廖 津 ，林海生 ，伍 彬 ，秦小明 ，曹文紅 ，高加龍 ，鄭惠娜 ，章超樺 ，譚綺晴

1. 廣東海洋大學(xué) 食品科技學(xué)院/國家貝類加工技術(shù)研發(fā)分中心 (湛江)/廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省海洋生物制品工程實(shí)驗(yàn)室/水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 湛江 524088

2. 暨南大學(xué) 食品科學(xué)與工程系，廣東 廣州 510632

3. 大連工業(yè)大學(xué)海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，遼寧 大連 116034

目前，糖尿病 (Diabetes mellitus, DM) 患病人數(shù)呈逐年增加趨勢，已成為人類健康的重大威脅之一[1]。根據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟 (The International Diabetes Federation, IDF) 的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，2019年全球糖尿病患者已超4.63億，預(yù)測至2045年仍將繼續(xù)增長51%[2]。目前臨床醫(yī)學(xué)上，糖尿病患者的治療通常采用服入α-葡萄糖苷酶抑制劑類型的藥物，其能有效減慢人體對食品中葡萄糖的吸收利用，達(dá)到餐后降血糖的效果[3]。然而，傳統(tǒng)藥物治療往往有較大的副作用[4]。因此尋找副作用小且經(jīng)濟(jì)的降血糖物質(zhì)是未來研究的趨勢。研究發(fā)現(xiàn)，水產(chǎn)動物來源的蛋白酶解物具有較好的α-葡萄糖苷酶抑制活性[5-6]，同時也被認(rèn)為是一種潛在的輔助降血糖功能食品的原料來源[7-8]。然而，以貝類為原材料酶法制備具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的肽類的研究卻鮮有報(bào)道。

海洋貝類是重要的漁業(yè)資源，其富含蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素、?；撬岬葼I養(yǎng)功能成分，是制備生物活性肽的優(yōu)質(zhì)原料[9-10]?，F(xiàn)代酶解技術(shù)是蛋白高值化利用制備活性肽的主要方法之一。目前已報(bào)道貝類酶解物的生理功效包括抗氧化[11-12]、降血糖[13]、降血壓[14-15]、促傷口愈合[16]和保護(hù)肝臟[17]等。馬氏珠母貝 (Pinctada martensii)、華貴櫛孔扇貝 (Chlamys nobilis) 和櫛江珧 (Atrina pectinate) 是我國主要的養(yǎng)殖貝類，主要集中在廣東、廣西和海南等地，養(yǎng)殖產(chǎn)量極高。其閉殼肌大、味道鮮美、營養(yǎng)豐富。目前，除了鮮食外，閉殼肌主要被加工成干貝、即食貝柱、速凍貝柱、貝柱罐頭[18]等方便食品，精深加工利用程度較低。目前尚未見有其在降血糖領(lǐng)域的應(yīng)用報(bào)道。為了進(jìn)一步挖掘海洋貝類生物活性肽的潛在輔助降血糖營養(yǎng)功能食品的開發(fā)價值，本研究選用新鮮華貴櫛孔扇貝、馬氏珠母貝和櫛江珧閉殼肌為研究對象，采用酶法水解制得酶解產(chǎn)物，研究其對α-葡萄糖苷酶的抑制活性，并以小鼠作為動物試驗(yàn)對象進(jìn)行降血糖活性驗(yàn)證，為海洋貝類資源高值化利用提供思路，也為開發(fā)新型輔助降血糖營養(yǎng)功能食品提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

馬氏珠母貝和華貴櫛孔扇貝均購自湛江市雷州市流沙灣養(yǎng)殖場；櫛江珧購自湛江市東風(fēng)市場。

風(fēng)味蛋白酶 (57 821 U·g-1)、復(fù)合蛋白酶 (62 784 U·g-1)[諾維信 (中國) 生物技術(shù)有限公司]；α-葡萄糖苷酶、對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷 (p-Nitrophenyl-α-D-glucopyranoside, pNPG) (上海源葉生物科技有限公司)；Folin-酚蛋白定量試劑盒 (北京鼎國昌盛生物技術(shù)公司)；可溶性淀粉 (北京索萊寶科技有限公司)；小鼠胰島素 (INS) 酶聯(lián)免疫分析 (ELISA) 試劑盒 (江蘇雨桐生物科技有限公司)；碳酸鈉、甲醛、鹽酸、氫氧化鈉、三氯乙酸等均為分析純。

雄性昆明小鼠，購自珠海百試通生物科技有限公司，飼養(yǎng)于廣東海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心[SYXK(粵) 2019-0204]。

1.2 儀器與設(shè)備

UNIVERSAL 320R臺式高速冷凍離心機(jī) (德國Hettich科學(xué)儀器公司)；VARIOSKAN FLASH全波長掃描式多功能酶標(biāo)儀 (賽默飛世爾科技公司)；SHZ-B水浴恒溫振蕩器 (上海博訊醫(yī)療儀器股份有限公司)；HHS數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋 (上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；羅氏活力血糖儀、羅氏血糖試紙 [羅氏診斷產(chǎn)品 (上海) 有限公司]；FDU-551真空冷凍干燥機(jī)、N-4000真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (EYELA東京理化器械株式會社)。

1.3 方法

1.3.1 不同蛋白酶酶解產(chǎn)物的制備

鮮活貝類洗凈開殼取閉殼肌，沸水漂燙5 min后，紗布過濾，濾液濃縮凍干后，得到水提物；漂燙后的貝類組織按1∶3 (m∶V) 的料液比加水勻漿，調(diào)節(jié)pH至7.0，按照酶添加量5 000 U·g-1(依據(jù)原料蛋白質(zhì)質(zhì)量添加) 加入蛋白酶 (風(fēng)味蛋白酶、復(fù)合蛋白酶)，50 ℃水浴振蕩器中進(jìn)行酶解3 h，100 ℃ 滅酶，于 8 000 r·min-1離心 10 min取上清液，凍干得到酶解產(chǎn)物。通過測定酶解物中游離氨基酸態(tài)氮含量、短肽含量和α-葡萄糖苷酶抑制活性，篩選出最佳用酶。

1.3.2 酶解工藝對酶解產(chǎn)物 α-葡萄糖苷酶抑制活性的影響

以馬氏珠母貝閉殼肌作為研究對象，以復(fù)合蛋白酶作為試驗(yàn)用酶，參照1.3.1所述酶解方法，分別考察酶解時間、酶添加量、酶解溫度和酶解pH 4個因素對酶解產(chǎn)物中α-葡萄糖苷酶抑制活性的影響。在最佳酶解工藝條件下，制備馬氏珠母貝閉殼肌酶解產(chǎn)物 (Enzymatic hydrolysate ofP. martensiiadductor muscle, EHPA)。

1.3.3 游離氨基酸態(tài)氮的測定

參考GB 5009.235—2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸態(tài)氮的測定》的操作步驟進(jìn)行檢測。

1.3.4 短肽含量的測定

參考柏昌旺等[19]方法稍加修改，取酶解上清液按照體積比1∶1 加入10%的三氯乙酸 (TCA)，混勻后 4 ℃ 離心 (8 000 r·min-1, 10 min)，取上清液稀釋一定倍數(shù)測定。分別取40 μL樣品溶液和200 μL Folin?酚試劑甲液，室溫放置10 min，加入20 μL Folin?酚試劑乙液混勻靜置30 min后，在500 nm處測定其吸光度。選用牛血清白蛋白 (BSA)作為標(biāo)準(zhǔn)品，按照相同方法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測定吸光度對照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算短肽質(zhì)量濃度。獲得吸光度數(shù)據(jù)，使用Excel 2020軟件繪制短肽含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：y=0.756 8x+0.030 4，該曲線的R2為0.993 8，線性較好，可作為Folin?酚試劑定量測量的依據(jù)。

1.3.5 α-葡萄糖苷酶抑制活性測定

采用pNPG法測定α-葡萄糖苷酶抑制活性，參考Zhang等[20]和林海生等[21]的方法稍作修改。α-葡萄糖苷酶抑制率 (Ri) 計(jì)算公式如下

式中：A樣品為樣品組吸光度，樣品+α-葡萄糖苷酶+pNPG；A樣品空白為樣品空白組吸光度，樣品+PB (磷酸鹽緩沖溶液) +pNPG；A對照為對照組吸光度，PB+α-葡萄糖苷酶+pNPG；A空白為空白組吸光度，PB+PB+pNPG；

1.3.6 EHPA 對小鼠糖耐量的影響

參考延?，摰萚3]方法，EHPA以不同比例與蒸餾水混溶后得到受試物。所有小鼠試驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，禁食12 h后，采用血糖試劑盒檢測空腹血糖，隨機(jī)分為5組，不同劑量試驗(yàn)組分別為：低劑量組 500 mg·kg-1、中劑量組 1 000 mg·kg-1、高劑量組 2 000 mg·kg-1、分別記為 EHPA?L、EHPA?M、EHPA?H，陽性對照組 (PC組，二甲雙胍150 mg·kg-1)和空白對照組 (NC組)，每組10只小鼠。連續(xù)灌胃受試物3 d，空白組灌胃蒸餾水，記錄體質(zhì)量，計(jì)算體質(zhì)量增長率 (%)。灌胃第4 d，禁食12 h，測定空腹血糖。各組與可溶性淀粉250 mg·kg-1混合同時灌胃，測定灌胃淀粉后各組0.5和2 h的血糖。并計(jì)算血糖曲線下面積 (AUC, mmol·min·L-1)。

式中：a為灌胃前血糖 (mmol·L-1)；b為灌胃0.5 h血糖 (mmol·L-1)；c為灌胃 2 h 血糖 (mmol·L-1)。

1.3.7 EHPA 對小鼠空腹血糖的影響

小鼠禁食不禁水12 h，采用尾部靜脈取血取小鼠尾尖血，使用羅氏活力血糖儀及血糖試紙測定小鼠血糖，重復(fù)2次。分別在灌胃前及結(jié)束后測定空腹血糖。

式中：Rh為降糖率 (%)； FBG0為給藥前空腹血糖濃度 (mmol·L-1)；FBG1為給藥結(jié)束后空腹血糖濃度(mmol·L-1)。

1.3.8 EHPA 對血清胰島素的影響

EHPA對正常小鼠血糖的影響試驗(yàn)結(jié)束后，小鼠經(jīng)眼球取血后，采用脫頸位法處死。室溫血液自然凝固 10～15 min，10 000 r·min-1離心 10 min，收集上清液，置于-80 ℃保存。采集臟器稱質(zhì)量，取0.5 g肝臟加入9倍質(zhì)量生理鹽水后勻漿制備成組織勻漿液，-80 ℃保存，使用前10 000 r·min-1離心10 min取上清液4 ℃保存?zhèn)溆?。根?jù)試劑盒使用說明書操作，在450 nm波長下測定吸光度(Optical density, OD) 繪制標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)曲線計(jì)算各組小鼠血清胰島素濃度并計(jì)算出各組胰島素敏感指數(shù)和胰島素分泌指數(shù)。

式中：ISI為胰島素敏感指數(shù)；FPG為空腹血糖濃度 (mmol·L-1)；FINS為空腹胰島素濃度 (mmol·L-1)；FBCI為胰島素分泌指數(shù)。獲得吸光度數(shù)據(jù)，使用Excel 2020 軟件繪制胰島素含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：y=0.043 7x+0.011 2，R2為0.999 2，線性較好。

1.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

每組試驗(yàn)至少重復(fù)3次，采用Excel 2020軟件整理數(shù)據(jù)及作圖，用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，表中數(shù)據(jù)為“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤 ()”。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同蛋白酶對貝類閉殼肌酶解效果評價

適當(dāng)熱預(yù)處理可加大酶對蛋白質(zhì)的水解程度[22]，并可有效調(diào)控蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物組成[23-24]。另外，高溫可滅活易對試驗(yàn)造成干擾的貝類內(nèi)源蛋白酶，并殺死微生物。因而，本研究采用熱漂燙法對閉殼肌進(jìn)行預(yù)處理，并將漂燙后水提物作為單獨(dú)一組進(jìn)行對比分析。不同蛋白酶對貝類閉殼肌酶解產(chǎn)物游離氨基酸態(tài)氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響見圖1。酶解產(chǎn)物中游離氨基酸態(tài)氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于水提物 (P＜0.05)。風(fēng)味蛋白酶酶解產(chǎn)物游離氨基酸態(tài)氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于復(fù)合蛋白酶酶解產(chǎn)物，其中華貴櫛孔扇貝風(fēng)味蛋白酶酶解產(chǎn)物此指標(biāo)最高。造成此差別主要是由貝類組織蛋白結(jié)構(gòu)和蛋白酶作用位點(diǎn)的不同所致，復(fù)合蛋白酶主要成分是內(nèi)切酶和端肽酶，而風(fēng)味蛋白酶是氨基端外切酶[24]。

圖1 不同蛋白酶對貝類閉殼肌酶解產(chǎn)物游離氨基酸態(tài)氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響注：不同小寫字母的組間差異顯著 (P＜0.05)，后圖同此。Fig. 1 Effect of different protease on mass fraction of free amino acid nitrogen in hydrolysate of shellfish adductor muscleNote: Different lowercase letters indicate significant difference between groups (P＜0.05); the same case in the following figures.

短肽濃度能夠衡量酶解產(chǎn)物的品質(zhì)[25]。三氯乙酸法是一種理想的短肽提取方法[26-27]，通常采用三氯乙酸沉淀蛋白酶解液中的大分子肽段，并通過測定上清液中肽的濃度定義為短肽濃度[19]，李佳蕓等[7]發(fā)現(xiàn)馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物中93.88%的短肽分子量小于2 000 D，這與孫建忠[28]用三氯乙酸沉淀法提取的林蛙油短肽分子量接近。酶解產(chǎn)物短肽質(zhì)量濃度的測定結(jié)果見圖2。酶解產(chǎn)物短肽質(zhì)量濃度顯著高于水提物，表明酶解過程釋放出大量短肽物質(zhì)。3種貝類閉殼肌的復(fù)合蛋白酶酶解產(chǎn)物中，短肽質(zhì)量濃度均顯著高于其風(fēng)味蛋白酶酶解物，馬氏珠母貝和華貴櫛孔扇貝閉殼肌的酶解產(chǎn)物中，短肽質(zhì)量濃度顯著高于櫛江珧酶解產(chǎn)物 (P＜0.05)。

圖2 不同蛋白酶對閉殼肌酶解產(chǎn)物短肽質(zhì)量濃度的影響Fig. 2 Effect of different protease on mass concentration of short chain polypeptide in hydrolysates of shellfish adductor muscle

綜上，本研究所用的2種蛋白酶均能有效酶解貝類閉殼肌。采用風(fēng)味蛋白酶有利于酶解產(chǎn)物的風(fēng)味呈現(xiàn)[29]，而從酶解產(chǎn)物中有效成分出發(fā)，復(fù)合蛋白酶更適合后續(xù)研究[30]。

2.2 不同酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶抑制活性

α-葡萄糖苷酶抑制活性是衡量糖尿病療效的重要科學(xué)依據(jù)[31]。在酶解產(chǎn)物的短肽質(zhì)量濃度(16 mg·mL-1) 相同的情況下，貝類閉殼肌酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶抑制活性的影響結(jié)果見圖3。3種貝類閉殼肌的復(fù)合蛋白酶酶解產(chǎn)物均大于風(fēng)味蛋白酶酶解產(chǎn)物，且馬氏珠母貝和華貴櫛孔扇貝的復(fù)合蛋白酶解產(chǎn)物 (兩者無顯著差異，P＞0.05) 顯著強(qiáng)于櫛江珧 (P＜0.05)。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，櫛江珧的水提物也表現(xiàn)出較強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制活性，顯著高于其他兩種貝的水提物 (P＜0.05)。海洋貝類水提物中富含礦物質(zhì)、氨基酸、?；撬帷⒛憠A、水溶性多糖等物質(zhì)，多具有顯著的生物活性[32]。

圖3 貝類閉殼肌酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性Fig. 3 Inhibition of α-glucosidase activity in hydrolysate of shellfish adductor muscle

綜上，復(fù)合蛋白酶酶解馬氏珠母貝的酶解產(chǎn)物，其短肽濃度和α-葡萄糖苷酶抑制活性均處于較高水平。而馬氏珠母貝的閉殼肌作為珍珠產(chǎn)業(yè)的副產(chǎn)物，資源利用率低[33]，基于資源綠色高值化利用理念，本研究將利用馬氏珠母貝閉殼肌作酶解產(chǎn)物，并配合復(fù)合蛋白酶進(jìn)行深入研究。

2.3 馬氏珠母貝閉殼肌酶解工藝

考察了酶解時間、pH、溫度和酶添加量對酶解產(chǎn)物α-葡萄糖苷酶抑制活性的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)酶解時間為3 h時酶解產(chǎn)物α-葡萄糖苷酶的抑制活性達(dá)到峰值 (圖4-a)，當(dāng)酶解時間超過3 h后，隨著時間延長，酶解產(chǎn)物的抑制活性相較之前增長變慢，甚至出現(xiàn)下降，可能是由于起主要α-葡萄糖苷酶抑制活性作用的短肽被酶解成更小的物質(zhì)，從而減弱或者失去了抑制活性。當(dāng)酶添加量達(dá)到5 000 U·g-1時 (圖4-b)，則無法通過繼續(xù)提升酶添加量來顯著增強(qiáng)酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性。蛋白酶過多時也會抑制水解能力[3]。當(dāng)酶解溫度達(dá)到50 ℃時 (圖4-c) 抑制活性達(dá)到峰值，而溫度過高會導(dǎo)致酶解液抑制活性也隨之降低[33]。酶解pH為7.0時達(dá)到對α-葡萄糖苷酶抑制活性的峰值 (圖4-d)，而酶解環(huán)境過酸或過堿均會影響蛋白酶活性，導(dǎo)致對α-葡萄糖苷酶的抑制活性降低。

圖4 酶解條件對產(chǎn)物α-葡萄糖苷酶抑制活性的影響Fig. 4 Effect of enzymolysis factors on α-glucosidase inhibitory activity

綜上，以α-葡萄糖苷酶抑制活性為評價指標(biāo)，選擇較優(yōu)酶解條件：時間3 h，酶添加量5 000 U·g-1，酶解溫度50 ℃，酶解pH=7.0，該條件下制備的馬氏珠母貝閉殼肌酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性為24.54%。

2.4 EHPA短肽濃度對α-葡萄糖苷酶的抑制活性

酶解產(chǎn)物隨著其短肽濃度的增加，對α-葡萄糖苷酶抑制活性增大，即酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶抑制活性與短肽濃度有一定依賴性 (圖5)?？梢娫贓HPA中對α-葡萄糖苷酶抑制活性起主要作用的是短肽類物質(zhì)。

圖5 不同短肽質(zhì)量濃度的酶解產(chǎn)物的α-葡萄糖苷酶抑制活性Fig. 5 α-glucosidase inhibitory activity of enzymatic hydrolysates with different mass concentrations of short chain polypeptide

2.5 EHPA對小鼠血糖的影響

2.5.1 EHPA 對小鼠體質(zhì)量的影響

EHPA的體外試驗(yàn)已證明其具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，通過小鼠試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證其體內(nèi)活性，結(jié)果見表1。在灌胃給藥3 d后，EHPA低、中、高組體質(zhì)量增長呈遞增趨勢，但組間無顯著性差異(P＞0.05)，這與胡佳妮等[34]的研究結(jié)果一致，后者認(rèn)為海洋水產(chǎn)蛋白肽會影響小鼠的食品利用率，而導(dǎo)致其體質(zhì)量增長幅度不同。

表1 馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物對正常小鼠體質(zhì)量的影響 (N=10)Table 1 Effect of P. martensii hydrolysate on mass of mouse (N=10)

2.5.2 EHPA 對小鼠空腹血糖的影響

EHPA對小鼠空腹血糖的影響見表2。與空白組相比，PC組和試驗(yàn)組的降糖率均有提高，其中EHPA-H組降糖率最高 (31.76%)，試驗(yàn)組之間無顯著性差異 (P＞0.05)。結(jié)果表明，經(jīng)過EHPA干預(yù)后，一定程度上可以降低小鼠空腹血糖濃度。

表2 馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物對小鼠空腹血糖的影響 (N=10)Table 2 Effect of P. martensii hydrolysate on fasting blood glucose of mouse (N=10)

2.5.3 EHPA 對小鼠糖耐量的影響

EHPA對小鼠糖耐量影響試驗(yàn)結(jié)果見表3。灌胃0.5及2 h后，與NC組小鼠相比，其他組血糖均顯著降低 (P＜0.05)，其中PC組小鼠血糖降低最顯著，其次為EHPA-H組。

表3 馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物對小鼠糖耐量的影響 (N=10)Table 3 Effect of P. martensii enzymatic hydrolysate on glucose tolerance of mouse (N=10)

與NC組的血糖曲線下面積相比，其他組均顯著降低 (P＜0.05)，其中PC組血糖曲線下面積降低最為顯著，對小鼠糖耐量改善明顯，其次為EHPA-H組。

綜上所述，連續(xù)灌胃3 d后會影響正常小鼠的糖耐量，這與王婷婷[35]報(bào)道的海洋水產(chǎn)類酶解物對大鼠葡萄糖耐量的影響結(jié)果一致。

2.5.4 EHPA 對小鼠血清胰島素的影響

EHPA對小鼠血清胰島素影響的試驗(yàn)結(jié)果見表4。與NC組的空腹血清胰島素相比，PC組和試驗(yàn)組稍有提高，但各組間均無顯著性差異。胰島素敏感指數(shù)各組間均無顯著性差異。與NC組胰島素分泌指數(shù)相比，EHPA-L組有所提高，其余試驗(yàn)組均有一定程度下降，但各組間均無顯著性差異 (P＞0.05)。結(jié)果表明EHPA對正常小鼠胰島素分泌幾乎沒有影響。

表4 馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物對小鼠血清胰島素的影響 (N=10)Table 4 Effect of P. martensii hydrolysate on serum insulin of mouse (N=10)

3 結(jié)論

本研究通過比較不同貝類原料、蛋白酶、酶解因素等對酶解產(chǎn)物中游離氨基酸態(tài)氮、短肽濃度及α-葡萄糖苷酶抑制活性的影響，篩選出最佳貝類活性肽的制備方法，并通過動物實(shí)驗(yàn)評價其輔助降血糖功效。結(jié)果顯示，3種貝類閉殼肌酶解產(chǎn)物均有α-葡萄糖苷酶抑制活性，其中馬氏珠母貝、華貴櫛孔扇貝酶解產(chǎn)物效果活性最強(qiáng)，而櫛江珧水提物抑制活性較好。采用復(fù)合蛋白酶制備馬氏珠母貝閉殼肌活性肽 (EHPA) 的條件為酶解時間3 h、酶添加量5 000 U·g-1、酶解溫度50 ℃、酶解pH 7.0，該條件下酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性為24.54%，且其抑制活性與其短肽的濃度成正相關(guān)，提示EHPA中具有降血糖活性的物質(zhì)為短肽。有多項(xiàng)研究表明水生生物酶解產(chǎn)物具有降血糖活性，且其主要功效活性與其短肽關(guān)系密切[36-39]，本研究的動物試驗(yàn)初步表明EHPA能影響糖耐量，具有輔助降血糖活性。不少研究指出動物組織水提物有降血糖活性[40-41]，櫛江珧的水提多糖具有多方面生物活性[32]，其中起到α-葡萄糖苷酶抑制作用的物質(zhì)值得深入探討。