程文杰，關(guān)少君，段博芳

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650201；2.云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南昆明 650201)

新孢子蟲病(Neosporosis)是由犬新孢子蟲(Neosporacaninum)引起的可感染多種哺乳動(dòng)物的原蟲病，犬科動(dòng)物是新孢子蟲的終末宿主[1-2]。其中間宿主包括牛、羊、馬等。新孢子蟲病傳播途徑分為垂直傳播和水平傳播[3]，新孢子蟲感染可引起孕畜流產(chǎn)、死胎等，影響肉制品以及乳制品等行業(yè)，每年造成的經(jīng)濟(jì)損失超過10億美元[4]。有研究表明在人血清中檢測到新孢子蟲抗體，雖然沒有分離到蟲體等證據(jù)證明新孢子蟲可感染人類，仍然不能忽視新孢子蟲的人獸共患潛力[5]。

新孢子蟲病是世界性奶牛流產(chǎn)的主要病因[6]，因此關(guān)于奶牛新孢子蟲病的報(bào)道相對較多，而馬屬動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)是畜牧業(yè)的重要組成部分，馬屬動(dòng)物的用途由傳統(tǒng)的役用逐漸向肉用、娛樂等方向轉(zhuǎn)變，隨之而來創(chuàng)造的經(jīng)濟(jì)效益也不斷增加。Leszkowicz M M等[7]發(fā)現(xiàn)，流產(chǎn)母馬新孢子蟲血清陽性率為70.9%，表明新孢子蟲是馬流產(chǎn)的重要原因，因此有必要加強(qiáng)關(guān)于馬屬動(dòng)物新孢子蟲的研究。

國外已有關(guān)于馬、驢等馬屬動(dòng)物新孢子蟲病的血清學(xué)調(diào)查報(bào)道[8-9]，但國內(nèi)新孢子蟲病的研究對象以奶牛為主，關(guān)于馬、驢等其他宿主的相關(guān)報(bào)道相對較少[10]，在云南省已有奶水牛、烏骨羊感染新孢子蟲的報(bào)道[11-12]，但馬屬動(dòng)物新孢子蟲感染情況的調(diào)查尚未有報(bào)道。本研究的目的是調(diào)查云南地區(qū)馬屬動(dòng)物新孢子蟲感染情況，以期能為防控馬屬動(dòng)物新孢子蟲感染提供依據(jù)，從而降低該疾病對畜牧業(yè)的危害。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 從云南16個(gè)地州市中的昆明(114份)、紅河(114份)、怒江(55份)、保山(300份)、德宏(150份)、臨滄(69份)、普洱(116份)、西雙版納(51份)等8個(gè)地區(qū)采集馬屬動(dòng)物血液共計(jì) 969 份，其中馬、驢、騾的血液樣品分別采集到279份、400份、290份，散養(yǎng)和規(guī)?；B(yǎng)殖的馬屬動(dòng)物血液樣品分別采集到907份、62份。記錄采集地區(qū)、品種、養(yǎng)殖方式等背景信息。無菌分離血清，保存在-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要試劑 新孢子蟲病ELISA抗體檢測試劑盒(雙抗原夾心法)，上海酶聯(lián)生物科技有限公司產(chǎn)品(批號(hào)：m1234604)。

1.1.3 主要儀器 微量移液器、八道移液器、Multiskan FC酶標(biāo)儀，賽默飛世爾科技公司產(chǎn)品；LRH系列生化培養(yǎng)箱，上海一恒科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 新孢子蟲病ELISA抗體檢測 操作步驟與判定標(biāo)準(zhǔn)按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 用SPSS 20.0軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05時(shí)差異顯著，P<0.01差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同馬屬動(dòng)物新孢子蟲抗體檢測結(jié)果

969份血清中，共有49份血清抗體檢測結(jié)果為陽性，驢血清抗體陽性率最高，為7.25%；馬血清抗體陽性率最低，為1.08%；騾血清抗體陽性率為5.86%。不同馬屬動(dòng)物血清樣本新孢子蟲抗體陽性率差異極顯著(P<0.01)，見表1。

表1 不同馬屬動(dòng)物新孢子蟲抗體檢測結(jié)果Table 1 Detection results of antibodies against Neospora in different equine species

2.2 不同地區(qū)馬屬動(dòng)物新孢子蟲抗體檢測結(jié)果

在不同地區(qū)分組中，臨滄地區(qū)馬屬動(dòng)物血清抗體陽性率最高，為11.59%；紅河地區(qū)馬屬動(dòng)物血清抗體陽性率最低，為0.88%。不同地區(qū)的馬屬動(dòng)物血清樣本新孢子蟲抗體陽性率差異顯著(P<0.05)，見表2。

表2 不同地區(qū)馬屬動(dòng)物新孢子蟲抗體檢測結(jié)果Table 2 Detection results of antibodies against Neospora in equine species from different regions

2.3 不同養(yǎng)殖模式馬屬動(dòng)物新孢子蟲抗體檢測結(jié)果

散養(yǎng)的馬屬動(dòng)物血清抗體陽性率為4.96%；規(guī)?；B(yǎng)殖的馬屬動(dòng)物血清抗體陽性率為6.45%。不同養(yǎng)殖模式馬屬動(dòng)物血清樣本新孢子蟲抗體陽性率差異不顯著(P>0.05)，見表3。

表3 不同養(yǎng)殖模式馬屬動(dòng)物新孢子蟲抗體檢測結(jié)果Table 3 Detection results of antibodies against Neospora in equine species under different breeding models

3 討論

新孢子蟲病呈世界分布，我國包括云南在內(nèi)的多個(gè)地區(qū)均有相關(guān)報(bào)道，但關(guān)于馬屬動(dòng)物新孢子蟲病的研究相對較少。云南省關(guān)于馬、驢、騾等馬屬動(dòng)物新孢子蟲感染情況未見相關(guān)研究報(bào)道。本研究首次調(diào)查發(fā)現(xiàn)云南馬屬動(dòng)物新孢子蟲總抗體陽性率為5.06%(49/969)，表明云南省馬屬動(dòng)物中存在新孢子蟲的感染，8個(gè)地區(qū)中新孢子蟲病抗體陽性率介于0.88%～11.59%之間，說明新孢子蟲感染在云南省較為普遍。

Nazir M M等[8]采用cELISA發(fā)現(xiàn)巴基斯坦馬、驢、騾的新孢子蟲抗體陽性率為16.0%、32.6%、26.9%；嚴(yán)生旺等[13]發(fā)現(xiàn)青海馬、驢、騾的抗體陽性率分別為8.60%、16.67%、0；劉夢麗等[14]通過rELISA發(fā)現(xiàn)新疆馬抗體陽性率為8.89%；Villa A L等[9]發(fā)現(xiàn)意大利馬、驢抗體陽性率為8.2%、0；Cruz I等[15]發(fā)現(xiàn)葡萄牙馬抗體陽性率1.08%。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)馬、驢、騾血清抗體陽性率1.08%、7.25%、5.86%，與已報(bào)道的其他國家和地區(qū)的新孢子蟲病陽性率存在差異，這可能與飼養(yǎng)條件、地理環(huán)境以及所使用的檢測方法有關(guān)。

本研究中不同馬屬動(dòng)物血清樣本新孢子蟲抗體陽性率差異極顯著(P<0.01)，驢新孢子蟲陽性率顯著高于馬和騾；不同地區(qū)的馬屬動(dòng)物血清樣本新孢子蟲抗體陽性率差異顯著(P<0.05)，表明品種與地理因素是影響馬屬動(dòng)物新孢子蟲感染的重要因素，這與Nazir M M等[8]和Javanmardi E等[16]的研究相一致。犬科動(dòng)物感染新孢子蟲后可持續(xù)排放卵囊污染水源與食物[17]，從而引起其他動(dòng)物的感染。臨滄地區(qū)新孢子蟲陽性率最高，可能是因?yàn)楫?dāng)?shù)亟涤曦S富同時(shí)農(nóng)戶散養(yǎng)犬，養(yǎng)殖過程中管理粗放，這些有利于延長卵囊在環(huán)境中的存活時(shí)間，增大了馬屬動(dòng)物感染新孢子蟲的風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)加強(qiáng)引種前檢疫，定期檢測，淘汰陽性個(gè)體，也要限制馬屬動(dòng)物與犬的接觸。

綜上所述，云南省本研究中受調(diào)查地區(qū)馬屬動(dòng)物中存在新孢子蟲的感染與流行，總抗體陽性率為5.06%。因此，應(yīng)加強(qiáng)對調(diào)查地區(qū)馬屬動(dòng)物新孢子蟲病的重視，采取有效的防控措施，以保證馬屬動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。