鄢 敏，楊 洋，楊懿德，周本國，李林秋，許大鳳*

(1.四川省煙草公司宜賓市公司,四川宜賓 644600；2.安徽省農(nóng)業(yè)科學院煙草研究所,安徽合肥 230031)

煙草根黑腐病是由基生根串株霉菌[(Berk.et br.)Fer.]引起的一種煙草生產(chǎn)重要根莖部病害，主要使根呈特異性黑色壞死從而導致煙苗死亡或地上部分生長不良。煙草根莖部是煙葉獲取營養(yǎng)物質的源頭和通道，根黑腐病害的發(fā)生將嚴重影響煙葉的產(chǎn)量和質量。研究表明，煙草根莖部病害的發(fā)生是土壤微生物造成的，土壤中病原菌的含量直接影響煙草根腐病的發(fā)生。土壤內(nèi)部環(huán)境對煙草根黑腐病的發(fā)生也有一定的影響，土壤pH是影響病原菌存活的重要因子，根莖類病害的發(fā)生與土壤pH密切相關。如果大田管理不到位，土壤肥力不夠，煙苗瘦弱，田間排水不暢，雨后積水嚴重，土壤濕度較大，且氣溫合適，會導致根黑腐病害發(fā)生。因此，筆者從土壤pH人手，同時結合土壤的濕度、肥力和接種體濃度來明確煙草根黑腐病的發(fā)生條件及影響因素，從而有效控制煙草根黑腐病的發(fā)生；結合選育抗病品種，明確不同煙草品種之間的抗病性差異，依據(jù)各地種植條件，合理選擇抗病品種，從而減少病害的發(fā)生，以期為宜賓煙區(qū)煙草根黑腐病的可持續(xù)、綠色防控奠定理論基礎。

1 材料與方法

煙草根黑腐病菌[(Berk.et br.)Fer.],由安徽農(nóng)業(yè)大學植物保護學院病理研究室分離純化獲得。

供試煙草品種由安徽省農(nóng)業(yè)科學院煙草所提供，品種分別為K326、云煙87、云煙85、云煙97、中煙100。

供試煙草采用滅菌土育苗，待長到4片真葉時移栽于口徑9 cm營養(yǎng)缽中，每缽1株，25 ℃恒溫培養(yǎng)至5～7片真葉，準備接種。

用1 mol/L KOH和1 mol/L HCl溶液及滅菌水對營養(yǎng)缽中的土壤進行pH調節(jié)，使土壤pH分別為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0和9.0，每處理15株，設3次重復，移栽煙苗(云煙87，6～7片真葉)。用滅菌水制備煙草根黑腐孢子懸液，孢子濃度為10～10個/mL，用滅菌的剪刀斜切煙草根部造成傷口，取2 mL孢子懸浮液灌根進行接種。每7 d測定一次土壤pH，保持土壤pH不變，25 ℃恒溫培養(yǎng)。接種后第20天檢查發(fā)病情況, 并參照煙草行業(yè)標準YC/T 39—1996進行分級，計算病情指數(shù)。

將烘干的土樣分別加水稱重，將其土壤含水量分別調為20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%，每天稱重補水。移栽煙苗(云煙87，6～7片真葉)。用滅菌水制備煙草根黑腐孢子懸液，孢子濃度為10～10個/mL，對煙苗進行接種(方法同“.”)，每處理15株，3次重復，25 ℃恒溫培養(yǎng)。接種后第20天檢查發(fā)病情況, 并參照煙草行業(yè)標準YC/T 39—1996進行分級，計算病情指數(shù)。

用滅菌水制備煙草根黑腐病原菌孢子懸液，孢子濃度分別為10、10、10、10、10個/mL。移栽煙苗(云煙87，6～7片真葉)，對煙苗進行接種(方法同“.”)，每處理15株，重復3次，25 ℃恒溫培養(yǎng)。接種后第20天檢查發(fā)病情況, 并參照煙草行業(yè)標準YC/T 39—1996進行分級，計算病情指數(shù)。

煙苗(云煙87)移栽前，在營養(yǎng)缽土中加入尿素，設置5個不同處理，分別為10、15、20、25、30 g/m，移栽煙苗，每處理15株，重復3次。用滅菌水制備煙草根黑腐孢子懸液，孢子濃度為10～10個/mL，對煙苗進行接種(方法同“.”)，25 ℃恒溫培養(yǎng)。接種后第20天檢查發(fā)病情況, 并參照煙草行業(yè)標準YC/T 39—1996進行分級，計算病情指數(shù)。

供試煙草K326、云煙87、云煙85、云煙97、中煙100，采用滅菌土育苗，待長至4片真葉時移栽于口徑為9 cm營養(yǎng)缽中，每缽1株，25 ℃恒溫培養(yǎng)至6～7片真葉，準備接種。用滅菌水制備煙草根黑腐孢子懸液，孢子濃度為10～10個/mL，用滅菌的剪刀斜切煙草根部造成傷口，取2 mL孢子懸浮液灌根進行接種，對照株接清水，每個處理15株，3次重復。25 ℃恒溫培養(yǎng)，保持土壤濕潤。接種后第20天檢查發(fā)病情況, 并參照煙草行業(yè)標準YC/T 39—1996進行分級，計算病情指數(shù)，進行不同品種室內(nèi)抗性差異測定。

采用DPS數(shù)據(jù)處理軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，差異顯著性采用單因素方差分析及LSD法檢驗，以病情指數(shù)衡量煙草品種發(fā)病嚴重度，并劃分抗性類型。

2 結果與分析

土壤pH對煙草根黑腐病發(fā)生有一定的影響(表1)。土壤pH為 4時，不適合煙草根黑腐病的發(fā)生，病株率為0；當土壤pH 為5時，病株率及病情指數(shù)最高，分別為85.10%和52.70，與其他pH條件下病株率和病情指數(shù)達顯著差異水平(<0.05),但當土壤pH為5和9時，其病株率無極顯著差異(>0.01)；隨著土壤pH的增大，煙株的病株率和病情指數(shù)逐漸減小，當pH為7時，煙株的病株率和病情指數(shù)達到最小，分別為40.73%和15.73；隨著pH的增加，煙株的病株率和病情指數(shù)逐漸增大，當pH為9時，煙株的病株率和病情指數(shù)分別為70.36%和34.14，僅次于土壤pH 5。因此，煙草根黑腐病的發(fā)生與土壤pH有一定的關系，弱酸、堿性的土壤條件有利于病害的發(fā)生。

土壤含水量影響煙草根黑腐病發(fā)生(表2)。當土壤含水量為20%、30%時，不利于煙株發(fā)病，病株率為0；當土壤含水量≥40%時，隨著含水量的增加，病株率越大，病情指數(shù)越高，煙草根黑腐病發(fā)生越嚴重；當土壤含水量達到80%時，病株率達到最大，為88.9%，病情指數(shù)達到最高，為60.2；但土壤含水量為70%時，病株率為77.8%，其病株率與含水量80%差異不顯著。因此，煙草根黑腐病的發(fā)生與土壤含水量密切相關，土壤含水量越大，煙草根黑腐病發(fā)生越嚴重。

表1 pH對植株發(fā)病的影響

表2 不同土壤含水量對植株發(fā)病的影響

由表3可知，接種體濃度為10個孢子/mL時病株率為0，當接種體濃度≥10個孢子/mL，植株開始發(fā)病，且隨著接種體濃度的增大，煙株病株率逐漸增大。接種體濃度為10個孢子/mL時，煙株的病株率最高，病情指數(shù)達到最大；且接種體濃度為10個孢子/mL時，其病株率為77.78%，與接種體濃度為10個孢子/mL時的病株率和病情指數(shù)差異不顯著。因此，煙草根黑腐孢子接種體量影響煙草根黑腐病的發(fā)生，當濃度低于10個孢子/mL時,不利于煙株發(fā)病，當接種體濃度≥10個孢子/mL時，接種體濃度越大，煙株病株率越高，病情指數(shù)就越大，根黑腐病越嚴重。

表3 不同接種體濃度對植株發(fā)病的影響

由表4可知，施氮組煙草的平均病株率和病情指數(shù)均高于不施氮組。隨著施氮量的增加，病株率逐漸增多，病情指數(shù)逐漸增大，當施氮量達25 g/m時，其病株率達到最大，病情指數(shù)達到最高，分別為85.18%、52.80。但當施氮量達30 g/m時，其病株率反而降低，病情指數(shù)減小，分別為66.66%和37.90。因此，氮肥的施加會加重煙草根黑腐病的發(fā)生。

表4 施氮量對植株發(fā)病的影響

由表5可知，不同煙草品種煙草根黑腐病抗性差異顯著。供試5個煙草品種的病株率為51.85%～96.3%，病情指數(shù)為20.37～62.97，其中云煙87的病情指數(shù)最高，為62.97，為高感品種；中煙100病情指數(shù)為20.37，為抗性品種；云煙85和K326為中抗品種，云煙97為感病品種，未測到高抗品種。

表5 不同煙草品種煙草根黑腐病的抗性差異

3 結論與討論

該試驗結果表明，偏酸性、堿性土壤有利于煙草根黑腐病的發(fā)生，而強酸性的土壤環(huán)境有利于控制病害，與魏國勝等的研究結果一致。Meyer提出，土壤抑菌效果是土壤堿性飽和度、鋁離子濃度、土壤 pH共同作用的結果；羅文富指出，影響煙草根黑腐病發(fā)生的土壤因素多樣，不同地區(qū)與抑病有關的土壤因素和抑病機制可能不同；因此生產(chǎn)上不僅要通過調節(jié)土壤酸堿度來控制根黑腐病的發(fā)生，更要結合應用土壤抑制機制來達到防治病的目的。土壤含水量的增加將會加重煙草根黑腐病的發(fā)生，即在低洼陰濕的田塊，此病易暴發(fā)，在田間生產(chǎn)中，及時采用行間深松和中耕松土的方法，增強土壤通氣透水性，以控制病的發(fā)展；孢子濃度在10～10個孢子/mL，濃度越大，發(fā)病率越高，病情越嚴重，在田間生產(chǎn)中，前茬作物要及時清理干凈，避免病殘體在田間腐爛，而導致煙苗被侵染，減少土壤中病原孢子的殘留；一定范圍內(nèi)，氮肥的施加加重了煙草根黑腐病的發(fā)生，左麗娟等研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)施肥中，鉀肥的增施可以顯著提高根黑腐病抗性。因此，田間管理中，可以適當增施鉀肥、腐熟的有機肥，增強煙草的抗病力，從而減輕根黑腐病的發(fā)生。

煙草根黑腐病給煙草生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失，選育抗病品種是病害防治最經(jīng)濟有效的措施；成功培育的抗根黑腐病的白肋煙品種，使病情得到較大控制，是抗病育種的重要抗原。該試驗5個供試品種中未發(fā)現(xiàn)高抗品種，竇彥霞等研究表明，我國不同地區(qū)來源煙草根黑腐病菌致病力分化明顯，并具有多樣性，伴隨著病原菌不斷發(fā)生生理小種的變異，以及不同地區(qū)生態(tài)條件的不同，部分品種在不同種植區(qū)域，抗感性表現(xiàn)也不同，抗病品種的選育及抗性評價有待進一步研究。