孫詩(shī)雨，陳小麗，王曉婭，劉彩玉，藍(lán)信強(qiáng)

1.青島大學(xué)附屬威海市立第二醫(yī)院/山東省威海市婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳科，山東威海 264200；2.廣東省東莞市宜安科技股份有限公司，廣東東莞 523662

孕早期流產(chǎn)是婦產(chǎn)科常見(jiàn)的一種疾病，也是女性在孕早期容易出現(xiàn)的并發(fā)癥之一。孕早期流產(chǎn)包括了自然流產(chǎn)和稽留流產(chǎn)兩大類(lèi)，其中稽留流產(chǎn)是指胚胎已死亡但滯留在宮腔內(nèi)未及時(shí)排出的一種流產(chǎn)疾病，也是孕早期流產(chǎn)中一種較特殊的流產(chǎn)類(lèi)型[1]。醫(yī)學(xué)研究表明，造成孕早期流產(chǎn)的原因包括遺傳因素，細(xì)菌和病毒引起的宮內(nèi)感染，內(nèi)分泌異常，免疫因素等[2]。其中遺傳因素被認(rèn)為是最常見(jiàn)的誘發(fā)孕婦孕早期流產(chǎn)的因素，其致病機(jī)制主要包括染色體數(shù)目異常和染色體結(jié)構(gòu)異常[3-4]。因此，本研究擬對(duì)本院孕早期稽留流產(chǎn)絨毛染色體檢測(cè)結(jié)果作回顧性分析，為臨床上研究遺傳因素對(duì)孕早期稽留流產(chǎn)的影響提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2021年6月于本院行清宮術(shù)和絨毛染色體檢查的166例孕早期稽留流產(chǎn)孕婦為研究對(duì)象，年齡22～47歲，平均年齡31.09歲；B超提示孕婦胚胎停止發(fā)育。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，孕婦均已知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本和絨毛培養(yǎng) 采用B超定位經(jīng)宮頸絨毛吸取法獲得其絨毛標(biāo)本，將生理鹽水中的絨毛組織去除血凝塊和其他非絨毛組織，采用滅菌的眼科剪將絨毛剪碎，加入0.25%的胰酶消化。加入1 mL培養(yǎng)基終止消化，以1 500 r/min離心10 min，去除上清液。加入培養(yǎng)基混勻后置于37 ℃，含5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2絨毛細(xì)胞培養(yǎng)和染色體制備 細(xì)胞培養(yǎng)5～7 d后，于倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)并進(jìn)行換液。待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)適中時(shí)加入秋水仙素，阻斷細(xì)胞周期于中期，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后收集細(xì)胞，并制備染色體玻片。利用G顯帶法對(duì)玻片進(jìn)行顯帶，使用Leica染色體分析系統(tǒng)拍照保存。計(jì)數(shù)至少20個(gè)分裂象，分析5個(gè)細(xì)胞核型。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1絨毛細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果 在166例孕婦的流產(chǎn)絨毛中，細(xì)胞培養(yǎng)成功159例，占總例數(shù)的95.78%。細(xì)胞培養(yǎng)失敗7例，其中5例細(xì)胞培養(yǎng)存在污染，2例細(xì)胞無(wú)法培養(yǎng)貼壁。

2.2絨毛染色體核型分析結(jié)果 在159例成功進(jìn)行絨毛染色體核型分析的孕婦中，核型正常有54例，核型異常有105例，其中包括染色體數(shù)目異常98例，占異常核型的93.33%。染色體數(shù)目異常中，單體45,X核型異常有6例、三體核型異常有63例。三體核型異常中16-三體有18例、22-三體有12例、7-三體有6例、15-三體有5例、21-三體有4例、2-三體有3例；復(fù)合三體有3例，包括48,XX,+5,+9、48,XX,+7,+8、48,XY,+20,+21；三倍體有16例，其中69,XXX有4例、69,XXY有8例、69,XYY有1例、70,XXXY有1例、70,XXY,+21有1例、71,XXXX,-11有1例；四倍體有5例，其中92,XXXX有3例、92,XXYY有1例、90,XXYY,-13,-13有1例；嵌合體有3例，分別是45,X/46,XX、46,XX/46,XY和47,XX,+16/94,XXXX,+16,+16。此外，染色體結(jié)構(gòu)異常有7例。見(jiàn)表1。

表1 絨毛染色體核型分析結(jié)果

2.3絨毛染色體異常核型與孕婦年齡的關(guān)系 結(jié)果發(fā)現(xiàn)30～34歲的孕婦異常核型占比為71.11%；35～39歲的孕婦異常核型占比為70.94%；40～47歲的孕婦異常核型占比為63.64%；22～24歲的孕婦異常核型占比最低，為50.00%。30～47歲的孕婦異常核型占比為70.11%，與正常核型占比比較(29.89%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；22～29歲的孕婦異常核型占比為61.11%，與正常核型占比比較(38.89%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 絨毛染色體核型與孕婦年齡的關(guān)系

2.4絨毛染色體核型與流產(chǎn)胚胎性別的關(guān)系 159例成功進(jìn)行絨毛染色體核型分析的孕婦中，男胎75例，其中異常核型胚胎52例，異常核型占比為69.33%；女胎84例，其中異常核型胚胎53例，異常核型占比為63.10%。見(jiàn)表3。

表3 絨毛染色體核型與流產(chǎn)胚胎性別的關(guān)系

2.5不同孕產(chǎn)史孕婦絨毛染色體狀況 159例成功進(jìn)行絨毛染色體核型分析的孕婦中，生育過(guò)健康孩子的孕婦24例，其中絨毛染色體異常核型10例，絨毛染色體正常核型14例；未生育過(guò)健康孩子的孕婦135例，其中絨毛染色體異常核型95例，絨毛染色體正常核型40例。見(jiàn)表4。

表4 不同孕產(chǎn)史孕婦絨毛染色體狀況

3 討 論

研究表明女性在妊娠期間發(fā)生流產(chǎn)的概率約為15%，流產(chǎn)不僅會(huì)給孕婦帶來(lái)身體損傷，還會(huì)給孕婦及其家屬造成精神上的傷害[5]。在所有導(dǎo)致孕婦出現(xiàn)稽留流產(chǎn)的原因中，胚胎染色體異常是最主要的原因[5-6]。因此，對(duì)胚胎染色體異常情況進(jìn)行分析和研究，對(duì)幫助有流產(chǎn)史的育齡期女性成功妊娠具有重要意義。本研究對(duì)166例稽留流產(chǎn)孕婦采用B超定位經(jīng)宮頸絨毛吸取法獲得其絨毛標(biāo)本，進(jìn)行流產(chǎn)絨毛染色體檢查，采用絨毛細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行絨毛染色體培養(yǎng)和制備，其中培養(yǎng)成功159例，培養(yǎng)成功率為95.78%。

本研究培養(yǎng)成功的159例絨毛細(xì)胞標(biāo)本中，染色體異常占66.04%，其中染色體數(shù)目異常占異常核型的93.33%。本研究表明染色體數(shù)目異常是導(dǎo)致孕早期稽留流產(chǎn)的主要原因。然而，染色體數(shù)目異常形成的主要原因是由于配子形成時(shí)或受精卵卵裂時(shí)出現(xiàn)染色體不分離，從而導(dǎo)致染色體的單體、三體、復(fù)合三體、三倍體及四倍體的產(chǎn)生[7-11]。關(guān)于非整倍體異常的產(chǎn)生機(jī)制，主要是由染色體的減數(shù)分裂時(shí)期，染色體不分離或染色體缺失導(dǎo)致[12]。本研究發(fā)現(xiàn)16-三體、69,XXX/XXY/XYY、22-三體、7-三體、45,X、15-三體、21-三體占主要異常核型，其中16-三體和22-三體是孕早期稽留流產(chǎn)常見(jiàn)的三體核型。已有研究報(bào)道，16-三體是稽留流產(chǎn)絨毛細(xì)胞中常見(jiàn)的染色體核型[13]，然而關(guān)于16號(hào)染色體高度致死的原因是否與其著絲粒的位置相關(guān)需要進(jìn)一步研究證實(shí)[14]。對(duì)于多倍體染色體核型形成的原因，主要是由于雙雌受精和雙雄受精[15]。然而，絨毛分析結(jié)果為多倍體核型的胎兒父母，進(jìn)行外周血染色體檢查結(jié)果大多正常[15]。

本研究發(fā)現(xiàn)不同年齡段孕婦絨毛染色體結(jié)果存在明顯差異。30～47歲的孕婦，其絨毛染色體核型異常的發(fā)生率明顯高于22～29歲的孕婦。其中30～34歲的孕婦異常核型占比為71.11%，35～39歲的孕婦異常核型占比為70.97%，40～47歲的孕婦異常核型占比為63.64%，然而，22～24歲的孕婦異常核型占比僅為50.00%。同時(shí)，30～47歲的孕婦異常核型占比(70.11%)與正常核型占比(29.89%)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果說(shuō)明胚胎染色體異常的占比隨著女性年齡增長(zhǎng)而逐漸增加。這是因?yàn)殡S著女性生育年齡的逐漸增長(zhǎng)，生殖系統(tǒng)會(huì)逐漸老化，卵巢周?chē)奈h(huán)境改變，以及卵母細(xì)胞凋亡速度增加，導(dǎo)致卵細(xì)胞發(fā)生異常，從而導(dǎo)致形成非整倍體的卵細(xì)胞概率增加[16-18]。因此，建議高齡孕婦進(jìn)行羊水細(xì)胞產(chǎn)前診斷檢測(cè)，對(duì)降低新生兒的出生缺陷比例具有重要的意義。

關(guān)于孕婦稽留流產(chǎn)的研究，除了與絨毛細(xì)胞染色體異常和孕婦年齡有關(guān)外，是否與胎兒性別存在關(guān)系需要進(jìn)行深入探討。本研究發(fā)現(xiàn)，159例成功進(jìn)行絨毛染色體核型分析的孕婦中，女胎84例，占稽留流產(chǎn)胎兒的52.83%，其中女胎正常核型占比為36.90%，高于男胎正常核型的占比(30.67%)。然而在異常核型中，男胎占比為69.33%，較高于女胎的63.10%。此外，絨毛細(xì)胞三倍體核型的研究發(fā)現(xiàn)，69,XXY是三倍體的主要核型。因此，關(guān)于胎兒性別與稽留流產(chǎn)的傾向性，以及與絨毛細(xì)胞核型的相關(guān)性尚無(wú)明顯結(jié)論，還需要長(zhǎng)期的研究證實(shí)[9,19]。

本研究中，按照孕婦孕產(chǎn)史，將孕婦分成生育過(guò)健康孩子的孕婦和未生育過(guò)健康孩子的孕婦，結(jié)果發(fā)現(xiàn)已生育過(guò)健康孩子的孕婦，其絨毛染色體正常核型占比為58.33%。然而，未生育過(guò)健康孩子的孕婦(包括有復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、死胎及懷畸形胎兒等異常孕產(chǎn)史)，絨毛染色體異常核型占比為70.37%。該結(jié)果進(jìn)一步表明，對(duì)于多年未避孕或有不良孕產(chǎn)史等原因而未生育過(guò)健康孩子的部分孕婦，其流產(chǎn)原因可能與胎兒染色體核型異常相關(guān)。

綜上所述，絨毛染色體核型異常是導(dǎo)致孕早期稽留流產(chǎn)的主要原因，且染色體異常核型主要為染色體數(shù)目異常，其中常染色體三體核型最為常見(jiàn)。此外，染色體畸變與孕婦年齡等有關(guān)，因此，高齡孕婦孕期行羊水穿刺產(chǎn)前診斷檢查尤為重要[20]。通過(guò)對(duì)孕早期稽留流產(chǎn)絨毛染色體的核型進(jìn)行分析，可為孕婦再次妊娠，以及為育齡期女性的優(yōu)生優(yōu)育提供重要的理論依據(jù)。