李程勛, 徐曉俞, 李愛萍*, 鄭開斌

蠶豆花水提取物的UPLC-ESI-QTOF質(zhì)譜聯(lián)用分析及抗氧化活性研究

李程勛1, 徐曉俞1, 李愛萍1*, 鄭開斌2*

(1. 福建省農(nóng)業(yè)科學院作物研究所，福州 350013；2. 福建省農(nóng)業(yè)科學院，福州 350003)

為闡明蠶豆()花水提取物的藥效作用基礎，采用超高效液相色譜-高分辨飛行時間質(zhì)譜(UPLC-ESI-QTOF-MS)聯(lián)用技術(shù)對其水提取物進行分析鑒定，并測定其抗氧化活性。結(jié)果表明，從蠶豆花水提取物中鑒定出178種化學成分，其中相對含量大于0.01%的成分有107種，相對含量較高的成分有野黃芩素-7-新橘皮糖苷、3-吲哚基--d-葡糖苷酸環(huán)己胺鹽、螺環(huán)內(nèi)脂E、蘆丁、海藻酸丙二醇酯、山柰酚-3--d-半乳糖甙、4,8-二羥基喹啉-2-甲酸等。蠶豆花水提取物的主要成分以黃酮類和生物堿類為主，分別有16和17種，相對含量分別為36.53%和34.33%。清除DPPH和ABTS+自由基的IC50值分別為26.5 和25.0g/mL。黃酮類和生物堿類是蠶豆花發(fā)揮功效的主要物質(zhì)基礎，蠶豆花水提取物具有較強的抗氧化活性，蠶豆花具有較高的應用價值。

蠶豆; 花; 水提物; 化學成分；抗氧化

蠶豆()，別名蘭花豆、胡豆、南豆等, 為豆科(Leguminosae)豌豆屬一年生草本植物[1–2]。蠶豆大多數(shù)品種具有無限開花的習性，但多花不多實，其有效結(jié)莢數(shù)不足現(xiàn)蕾數(shù)的15%[3]，蠶豆開花后，營養(yǎng)需求增大，植株營養(yǎng)供應不足造成大量落花落莢現(xiàn)象，在生產(chǎn)過程中會對蠶豆進行疏花處理，保證蠶豆有效莢的營養(yǎng)供應，疏花過程中摘除的蠶豆花一般都直接舍棄在農(nóng)田中，沒有加以利用，對蠶豆花進行開發(fā)利用，將實現(xiàn)廢棄資源的利用，創(chuàng)造出額外的經(jīng)濟價值，提高企業(yè)和農(nóng)民的經(jīng)濟收入，具有重要的意義。

關(guān)于蠶豆化學成分的研究，前人報道種子中含有大豆皂苷 I、大豆皂苷bg和赤豆皂苷IV等成分[4–5]; 蠶豆葉片中含有山柰酚-3--葡萄糖-7--鼠李糖苷[6];蠶豆地上部分含有10個由槲皮素和山奈酚皂苷組成的黃酮皂苷[7–8]；蠶豆種皮中含有6個原花青素低聚物[9]，8個兒茶素及其衍生物的單體和二聚體[10]。蠶豆種子提取物中的縮合單寧、蠶豆地上部分提取物中的多酚類化合物和蠶豆皮提取物中的原花青素具有良好的抗氧化活性[11–12]。此外蠶豆提取物還具有抑制人類腫瘤細胞株增殖[13]、鏈脲霉素誘導的糖尿病活性[14]和黃嘌呤氧化酶活性[7]等功效。

蠶豆花具有涼血止血、降血壓、防癌抗癌等功效[15–16]，目前，關(guān)于蠶豆花的研究主要集中在花莢脫落[17]、形成過程[17–18]和功效成分[16,19]等方面。郭向群等[16]報道蠶豆花中含有槲皮素和山奈酚等黃酮類化合物，鄭開斌等[20]報道蠶豆花中含有左旋多巴，然而蠶豆花水提取液中是否含有其他種黃酮類、氨基酸類成分以及其他類型化學成分尚未明確，尚沒有關(guān)于蠶豆花水提取物成分和功效作用方面的相關(guān)研究，使蠶豆花難以得到進一步開發(fā)利用。

UPLC-ESI-QTOF質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)目前已被廣泛應用于化學成分的表征研究中[21–24]，UPLC具有檢測速度快、靈敏度高、分離能力強的優(yōu)點, QTOF具有分辨率高、分子量上限高、定性能力強等優(yōu)點[25–26]。因此，本研究利用UPLC-ESI-QTOF質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)首次對蠶豆花水提取物中的化學成分進行分析鑒定，進一步測定其抗氧化活性，以闡明蠶豆花藥效物質(zhì)基礎，為蠶豆花的應用提供科學依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料和儀器

蠶豆()鮮花于2019年2月25日采自福建省連江縣丹陽試驗基地。

超高效液相色譜UPLC-TripleTOF串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀(美國AB SCIEX公司)；Denver TP-214電子天平(丹佛儀器有限公司)；Centrifuge5804R離心機(Eppendorf公司)；T6新世紀紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。

1.2 樣品制備

稱取5 kg蠶豆鮮花置于100 L蒸餾罐中，加入20 kg純水，加熱回流提取2 h，過濾，即得蠶豆花水提取物，待用。

1.3 UPLC-MS分析

分別移取5 mL蠶豆花提取物樣品，真空濃縮抽干，加入500L提取試劑(乙腈∶甲醇∶水=2∶2∶1)超聲提取15 min，重復提取3次，提取物于4 ℃，1 200×離心10 min，取上清液，真空抽干，用100L復溶液(乙腈∶水=1∶1)復溶，得上機樣品，待用。

色譜條件 色譜柱：BEH C18柱(100 mm× 2.1 mm, 1.7m)；柱溫：45 ℃；流動相A：水(含0.1%甲酸)，流動相B：乙腈/異丙醇(含0.1%甲酸)= 1∶1；梯度洗脫程序：0～3 min 5%～25% B；3～9 min 25%～95% B；9～13 min 95% B；13～13.1 min 95%～ 5% B, 并保持3 min；流速：0.40 mL/min，進樣量：10L。

質(zhì)譜條件 樣品質(zhì)譜信號采集采用正離子掃描模式，電噴霧毛細管電壓：1.0 kV，進樣電壓：40 V,碰撞電壓：6 eV；離子源溫度：120 ℃，去溶劑溫度：500 ℃；載氣流量：900 L/h；質(zhì)量掃描范圍：50～1 000，掃描時間：0.1 s，間隔時間：0.02 s。

1.4 抗氧化活性研究

DPPH自由基清除能力測定 參照Baltrusai- tyte等[27]的方法，取蠶豆花提取物旋蒸抽干，用純水配置成10、20、30、40、50g/mL蠶豆花提取物溶液。取蠶豆花提取物溶液和DPPH自由基溶液(39.40g/mL)等量混合均勻，靜置30 min，測定混合液在517 nm波長下的吸光度，計算蠶豆花提取物溶液對DPPH自由基的清除率，每個樣品重復3次。DPPH自由基的清除率=(1-1/2)×100%, 式中,1為DPPH自由基與蠶豆花提取物混合溶液的吸光值；2為DPPH自由基與純水混合溶液的吸光值。

ABTS+自由基清除能力測定 參照管瑛等[28]的方法，取76 mg ABTS和13 mg過硫酸鉀配置成20 mL溶液，室溫下暗室靜置反應16 h，將溶液稀釋50倍后待用。取蠶豆花提取物溶液和ABTS+自由基溶液混合均勻，靜置30 min，測定混合液在波長734 nm下的吸光值，計算蠶豆花提取物溶液對ABTS+自由基的清除率，每個樣品重復3次。ABTS+自由基清除率=(1-3/4)×100%, 式中,3為ABTS+自由基與蠶豆花提取物混合溶液的吸光值；4為ABTS+自由基與純水混合溶液的吸光值。

1.5 數(shù)據(jù)處理和分析

UPLC-MS分析的原始數(shù)據(jù)經(jīng)Progenesis QI (Waters Corporation, Milford, USA)代謝組學處理軟件處理，最終得到1個保留時間、質(zhì)荷比和峰強度的數(shù)據(jù)矩陣，再與HMDB數(shù)據(jù)庫和Metlin數(shù)據(jù)庫進行比對，根據(jù)得分進行篩選，閾值選擇為60分，對代謝物質(zhì)進行定性分析[29–30]。參照徐曉俞等[31]的方法，采用峰面積歸一化法計算代謝物質(zhì)的相對含量。采用Microsoft Excel 2003和SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果和分析

2.1 提取物成分鑒定分析

利用UPLC-ESI-QTOF質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)從蠶豆花水提取物中鑒定出178種化學成分(表1)，總離子流圖見圖1，其中相對含量0.01%以上的成分有107種, 相對含量0.1%以上的成分有66種(表2)。

2.1.1 氨基酸類和肽類化合物

化合物1278.122 5 [M + H]+，分子量277，失去1分子果糖基(162)產(chǎn)生碎片116.086 5, 進一步失去NH3(17)、HCOOH (46)，產(chǎn)生碎片53.068 1,分子式C11H19NO7，結(jié)合文獻[32]推測為-(1-脫氧- 1-果糖基)脯氨酸。

化合物2294.154 0 [M + H]+，分子量293，失去1分子果糖基產(chǎn)生碎片132.036 9，進一步失去NH3、HCOOH，產(chǎn)生碎片69.046 2，分子式C12H23NO7，結(jié)合文獻[32]推測為-(1-脫氧-1-果糖基)亮氨酸。

化合物3130.048 7 [M + H]+，分子量129，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片84.050 0、113.088 6，分子式C5H7NO3，結(jié)合文獻[33]推測為d-焦谷氨酸。

化合物4289.138 6 [M + H-2H2O]+，分子量324，失去1分子半乳糖基(162)產(chǎn)生碎片127.061 4，分子式C12H24N2O8，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為半乳糖基羥基賴氨酸。

化合物5326.122 1 [M + H-H2O]+，分子量343，失去1分子果糖基產(chǎn)生碎片164.081 1, 進一步失去NH3(17)、HCOOH (46)，產(chǎn)生碎片101.013 8,分子式C15H21NO8，結(jié)合文獻[32]推測為-(1-脫氧- 1-果糖基)酪氨酸。

化合物6203.137 7 [M + H]+，分子量202，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片157.055 9、186.056 3，分子式C9H18N2O3，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為丙氨酰基-dl-亮氨酸。

化合物7205.095 4 [M + H]+，分子量204, 失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片159.063 4、188.056 9，分子式C11H12N2O2，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為l-色氨酸。

表1 蠶豆花水提取物化學成分的種類和相對含量

圖1 蠶豆花水提取物總離子流圖

表2 蠶豆花水提取物的化學成分和相對含量

續(xù)表(Continued)

化合物8322.091 6 [M + H-H2O]+, 分子量339, 失去1分子葡萄糖基(162)產(chǎn)生碎片160.052 4, 分子式C15H19NO9，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為環(huán)多巴葡萄糖苷。

化合物9257.053 9 [M + H]+，分子量256，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片211.053 9、240.044 3，分子式C8H14N2O5，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為l-羥基脯氨酸。

化合物10346.196 4 [M + H]+，分子量345，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片300.138 1、329.095 9，分子式C15H27N3O6，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為亮氨酸-纈氨酸-天冬氨酸。

化合物11290.170 2 [M + H]+，分子量289，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片244.079 7、273.067 9，分子式C12H23N3O5，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為絲氨酸-亮氨酸-丙氨酸。

化合物12346.196 5 [M + H]+，分子量345，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片300.154 8、329.202 5，分子式C15H27N3O6，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為纈氨酸-亮氨酸-天冬氨酸。

化合物13336.191 4 [M + CH3OH + H]+,分子量303, 失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片290.067 8、319.043 9，分子式C16H21N3O3，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為纈氨酸-色氨酸。

化合物14346.196 8 [M + H]+，分子量345，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片300.082 7、329.074 7，分子式C15H27N3O6，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為纈氨酸-天冬氨酸-亮氨酸。

化合物15330.237 7 [M + H]+，分子量329，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片284.049 5、313.055 7，分子式C16H31N3O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為纈氨酸-亮氨酸-纈氨酸。

化合物16332.216 9 [M + H]+，分子量331，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片286.066 2、315.042 1，分子式C15H29N3O5，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為亮氨酸-絲氨酸-異亮氨酸。

化合物17344.252 9 [M + H]+，分子量343，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片298.052 0、327.059 5，分子式C17H33N3O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為纈氨酸-異亮氨酸-亮氨酸。

化合物18336.190 6 [M + H]+，分子量335，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片290.055 3、319.162 7，分子式C17H25N3O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為甘氨酸-苯丙氨酸-異亮氨酸。

化合物19358.268 7 [M + H]+，分子量357，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片312.097 6、341.187 1，分子式C18H35N3O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為異亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸。

化合物20426.237 5 [M + H]+，分子量425，失去1分子HCOOH、NH3產(chǎn)生碎片380.055 2、409.049 3，分子式C24H31N3O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為異亮氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸。

2.1.2 萜類化合物

化合物21149.058 2 [M + H-H2O]+，分子量166，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片103.101 2，分子式C9H12O4，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為京尼平酸。

化合物22247.131 3 [M + H-H2O]+，分子量為264，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片201.087 1,分子式為C15H20O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為脫落酸。

化合物23221.188 3 [M + H]+，分子量220, 失去1分子H2O (18)產(chǎn)生碎片203.103 7, 分子式C15H24O，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為石竹素。

化合物24497.246 9 [M + Na]+，分子量474，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片451.082 5，分子式C27H38O7，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為赤芝酸l。

2.1.3 黃酮類化合物

黃酮苷類化合物易脫去糖基形成黃酮苷元，黃酮苷元和對應的黃酮類化合物裂解規(guī)律一樣，即黃酮結(jié)構(gòu)中的C環(huán)的C1與C2位和C3與C4位已發(fā)生RDA裂解反應，產(chǎn)生A環(huán)和B環(huán)2個碎片離子。

化合物25611.160 5 [M + H]+，分子量610，失去1分子鼠李糖基(146)產(chǎn)生碎片465.238 2，繼續(xù)失去1分子葡萄糖基產(chǎn)生碎片303.151 3，分子式C27H30O16，結(jié)合文獻[34]推測為蘆丁。

化合物26433.111 9 [M + H]+，分子量432，失去1分子C4H8O4(120)產(chǎn)生碎片313.061 1,繼續(xù)失去1分子醛基產(chǎn)生碎片283.058 8，分子式C21H20O10，結(jié)合文獻[35]推測為異牡荊素。

化合物27465.101 9 [M + H]+，分子量464，失去1分子葡萄糖基產(chǎn)生碎片303.054 2，分子式C21H20O12，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為異懈皮苷。

化合物28595.1648 [M + H]+，分子量為594，失去1分子脫氧己糖-己糖基(308)產(chǎn)生碎片287.055 4，分子式為C27H30O15，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為野黃芩素-7-新橘皮糖苷。

化合物29287.053 4 [M + H]+，分子量286，失去1分子CO(28)產(chǎn)生碎片259.043 6，分子式C15H10O6，結(jié)合文獻[32,34]推測為山奈酚。

化合物30449.106 8 [M + H]+，分子量448，失去1分子半乳糖基產(chǎn)生碎片287.055 2，分子式C21H20O11，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為山柰酚-3--d-半乳糖甙。

化合物31271.058 6 [M + H]+，分子量270，失去2分子CO產(chǎn)生碎片215.081 2，分子式C15H10O5，結(jié)合文獻[36]推測為高良姜素。

化合物32491.117 2 [M + H]+，分子量490, 失去1分子乙?；咸烟擒?204)產(chǎn)生碎片287.071 6, 分子式C23H22O12，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為矢車菊素-3-(6-乙酰葡糖苷)。

化合物33479.114 3 [M + H]+，分子量478，失去1分子葡萄糖苷產(chǎn)生碎片317.009 9，分子式C22H22O12，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為矮牽牛素葡萄糖苷。

化合物34303.048 7 [M + H]+，分子量302，C環(huán)1、3位RDA裂解產(chǎn)生碎片153.034 7, 分子式C15H10O7，結(jié)合文獻[37]推測為槲皮素。

化合物35401.122 1 [M + H-H2O]+，分子量418，失去1分子葡萄糖苷產(chǎn)生碎片239.139 7，分子式C21H22O9，結(jié)合文獻[38]推測為新甘草苷。

2.1.4 脂肪醇類化合物

化合物36200.199 4 [M + CAN + H]+,分子量158，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片182.086 3,分子式C10H22O，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為1-癸醇。

化合物37228.230 9 [M + CAN + H]+,分子量186，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片210.072 3，分子式C12H26O，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為十二醇。

2.1.5 脂肪酸和有機酸類化合物

化合物38305.235 6 [M + H]+，分子量304，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片259.082 1，分子式C16H32O5，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為紫膠桐酸。

化合物39211.167 6 [M + H]+，分子量210, 失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片165.086 0, 分子式C13H22O2，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為7-十三炔酸。

化合物40305.245 7 [M + H]+，分子量304，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片259.023 6，分子式C20H32O2，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為5,11,14, 17-二十碳四烯酸。

化合物41293.209 8 [M + H]+，分子量292，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片247.226 8，分子式C18H28O3，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為12,13-環(huán)氧-9,11,15-十八碳三烯酸。

化合物42311.220 1 [M + H]+，分子量310, 失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片265.219 3, 分子式C18H30O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為9-氧代-11- (3-戊基-2-環(huán)氧乙烷基)-10()-十一烯酸。

化合物43383.278 6 [M + H-2H2O]+, 分子量418, 失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片337.231 5,分子式C22H42O7，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為棕櫚酰葡萄糖苷酸。

化合物44295.225 7 [M + H-H2O]+，分子量312，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片249.087 0，分子式C18H32O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為13-過氧羥基-9,11-十八碳二烯酸。

化合物45376.102 1 [M + CAN + Na]+，分子量312, 失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片330.061 8,分子式C14H16O8，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為3,4,5-三羥基-6-[(2-苯乙?；?氧基]氧烷-2-羧酸。

化合物46537.2116 [M + 2Na-H]+，分子量492，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片491.280 0，分子式C26H36O9，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為4-羥基視黃酸葡糖苷酸。

化合物47309.204 7 [M + H-H2O]+，分子量326，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片263.238 0，分子式C18H30O5，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為2,3-丁炔-8-異構(gòu)前列腺素。

化合物48339.251 9 [M + H-H2O]+，分子量356，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片293.0989，分子式C20H36O5，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為13,14-二氫前列腺素。

2.1.6 生物堿類和其他類化合物

化合物49273.120 1 [2M + K]+，分子量117, 失去2分子HCOOH產(chǎn)生碎片181.072 3, 分子式C5H11NO2，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為5-氨基頡草酸。

化合物50441.118 2 [M + CH3OH + H]+,分子量408, 失去1分子環(huán)己胺鹽(99)產(chǎn)生碎片342.077 5, 再失去1分子葡萄糖苷酸(194)產(chǎn)生碎片148.072 6, 分子式為C20H28N2O7，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為3-吲哚基--d-葡糖苷酸環(huán)己胺鹽。

化合物51374.143 8 [M + H-2H2O]+, 分子量409，失去1分子葡萄糖苷酸(194)產(chǎn)生碎片180.057 6，分子式C16H27NO11，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為軟骨d-葡萄糖醛酸。

化合物52206.043 2 [M + H]+，分子量205，失去1分子HCOOH產(chǎn)生碎片160.054 4，分子式C10H7NO4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為4,8-二羥基喹啉-2-甲酸。

化合物53309.086 5 [M + H]+，分子量為308, 失去1分子羥基(17)產(chǎn)生碎片292.083 0, 再失去1分子NH3產(chǎn)生碎片275.085 6, 分子式C17H12N2O4,結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為酒渣堿。

化合物54316.284 0 [M + H]+，分子量315，失去1分子羥基產(chǎn)生碎片299.285 5，再失去1分子NH3產(chǎn)生碎片282.271 4，分子式C18H37NO3，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為6-羥基鞘氨醇。

化合物55462.339 9 [M + H]+，分子量為461，失去1分子半乳糖苷產(chǎn)生碎片300.383 8, 分子式C24H47NO7，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為神經(jīng)鞘氨醇半乳糖苷。

化合物56302.304 4 [M + H]+，分子量301, 失去1分子羥基產(chǎn)生碎片285.061 0, 再失去1分子NH3產(chǎn)生碎片268.043 4, 分子式C18H39NO2, 結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為d-赤式-C18-二氫-d-神經(jīng)鞘氨醇。

化合物57708.489 4 [M + H-H2O]+，分子量725，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片690.423 7, 分子式C43H67NO8，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為螺環(huán)內(nèi)酯。

化合物58490.363 3 [M + H-H2O]+，分子量507，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片472.278 0，分子式C26H54NO6P，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為溶血磷脂。

化合物59338.341 0 [M + H]+，分子量337，失去1分子C19H37(265)產(chǎn)生碎片73.375 6, 再脫去CH2產(chǎn)生碎片59.364 0，分子式C26H54NO6P, 結(jié)合文獻[39]推測為芥酸酰胺。

化合物60328.138 7 [M + CAN + H]+,分子量286，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片310.269 9, 分子式C13H18O7，結(jié)合文獻[40]推測為水楊甙。

化合物61504.170 2 [M + CAN + H]+,分子量462，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片486.106 5, 分子式C17H28O13，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為海藻酸丙二醇酯。

化合物62463.122 2 [M + K]+，分子量424，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片445.129 4，分子式C20H24O10，結(jié)合HMDB數(shù)據(jù)庫推測為蕓香素。

化合物63417.117 4 [M + H]+，分子量416，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片399.110 3，分子式C21H20O9，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為13-二氫阿霉酮。

化合物64235.167 5 [M + H]+，分子量234，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片217.154 4，分子式C15H22O2，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為日齊醇。

化合物65309.204 4 [M + H]+，分子量308，失去1分子H2O產(chǎn)生碎片291.187 3，分子式C18H28O4，結(jié)合Metlin數(shù)據(jù)庫推測為Soraphen O。

化合物66263.237 3 [M + H]+，分子量262, 失去1分子C3H6O (58)產(chǎn)生碎片205.220 8, 分子式C18H30O，結(jié)合文獻[41]推測為法尼基丙酮。

提取物中相對含量較高的成分有野黃芩素-7-新橘皮糖苷(21.59%)、3-吲哚基--d-葡糖苷酸環(huán)己胺鹽(12.36%)、螺環(huán)內(nèi)脂E (10.25%)、蘆丁(6.19%)、海藻酸丙二醇酯(3.46%)、山柰酚-3--d-半乳糖甙(3.41%)和4,8-二羥基喹啉-2-甲酸(3.00%)等。

黃酮類和生物堿類成分是蠶豆花水提取物中相對含量最高的2類成分, 分別達到36.53%和34.33%,黃酮類和生物堿類是蠶豆花水提取物的主要物質(zhì)基礎，對蠶豆花水的功效發(fā)揮具有重要作用。生物堿類成分有17種, 3-吲哚基--d-葡糖苷酸環(huán)己胺鹽、螺環(huán)內(nèi)脂E、4,8-二羥基喹啉-2-甲酸、酒渣堿、6-羥基鞘氨醇和軟骨素d-葡萄糖醛酸相對含量較高，分別為12.36%、10.25%、3.00%、2.91%、1.08%和1.05%;黃酮類成分有16種，包括有2種花青素[矢車菊素- 3-(6-乙酰葡糖苷)和芍藥素-3--葡萄糖苷]，野黃芩素-7-新橘皮糖苷、蘆丁、山柰酚-3--d-半乳糖甙和異牡荊素相對含量較高，分別為21.59%、6.19%、3.41%和2.21%。

本研究還檢測到12種氨基酸和18種肽類成分,總相對含量分別達3.67%和4.05%，主要包括色氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、脯氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、丙氨酸、蘇氨酸和瓜氨酸等氨基酸成分。11種萜類成分，相對含量均小于1%，其中3種單萜類成分：京尼平酸、芳樟醇氧化物d 3-芹菜糖基(1-6)葡萄糖甙和L-紫蘇醇；5種倍半萜類成分：脫落酸、5--甲基-melledonal、二氫獼猴桃內(nèi)酯、石竹素和-姜黃烯; 1種二萜類成分：水芹烯二聚物; 2種三萜類成分：赤芝酸l和安息香膠酸。9種脂肪酸成分, 12, 13-環(huán)氧-9,11,15Z-十八碳三烯酸、棕櫚酰葡萄糖苷酸、9-氧代-11-(3-戊基-2-環(huán)氧乙烷基)-10()-十一烯酸和紫膠桐酸相對含量較高, 分別為2.77%、1.87%、1.55%和1.16%。9種有機酸和3種脂肪醇成分，相對含量均小于1%。

2.2 抗氧化活性分析

從圖2可見，蠶豆花水提取物對DPPH和ABTS+自由基的清除能力均高于維生素C，其IC50值分別為26.5和25.0g/mL，表明蠶豆花水提取物具有較強的DPPH和ABTS+自由基清除能力。

3 結(jié)論和討論

黃酮類化合物屬植物次生代謝產(chǎn)物，是廣泛存在于植物中具有功效活性的一類化合物，黃酮類化合物普遍具有良好的抗氧化、抑菌作用，能夠防治血管疾病、調(diào)節(jié)動物激素水平和提高機體免疫力。蠶豆花水提取物中野黃芩素-7-新橘皮糖苷和山柰酚-3--d-半乳糖甙都以糖苷的形式存在，其中野黃芩素能通過抑制EGFR/ERK1/2通路的激活來抑制結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展[42]，同時具有抗炎鎮(zhèn)痛[43]、活血化瘀和祛風除濕等功效；山柰酚具有良好的抗癌活性，能抑制肺癌、肝癌、結(jié)腸癌和卵巢癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，主要通過促使癌細胞內(nèi)活性氧生成，誘導癌細胞發(fā)生線粒體途徑凋亡來起到抗癌作用[44]，同時具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等多種功效。蘆丁具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗病毒、預防和治療心腦血管疾病等作用[45]；異牡荊素具有降血糖、抗菌、調(diào)節(jié)記憶、抑制-葡萄糖苷酶、降血壓和抗氧化等作用。

圖2 蠶豆花水提取物DPPH和ABTS+自由基清除能力

生物堿類化合物種類較多，具有多種藥理活性。蠶豆花水提取物中酒渣堿具有抗HIV、抗菌和預防癌癥等作用[46]；6-羥基鞘氨醇可以抑制結(jié)腸癌細胞的生長[47]；軟骨素d-葡萄糖醛酸中葡醛酸是抗壞血酸的前體，葡醛酸參與糖代謝，其與冰乙酸內(nèi)酯化形成葡醛內(nèi)酯，葡醛內(nèi)酯具有減肥、增強能量、抗衰老等功效，常用于功能性飲料、化妝品和食品等領域[48]。

本研究結(jié)果表明，蠶豆花水提取物還含有多種氨基酸類和萜類成分，具有較高的功效作用和營養(yǎng)價值。蠶豆花水提取物含有7種人類必需氨基酸: 色氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸和蘇氨酸，氨基酸種類豐富，營養(yǎng)價值高。萜類化合物中京尼平酸具有抗氧化、抗應激等藥理作用；芳樟醇氧化物是一種多香韻的香料，具有強烈的甜香、木香和花香[49]；二氫獼猴桃內(nèi)酯是類胡蘿卜素裂解產(chǎn)物之一[50]，具有木香和麝香氣味[51]; 石竹素具有細胞修復和再生功能[52]；-姜黃烯為姜黃類藥物的主要活性成分[53]；赤芝酸l是藥用真菌赤芝的主要成分之一[54]。

本研究利用UPLC-ESI-QTOF質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)從蠶豆花水提取物中鑒定出178種化學成分，相對含量大于0.01%的成分有107種，其中16種黃酮類和17種生物堿類成分, 相對含量分別為36.53%和34.33%,是蠶豆花發(fā)揮功效的主要物質(zhì)基礎。蠶豆花水提取物具有較強的抗氧化能力，其清除DPPH和ABTS+自由基的IC50分別為26.5和25.0g/mL, 表明蠶豆花提取物具有豐富的藥效成分和高抗氧化活性，在醫(yī)藥、保健品、功能食品和化妝品等領域具有良好的應用前景。

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UPLC-ESI-QTOF Mass Spectrometry Analysis and Antioxidant Activity of Water Extract fromFlowers

LI Chengxun1, XU Xiaoyu1, LI Aiping1*, ZHENG Kaibin2*

(1. Crop Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou 350013, China; 2. Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou 350003, China)

In order to clarify the pharmacodynamic basis of water extractfromflowers, the chemical constituents were analyzed and identified by ultra performance liquid chromatography electrospray ion source quadrupole time of flight mass spectrometry (UPLC-ESI-QTOF-MS), and the antioxidant activity was determined. The results showed that 178 components were identified from the water extract, and the relative contents of 107 components were more than 0.01%. The components with higher relative content included scutellarein 7-neohesperidoside, indoxyl glucuronide, spirolide E, rutin, propylene glycol alginate, kaempferol 3--d- galactoside, xanthurenic acid, and so on. The main components of flower water extract were flavonoids and alkaloids, with 16 and 19 kinds, and their relative contents were 36.53% and 34.33%, respectively. The IC50of flower water extract for scavenging DPPH and ABTS+free radical was 26.5 and 25.0g/mL, respectively. Therefore, flavonoids and alkaloids were the main substance basis offlower, and the water extract had strong antioxidant activity, indicatingflowers had high application value.

flower; Water extract; Chemical constituent; Antioxidant

10.11926/jtsb.4596

2021-12-17

2022-05-06

福建省科技計劃公益類專項(2021R1031004)；福建省農(nóng)業(yè)科學院科技創(chuàng)新團隊建設項目(CXTD2021011-2)；福建省“5511”協(xié)同創(chuàng)新工程(XTCXGC2021019)資助

This work was supported by the Special Project for Public Welfare for Research Institute in Fujian (Grant No. 2021R1031004), the Project for Scientific and Technological Innovation Team Construction of Fujian Academy of Agricultural Sciences (Grant No. CXTD2021011-2), and the Project for “5511” Collaborative Innovation in Fujian (Grant No.XTCXGC2021019).

李程勛(1991生)，男，碩士，研究實習員，研究方向為作物遺傳品質(zhì)育種與農(nóng)產(chǎn)品天然產(chǎn)物提取。E-mail: 1219513539@qq.com

. E-mail: apl909@163.com; k03163@163.com