李新新 王燕芹 邢瀟勻 馬 蕾（濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚科，濱州 256603）

IL-17A導(dǎo)致的免疫紊亂和炎癥效應(yīng)是銀屑病的重要致病因素，輔助性T細(xì)胞17（Th17）是其主要來源細(xì)胞［1-2］。Notch信號(hào)通路在T淋巴細(xì)胞分化中起關(guān)鍵作用，在小鼠和人促Th17分化的細(xì)胞因子環(huán)境中均有Notch信號(hào)通路的活化［3］。課題組前期研究亦表明，Notch/發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子1（hairy and enhancer of split 1，Hes1）信號(hào)通路能夠調(diào)控銀屑病患者及銀屑病樣皮炎小鼠Th17的分化和功能［4-5］。磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（also known as PKB，protein kinase B，AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號(hào)通路在銀屑病發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，且該信號(hào)通路能夠正向調(diào)控Th17的分化［6-8］。第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因（phosphate and tension homology deleted on chromosome ten，PTEN）是PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路上游的負(fù)向調(diào)控因子，急性T淋巴細(xì)胞白血病研究顯示，Notch信號(hào)通路靶基因Hes1能夠負(fù)向調(diào)控PTEN［9-10］。本研究以銀屑病樣皮炎小鼠為研究對(duì)象，利用γ分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號(hào)通路，以探討Notch/Hes1-PI3K/AKT/mTOR復(fù)合物1（mechanistic target of rapamycin complex 1，mTORC1）信號(hào)軸對(duì)IL-17A表達(dá)和分泌的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 小鼠來源及飼養(yǎng)24只雄性健康無特定病原（SPF）級(jí)BALB/c小鼠（濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：1107261911003852），6周齡，體質(zhì)量（18±2）g，飼養(yǎng)于濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院SPF動(dòng)物房，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)許可證號(hào)：SYXK（魯）20180022，室溫（23±1）℃，照度15～20 Lux，光照時(shí)間為每天7：00～19：00，晝夜明暗交替時(shí)間12 h/12 h，標(biāo)準(zhǔn)滅菌飼料和高壓蒸汽滅菌水飼養(yǎng)，自由取食，實(shí)驗(yàn)過程遵循減少、替代、優(yōu)化的3R原則。

1.1.2 主要試劑與儀器5%咪喹莫特乳膏（英國3M Health Care Limited公司）；DAPT（純度99%，美國Selleck公司）；Trizol RNA提取試劑、引物的設(shè)計(jì)及合成［生工生物工程（上海）股份有限公司］；PrimeScriptTMRT試劑盒、TB Green?PreMix Ex TaqTMⅡ試劑盒（日本TaKaRa公司）；CFX96 TouchTMReal-Time PCR檢測系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司）；RIPA組織/細(xì)胞裂解液、BCA蛋白濃度測定試劑盒、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；兔抗鼠多克隆抗體Hes1、PTEN、磷酸化（p）-AKT絲氨酸473位 點(diǎn)（Ser473）、p-mTOR絲 氨 酸2448位 點(diǎn)（Ser2448）、IL-17A和GAPDH（美國Affinity Biosciences公司）；辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG二抗（美國Jackson ImmunoResearch公司）；增強(qiáng)型ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（上海諾倫生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司）；酶標(biāo)檢測儀（美國Thermo公司）。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理將24只小鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為對(duì)照組、模型組和干預(yù)組，每組8只。按參考文獻(xiàn)［11-12］采用5%咪喹莫特乳膏（62.5 mg/d）外涂小鼠背部制備銀屑病樣皮炎動(dòng)物模型，對(duì)照組小鼠涂抹等劑量白凡士林；在外涂咪喹莫特乳膏后立即給干預(yù)組小鼠腹腔注射DAPT工作液［10 mg/（kg·d），將10 mg DAPT溶解于1 ml二甲基亞砜（DMSO），配制成儲(chǔ)存液（10 mg/ml），置于-20℃冰箱儲(chǔ)存，用時(shí)以玉米油溶解DAPT儲(chǔ)存液，配制成工作液（0.2 mg/ml）］，對(duì)照組及模型組小鼠腹腔注射等劑量玉米油與DMSO混合液［11］。以上處理每天固定時(shí)間進(jìn)行1次，連續(xù)6次，末次處理24 h后麻醉并處死小鼠，取皮損組織行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）和Western blot檢測。本研究經(jīng)濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)討論批準(zhǔn)（編號(hào)：20190104-15）。

1.2.2 皮膚組織病理學(xué)檢查剪取背部0.5 cm×0.5 cm的皮膚組織，4%多聚甲醛固定，經(jīng)石蠟包埋、切片、HE染色后于顯微鏡下觀察。Image-Pro Plus 6.0軟件測量表皮厚度。

1.2.3 RT-PCR檢測小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、AKT、mTORC1及IL-17A mRNA的 表 達(dá)采 用Trizol RNA提取試劑抽提小鼠皮膚組織中總RNA，1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整性，紫外分光光度儀測定其純度，吸光度比值（A260/A280）在1.8～2.0為合格樣本。采用PrimeScriptTMRT試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以GAPDH為內(nèi)參照，采用TB Green?PreMix Ex TaqTMⅡ試 劑 盒 在CFX96 TouchTMReal-Time PCR檢測系統(tǒng)上行RT-PCR檢測。PCR反應(yīng)體系共25μl：cDNA模板2μl（＜100 ng），0.4μmol/L正、反向引物各1μl，TB Green?Premix Ex TaqTMⅡ（2×）12.5μl，滅菌水8.5μl。引物序列見表1。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30 min，95℃變性5 s、55℃退火30 s、72℃延伸30 s，40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔。根據(jù)2-ΔΔCt公式計(jì)算Hes1、PTEN、AKT、mTORC1、IL-17A mRNA的相對(duì)表達(dá)量，其中ΔCt=目的基因Ct值-內(nèi)參基因Ct值，ΔΔCt=實(shí)驗(yàn)樣本ΔCt值-校準(zhǔn)樣本ΔCt值。

1.2.4 Western blot檢測小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、p-AKT、p-mTOR和IL-17A蛋白表達(dá)量從液氮中取出凍存的小鼠皮膚標(biāo)本，用眼科剪將組織剪成細(xì)小的碎片并用組織勻漿器勻漿，采用RIPA裂解液于冰上提取皮膚組織蛋白，蛋白濃度均在50～2 000μg/ml范圍內(nèi)。取50μg總蛋白變性后，根據(jù)SDS-PAGE凝膠試劑盒恒壓電泳，將電泳產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜，于含5%脫脂奶粉的TBST緩沖液中封閉2 h，TBST溶液洗膜3次后滴加一抗，分別為兔抗鼠多克隆抗體Hes1、PTEN、p-AKT、p-mTOR、IL-17A和GAPDH，稀釋比例均為1∶500，4℃過夜；TBST緩沖液洗膜4次，每次10 min，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（1∶1 000），室溫孵育1 h；TBST洗膜4次，每次10 min。按增強(qiáng)型ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒說明書顯色，在自動(dòng)電泳凝膠成像分析系統(tǒng)下自動(dòng)成像。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。應(yīng)用Image J軟件分析目的蛋白條帶的灰度值，以GAPDH為內(nèi)參，目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白灰度值/GAPDH灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。應(yīng)用Shapiro-Wilk檢驗(yàn)法進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。若Levene檢驗(yàn)顯示方差齊，數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩多重比較采用LSD-t法；若方差不齊，數(shù)據(jù)以中位數(shù)M（P25，P75）表示，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，兩兩多重比較采用Dunn-bonferroni檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

2 結(jié)果

2.1 皮損形態(tài)改變對(duì)照組小鼠皮膚始終無紅斑、鱗屑及浸潤增厚改變；模型組小鼠皮膚出現(xiàn)明顯紅斑、鱗屑及浸潤增厚；干預(yù)組小鼠皮膚紅斑、鱗屑及浸潤增厚現(xiàn)象較模型組明顯減輕，見圖1。皮損嚴(yán)重程度評(píng)分比較見圖2，對(duì)照組評(píng)分始終為0；模型組評(píng)分第2天開始持續(xù)提高，至第6天達(dá)到最高值；干預(yù)組前4天評(píng)分與模型組變化趨勢一致，第5天與第4天評(píng)分基本持平，第6天評(píng)分有下降趨勢，且與模型組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖l三組實(shí)驗(yàn)小鼠背部皮膚表現(xiàn)Fig.1 Skin changes on back of three groups of experimental mice

圖2 三組實(shí)驗(yàn)小鼠背部皮損嚴(yán)重程度評(píng)分Fig.2 Severity scores of back lesions in three groups of experimental mice

2.2 組織病理改變對(duì)照組小鼠皮膚菲薄，表皮層僅由1～2層細(xì)胞構(gòu)成；模型組小鼠表皮層明顯增厚，可見角化過度及角化不全，角化不全中有中性粒細(xì)胞聚集，形成Munro微膿腫，表皮突向下延伸，真皮炎癥細(xì)胞大量浸潤，真皮淺層可見血管擴(kuò)張；干預(yù)組小鼠表皮增厚及真皮炎癥細(xì)胞浸潤程度較模型組均明顯減輕，見圖3。

比較三組實(shí)驗(yàn)鼠表皮層厚度，對(duì)照組、模型組和干預(yù)組分別為（14.37±0.54）μm、（105.72±7.46）μm和（40.57±6.23）μm，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=560.543，P＜0.01）；進(jìn)一步三組間兩兩比較（模型組比對(duì)照組、模型組比干預(yù)組、干預(yù)組比對(duì)照組）差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值分別為32.51、23.19、9.32，P均＜0.01）。

2.3 三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、mTORC1、AKT及IL-17A mRNA的表達(dá)如表2所示，三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、AKT、mTORC1及IL-17A mRNA表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。模型組PTEN mRNA表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組（t=6.67，P＜0.001），而Hes1、AKT、mTORC1及IL-17A mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，t/Z值分別為15.25、5.57、3.39、14.63，P值 分 別 為＜0.001、＜0.001、0.003、＜0.001。經(jīng)DAPT干預(yù)處理后，干預(yù)組PTEN mRNA表達(dá)水平顯著高于模型組，t=6.51，P＜0.001，而Hes1、AKT、mTORC1及IL-17A mRNA表達(dá)水平均顯著低于模型組，t/Z值分別為8.75、4.13、2.65、9.38，P值分別為＜0.001、＜0.001、0.015、0.024。干預(yù)組Hes1、PTEN、AKT、mTORC1及IL-17A mRNA的表達(dá)與對(duì)照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，t/Z值分別為6.50、1.60、1.44、0.75、5.25，P值分別為0.198、0.875、0.165、0.464、0.413。

圖3 三組實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚組織病理組織學(xué)變化（HE，×200）Fig.3 Histopathological changes of skin tissue in three groups of experimental mice（HE，×200）

2.4 三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、p-AKT、p-mTOR及IL-17A蛋白表達(dá)如圖4、表3所示，三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、p-AKT、p-mTOR及IL-17A蛋白表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。模型組PTEN蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組，t=4.45，P=0.031，而Hes1、p-AKT、p-mTOR及IL-17A蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組，t/Z值分別為10.63、14.25、3.83、3.86，P值 分 別 為0.008、＜0.001、0.001、＜0.001。經(jīng)DAPT干預(yù)處理后，干預(yù)組PTEN蛋白表達(dá)顯著高于模型組，t=2.31，P＜0.001，而Hes1、p-AKT、p-mTOR及IL-17A蛋白表達(dá)顯著低于模型組，t/Z值分別為10.38、9.75、2.64、3.50，P值分別為0.010、0.017、0.015、＜0.001。干預(yù)組Hes1、p-AKT、p-mTOR及IL-17A蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，t/Z分別為0.25、4.50、1.19、0.36，P值分別為1.000、0.609、0.248、0.290，但干預(yù)組PTEN蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組，t=2.14，P=0.031。

圖4 三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、p-AKT、p-mTOR及IL-17A蛋白印跡圖Fig.4 Western blot of Hes1，PTEN，p-AKT，p-mTOR and IL-17A in skin tissue in three groups of experimental mice

表2 三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、AKT、mTORC1及IL-17A mRNA表達(dá)水平［中位數(shù)M（P25，P75）或±s，n=8］Tab.2 Expression levels of Hes1，PTEN，AKT，mTORC1 and IL-17A mRNA in skin tissue in three groups of experimental mice［Median M（P25，P75）or xˉ±s，n=8］

表2 三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、AKT、mTORC1及IL-17A mRNA表達(dá)水平［中位數(shù)M（P25，P75）或±s，n=8］Tab.2 Expression levels of Hes1，PTEN，AKT，mTORC1 and IL-17A mRNA in skin tissue in three groups of experimental mice［Median M（P25，P75）or xˉ±s，n=8］

Note：1）Kruskal-Wallis H testχ2 value；2）One-Way ANOVA F test value.

Groups Control Model Intervention F/χ2 P Hes1 1.44（0.27，2.99）11.09（9.55，18.16）5.16（3.98，5.35）18.741）＜0.001 PTEN 1.04±0.32 0.25±0.14 1.02±0.21 28.962）＜0.001 AKT 1.59±1.01 5.72±2.02 2.66±1.23 16.742）＜0.001 mTORC1 1.16±0.49 3.11±1.81 1.59±0.67 6.362）0.007 IL-17A 1.20（0.57，3.43）37.24（23.02，92.63）8.59（3.55，11.23）17.561）0.000 1

表3 三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、p-AKT、p-mTOR及IL-17A蛋白表達(dá)水平［中位數(shù)M（P25，P75）或±s，n=8］Tab.3 Expression levels of Hes1，PTEN，p-AKT，p-mTOR and IL-17A protein in skin tissue in three groups of experimental mice［Median M（P25，P75）or xˉ±s，n=8］

表3 三組小鼠皮膚組織中Hes1、PTEN、p-AKT、p-mTOR及IL-17A蛋白表達(dá)水平［中位數(shù)M（P25，P75）或±s，n=8］Tab.3 Expression levels of Hes1，PTEN，p-AKT，p-mTOR and IL-17A protein in skin tissue in three groups of experimental mice［Median M（P25，P75）or xˉ±s，n=8］

Note：1）Kruskal-Wallis H testχ2 value；2）One-Way ANOVA F value.

Groups Control Model Intervention F/χ2 P Hes1 0.19（0.18，0.21）0.34（0.27，0.42）0.18（0.15，0.22）11.771）0.003 PTEN 0.91±0.28 0.39±0.21 0.66±0.20 9.922）0.001 p-AKT（Ser473）0.23（0.13，0.26）0.82（0.66，0.88）0.29（0.25，0.35）16.981）＜0.001 p-TOR（Ser2448）0.31±0.21 0.72±0.24 0.43±0.20 7.692）0.003 IL-17A 0.20±0.05 0.72±0.18 0.29±0.13 34.262）＜0.001

3 討論

銀屑病是一種由T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，Th17及其產(chǎn)生的效應(yīng)性細(xì)胞因子IL-17在銀屑病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用［2］。IL-17A是IL-17家族最具代表性的細(xì)胞因子。在皮膚組織中，IL-17A可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、血管內(nèi)皮生長因子、IL-8、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子和趨化因子CXCL10等細(xì)胞因子，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞分化，破壞皮膚屏障，誘導(dǎo)多種前炎癥細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)分泌，啟動(dòng)并加重皮膚炎癥反應(yīng)［13-14］。本研究結(jié)果顯示，銀屑病樣皮炎小鼠皮損中IL-17A的mRNA和蛋白表達(dá)均明顯增高，進(jìn)一步證實(shí)了IL-17A在銀屑病發(fā)生發(fā)展中的重要作用。

Notch/Hes1信號(hào)通路參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡和上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化等多種生命活動(dòng)過程［3］。在哺乳動(dòng)物中，Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)由4類異二聚體形式的Notch受體、5類Ⅰ型跨膜蛋白的Notch配體和DNA結(jié)合蛋白CSL等組成。Notch配體與受體相互作用，在Notch受體分子的S2和S3兩個(gè)位點(diǎn)發(fā)生連續(xù)切割，S3被包含早老素的γ分泌酶復(fù)合物切割后，釋放出具有核定位信號(hào)的Notch胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（notch intracellular domain，NICD），并移位至細(xì)胞核，與C啟動(dòng)子結(jié)合因子1（CBF-1）、核轉(zhuǎn)錄激活蛋白家族MAML結(jié)合形成CBF-NICD-MAML三元復(fù)合物，啟動(dòng)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，如Hes1［15］。γ分泌酶抑制劑通過作用于早老素分子而阻斷γ分泌酶的作用，減少NICD產(chǎn)生，由于NICD啟動(dòng)作用的缺失或減弱，下游信號(hào)分子處于靜止或下調(diào)狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示，γ分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號(hào)后，銀屑病樣皮炎小鼠皮損嚴(yán)重程度明顯改善，PASI評(píng)分降低，表皮厚度及真皮炎癥細(xì)胞浸潤程度較模型組均明顯減輕，證實(shí)Notch信號(hào)通路參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展［4，11］。在銀屑病樣皮炎小鼠皮損組織中，Notch信號(hào)通路靶基因Hes1及IL-17A的mRNA和蛋白表達(dá)均明顯增加，DAPT阻斷Notch信號(hào)通路后，Hes1表達(dá)明顯下降，同時(shí)IL-17A mRNA和蛋白表達(dá)亦顯著降低，進(jìn)一步表明Notch/Hes1信號(hào)通路對(duì)IL-17A表達(dá)和分泌具有調(diào)控作用［5］。

PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、增殖、分化、運(yùn)動(dòng)和生存的經(jīng)典信號(hào)途徑。在銀屑病相關(guān)研究中，抑制或減弱PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的銀屑病細(xì)胞模型增殖，改善銀屑病樣皮炎小鼠皮損的嚴(yán)重程度及銀屑病人類皮膚模型的銀屑病樣表現(xiàn)［16-17］。PI3K/AKT/mTORC1信號(hào)途徑在Th17分化過程中發(fā)揮重要作用［6-8］。mTORC1能同時(shí)促進(jìn)下游核糖體S6蛋白激酶1/2（S6K1/2）表達(dá)，并通過S6K1/2兩條信號(hào)途徑正向調(diào)控Th17的分化；敲除mTORC1上游的調(diào)控蛋白R(shí)aptor可阻止mTORC1的生物學(xué)效應(yīng)，使初始CD4+T細(xì)胞無法分化成Th17［7］。PTEN是PI3K上游的重要負(fù)向調(diào)控因子，PTEN通過將細(xì)胞膜上的磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3）去磷酸化生成磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2），阻止PIP3將AKT招募到細(xì)胞膜上，進(jìn)而拮抗PI3K介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。關(guān)于急性T淋巴細(xì)胞白血病的研究顯示，Notch信號(hào)通路靶基因Hes1結(jié)合于PTEN啟動(dòng)子，能夠負(fù)向調(diào)控PTEN，進(jìn)而促進(jìn)PI3K/AKT信號(hào)通路的活化，而抑制Notch/Hes1可上調(diào)正常和病變T細(xì)胞中PTEN表達(dá)，降低AKT的磷酸化水平［9-10］。課題組前期研究結(jié)果表明，銀屑病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞及銀屑病樣皮炎小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞中高表達(dá)Notch/Hes1信號(hào)分子，γ分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch/Hes1信號(hào)通路可劑量依賴性地降低銀屑病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞及銀屑病樣皮炎小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞Th17的比例及IL-17A的表達(dá)［4-5］。銀屑病皮損中，p-mTOR已被證實(shí)主要與mTORC1的活性相關(guān)［18］。本研究結(jié)果顯示，模型組小鼠銀屑病樣皮損組織中PTEN表達(dá)顯著低于對(duì)照組，p-mTOR表達(dá)顯著增加；DAPT阻斷Notch信號(hào)后，干預(yù)組小鼠PTEN表達(dá)明顯高于模型組，p-mTOR表達(dá)則顯著降低。推測在銀屑病的疾病環(huán)境下，Notch/Hes1信號(hào)通路可能通過負(fù)向調(diào)控PTEN，經(jīng)PI3K/AKT/mTORC1信號(hào)途徑調(diào)控Th17的分化和功能，促進(jìn)IL-17A的表達(dá)和分泌，增強(qiáng)IL-17A的致炎作用。

此外，亦有研究指出，活化的AKT能抑制Notch1受體酪氨酸殘基的磷酸化，減少Notch1經(jīng)溶酶體途徑的單泛素化和降解，以PI3K抑制劑LY294002或負(fù)顯性型AKT瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞MOLT-4可明顯抑制Notch1蛋白的表達(dá)及活性，降低其靶基因Hes1的轉(zhuǎn)錄［19］。在動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞中，AKT能夠上調(diào)Notch1和Notch配體DLL4基因表達(dá)或提高Notch2轉(zhuǎn)錄活性，從而調(diào)控Notch1信號(hào)通路活性［20-22］。因此，課題組推測Notch/Hes1信號(hào)通路負(fù)向調(diào)控PTEN，促進(jìn)PI3K/AKT/mTORC1信號(hào)途徑活化的同時(shí)，活化的AKT亦可正向調(diào)控Notch1活性，形成正反饋調(diào)節(jié)，從而促進(jìn)IL-17A的致炎效應(yīng)。