顧曉風，顧倩，于杰

（1.蘇州市藥品檢驗檢測研究中心，江蘇蘇州 215104； 2.青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點國家實驗室，山東青島 266200）

乙基纖維素作為藥用輔料從2000 年版開始載入《中國藥典》，具有良好的成膜性和水不溶性，是制備藥物緩控釋制劑最重要的輔料之一[1-2]。藥用輔料是制劑的重要組成部分，同藥物活性成分一同全程參與體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程，所以藥用輔料的安全性直接影藥物制劑的安全性[3-4]。由輔料引起的臨床不良反應(yīng)時有報道[5]，輔料對藥品安全性的影響越來越引起藥品監(jiān)管部門的重視。從2010 年版開始，《中國藥典》更是從定義上就特別強調(diào)了對輔料的安全性評估。

氯離子作為乙基纖維素的安全性指標之一，《中國藥典》2020 年版[6]采用比濁法來評價其殘留控制水平，無法得到氯離子含量的具體數(shù)值。為得到準確可靠的量化數(shù)據(jù)，以提高對乙基纖維素及藥物制劑的安全性控制，筆者參考文獻[7-9]，用離子色譜法測定藥用輔料乙基纖維素中氯離子含量，并根據(jù)JJF 1059.1—2012 《測量不確定度評定與表示》[10]和CNAS GL006—2019 《化學(xué)分析中不確定度的評估指南》[11]，結(jié)合文獻[12-15]對測定方法進行測量不確定度評定，分析不確定度的來源及影響因素，并計算各分量的值，為實驗過程的控制和檢測報告的評估提供科學(xué)的依據(jù)，有利于提高藥品的質(zhì)控水平和測定結(jié)果的準確性。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

離 子 色 譜 儀：DIONEX ICS-5000+ 型，包 括SP-DP 雙泵、DC 柱溫箱模塊、EG-5 淋洗液自動發(fā)生器、AERS 500（4 mm）陰離子抑制器、DC-5 電導(dǎo)檢測器和AS-AP 自動進樣器，附帶Chromeleon 7色譜工作站，美國賽默飛世爾科技公司。

電子天平：XS205DU 型，感量為0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多公司。

超純水儀：Milli-Q 型，密理博（中國）有限公司。

水中氯標準溶液：質(zhì)量濃度1 000 μg/mL，U=0.7%，編號為GBW(E) 080268，中國計量科學(xué)研究院。

乙基纖維素：批號為20140409，分析純，中國醫(yī)藥集團有限公司。

實驗用水為去離子水，由Milli-Q 型超純水儀制得。

1.2 色譜條件

色 譜 柱： Dionex IonPac AS19 柱（250 mm×4 mm，5 μm，美國賽默飛世爾科技公司）；保護柱：IonPac AG19 Guard 柱（50 mm×4 mm，5 μm，美國賽默飛世爾科技公司）；流動相：10 mmol/L 氫氧化鉀溶液，等度洗脫，流量為1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進樣體積：25 μL[16]。

1.3 氯離子對照品溶液制備

精密量取水中氯標準溶液1 mL，置于10 mL 容量瓶中，加水稀釋至標線，搖勻；精密量取1 mL，置于100 mL 容量瓶中，加水稀釋至標線，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL 的氯離子對照品溶液。

1.4 樣品溶液的制備

取樣品約0.25 g，精密稱定，置于燒杯中，加水50 mL，加熱煮沸，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL 容量瓶中，燒杯用水洗滌3 次，洗滌液合并至同一容量瓶中，加水稀釋至標線，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為樣品溶液。

1.5 實驗方法與數(shù)學(xué)模型

取對照品溶液和樣品溶液，按照1.2 色譜條件進樣測定，以色譜峰面積按外標法定量，乙基纖維素中氯離子的含量按照式(1)計算：

mx——樣品的質(zhì)量，g；

Ax——樣品中氯離子的色譜峰面積；

Vx——樣品溶液的稀釋倍數(shù)；

As——氯離子對照品溶液中氯離子的色譜峰面積；

Vs——氯離子對照品溶液的稀釋倍數(shù)；

1 000——單位轉(zhuǎn)換系數(shù)。

2 不確定度來源

根據(jù)實驗過程和數(shù)學(xué)模型，乙基纖維素中氯離子含量測定的不確定度來源包括：

（1）水中氯離子標準溶液引入的不確定度；

（2）氯離子對照品溶液的配制過程引入的不確定度；

（3）樣品的稱量及樣品溶液的配制過程引入的不確定度；

（4）離子色譜儀引入的不確定度；

（5）重復(fù)測定引入的不確定度。

3 不確定度評定

3.1 水中氯標準溶液引入的相對標準不確定度

水中氯標準溶液引入的不確定度為B 類測量不確定度。經(jīng)查閱證書，水中氯標準溶液的質(zhì)量濃度ρ為1 000 μg/mL，相對擴展不確定度為U=0.7%，k=2。則由標準物質(zhì)引入的相對標準不確定度：

3.2 氯離子對照品溶液稀釋引入的不確定度

其相對標準不確定度：

以此類推，10 mL 容量瓶允差為±0.020 mL，產(chǎn)生的標準不確定度為u(V10) = 0.013 04 mL，相對標準不確定度為urel(V10) = 0.001 304；1 mL 移液管的允差為±0.007 mL，標準不確定度為u(V1) = 0.004 087 mL，相對標準不確定度為urel(V1) = 0.004 087。

綜上所述，由對照品溶液稀釋引入的相對標準不確定度：

3.3 樣品稱量引入的不確定度

移取樣品質(zhì)量為250 mg，采用差減法稱量，需稱量2 次，因此由樣品的稱量引入的相對標準不確定度：

3.4 樣品提取引入的不確定度

3.5 樣品稀釋引入的不確定度

樣品稀釋步驟操作簡單，僅使用250 mL 容量瓶1 次，其允差為±0.15 mL，參照3.2 項下對照品溶液稀釋的不確定度計算，由樣品稀釋引入的標準不確定度為u(V250) = 0.174 6 mL，則樣品溶液稀釋引入的相對標準不確定度：

3.6 離子色譜儀引入的不確定度

校正因子的測定主要受離子色譜儀穩(wěn)定性影響，包括離子色譜儀自動進樣器取樣的體積、抑制器的穩(wěn)定性、泵的穩(wěn)定性、待測組分的保留程度等。由于對照品溶液與樣品溶液在相同條件下測定，對于以上因素的影響，可以采用進樣精密度來評定?？疾靸x器的進樣精密度，取對照品溶液連續(xù)進樣6 次，得到氯離子峰面積分別為0.300 0、0.299 5、0.300 0、0.301 4、0.299 5、0.299 7，計算平均值為0.300 0，標準偏差為0.000 714，則由離子色譜儀引入的相對標準不確定度：

3.7 樣品重復(fù)測定引入的不確定度

3.8 合成相對標準不確定度及擴展不確定度

各分量的不確定度來源彼此獨立不相關(guān)，其來源及量值匯總見表1。

表1 各不確定度分量的來源及量值

根據(jù)表1 數(shù)據(jù)進行計算，采用離子色譜法測定乙基纖維素中氯離子含量的相對標準不確定度為urel=0.017 4，因此合成標準不確定度：

u= 0.017 4×0.026 8% = 0.000 466%

測量結(jié)果符合正態(tài)分布，包含概率為95%時，取擴展因子k=2，則擴展不確定度：

3.9 測定結(jié)果表示

參照JJF 1059.1—2012 《測量不確定度評定與表示》[10]相關(guān)規(guī)定，離子色譜法測定乙基纖維素中氯離子含量：

4 結(jié)語

離子色譜法測定乙基纖維素中氯離子含量的不確定度主要來源于氯離子的提取、對照品稀釋和樣品重復(fù)測定。其中，提取和稀釋均源于實驗方法設(shè)計，故選擇更優(yōu)化的方法，可以提高測定結(jié)果的準確度，而不確定度的大小，也反過來說明方法設(shè)計的合理性。其次，針對重復(fù)測定引起不確定度，應(yīng)在實驗中規(guī)范操作，嚴格控制，盡量減小人員帶來的隨機誤差。