劉 穎,楊 舟,王小波,詹 鋒

（1.海南省人民醫(yī)院 海南醫(yī)學(xué)院附屬海南醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，海南 ?？?570311；2.海南省人民醫(yī)院 海南醫(yī)學(xué)院附屬海南醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科，海南 ?？?570311）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡 （systemic lupus erythematosus，SLE）是一種自身免疫性疾病，患病后可能會影響機體內(nèi)多個器官，包括關(guān)節(jié)、皮膚、肺和腎臟等。SLE可導(dǎo)致自身抗原的耐受性喪失和致病性自身抗體的產(chǎn)生，并對多個器官系統(tǒng)造成損害［1-2］。狼瘡性腎炎（lupus nephritis，LN）是SLE的并發(fā)癥之一，也是SLE患者發(fā)病和死亡的主要原因。約40%～70%的SLE患者在診斷后5年內(nèi)發(fā)展為LN［3］。若LN不加以控制，會迅速發(fā)展并引起腎功能受損，最終導(dǎo)致腎衰竭。因此，對LN采用有效的臨床管理措施對于維持患者正常腎功能和提高患者生存率至關(guān)重要。

間 充 質(zhì) 干 細(xì) 胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有多能性和自我更新能力，可分化為來源于中胚層的細(xì)胞，包括軟骨母細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞等。目前，干細(xì)胞療法已涉及多種器官系統(tǒng)性疾病。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs）除 具 備 典 型的干細(xì)胞特征外，還具有弱免疫原性，可調(diào)節(jié)免疫功能，已廣泛應(yīng)用于免疫移植相關(guān)疾病的研究中［4-6］。研 究［7］表 明：人 臍 帶 間 充 質(zhì) 干 細(xì) 胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs）移植治療MRL/Lpr狼瘡鼠可降低狼瘡活動指標(biāo)，對LN具有一定治療作用。Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）能夠識別受體功能，在機體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。病原相關(guān)分子模式和損傷相關(guān)分子模式可以激活TLRs，MSCs表現(xiàn)促組織修復(fù)、促血管生成和免疫調(diào)控等作用。在不同的炎癥環(huán)境中，相應(yīng)的TLRs活化可以調(diào)控MSCs的不同功能［8］。因此，全面了解TLRs在MSCs研究中的作用，能夠更好地為臨床治療策略提供新思路。本研究通過激活hUC-MSCs中TLR3途徑，探討TLR3途徑增強對LN的治療效果，并闡明其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、細(xì)胞、主要試劑和儀器SPF級10周齡雌性MRL/Lpr小鼠45只及雌性C57BL/6C小鼠15只，體質(zhì)量（20±2）g，由海南醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（瓊）2017-0013。本研究動物實驗部分均按照《實驗動物管理條例》進行，嚴(yán)格遵循3R原則，動物實驗獲得海南省人民醫(yī)院動物護理和使用委員會審核批準(zhǔn)（IACUC編號：20191120-07）。小鼠飼養(yǎng)于SPF級動物飼養(yǎng)間，溫度（23±2）℃，濕度50%～60%，12 h黑暗/光照循環(huán)，自由攝食和飲水。hUC-MSCs由上海弘順生物科技有限公司提供。聚肌胞苷酸、胎牛血清、青霉素、鏈霉素和DMEM培養(yǎng)基購自美國Sigma公司，油紅O染色和茜素紅S染色購自北京索萊寶生物有限公司，酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測試劑盒購自南京建成生物研究公司，HE染色試劑盒和免疫熒光染色試劑盒購自上海藍基生物公司，PAS染色試劑盒購自北京雷根生物有限公司，BCA蛋白檢測試劑盒和化學(xué)發(fā)光液ECL購自上海碧云天生物研究所，蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）抗體、雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）抗體、微管相關(guān)蛋白1輕鏈3Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3Ⅱ，LC3Ⅱ）抗 體、酵 母ATG6的同系物（Beclin1）抗體、AlexaFluor-546標(biāo)記IgG和補體C3抗體均購自英國Abcam公司，F(xiàn)ITC-A標(biāo)記CD11b、CD34、CD45、HLA-DQ和CD90抗體及PE-A標(biāo)記CD19、HLA-DR、CD44、CD73和CD105抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，其他試劑均采用國產(chǎn)市售分析純。熒光倒置顯微鏡購自德國Leica公司，BD FACSCelesta?細(xì)胞分析儀購自美國BD公司，Western blotting熒光化學(xué)發(fā)光多功能成像系統(tǒng)購自美國賽默飛公司，紫外可見全波長多功能酶標(biāo)儀購自德國BMG LABTECH公司。

1.2 hUC-MSCs培養(yǎng)和處理凍存的hUC-MSCs 37℃恒溫水浴復(fù)蘇，期間輕輕搖晃。細(xì)胞完全溶解后，1 000 r·min－1離心5 min，棄上清液，沉淀中加入含10%胎牛血清與1%青-鏈霉素雙抗DMEM培養(yǎng)基，反復(fù)吹打至細(xì)胞混勻，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔1 d傳代1次，細(xì)胞傳代3次。

取生長狀態(tài)良好hUC-MSCs，以每孔1×105個的密度接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，含終濃度為10 mg·L－1的TLR3激動劑聚肌胞苷酸培養(yǎng)基，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。

1.3 實驗動物分組和處理45只MRL/Lpr小鼠隨機分為模型組、hUC-MSCs組和TLR3+hUC-MSCs組。hUC-MSCs組小鼠尾靜脈注射hUC-MSCs（1×106g－1），TLR3+hUC-MSCs組小鼠尾靜脈注射經(jīng)過聚肌胞苷酸處理的hUC-MSCs（1×106g－1），模型組小鼠尾靜脈注射等劑量生理鹽水。另取C57BL/6C雌性小鼠15只，設(shè)為對照組，尾靜脈注射等劑量生理鹽水。

1.4 hUC-MSCs鑒定取生長狀態(tài)良好hUCMSCs，PBS緩沖液洗滌細(xì)胞，加入FITC-A標(biāo)記的CD11b、CD34、CD45、HLA-DQ和CD90抗體及PE-A標(biāo) 記 的CD19、HLA-DR、CD44、CD73和CD105抗體，室溫下共同孵育30 min，流式細(xì)胞儀檢測后FlowJo軟件分析結(jié)果，檢測細(xì)胞表面抗原表達情況。

hUC-MSCs以每孔1×105個的密度接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，分別用成骨完全培養(yǎng)基和成脂分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞12 d，分化細(xì)胞油紅O染色和茜素紅S染色，觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)滴和鈣沉積情況，光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。具體操作按照試劑盒說明書進行。

1.5 Bradford法檢測各組小鼠24 h尿蛋白水平給藥后每2周檢測各組小鼠24 h尿蛋白水平。收集小鼠尿液后雙蒸水10倍稀釋，采用Bradford法測定尿蛋白水平，以小牛血清蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，具體操作按照試劑盒說明書進行。采用酶標(biāo)儀于562 nm波長處測定各樣品吸光度（A）值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算各組小鼠24 h尿蛋白水平。

1.6 ELISA法檢測各組小鼠血清中抗雙鏈DNA（double stranded DNA，dsDNA）抗體水平注射hUC-MSCs 8周，小鼠禁食12 h后取血，4 000 r·min－1離心10 min，獲取血清。采用ELISA法檢測各組小鼠血清中抗dsDNA抗體水平，按試劑盒說明書操作，配制梯度標(biāo)準(zhǔn)品和檢測試劑，采用酶標(biāo)儀于450 nm波長處測定各樣品A值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算各組小鼠血清中抗dsDNA水平。

1.7 ELISA法檢測各組小鼠腎組織中炎癥因子水平注射hUC-MSCs 8周后，麻醉并處死小鼠，無菌環(huán)境下解剖取腎組織，剪碎，加入預(yù)冷的PBS緩沖液，研磨后 制成勻漿，4 000 r·min－1離心10 min，收集上清液。ELISA法檢測上清液中腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6） 和 白 細(xì) 胞 介 素17（interleukin-17，IL-17）水平，步驟嚴(yán)格按照試劑盒所示操作進行。

1.8 HE染色和PAS染色觀察各組小鼠腎組織病理形態(tài)表現(xiàn)取各組小鼠腎組織于4%多聚甲醛固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，冰凍切片機上制備厚度為5 μm腎組織切片。HE染色試劑盒染色，光學(xué)顯微鏡觀察各組小鼠腎組織病理形態(tài)表現(xiàn)并拍照。取制備的腎組織石蠟切片，脫蠟脫水后，PAS試劑盒染色，光學(xué)顯微鏡觀察各組小鼠腎組織染色情況并拍照。

1.9 免疫熒光染色檢測各組小鼠腎組織中IgG和C3沉積情況腎組織切片脫蠟脫水后，PBS緩沖液漂洗3次，每次5 min，5%山羊血清封閉2 h。滴加AlexaFluor-546標(biāo)記的IgG抗體和C3抗體，室溫下避光孵育2 h。PBS緩沖液漂洗干凈后，避光環(huán)境下甘油封片處理，熒光顯微鏡觀察IgG和C3沉積情況并拍照，采用Image Pro Plus 6.0軟件分析熒光強度，以熒光強度表示IgG和C3沉積水平。

1.10 Western blotting法檢測各組小鼠腎組織中Akt、mTOR、LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達水平取各組小鼠腎組織，無菌環(huán)境下剪碎研磨，加入RIPA裂解液裂解并提取總蛋白，BCA法測定蛋白濃度后，取40 μg等量各蛋白樣品10% SDS-PAGE電泳分離，電轉(zhuǎn)至PVDF膜。脫脂奶粉室溫下封閉2 h，TBST緩沖液洗膜3次，每次5 min。加入一抗（1∶1 000）4℃孵育過夜。次日，TBST緩沖液洗膜后，加入HRP標(biāo)記的二抗（1∶5 000），室溫孵育1 h。洗膜后采用ECL化學(xué)發(fā)光液顯影，采用Image Pro Plus 6.0軟件分析各蛋白條帶灰度值，計算目的蛋白表達水平。目的蛋白表達水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參蛋白條帶灰度值。

1.11 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用Graphpad 8.3.0軟件制圖。各組小鼠24 h尿蛋白水平，腎組織中炎癥因子水平、抗dsDNA抗 體 水 平、IgG和C3沉 積 水 平 和Akt、mTOR、LC3Ⅱ及Beclin1蛋白表達水平均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 hUC-MSCs鑒定倒置顯微鏡觀察hUCMSCs形態(tài)表現(xiàn)結(jié)果顯示：第5天時可見少量細(xì)胞，且細(xì)胞聚集成團；第10天可見大量細(xì)胞，形狀呈紡錘形，有特殊的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。見圖1。

圖1 hUC-MSCs形態(tài)表現(xiàn)（×200）Fig.1 Morphology of hUC-MSCs(×200)

流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：細(xì)胞表面抗原CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DQ及HLA-DR呈陰性表達，而CD44、CD73、CD90和CD105呈陽性表達。見圖2。

圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測hUC-MSCs表面抗原表達情況Fig.2 Expressions of surface antigens of hUC-MSCs detected by flow cytometry

采用成骨和成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)12 d后，油紅O染色結(jié)果顯示：細(xì)胞內(nèi)有大量紅色脂滴積累，表明hUC-MSCs可以分化為脂肪細(xì)胞；茜素紅S染色后可見細(xì)胞內(nèi)有鈣沉積出現(xiàn)，表明hUC-MSCs可以分化為成骨細(xì)胞。見圖3。

圖3 油紅O染色（A,B）和茜素紅S染色（C,D）觀察hUC-MSCs分化Fig.3 Differentiation of hUC-MSCs observed by Oil red O staining(A,B)and Alizarin red S staining(C,D)

2.2 各組小鼠24 h尿蛋白水平給藥前，模型組和各治療組小鼠24 h尿蛋白水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。給藥4周后，與模型組比較，TLR3+hUC-MSCs組小鼠24 h尿蛋白水平明顯降低（P＜0.05）；給藥6和8周后，與模型組比較，hUC-MSCs組和TLR3+hUC-MSCs組小鼠24 h尿蛋白水平均明顯降低（P＜0.05）。見表1。

表1 各組小鼠24 h尿蛋白水平Tab.1 Levels of 24 h urine protein of mice in various groups [n=15,±s,ρB/(g·L－1)]

表1 各組小鼠24 h尿蛋白水平Tab.1 Levels of 24 h urine protein of mice in various groups [n=15,±s,ρB/(g·L－1)]

*P＜0.05 compared with model group.

Group Control Model hUC-MSCs TLR3+hUC-MSCs Urine protein(weeks)0 1.02±0.04 1.97±0.19 1.95±0.20 1.97±0.21 2 1.04±0.03 2.25±0.24 2.18±0.20 2.20±0.23 4 1.03±0.03 2.75±0.28 2.45±0.23 2.03±0.19*6 1.05±0.04 3.41±0.33 2.27±0.23*2.14±0.22*8 1.03±0.02 3.92±0.37 2.25±0.22*2.11±0.21*

2.3 各組小鼠血清中抗dsDNA抗體水平ELISA法檢測結(jié)果顯示：與對照組比較，模型組小鼠血清中抗dsDNA抗體水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，hUC-MSCs組和TLR3+hUC-MSCs組小鼠血清中抗dsDNA抗體水平均明顯降低（P＜0.05）；與hUC-MSCs組 比 較，TLR3+hUCMSCs組小鼠血清中抗dsDNA抗體水平明顯降低（P＜0.05）。見圖4。

圖4 各組小鼠血清中抗dsDNA抗體水平Fig.4 Levels of anti-dsDNA antibody in serum of mice in various groups

2.4 各組小鼠腎組織中炎癥因子水平與對照組比較，模型組小鼠腎組織中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，hUC-MSCs組和TLR3+hUC-MSCs組小鼠腎組織中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平均明顯降低（P＜0.05）；與hUC-MSCs組比較，TLR3+hUC-MSCs組 小 鼠腎組織中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明顯降低（P＜0.05）。見表2。

表2 各組小鼠腎組織中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平Tab.2 Levels of TNF-α,IL-1β,IL-6 and IL-17 in kidney tissue of mice in various groups [n=15,±s,ρB/(ng·L－1）]

表2 各組小鼠腎組織中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平Tab.2 Levels of TNF-α,IL-1β,IL-6 and IL-17 in kidney tissue of mice in various groups [n=15,±s,ρB/(ng·L－1）]

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group；#P＜0.05 compared with hUC-MSCs group.

Group Control Model hUC-MSCs TLR3+hUC-MSCs TNF-α 46.24±5.17 276.43±28.05*219.15±23.44△175.30±15.37△#IL-1β 4.02±0.38 13.68±1.45*8.46±0.91△5.94±0.55△#IL-6 17.89±1.57 112.15±9.92*80.21±8.04△66.97±7.31△#IL-17 3.98±0.41 11.59±1.25*7.15±0.71△5.33±0.50△#

2.5 各組小鼠腎組織病理形態(tài)表現(xiàn)對照組小鼠腎組織結(jié)構(gòu)完整且清晰，未見異常病理變化；模型組小鼠腎組織中腎小球系膜細(xì)胞明顯增生，腎小管上皮細(xì)胞部分脫落，管腔內(nèi)可見蛋白樣物質(zhì)，出現(xiàn)空泡，并伴有炎癥細(xì)胞浸潤；與模型組比較，hUC-MSCs組和TLR3+hUC-MSCs組小鼠腎組織中腎小球系膜細(xì)胞增生有不同程度緩解，腎小管硬化和炎癥細(xì)胞浸潤現(xiàn)象明顯減少；與hUC-MSCs組比較，TLR3+hUC-MSCs組小鼠腎組織上述病理形態(tài)改善更加明顯。見圖5。

圖5 HE染色（A-D）和PAS染色（E-H）觀察各組小鼠腎組織病理形態(tài)表現(xiàn)（Bar=100 μm）Fig.5 Pathomorphology of kidney tissue of mice in various groups observed by HE staing(A-D)and PAS staing(E-H)（Bar=100 μm）

2.6 各組小鼠腎組織IgG和C3沉積情況免疫熒光染色結(jié)果顯示：對照組小鼠腎組織中IgG和C3沉積較少；與對照組比較，模型組小鼠腎組織腎小球中有大量IgG和C3沉積，熒光強度明顯增加（P＜0.05）；與 模 型 組 比 較，hUC-MSCs組 和TLR3+hUC-MSCs組小鼠腎組織中IgG和C3沉積減少，熒光強度均明顯降低（P＜0.05）；與hUCMSCs組比較，TLR3+hUC-MSCs組小鼠腎組織中IgG和C3沉積減少，熒光強度明顯降低（P＜0.05）。見圖6。

圖6 各組小鼠腎組織中IgG和C3沉積情況Fig.6 Deposition of IgG and C3 in kidney tissue of mice in various groups

2.7 各組小鼠腎組織中Akt、mTOR、LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達水平Western blotting檢測結(jié)果顯示：與對照組比較，模型組小鼠腎組織中Akt和mTOR蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05），LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，hUC-MSCs組和TLR3+hUC-MSCs組小鼠腎組織中Akt和mTOR蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05），LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達水平明顯 升 高（P＜0.05）；與hUC-MSCs組 比 較，TLR3+hUC-MSCs組小鼠腎組織中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05），Akt和mTOR蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖7和8。

圖7 各組小鼠腎組織中Akt和mTOR蛋白表達電泳圖（A）和直條圖（B，C）Fig.7 Electrophoregram(A)and histogram(B，C)of expressions of Akt and mTOR proteins in kidney tissue of mice in various groups

3 討 論

LN作為SLE最常見的并發(fā)癥，是導(dǎo)致SLE患者死亡的主要原因。目前，臨床上治療LN的方法主要是使用激素和免疫抑制劑，但部分患者預(yù)后較差，并最終發(fā)展為終末期腎?。?］。因此，尋找新型有效的LN治療方法對于患者具有重要意義。MRL/Lpr小鼠癥狀與人類SLE相似，包括明顯的血清自身抗體、免疫復(fù)合物腎小球腎炎和血管炎等，是SLE動物模型之一［9］。本研究檢測結(jié)果顯示：MRL/Lpr小鼠24 h尿蛋白水平升高，腎小球系膜細(xì)胞明顯增生，腎小管萎縮并壞死，并伴有炎癥細(xì)胞浸潤等現(xiàn)象，提示小鼠腎組織發(fā)生損傷，成功構(gòu)建LN模型。

MSCs不僅具有干細(xì)胞多能性，還具有強大的抗炎和免疫調(diào)節(jié)特性，已被認(rèn)為是治療自身免疫性疾病和炎性疾病的潛在方法，可治療移植物抗宿主病、克羅恩氏病、多發(fā)性硬化、SLE和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病［10-11］。LI等［12］研究發(fā)現(xiàn)：hUC-MSCs可減弱慢性不可預(yù)見輕度應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）誘導(dǎo)的抑郁小鼠中NLRP3激活，該作用可能與其調(diào)節(jié)神經(jīng)元中補體C3a相關(guān)。LI等［13］報 道：hUC-MSCs經(jīng) 抗 菌 融 合 蛋 白BPI21/LL-37修飾后不影響其干性和免疫調(diào)節(jié)能力，修飾后hUC-MSCs全身內(nèi)毒素水平明顯降低，抗炎能力增強，對敗血癥起到良好治療作用。TLR3通路可以誘導(dǎo)局部免疫細(xì)胞極化，調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境方式，發(fā)揮羊膜MSCs移植治療大鼠創(chuàng)傷性腦損傷的作用［14］。聚肌胞苷酸作為TLR3激動劑，能夠與TLR3結(jié)合參與調(diào)節(jié)機體免疫功能、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞行為學(xué)等過程。本研究結(jié)果顯示：移植hUC-MSCs和移植TLR3激動劑聚肌胞苷酸處理后的hUC-MSCs對小鼠LN具有保護作用；與單獨移植hUC-MSCs比較，移植TLR3激動劑聚肌胞苷酸處理后的hUC-MSCs對小鼠LN改善作用明顯增強，提示激活TLR3可增強移植hUC-MSCs的治療效果。

圖8 各組小鼠腎組織中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達電泳圖（A）和直條圖（B，C）Fig.8 Electrophoregram(A)and histogram(B，C)of expressions of LC3Ⅱand Beclin1 proteins in kidney tissue of mice in various groups

LN主要由Ⅲ型超敏反應(yīng)所引起，可導(dǎo)致免疫復(fù)合物的形成?？筪sDNA抗體與DNA結(jié)合并形成抗dsDNA免疫復(fù)合物并沉積于腎臟腎小球基底膜附近的系膜、內(nèi)皮下和上皮下區(qū)域，導(dǎo)致LN發(fā)作時產(chǎn)生炎癥反應(yīng)［15］，同時，補體途徑被中性粒細(xì)胞和其他炎癥途徑所激活［16］。研究［17］表明：免疫復(fù)合物沉積引發(fā)的炎癥反應(yīng)與LN的持續(xù)時間和進展密切相關(guān)。腎臟免疫復(fù)合物沉積或補體的激活促進細(xì)胞因子的分泌，從而促進炎癥細(xì)胞浸潤。補體途徑在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，一方面可導(dǎo)致器官的更多病理損傷，另一方面可加劇組織炎癥反應(yīng)，補體C3水平升高會促進腎病間質(zhì)纖維化和腎損傷［18］。研究［19］表明：通過MSCs移植治療MRL/Lpr小鼠后，可降低抗dsDNA抗體水平和腎小球補體C3的沉積。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，hUC-MSCs和TLR3+hUC-MSCs組MRL/Lpr小鼠腎組織中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平均明顯降低，TLR3+hUC-MSCs組小鼠腎組織中炎癥因子水平更低；2組小鼠血清中抗dsDNA抗體水平降低，腎組織中IgG和C3沉積明顯減少，TLR3+hUC-MSCs組小鼠血清中抗dsDNA抗體水平更低，且IgG和C3沉積更少。

自噬是維持細(xì)胞和機體穩(wěn)態(tài)的核心分子途徑，其在多種細(xì)胞類型和疾病中均具有保護作用，有助于塑造免疫系統(tǒng)，并參與多種自身免疫性疾病。研究［20-21］顯示：藥物和基因干預(yù)損害自噬反應(yīng)促進或加重疾病。本研究結(jié)果顯示：模型組MRL/Lpr小鼠腎組織中自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達水平較低，hUC-MSCs組和TLR3+hUCMSCs組小鼠腎組織中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達水平升高，提示hUC-MSCs中TLR3激活后可能通過誘導(dǎo)自噬發(fā)生，從而達到對腎組織細(xì)胞的保護作用。

綜上所述，TLR3激活能夠增強hUC-MSCs移植治療小鼠LN的作用，降低小鼠24 h尿蛋白水平，降低血清中抗dsDNA抗體水平并減少腎組織中IgG和C3沉積，抑制腎組織炎癥反應(yīng)，調(diào)控腎組織自噬發(fā)生。本研究為hUC-MSCs移植治療小鼠LN提供了新的思路和治療策略。