吳蔓莉，肖賀月，3，賀豪華，王琪，高敬華

（1.西安建筑科技大學(xué)環(huán)境與市政工程學(xué)院，西安 710055；2.西北水資源與環(huán)境生態(tài)教育部重點實驗室，陜西省環(huán)境工程重點實驗室，西安 710055；3.西安建筑科技大學(xué)安德學(xué)院，西安 710311）

石油被譽為“工業(yè)的血液”和“黑色的金子”[1]，是工業(yè)發(fā)展的主要能源物質(zhì)。在石油的開采、冶煉、運輸、裝卸、加工和使用過程中，漏油事故會引起土壤污染和生態(tài)環(huán)境惡化[2]。對土壤中石油烴的生態(tài)毒性進(jìn)行研究是治理和管控土壤污染的重要依據(jù)，只有基于真實的生態(tài)毒性效應(yīng)確定石油污染的防治和治理技術(shù)，才能以優(yōu)化模式進(jìn)行污染土壤的修復(fù)治理和保護(hù)工作[3-5]。

蚯蚓是陸地生態(tài)系統(tǒng)中生物量最大的無脊椎動物之一，對土壤過程的物質(zhì)循環(huán)和能量傳遞具有十分重要的作用[6]。蚯蚓對環(huán)境毒素和土壤污染物的響應(yīng)十分敏感，因此可以用于指示土壤的污染狀況，在石油污染場地中被廣泛用于指示石油烴的生態(tài)毒性。TANG等[7]和黃盼盼等[8]利用蚯蚓作為指示生物研究了我國勝利油田石油污染土壤的生態(tài)毒性，發(fā)現(xiàn)中原油田污染土壤蚯蚓半數(shù)致死的LD50為1.37%～1.45%總石油烴（TPHs）含量。

目前對于石油污染生態(tài)毒性風(fēng)險的研究多集中于對土壤毒性與總石油烴含量、污染時長、不同受試物種之間的關(guān)系進(jìn)行定性和半定量描述[9-14]，不同研究的受試對象和毒性結(jié)果之間差異較大[15-16]。WANG等[17]發(fā)現(xiàn)蚯蚓暴露于采自勝利油田的油泥28 d后LC50值為15.8%，GAINER等[15]的研究表明蚯蚓暴露于加拿大薩斯喀徹溫省土壤14 d后的EC50值為3 950 mg·kg-1，HENTATI等[16]發(fā)現(xiàn)突尼斯斯法克斯油田區(qū)石油污染土壤對蚯蚓的EC50為644 mg·kg-1（以TPH計）。由于各油田區(qū)實驗油品、土壤土質(zhì)存在差異，使得毒性數(shù)據(jù)的適用性受到限制。

石油是由脂肪烴（直鏈或支鏈、環(huán)烷烴）、芳香烴（多環(huán)芳烴和單環(huán)芳烴）以及少量非烴物質(zhì)組成的復(fù)雜混合物，各組分烴在總石油烴中的當(dāng)量含量和毒性存在明顯差異[18-20]。文獻(xiàn)中多是對TPHs在土壤中的生態(tài)毒性風(fēng)險進(jìn)行評價，較少考慮不同組分烴的當(dāng)量毒性風(fēng)險貢獻(xiàn)情況。本研究以蚯蚓作為指示生物，利用微宇宙毒性試驗研究了黃綿土中不同石油污染水平的生態(tài)毒性，以正癸烷（C10H22）、正十六烷（C16H34）、正二十六烷（C26H54）作為烷烴組分的模式化合物，以蒽（An）、菲（Phe）、芘（Pyr）作為多環(huán)芳烴組分的模式化合物，探究了TPHs中當(dāng)量烷烴和多環(huán)芳烴組分的生態(tài)毒性風(fēng)險效應(yīng)。研究結(jié)果可為預(yù)測石油污染對黃綿土的生態(tài)毒性風(fēng)險提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 供試蚯蚓

實驗用赤子愛勝蚓（Eisenia foetida）購于陜西省西安市某花鳥市場。選擇環(huán)帶顯著、大小相近、體重在300～400 mg之間的成蟲作為實驗用蚓[21-22]。

1.1.2 供試土壤

供試土壤采自陜北志丹縣油井附近未污染的表層（0～20 cm）黃綿土，土壤的理化性質(zhì)：pH為8.0±0.1，含水率為2.2%±0.2%，氨態(tài)氮為68.79±2.72 mg·kg-1，硝 態(tài) 氮 為9.30±1.29 mg·kg-1，總 氮 為107.46±10.62 mg·kg-1，有機(jī)質(zhì)為8.52±0.67 g·kg-1。

1.1.3 石油與化學(xué)試劑

所用石油為長慶油田采油六廠原油，屬于石蠟基輕質(zhì)原油。正癸烷、正十六烷、正二十六烷、蒽、菲、芘購自Sigma公司，正己烷、二氯甲烷（純度≥99.5%）購自杭州化學(xué)試劑有限公司。超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒和過氧化氫酶（CAT）試劑盒購自生工生物工程上海股份有限公司。

1.1.4 實驗儀器

超聲波細(xì)胞破碎儀（JY96-IIN，寧波新芝科技股份有限公司），高速冷凍離心機(jī)（TGL-20bR，上海安亭科學(xué)儀器廠），GC-MS聯(lián)用儀（PE CLARUS 680，美國PE），臺式微量冷凍離心機(jī)（Pico-21，美國Thermo Fisher），紫外可見分光光度計（UC2600A，美國尤尼柯）。

1.2 實驗方法

1.2.1 石油污染土壤的制備

將清潔土壤置于陰涼通風(fēng)處風(fēng)干，剔除肉眼可見的石塊、枝葉、根莖等雜物。土樣研磨后過2 mm篩。根據(jù)預(yù)設(shè)最大含量，向12 kg土壤中加入840 g原油（溶于二氯甲烷）進(jìn)行人工污染，從而獲得高污染儲備土，用未污染的黃綿土逐步稀釋，獲得不同污染水平的石油污染土壤。含油量從低到高依次為412±4、825±8、1 650±17、3 299±34、6 598±67、13 197±135、26 393±270、52 787±539 mg·kg-1，編號分別為1#，2#，3#，4#，5#，6#，7#，8#。對照組（CK）中只加入相同含量的二氯甲烷溶劑。

1.2.2 土壤中TPHs及不同組分烴的提取與測定

TPHs含量測定參考美國EPA3550C（METHOD 3550C）的方法，利用超聲萃取提取土壤樣品中的TPHs，并用質(zhì)量法[23]測定含量：準(zhǔn)確稱取風(fēng)干后的待測土樣5.000 g于50 mL聚乙烯離心管中。加入25 mL萃取液（正己烷與二氯甲烷體積比為1∶1）。設(shè)置超聲波細(xì)胞破碎儀功率180 W、超聲開2 s、脈沖間隔1 s、-6℃，提取10 min后，在4℃、8 000 r·min-1條件下離心15 min。將上清液過濾后收集于已稱質(zhì)量的稱量瓶內(nèi)。對土壤進(jìn)行3次重復(fù)萃取后，合并收集萃取液于稱量瓶中。將稱量瓶置于通風(fēng)櫥揮發(fā)、風(fēng)干，質(zhì)量恒定后稱量并計算TPHs含量。

使用氧化鋁硅膠層析柱進(jìn)行TPHs中烷烴和多環(huán)芳烴組分的分離提取，用質(zhì)量法測定含量。根據(jù)EPA8270C（METHOD 8270C）、8275A（METHOD 8275A）方法利用GC-MS聯(lián)用儀測定脂肪烴中的正烷烴和芳香烴中的16種多環(huán)芳烴（PAHs）含量。

1.2.3 蚯蚓急性毒性試驗

蚯蚓急性毒性試驗參考《化學(xué)品蚯蚓急性毒性試驗》（GB/T 21809—2008）。將蚯蚓清洗后清腸1 d，選取大小相近、環(huán)帶明顯、活動能力強(qiáng)、體質(zhì)量在300～400 mg之間的成蟲作為實驗用蚓，用濾紙擦拭、稱質(zhì)量[24]。將配制的1#～8#污染土壤和清潔土壤（CK）各500 g分別置于9個直徑為12 cm、高10 cm的塑料盒中，加水120 g至最大持水量的60%（含水率21%）[7]。平衡1 d后，每盆放入10條蚯蚓，然后用打孔的塑料蓋密封，防止蚯蚓逃竄。每3 d噴水保持花盆恒質(zhì)量，各濃度下設(shè)置三組平行試驗。分別于第7天和第14天取出蚯蚓，計算蚯蚓死亡率、體質(zhì)量抑制率、測定抗氧化酶SOD、CAT活性。

計算蚯蚓死亡率（Mj）和體質(zhì)量抑制率（Nj）分別采用如下公式：

式中：yj為第j組的蚯蚓存活條數(shù)。

式中：Z0為各處理中的蚯蚓初始體質(zhì)量，mg；Zj為各處理中蚯蚓7 d或14 d后的體質(zhì)量，mg。

1.2.4 蚯蚓酶活性的測定

將清腸1 d后的冷凍蚯蚓充分研磨，并取0.1 g蚯蚓組織和9 mL提取液于1.5 mL EP管中。用渦旋機(jī)振蕩均勻，以8 000g離心10 min。依照酶活性快速測試包（D799593-0050，D799597-0050）說明書，準(zhǔn)確吸取定量的勻漿液和試劑至2 mL EP管，充分反應(yīng)后利用紫外可見分光光度計測定吸光值A(chǔ)。以上操作均在4℃下進(jìn)行。

①SOD的計算

抑制百分率（H）的計算：

式中：ΔA空白=A空1-A空2；ΔA測定=A測定-A對照。

SOD活力單位（U）：每毫升反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時所反應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位。

動物組織SOD活力（U·g-1）計算：

式中：V反總為反應(yīng)體系總體積，1.026 mL；V樣為加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.09 mL；V樣總為加入提取液體積，1 mL；W為樣品質(zhì)量，g；F為樣本稀釋倍數(shù)。

②CAT的計算

CAT活力單位（U）：每克組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化1 μmoL H2O2降解定義為一個酶活力單位。

動物組織CAT活力（U·g-1）計算：

式中：V反總為反應(yīng)體系總體積，1.035 mL；d為比色皿光徑，1 cm；V樣為加入樣本體積，0.035 mL；V樣總為加入的提取液體積，1 mL；T為反應(yīng)時間，1 min；W為樣本質(zhì)量，g；ε為H2O2摩爾吸光系數(shù)，43.6 L·mol-1·cm-1；106為單位換算系數(shù)，1 mol=106μmol。

1.3 數(shù)據(jù)分析處理

利用Excel 2016進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實驗結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD，n=3）表示。使用GraphPad Prism 9進(jìn)行繪圖。利用SPSS 26.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和單因素方差分析（ANOVA），經(jīng)鄧肯多重比較檢驗進(jìn)行差異性顯著性分析，設(shè)定P＜0.05為顯著水平。蚯蚓半數(shù)致死濃度LC50采用單位概率回歸分析法計算。

2 結(jié)果與分析

2.1 石油污染土壤中的各組分烴含量

利用柱層析-質(zhì)量法測得552 787±539 mg·kg-1石油污染土壤中脂肪烴總量為41 040±640 mg·kg-1，約占TPHs的77.75%；芳香烴總量為3 690±50 mg·kg-1，約占TPHs的6.99%。石油烴中各組分烴的含量占比如圖1所示。

圖1 石油污染土壤中各組分烴的含量占比Figure 1 Percentage of hydrocarbon fractions content in petroleum-contaminated soil

利用GC-MS測得52 787±539 mg·kg-1石油污染土壤中碳數(shù)為C7～C40的正烷烴總含量為5 067.7±21.1 mg·kg-1（圖2a）。其中，C7～C10所占百分比為0.62%，C11～C16為22.45%，C17～C34為75.95%，C35～C40為0.99%。16種PAHs總含量為9.17±0.85 mg·kg-1（圖2b）。其中，蒽（An）、菲（Phe）、芘（Pyr）分別占16種PAHs總量的4.14%、8.72%、1.53%。

圖2 52 000 mg·kg-1石油污染土壤中的C7～C40正烷烴和16種PAHs含量Figure 2 Contents of n-alkanes and 16 PAHs in 52 000 mg·kg-1 oil-contaminated soil

2.2 蚯蚓對TPHs的毒性響應(yīng)

2.2.1 不同石油污染水平對蚯蚓的體質(zhì)量抑制率

將蚯蚓放入不同石油污染水平的土壤中，蚯蚓表現(xiàn)出不同的響應(yīng)。在低石油烴含量的土壤中（TPHs＜5 000 mg·kg-1），蚯蚓自動向下挖掘，顏色紅潤無變化。在較高石油污染水平的土壤中（TPHs＞13 000 mg·kg-1），蚯蚓停留在土壤表面和花盆邊緣，體型變細(xì)變長，色澤變暗，且不斷扭曲彈動，有逃離土壤的行為，2 d后部分蚯蚓出現(xiàn)分泌體液，出血、身體斷裂以及死亡現(xiàn)象。在中等含量石油污染土壤中（6 500±67 mg·kg-1）的蚯蚓比對照組中的蚯蚓更為活躍，產(chǎn)生“毒物應(yīng)激效應(yīng)”[25]。蚯蚓逃離土壤的行為稱為回避行為，一些研究中使用蚯蚓回避率（NR）[15]來表示其所受石油烴毒性的影響程度，進(jìn)而診斷土壤受石油污染的情況。

分別在第7天和第14天對蚯蚓進(jìn)行計數(shù)、稱質(zhì)量，得到蚯蚓體質(zhì)量變化如圖4所示。土壤中含油量為400～6 500 mg·kg-1時，暴露7 d可致蚯蚓體質(zhì)量減少20%以上，土壤中含油量超過13 000 mg·kg-1時，14 d可致蚯蚓體質(zhì)量減少50%以上。土壤中石油含量越高，蚯蚓體質(zhì)量減少量越大，說明重度石油污染造成了蚯蚓的生長障礙。對比7 d和14 d暴露結(jié)果，大部分土壤中的蚯蚓體質(zhì)量減輕現(xiàn)象發(fā)生在前7 d。這可能是暴露7 d后由于蚯蚓對石油污染產(chǎn)生了適應(yīng)性，甚至可能會促進(jìn)石油的降解[26]。

2.2.2 TPHs與蚯蚓急性毒性的劑量-效應(yīng)關(guān)系

以石油烴含量的對數(shù)作為橫坐標(biāo)，以蚯蚓死亡率的概率作為縱坐標(biāo)，擬合得到線性回歸方程，通過計算得出蚯蚓的7 d和14 d半數(shù)致死濃度（LC50），如表1所示。暴露7 d和14 d時，蚯蚓的LC50分別為20 378.38 mg·kg-1和11 336.27 mg·kg-1。這與TANG等[7]的結(jié)果相近。石油烴對蚯蚓的14 d半數(shù)致死濃度值小于7 d時的濃度，說明隨著暴露時間的增加，石油烴對蚯蚓的致毒效應(yīng)增強(qiáng)。

表1 石油烴對蚯蚓7 d和14 d的半數(shù)致死濃度Table 1 Fifty percent lethal concentrations（7 d and 14 d）of petroleum to earthworm

2.2.3 TPHs對蚯蚓酶活性的影響

不同TPHs含量污染土壤中暴露14 d的蚯蚓組織中SOD和CAT活性測定結(jié)果見圖4。隨土壤中石油烴濃度增加，蚯蚓SOD和CAT活性總體上均呈現(xiàn)出先增加后降低隨后再升高的變化趨勢。各處理組（52 787 mg·kg-1濃度下蚯蚓均已死亡，因此不分析此濃度下的數(shù)據(jù)）SOD酶活性均大于對照組（CK），土壤中TPHs濃度為26 393±270 mg·kg-1時，SOD酶活性達(dá)到最大，是對照組的1.57倍。土壤中石油烴濃度為1 650±17 mg·kg-1時，蚯蚓的CAT酶活性最大，是對照組的2.18倍。此后隨石油烴濃度的增加CAT酶活性降低，在暴露劑量為6 598±67 mg·kg-1時最低，僅為對照組的85.7%。

圖4 不同污染水平土壤中存活14 d蚯蚓組織中的SOD和CAT活性Figure 4 Enzyme activities of SOD and CAT of earthworms that survived in petroleum-polluted soil for 14 days

總體上，當(dāng)土壤中TPHs濃度低于3 000 mg·kg-1時，SOD和CAT活性隨TPHs濃度的增加被誘導(dǎo)而迅速上升，此時蚯蚓體內(nèi)氧自由基增加，減少了細(xì)胞膜的氧化損傷，屬于機(jī)體對脅迫環(huán)境的適應(yīng)反應(yīng)[27]。這體現(xiàn)出蚯蚓抗氧化系統(tǒng)對TPHs的應(yīng)激敏感；當(dāng)土壤中TPHs濃度在3 000～6 500 mg·kg-1之間時，兩種酶活性降低，可能是由于蚯蚓需要消耗大量的酶以清除自由基；當(dāng)土壤中TPHs濃度超過6 500 mg·kg-1，兩種酶活性再次升高，可能是由于在高濃度石油污染條件下盡管存活的蚯蚓數(shù)量少，但可存活蚯蚓的抗氧化系統(tǒng)能力被極大激活所致。

圖3 不同石油污染水平條件下蚯蚓7 d和14 d的體質(zhì)量抑制率Figure 3 Changes in body weight of earthworms at 7 and 14 days under different oil pollution levels

正常生理條件下，生物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生和抗氧化防御系統(tǒng)酶之間存在動態(tài)平衡機(jī)制。而在不利的環(huán)境條件下，會引起生物體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生具有極強(qiáng)氧化能力的O2-，是生物氧毒害的重要因素之一。抗氧化酶活性SOD和CAT是動物抵御活性氧破壞的兩種重要酶，在清除O2-、H2O2以及阻止或減少羥基自由基中起著非常重要的作用，可反映動物體內(nèi)活性氧清除能力或抗氧化能力的強(qiáng)弱[22]。本研究結(jié)果表明土壤受到低濃度石油污染后，誘發(fā)了蚯蚓體內(nèi)產(chǎn)生大量氧活性自由基而造成氧化脅迫，導(dǎo)致活體蚯蚓通過啟動SOD系統(tǒng)以清除自由基，進(jìn)而減少細(xì)胞膜的過氧化作用[28]。同時啟動CAT系統(tǒng)清除產(chǎn)生的H2O2，以維持機(jī)體平衡[22]。

2.3 石油烴不同組分對蚯蚓的毒性作用

根據(jù)2.2.2所得結(jié)果，蚯蚓在石油污染土壤中14 d的半致死濃度LC50=11 291 mg·kg-1，體質(zhì)量抑制率的EC50為14 772 mg·kg-1。以此為依據(jù)，選取C10H22、C16H34、C26H54為烷烴組分的模式化合物，蒽（An）、菲（Phe）、芘（Pyr）為多環(huán)芳烴組分的模式化合物，取TPHs為10 000、30 000 mg·kg-1時各模式化合物的當(dāng)量濃度（各組分在總石油烴中的濃度）作為添加濃度，探究不同模式化合物對蚯蚓的毒性效應(yīng)。

2.3.1 烷烴組分對蚯蚓的毒性作用

根據(jù)2.1中烷烴組分測定結(jié)果，計算得到TPHs為10 000 mg·kg-1時，C10H22、C16H34、C26H54的濃度分別為3.22、48.34、52.73 mg·kg-1。向潔凈土壤中分別加入三種模式化合物，使其在土壤中的濃度分別為3.22、48.34、52.73 mg·kg-1，同時對另外一組潔凈土壤進(jìn)行TPHs為30 000 mg·kg-1時的等當(dāng)量烷烴污染，C10、C16、C26的當(dāng)量濃度分別為9.67、145.01、158.20 mg·kg-1。利用蚯蚓作為指示生物研究當(dāng)量烷烴組分的毒性風(fēng)險，結(jié)果見圖5。

整個實驗期間，所有處理中蚯蚓未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，但各組之間體質(zhì)量變化率存在差異。TPHs為10 000 mg·kg-1時的當(dāng)量烷烴模式化合物的蚯蚓急性毒性試驗抑制率見圖5。對比CK組，三種烷烴模式化合物，蚯蚓體質(zhì)量均表現(xiàn)出較高的抑制率。隨著污染物劑量的增加，各處理組呈先升高再下降的變化趨勢，但總體都高于CK組。其中，C16烷烴的體質(zhì)量抑制率達(dá)到最高，處理7 d時，10 000 mg·kg-1和30 000 mg·kg-1污染水平中C16烷烴的體質(zhì)量抑制率分別為27.15%和26.75%；處理14 d時，10 000 mg·kg-1和30 000 mg·kg-1污染水平的體質(zhì)量抑制率分別為45.93%和44.41%。

圖5 10 000 mg·kg-1和30 000 mg·kg-1 TPHs中等當(dāng)量烷烴組分模式化合物對蚯蚓的毒性Figure 5 Ecotoxicity of the equivalent alkane model compounds n-Decane，n-Hexadecane，and n-Hexacosane to earthworm

C10與CK組對比無顯著相關(guān)性。比較C10、C16、C26烷烴對蚯蚓的毒性可知，當(dāng)量濃度的高碳數(shù)烷烴對蚯蚓的毒性并非最大，說明石油污染土壤中不同烴類化合物對物種的毒性作用是復(fù)雜的，存在化學(xué)指標(biāo)的特異性。

2.3.2多環(huán)芳烴組分對蚯蚓的毒性作用

根據(jù)2.1中多環(huán)芳烴組分測定結(jié)果，計算得到10 000 mg·kg-1TPHs中An、Phe、Pyr濃度分別為0.15、0.07、0.03 mg·kg-1；相應(yīng)地，30 000 mg·kg-1TPHs中An、Phe、Pyr濃度分別為0.46、0.22、0.08 mg·kg-1。實驗設(shè)計同烷烴組分。

利用10 000 mg·kg-1TPHs中的等當(dāng)量多環(huán)芳烴污染土壤，蚯蚓7 d的體質(zhì)量抑制率與CK組相比表現(xiàn)出較明顯的抑制作用。三種多環(huán)芳烴中，當(dāng)量An對蚯蚓的體質(zhì)量抑制率最大，Phe和Pyr對蚯蚓的體質(zhì)量抑制情況接近。在30 000 mg·kg-1TPHs等當(dāng)量多環(huán)芳烴污染土壤中，An對蚯蚓的體質(zhì)量抑制率達(dá)到最大值，其次為Pyr，Phe對蚯蚓的體質(zhì)量抑制率最小。

由圖6可見，在組分烴模式化合物污染條件下，蚯蚓的體質(zhì)量抑制率與暴露時間和組分烴劑量有關(guān)，且低濃度時Phe的毒性低于Pyr，而高濃度時Phe的毒性高于Pyr。這與吳爾苗[29]的研究相似，即Phe和Pyr對蚯蚓的毒性差異與各自的溶解度有關(guān)，Phe在水中的溶解度較高，為1.3 mg·L-1，而Pyr在水中的溶解度為0.012 mg·L-1，Pyr的毒性受其低水溶性的影響。當(dāng)Phe濃度較高時，由于其高水溶性，其融入土壤孔隙水的量增加，從而被蚯蚓接觸吸收的Phe也較多，土壤毒性較高，相比于Pyr則較低。因此，評價石油烴組分在土壤中的毒性風(fēng)險時，不僅要考慮組分的結(jié)構(gòu)和物理化學(xué)特性，還與其在總石油烴中的當(dāng)量濃度、暴露時間有密切的關(guān)系。對比圖5與圖6得到，在相同時間當(dāng)量濃度下，各烷烴組分烴的蚯蚓體質(zhì)量抑制率均為最大，且烷烴在石油烴組分中占比高，為77.75%，故烷烴模式化合物毒性要高于多環(huán)芳烴。

圖6 10 000 mg·kg-1和30 000 mg·kg-1 TPHs中等當(dāng)量多環(huán)芳烴組分模式化合物對蚯蚓的毒性Figure 6 Ecotoxicity of the equivalent PAHs model compounds to earthworm

在實際中，污染物對蚯蚓接觸產(chǎn)生的毒性不僅取決于污染物本身，還與其在土壤中和蚯蚓體內(nèi)的行為變化密切相關(guān)[29]。因此，急性毒性試驗對潛在的毒性評價不夠準(zhǔn)確，而慢性試驗對評價污染物的毒性效應(yīng)更為準(zhǔn)確。梁繼東等[30]的研究表明，體質(zhì)量變化率比死亡率（LD50）更能準(zhǔn)確地反映污染物的生態(tài)毒性效應(yīng)。在污染物劑量較低，暴露時間較短不足以引起蚯蚓死亡時，蚯蚓體質(zhì)量的變化成為可靠的評價因素。

3 結(jié)論

（1）土壤中總石油烴含量為13 000 mg·kg-1時，可引起蚯蚓的體態(tài)變化和強(qiáng)烈回避行為、抗氧化系統(tǒng)過度應(yīng)激以及14 d內(nèi)半數(shù)致死等毒性效應(yīng)。蚯蚓致死率和體質(zhì)量抑制率均能較好表征蚯蚓在石油污染土壤中所受的毒害，但致死率測定便捷快速，而體質(zhì)量抑制率的測定較為費時費力。

（2）石油污染土壤中的烷烴和多環(huán)芳烴組分占比分別為77.75%和6.99%。通過分別比較烷烴和多環(huán)芳烴在土壤中的當(dāng)量濃度毒性可知，烷烴模式化合物正十六烷、正二十六烷對蚯蚓的急性毒性高于多環(huán)芳烴模式化合物蒽、菲、芘的急性毒性。因此，在土壤污染初期應(yīng)充分重視烷烴的急性毒性，尤其是正十六烷化合物的毒性。