王 燕,姚曉華,姚有華,蘇樂平,2,安立昆,吳昆侖

(1.青海大學(xué),青海省農(nóng)林科學(xué)院,青海省青稞遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,國(guó)家麥類改良中心青海青稞分中心,西寧 810016;2.延安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,陜西 延安 716000)

青稞(Hordeum vulgareL.var.nudumHook.f.)也稱裸大麥,屬禾本科大麥屬作物,為禾本科1～2 a生草本植物,可分為二棱、四棱和六棱,是大麥的一個(gè)變種[1-2]。因其具有抗寒、耐旱、抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn),被廣泛種植于西北、西南等高原地區(qū)[3]。青稞的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高,具有“三高兩低”的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn),其中,“三高”是指高纖維、高蛋白、高維生素;“兩低”是指低脂肪、低糖,因此長(zhǎng)期食用青稞對(duì)人體營(yíng)養(yǎng)膳食結(jié)構(gòu)有極大益處[4]。青稞還含有多酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)和β青葡聚糖等有益成分,對(duì)于降膽固醇、降血糖血脂有一定的作用,因此青稞的營(yíng)養(yǎng)保健功能現(xiàn)已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)[5]。中國(guó)青稞品種資源豐富,由于不同色素在青稞種子的果皮和糊粉層內(nèi)沉積而導(dǎo)致不同顏色的呈現(xiàn),目前帶顏色的青稞主要分為藍(lán)、黑、紫3種[1]。與普通青稞相比,有色青稞富含花色苷、酚類化合物、蛋白質(zhì)以及一些微量元素等有益成分,這也使得目前對(duì)于有色青稞的研究越來越受到重視[6]。

花青素(Anthocyanins)又稱為花色苷,主要是作為水溶性色素,廣泛存在于蔬菜、水果和有色麥類和其他植物中,也是使組織呈現(xiàn)特定顏色的主要次生代謝產(chǎn)物之一[7-8]?；ㄇ嗨厥切纬晒任镒蚜ｎ伾闹饕爻煞?具有預(yù)防心腦血管疾病、癌癥、保護(hù)肝臟等保健功能[9-10],可應(yīng)用于醫(yī)藥保健行業(yè),還可作為著色劑等應(yīng)用于食品行業(yè)[11]。在高海拔地區(qū),花青素還可抵御紫外線輻射,避免對(duì)植物造成損傷[12]。近年來隨著人們對(duì)富含花青素的谷物需求越來越多,有色大米和玉米因其花青素含量高而被用作天然的功能性材料[13]。目前花青素在擬南芥、玉米等植物體內(nèi)的合成途徑已經(jīng)研究得較為清楚,其主要由黃酮3′羥化酶(F3′H)、查爾酮合成酶(CHS)、黃烷酮3-羥化酶(F3 H)、查爾酮異構(gòu)酶(CHI)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)等多種酶催化完成[14]。然而,青稞紫粒中花青素的合成相關(guān)基因及其調(diào)控機(jī)制研究較少。

類黃酮3′單加氧酶(flavonoid 3′-monooxygenase,F3′M)屬于植物細(xì)胞色素P450家族(cytochromeP450,CYP450,CYPs)。早 在1986 年Larson等[15]從玉米中分離了F3′M基因,該基因的鑒定確立了玉米中黃酮類化合物生物合成的另一個(gè)反應(yīng)。然而F3′M基因在其他植物中的相關(guān)研究鮮見。CYP450是迄今為止支持植物代謝最大的酶家族,在植物體內(nèi)參與多種重要的代謝反應(yīng)[16]。CYP450還參與了生物體內(nèi)脂肪酸偶聯(lián)物、植物激素、防御化合物等生物的合成與分解代謝[16-17]。在植物的生長(zhǎng)發(fā)育、抵御生物和非生物脅迫過程中CYP450 也發(fā)揮著重要的作用[18]。目前細(xì)胞色素P450參與花青素合成相關(guān)研究主要集中在模式植物和藥用植物中,在青稞粒色形成中的研究尚無報(bào)道[16]。因此,本研究基于前期紫色青稞的GBS(Genotyping-by-sequencing)基因定位結(jié)果,從紫粒青稞‘達(dá)章紫’和白粒青稞‘昆侖12號(hào)’中克隆了CYP450 類基因F3′M,并對(duì)其序列進(jìn)行了分析,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RTqPCR)檢測(cè)了F3′M基因在紫粒和白粒青稞種子著色過程中的表達(dá)模式。研究結(jié)果為F3′M基因在花青素合成中的調(diào)控研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

以紫粒青稞品種‘達(dá)章紫’與白粒青稞品種‘昆侖12號(hào)’為材料,2020年4月栽種于青海大學(xué)農(nóng)林科學(xué)院青稞實(shí)驗(yàn)基地。在籽粒著色不同時(shí)期:播種后11周(早期)、13周(中期)和15周(晚期)取兩品種籽粒種皮,3次生物學(xué)重復(fù)。所有樣品經(jīng)液氮中速凍后于-80 ℃超低溫冰箱中保存,備用。

1.2 方法

1.2.1 青稞籽粒種皮總RNA 的提取及cDNA合成 將青稞籽粒種皮在液氮中快速研磨至粉末狀,對(duì)‘達(dá)章紫’與‘昆侖12 號(hào)’進(jìn)行總RNA 提取,采用北京麥瑞博生物科技有限公司RNA 試劑盒(Ta KaRa MiniBEST Plant RNA Extraction Kit),用超微量核酸蛋白測(cè)量?jī)x(NanoPhotometer)對(duì)2個(gè)品種的RNA 進(jìn)行濃度和純度測(cè)定,并借助1.2%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)其RNA完整性。樣品總RNA 的反轉(zhuǎn)錄,完全按照c DNA 合成試劑盒(PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit)的操作步驟進(jìn)行,并置-80 ℃保存,備用。

1.2.2 青稞HvnF3′M基因的克隆 在青稞紫粒的基因定位結(jié)果中,7 H 染色體的候選區(qū)段內(nèi)獲得一個(gè)與花青素合成相關(guān)的F3′M序列(基因ID:MLOC_6177),命名為Hvn F3′M[19]。利用Primer 5.0 設(shè)計(jì)該基因引物HvnF3′M-F/R(表1),以青稞種皮cDNA 為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR 擴(kuò)增體系及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)方法參考姚曉華等[20]的方法。獲得的目的條帶用DNA 膠回收試劑盒(DNA Gel Extraction Kit)進(jìn)行切膠回收,用超微量核酸蛋白測(cè)量?jī)x(NanoPhotometer)測(cè)定膠回收產(chǎn)物的濃度和純度。將回收產(chǎn)物與p Easy-Blunt載體(全式金生物公司)進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化至多個(gè)大腸桿菌(Escherichia coli)Trans-T1感受態(tài)細(xì)胞中。最后,將篩選獲得的3個(gè)陽性克隆以M13為擴(kuò)增引物進(jìn)行菌液PCR,并送至生工生物工程(上海)股份有限公司測(cè)序。

1.2.3 青稞Hvn F3′M基因的生物信息學(xué)分析利用NCBI分析Hvn F3′M的保守結(jié)構(gòu)域[21]。利用Expasy Protparma和Protscale預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和親/疏水性[21]。利用SignalP4.1和TMHMM-2.0 預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)[21]。用Cell-Ploc 2.0對(duì)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞進(jìn)行初步定位[21]。利用SOPMA 和SWISS-MODEL軟件對(duì)青稞Hvn F3′M分別進(jìn)行二、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)[21]。采 用 NCBI 中 的 BLASTP 工 具 與Hvn F3′M 蛋白高度同源的其他禾本科植物氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)[21]。利用Mega 5.1軟件構(gòu)建生物系統(tǒng)進(jìn)化樹[21]。

1.2.4 青稞HvnF3′M基因表達(dá)模式分析 根據(jù)擴(kuò)增獲得的Hvn F3′M基因序列,用Primer 5.0設(shè)計(jì)定量引物HvnF3′M-SF/SR(表1)。以‘達(dá)章紫’和‘昆侖12號(hào)’播種后11周(早期)、13周(中期)和15 周(后期)的籽粒種皮cDNA 為模板,選擇18Sr RNA 作為內(nèi)參基因(表1),采用Ta KaRa公司的TB Greenpremix ExTaqⅡ熒光染 料 利 用 Light Cycler480System 進(jìn) 行 RTqPCR。RT-qPCR 反應(yīng)體系參照蘇樂平等[21]的方法進(jìn)行。

表1 研究所涉及的引物情況Table 1 Primers used in this study

1.3 數(shù)據(jù)處理及分析

表達(dá)量數(shù)據(jù)利用Microsoft Excel 2010 和SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分別進(jìn)行整理分析,以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)”方式呈現(xiàn)?；蛟诓煌瑫r(shí)期青稞品種的相對(duì)表達(dá)量采用2-ΔΔCt公式進(jìn)行計(jì)算[22]。所有試驗(yàn)均包含3次生物學(xué)重復(fù),試驗(yàn)數(shù)據(jù)方差分析采用SPSS 22.0。

2 結(jié)果與分析

2.1 HvnF3'M 基因的克隆與序列分析

以‘達(dá)章紫’和‘昆侖12 號(hào)’的籽粒種皮cDNA 為模板,Hvn F3′M-F/R 為擴(kuò)增引物,獲得一條全長(zhǎng)為1 675 bp的目的條帶(圖1),該基因開放閱讀框?yàn)? 584 bp,共編碼527個(gè)氨基酸(圖2)。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),‘達(dá)章紫’與‘昆侖12 號(hào)’的Hvn F3′M的核苷酸序列存在兩個(gè)差異,分別位于72 bp和957 bp處,兩者一致性為99.87%,導(dǎo)致兩個(gè)氨基酸差異,一致性為99.62%。利用NCBI中的CD-search對(duì)兩個(gè)品種的氨基酸序列進(jìn)行基因的保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè),結(jié)果表明該基因有血紅素結(jié)構(gòu)域“F××G×R×C×G”,屬于細(xì)胞色素P450超家族的CYP75家族(圖3)。

圖1 HvnF3'M 基因的PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.1 PCR amplified product of HvnF3'M gene

圖2 HvnF3'M 基因的核酸和推導(dǎo)的氨基酸序列Fig.2 Nucleotide acid sequences and deduced amino acid sequences of HvnF3'M genes

圖3 HvnF3'M 蛋白的保守結(jié)構(gòu)域Fig.3 Conserved domain prediction of HvnF3'M Protein

利用在線工具Protparam 預(yù)測(cè)其理化性質(zhì),結(jié)果表明,‘達(dá)章紫’中的Hvn F3′M 蛋白分子式為C2561H4085N713O723S18,分子質(zhì)量為57.01 ku,不穩(wěn)定指數(shù)為35.16,脂溶指數(shù)為99.39,理論等電點(diǎn)為6.85,其中負(fù)電荷殘基為59個(gè),正電荷殘基為58個(gè)?！?2號(hào)’Hvn F3′M 蛋白分子式為C2553H4079N713O720S19,分子質(zhì)量為56.89 ku,不穩(wěn)定指數(shù)為35.21,脂溶指數(shù)為99.39,理論等電點(diǎn)為7.19,其中正、負(fù)電荷殘基均為58個(gè)(表2)。對(duì)Hvn F3′M 蛋白親疏水性、信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),該蛋白屬于親水性的穩(wěn)定堿性蛋白,不存在信號(hào)肽但存在跨膜結(jié)構(gòu)(圖4和圖5)。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)其極可能定位在細(xì)胞質(zhì)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,得分為1.915,而在周質(zhì)及外層膜分別為0.333和0.044。

圖4 HvnF3'M 蛋白的親水性和疏水性預(yù)測(cè)Fig.4 Hydrophilicity and hydrophobicity prediction of HvnF3'M protein

圖5 HvnF3'M 蛋白親跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果Fig.5 Prediction of transmembrane structure of HvnF3'M protein

表2 HvnF3'M 理化性質(zhì)分析Table 2 Results of physical and chemical properties of HvnF3'M

HvnF3′M 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),‘昆侖12 號(hào)’蛋白主要二級(jí)結(jié)構(gòu)依次為α-螺旋(49.15%)、無 規(guī) 卷 曲(35.86%)、延 伸 鏈(10.25%)和β轉(zhuǎn)角(4.74%);‘達(dá)章紫’蛋白主要二級(jí)結(jié)構(gòu)依次為無規(guī)卷曲(44.97%)、α-螺旋(42.69%)、延伸鏈(12.33%)(圖6)。對(duì)F3′M蛋白的三級(jí)預(yù)測(cè)結(jié)果表明,Hvn F3′M 蛋白為低聚態(tài)單體,含有α-螺旋與無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)(圖7)。

圖6 HvnF3'M 蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.6 Secondary structure prediction of HvnF3'M protein

圖7 Hvt F3'M 蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.7 Tertiary structure prediction of HvnF3'M protein

2.2 HvnF3'M 蛋白的同源比較及系統(tǒng)進(jìn)化分析

DNAMAN 6.0結(jié)果分析表明,Hvn F3′M 蛋白與青稞(Hordeum vulgareL.var.nudumHook.f.)、大麥(Hordeum vulgare)、二粒小麥(Triticum dicoccoides)、山羊草(Aegilops tauschii)、二穗短柄草(Brachypodium distachyon)的F3′M 氨基酸序列一致性較高,分別為99%、100%、88.85%、78.23%和77.52%(圖8)。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,在11 種禾本科植物種中,青稞F3′M 蛋白與同物種青稞、大麥的親緣進(jìn)化關(guān)系最近,與玉米(Zea mays)的親緣進(jìn)化關(guān)系較遠(yuǎn)(圖9)。

圖8 HvnF3'M 與禾本科其他植物多序列比對(duì)Fig.8 Multiple alignment of HvnF3'M and other plants of gramineae

圖9 HvnF3'M 蛋白與其他禾本科植物的系統(tǒng)發(fā)育分析Fig.9 Phylogenetic analysis of Hvt F3'M protein and other gramineae

2.3 總花青素含量及Hvn F3'M 基因表達(dá)分析

對(duì)‘達(dá)章紫’和‘昆侖12號(hào)’粒色形成的3個(gè)時(shí)期進(jìn)行粒色表型分析及總花青素含量測(cè)定發(fā)現(xiàn),‘達(dá)章紫’中總花青素含量呈極顯著升高,中期較早期增加了793.81μg/g,為早期的9.38 倍(P＜0.01),晚期較早期增加了1 173.07μg/g,為早期的13.38倍(P＜0.01);‘昆侖12號(hào)’總花青素含量3個(gè)時(shí)期均無顯著差異(圖10,圖11)。同時(shí)為研究Hvn F3′M基因在青稞種皮顏色形成中的表達(dá)模式,利用RT-qPCR 檢測(cè)該基因在‘達(dá)章紫’和‘昆侖12號(hào)’種皮顏色形成的早、中、晚期的相對(duì)表達(dá)量。熒光定量PCR 結(jié)果表明,在籽粒顏色形成的早、中、晚期,‘達(dá)章紫’的Hvn F3′M基因的表達(dá)量在早期與中期無顯著差異,晚期表達(dá)量極顯著升高,為早期的1.49倍,中期的1.52倍(P＜0.01);而‘昆侖12號(hào)’3個(gè)時(shí)期Hvn F3′M表達(dá)量差異不顯著;且晚期‘達(dá)章紫’Hvn F3′M基因的表達(dá)量極顯著高于‘昆侖12 號(hào)’(P＜0.01)(圖11-B)。推測(cè)隨著種皮花青素的合成,Hvn F3′M基因表達(dá)量逐漸升高,該基因可能正向調(diào)控花青素的累積。

圖10 HvnF3'M 基因在不同粒色青稞種子中的著色過程Fig.10 Coloration of HvnF3'M gene in barley seeds of different grain colours

圖11 不同粒色青稞品種粒色形成的早、中、晚期的表達(dá)量及總花青素含量Fig.11 Expression and total anthocyanin content of different hulless barley varieties at early,middle and late stages

3 討論

細(xì)胞色素P450單加氧酶家族在生物體內(nèi)對(duì)外源化合物(如工業(yè)化學(xué)品)的代謝和內(nèi)源化合物(如維生素)的調(diào)節(jié)過程都扮演著一個(gè)重要的角色[23-25]。本研究從紫粒青稞‘達(dá)章紫’和白粒青稞‘昆侖12號(hào)’,分別克隆獲得一條細(xì)胞色素P450單加氧酶的F3′M基因。發(fā)現(xiàn)‘達(dá)章紫’與‘昆侖12號(hào)’的Hvn F3′M的序列存在兩個(gè)堿基和兩個(gè)氨基酸的差異。研究表明,生物體內(nèi)堿基的突變都極大可能影響蛋白質(zhì)或酶的生物學(xué)功能,進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體的表型出現(xiàn)異常。例如,歐春青采用基因組重測(cè)序結(jié)合BSA 分析的方法,從一種紅色梨品種中鑒定出一個(gè)與紅色性狀緊密關(guān)聯(lián)的14 bp缺失變異,該片段缺失變異促使了PpBBX24基因產(chǎn)生移碼突變,蛋白翻譯提前終止,導(dǎo)致部分蛋白功能出現(xiàn)改變[26-27]。本試驗(yàn)中的堿基差異是否也與花青素合成相關(guān)有待進(jìn)一步驗(yàn)證。陸生植物細(xì)胞色素P450共有11個(gè)氏族,被分為單家族簇和多家族簇兩類,多家族簇其功能具有巨大的多樣性,其中CYP75屬于多家族簇,與類黃酮的合成密切相關(guān),而花青素生物合成途徑是類黃酮途徑的重要分支之一[16,28]。本試驗(yàn)克隆的F3′M屬于CYP75,因此推測(cè)該基因與花青素合成存在一定的聯(lián)系。通過對(duì)Hvn F3′M 蛋白跨膜結(jié)構(gòu)與信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),該蛋白在2種青稞內(nèi)均存在跨膜結(jié)構(gòu)?？缒さ鞍孜挥诩?xì)胞與外界的連接處,對(duì)于細(xì)胞與外界之間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)起著重要作用,具有多種生物學(xué)功能,該結(jié)構(gòu)的存在對(duì)基因功能的研究和探索具有重要意義[29]。亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn),該蛋白均可能定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,這與目前諸多研究發(fā)現(xiàn)的花青素合成位置具有相同性[30]。

花青素是植物中常見的具有強(qiáng)大抗氧化以及清除自由基等生理功能的代謝產(chǎn)物[31-32]。近年以來,關(guān)于F3′M基因在單子葉植物中的研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)Hvn F3′M 蛋白的同源比較分析發(fā)現(xiàn),Hvn F3′M 蛋白與大麥的F3′M 蛋白序列相似性最高,達(dá)到了100%,與NCBI上青稞未知蛋白(KAE8766982.1)相似性達(dá)到了99%,同源比對(duì)發(fā)現(xiàn)NCBI上青稞未知蛋白序列可能存在缺失現(xiàn)象,但須進(jìn)一步驗(yàn)證。Hvn F3′M 氨基酸序列具有絕對(duì)保守的“E××R”基序和典型的“LPPGP”序列,還具有P450超家族最具代表結(jié)構(gòu)域,即血紅素結(jié)構(gòu)域“F××G×R×C×G”,這一特征不僅符合P450超家族蛋白質(zhì)特征,也與植物花青素合成途徑中的F3′H(flavonoid 3′-hydroxylase)氨基酸序列特點(diǎn)相似[16,32-33]。前人研究發(fā)現(xiàn)F3′M蛋白與部分植物(如紅豆杉、云杉等)的F3′H 蛋白序列存在高度相似性,均具有保守結(jié)構(gòu)域(PPGP,AGTDT 和FGAGRRIC)[34]。因 此 本 研究從大麥參考基因組(ftp://ftp.ensemblgenomes. org/pub/release-63/plants/fasta/hordeum _ vulgare/dna) 中 調(diào) 取 了 F3′ H(HORVU1Hr1G094880)序列,比較其蛋白的3個(gè)保守結(jié)構(gòu)域(PPGP、AGTDT 和FGAGRRIC),與‘達(dá)章紫’F3′M 一致性分別為100%、80%和100%,與‘昆 侖12 號(hào)’F3′M 一 致 性 分 別 為100%、60%和100%。F3′H 是類黃酮生物合成途徑中的關(guān)鍵酶,研究表明F3′H 基因在轉(zhuǎn)錄水平上的豐度能有效影響花青素的合成[33],推測(cè)F3′M 蛋白在花青素合成過程中可能與F3′H 蛋白具有相似功能。

花青素的含量與植物籽粒成熟度之間關(guān)系密切,且隨著花青素的累積,部分基因的表達(dá)量也會(huì)顯著升高[35]。例如,蘇樂平等[21]研究發(fā)現(xiàn),青稞類黃酮3-O-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因(Hvt UF3GT)在藍(lán)粒青稞‘INB0N-7’和白粒青稞‘昆侖12號(hào)’的籽粒灌漿后期不表達(dá),而在黑粒青稞和紫粒青稞中的表達(dá)強(qiáng)弱依次為‘黑老鴉’(黑粒)＞‘昆侖17號(hào)’(黑粒)＞‘達(dá)章紫’(紫粒)＞‘涅如姆扎’(紫粒)。趙佳等[36]通過比較7種不同顏色月季花瓣中的花青素苷含量以及Rh MYBs4-1和Rh MYBs6-1的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)紅色花瓣中花青素苷含量顯著高于其他顏色花瓣,其中粉紅色月季花瓣中Rh MYBs4-1的表達(dá)量極低,且花青素苷含量不到紅色花瓣的10%。在本研究中,紫粒青稞種皮著色過程中Hvn F3′M基因的表達(dá)量極顯著(P＜0.01)高于白粒青稞,此外,在紫粒形成過程中的Hvn F3′M基因表達(dá)量隨著粒色的加深,表達(dá)量逐漸升高,且在晚期表達(dá)量達(dá)到了最高,推測(cè)Hvn F3′M基因在紫粒形成過程中正向調(diào)控了花青素的累積,但具體調(diào)控機(jī)理有待進(jìn)一步探索。

4 結(jié)論

本研究從青稞‘昆侖12號(hào)’和‘達(dá)章紫’中克隆了Hvn F3′M基因。該基因全長(zhǎng)為1 675 bp,編碼527 個(gè)氨基酸,屬于P450 超家族。RT-qPCR結(jié)果顯示,該基因在紫色品種‘達(dá)章紫’籽粒形成過程中其表達(dá)量在晚期顯著升高,在白色品種‘昆侖12號(hào)’中則差異不顯著;且在‘達(dá)章紫’表達(dá)量極顯著高于‘昆侖12號(hào)’。因此推測(cè),該基因在青稞籽粒著色過程中發(fā)揮重要正向調(diào)控作用。本研究結(jié)果為進(jìn)一步探究Hvn F3′M基因在花青素的合成中的作用和調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。