何貴新，馮雨菲，秦偉彬，林 琳，胡夢(mèng)弦，鄭國(guó)坤，玉黎燕，甲子永，韋 娟，文 琦，黃振樂，劉誓海

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530022；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530299）

心肌梗死是目前威脅人民生命的主要疾病之一，已然成為重大的公共衛(wèi)生問題。根據(jù)我國(guó)心血管病報(bào)告［1］，近年來心肌梗死的死亡率呈快速上升趨勢(shì)。再灌注策略可重新開通閉塞的血管，恢復(fù)缺血心肌的血氧供。然而，恢復(fù)過程可引起氧化應(yīng)激、心肌細(xì)胞凋亡、自噬和炎性細(xì)胞因子的釋放等多種病理過程，進(jìn)一步加重心肌損害，即出現(xiàn)心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia-reperfusion injury, MIRI）。積極有效地抑制心?；颊哐骰謴?fù)后的再灌注損傷，增加心肌細(xì)胞對(duì)MIRI 的抵抗力，對(duì)于進(jìn)一步挽救受損心肌，改善患者預(yù)后，具有重大意義［2］。

研究表明，心肌缺血時(shí)線粒體功能受損是加重細(xì)胞壞死的重要因素。心肌缺血會(huì)降低肌膜下線粒體和原纖維間線粒體中的多種復(fù)合物活性，損害電子傳遞鏈（electron transport chain , ETC），影響電子傳輸功能。缺血對(duì)ETC 的損害可增加線粒體的活性氧（reactive oxygen species,ROS）的凈產(chǎn)量，過量的ROS 引發(fā)心肌進(jìn)一步損傷，形成惡性循環(huán)［3，4］。而在缺血再灌注后，不僅ETC，包括中介代謝的多種途徑都承受著由ETC 引發(fā)的損害。這些受損線粒體是持續(xù)損傷和長(zhǎng)時(shí)間再灌注過程中向心肌病過渡的有效刺激物。因此，及時(shí)清除受損線粒體對(duì)維持心肌組織穩(wěn)態(tài)、心肌細(xì)胞正常功能具有重大意義。研究證實(shí),自噬是心臟穩(wěn)態(tài)和功能的一個(gè)主要調(diào)節(jié)器。自噬在基線條件下保留心臟結(jié)構(gòu)和功能，在應(yīng)激時(shí)被激活，限制了大多數(shù)條件下的損傷以保護(hù)心臟功能。它還通過限制錯(cuò)誤折疊蛋白積累、線粒體功能障礙和氧化應(yīng)激，減少慢性缺血性重構(gòu)并調(diào)節(jié)心臟對(duì)壓力過載的適應(yīng)［5］。因此，以調(diào)節(jié)線粒體自噬作為靶點(diǎn)的心肌保護(hù)方案是探索心血管疾病治療的新方向。

miRNAs 在病變組織中有差異表達(dá)，可以釋放到循環(huán)中以影響疾病的病程，因此，探求miRNAs 的診斷和治療作用，尋找疾病的調(diào)控機(jī)制及新的生物標(biāo)志物已然成為研究的一個(gè)重要領(lǐng)域。已報(bào)道的miRNAs 作為基因表達(dá)的核心調(diào)控因子，其調(diào)控異?？捎绊懝谛牟〉鹊陌l(fā)病機(jī)制［6］。盡管已證實(shí)多個(gè)miRNA 在心血管疾病中發(fā)揮重要作用，miRNA 種類繁多，作用廣泛，目前了解及掌握的miRNA 調(diào)控基因及其參與疾病的作用機(jī)制只是龐大miRNA 家族的冰山一角，更多調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。既往miRNA 相關(guān)研究發(fā)現(xiàn), miRNA 啟動(dòng)子DNA 甲基化水平的改變可直接導(dǎo)致其表達(dá)水平改變，參與其轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,在疾病的發(fā)病機(jī)制、診斷識(shí)別及發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用［7-9］。近年來，已有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)miRNA-DNA 甲基化在心肌缺血的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用［10，11］。且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，部分中藥復(fù)方可以通過調(diào)控miRNA 或DNA 甲基化,進(jìn)而顯著減少M(fèi)IRI 后的心肌壞死面積，調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬，抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，但具體機(jī)制尚不清楚［12］。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方芪參益氣滴丸能顯著改善MIRI 及調(diào)控細(xì)胞自噬功能，且細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)芪參益氣滴丸可以激活mitoKATP 信號(hào)通路從而改善心肌缺血。另外，前期研究證實(shí)外泌體miR-155 在內(nèi)皮細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激損傷、血管平滑肌細(xì)胞遷移等方面發(fā)揮著重要作用。然而，miR-155 啟動(dòng)子區(qū)DNA 甲基化是否參與MIRI，目前尚未見報(bào)道。故筆者提出假說，芪參益氣滴丸通過調(diào)控miRNA155-DNA 甲基化調(diào)節(jié)線粒體自噬，進(jìn)而緩解MIRI。相關(guān)理論探討研究如下：

1 心肌缺血后的氧化應(yīng)激損傷

心肌缺血發(fā)生時(shí)，線粒體再活化和氧的再生可導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)，通過刺激多種破壞性因素從而介導(dǎo)心肌損傷。ROS 作為誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的關(guān)鍵因素，當(dāng)產(chǎn)生過多，超過了機(jī)體清除過氧化物的能力時(shí)，氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)之間的平衡就會(huì)被破壞，導(dǎo)致組織的氧化損傷。MIRI 通過黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)，激活的中性粒細(xì)胞和線粒體呼吸鏈的功能出現(xiàn)異常，產(chǎn)生過量無氧的自由基。大量ROS 誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激是心肌細(xì)胞死亡、收縮和舒張功能下降的重要啟動(dòng)因子［13］。事實(shí)上，心肌缺血后，僅能觀察到少量的氧自由基產(chǎn)生，而氧自由基爆發(fā)式增長(zhǎng)則發(fā)生在再灌注后數(shù)秒鐘至1 min 以后。ROS 可直接攻擊生物膜上的不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化，破壞心肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整性。此外，ROS可引發(fā)細(xì)胞溶質(zhì)Ca2+超載，導(dǎo)致線粒體Ca2+過度增加，進(jìn)而誘導(dǎo)線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mitochondrial permeability transition pore，mPTP）打開，并使線粒體膜電位去極化。mPTP 的開放導(dǎo)致三磷酸腺苷（triphosadenine，ATP）的損失、線粒體腫脹和細(xì)胞色素C 的釋放，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［14］。另外，氧化應(yīng)激可介導(dǎo)的心肌細(xì)胞DNA 損傷。駱佳銘等［15］研究發(fā)現(xiàn)，加入抗氧化劑的缺氧/復(fù)氧H9C2 細(xì)胞DNA損傷明顯降低，同時(shí)抑制心肌損傷及凋亡，起到改善MIRI 的作用，證實(shí)氧化應(yīng)激介導(dǎo)的DNA 損傷可能密切參與MIRI 的發(fā)病過程。另外，ROS 還可以促進(jìn)心肌梗死后的炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)控心肌細(xì)胞凋亡并參與心肌梗死后的心肌重塑［16］。因此，有效清除過量的ROS 可能為減輕MIRI 提供理論基礎(chǔ)和治療靶點(diǎn)。

2 線粒體自噬與缺血后的氧化應(yīng)激損傷

心肌是一種高度氧化的組織，線粒體在維持心臟的最佳性能方面發(fā)揮著核心作用。線粒體是一種雙膜細(xì)胞器，內(nèi)膜為離子透膜，外膜為因子透膜，這種復(fù)雜的膜結(jié)構(gòu)使ATP 通過線粒體氧化磷酸化產(chǎn)生。而在成年哺乳動(dòng)物心臟中，線粒體氧化磷酸化負(fù)責(zé)產(chǎn)生95%的ATP。肌酸磷酸鹽穿梭系統(tǒng)將高能磷酸基從線粒體產(chǎn)生的部位運(yùn)送到肌原纖維，以再生收縮過程中消耗的ATP。因此，細(xì)胞正常生存需要依賴線粒體功能和結(jié)構(gòu)的完整性。

自噬是一種溶酶體依賴的降解過程。線粒體自噬是典型的選擇性自噬，通過消除受損或功能障礙線粒體，以維持線粒體穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。Lemasters［17］于2005 年首次提出“線粒體自噬”，強(qiáng)調(diào)在酵母菌中識(shí)別Uth1基因后，該過程的非隨機(jī)性證實(shí)線粒體自噬具有選擇性。隨著研究的深入，人們對(duì)線粒體自噬的過程及分子機(jī)制認(rèn)識(shí)逐漸加強(qiáng)。目前，大致接受的線粒自噬途徑包括：泛素型、受體型和非典型的線粒體自噬途徑［18］?？傮w而言，線粒體自噬分為自噬誘導(dǎo)、自噬體形成、自噬融酶體形成以及降解四個(gè)階段。受損線粒體可引起其通透性發(fā)生改變及相關(guān)蛋白活化。線粒體膜上的蛋白質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的自噬小體相連接，逐漸包裹整個(gè)線粒體，后運(yùn)送至溶酶體。被包裹的線粒體與溶酶體相融合，隨后線粒體溶酶體降解，細(xì)胞利用其中成分合成新的細(xì)胞器和蛋白質(zhì)。在心肌組織中，自噬隨著年齡的增長(zhǎng)而減少，并且在衰老的心臟中積累了錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)和功能失調(diào)的線粒體，因此，線粒體自噬是心肌細(xì)胞控制線粒體質(zhì)量的重要中介。Mito-Keima 小鼠的檢測(cè)表明，心臟的基礎(chǔ)線粒體自噬活性大于其他器官，如胸腺［19］，可能反映了高水平的氧化磷酸化、ROS 以及心肌細(xì)胞線粒體損傷。在應(yīng)激過程中，線粒體自噬被激活，允許清除受損的線粒體。同時(shí)，自噬與線粒體生物發(fā)生緊密耦連，因此被清除的線粒體不斷地被新的線粒體取代。研究發(fā)現(xiàn)，線粒體自噬障礙可導(dǎo)致鈣穩(wěn)態(tài)的持續(xù)喪失、ROS 的過量產(chǎn)生、細(xì)胞能量和ATP 的產(chǎn)生受損，并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡［20］。在壓力過載引起的心力衰竭中，線粒體自噬的下調(diào)在介導(dǎo)線粒體功能障礙中是疾病發(fā)生的重要原因，因此，有效增加線粒體自噬可改善心臟功能障礙［21］。而在心肌缺血與缺氧過程中，心肌細(xì)胞中的線粒體的損傷產(chǎn)生大量的ROS 等促凋亡因子，線粒體自噬激活通過降解功能異常的線粒體以及降低ROS 水平進(jìn)行質(zhì)量控制，同時(shí)促進(jìn)ATP 生成，提供能量以維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)［22］。另外，線粒體自噬可減輕心肌細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，在心肌損傷過程中起到抑制作用［23，24］。因此，有效的線粒體自噬對(duì)心肌缺血后的心肌保護(hù)發(fā)揮積極作用。

3 ATP 敏感性鉀通道與心肌缺血再灌注損傷

ATP 敏感性鉀通道是一種受細(xì)胞內(nèi)ATP 濃度調(diào)控的內(nèi)向整流鉀通道。KATP 通道是由4 個(gè)內(nèi)部整流鉀通道6（Kir6，Kir6.1 或Kir6.2）亞單位和4 個(gè)ABCC（atp 結(jié)合盒，亞家族C）家族成員磺酰脲受體（SUR，SUR1，SUR2A，或SUR2B）組成的異共體膜蛋白復(fù)合物［25］。KATP 通道可分為肌細(xì)胞膜型（sarcKATP）和線粒體型（mitoKATP）。KATP 通道大量存在于心肌組織中，并在心肌細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起著至關(guān)重要的作用［26］。有研究表明，開放KATP 通道通過減少心肌細(xì)胞的損傷和凋亡進(jìn)而對(duì)心肌起到保護(hù)作用［27］。KATP 通道的活動(dòng)與細(xì)胞代謝密切相關(guān)，受到細(xì)胞內(nèi)ATP 濃度的調(diào)節(jié)：生理情況下，ATP 在細(xì)胞內(nèi)具有較高濃度，此時(shí)KATP 通道關(guān)閉；而當(dāng)心肌細(xì)胞受到缺血、再灌注損傷、細(xì)胞應(yīng)激和細(xì)胞凋亡等病理刺激時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的ATP 會(huì)被消耗，濃度降低，從而誘發(fā)KATP 通道開放，鉀離子外流，穩(wěn)定細(xì)胞膜的靜息電位，同時(shí)縮短動(dòng)作電位時(shí)間，減少鈣離子的內(nèi)流，減輕心肌細(xì)胞的鈣超載，降低心肌細(xì)胞的耗能，增加應(yīng)激耐受性，改善心肌損傷［28］。同時(shí)，也有研究表明，KATP通道在MIRI 的過程中具有抗心律失常的作用［29］。既往研究證實(shí)，mitoKATP 能夠阻止mPTP 的長(zhǎng)期開放，從而保持線粒體的完整性，保證細(xì)胞能量狀態(tài)和促存活作用。同時(shí)，mitoKATP 通道在自噬調(diào)節(jié)過程參與的心臟保護(hù)中發(fā)揮重要作用［30，31］。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，mitoKATP 信號(hào)通路對(duì)改善心肌缺血具有促進(jìn)作用，而芪參益氣滴丸可有效激活mito-KATP 通道。

4 miRNA-DNA 甲基化參與心肌缺血再灌注損傷

miRNA 是一類內(nèi)源性非編碼小核糖核酸，包含18～24 個(gè)核苷酸。miRNA 可在轉(zhuǎn)錄后通過與靶mRNA 的3'-非翻譯區(qū)（3'-UTR）結(jié)合，引起靶mRNA 的降解或沉默，從而誘導(dǎo)調(diào)節(jié)生理過程或信號(hào)通路。據(jù)估計(jì)，miRNAs 控制了30%～50%的蛋白編碼基因的活性。不同于在控制基因表達(dá)中具有開啟和關(guān)閉功能的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，miRNAs 可以根據(jù)環(huán)境條件的變化來微調(diào)蛋白質(zhì)表達(dá)水平。作為微管理器，miRNA 參與細(xì)胞存活、應(yīng)激反應(yīng)、增殖和凋亡［32］。例如，miR-145 直接靶向血管生成素-2，1，通過提高miR-145 水平可抑制Angpt2 表達(dá)來保護(hù)心肌細(xì)胞免受I/R 損傷［33］。miR-17-3p 促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大、增殖和存活。負(fù)向運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的心臟生而長(zhǎng)，包括心肌細(xì)胞肥大和心肌細(xì)胞增殖標(biāo)志物的表達(dá)［34］，證實(shí)miRNA 對(duì)心肌細(xì)胞的直接及間接調(diào)控作用。

既往研究發(fā)現(xiàn)，miRNA 因其自身具有高度保守性，在機(jī)體中充當(dāng)表觀遺傳調(diào)控作用，同時(shí)也受到其它表觀遺傳的調(diào)控作用，而在其受表觀遺傳調(diào)控機(jī)制中，miRNA 通過miRNA 靶結(jié)合DNMT1，3a，3b，TET2 或Drosha 促進(jìn)DNA 甲基化修飾，從而間接引起靶基因啟動(dòng)子甲基化水平及其基因表達(dá)水平變化［35，36］。miRNA 啟動(dòng)子上的高甲基化可能表明miRNA 功能和生物發(fā)生減少。在hcy 誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化中，泡沫細(xì)胞中miR-124 的表達(dá)降低，而miR-124 啟動(dòng)子DNA 甲基化水平升高，且呈劑量依賴性，故推測(cè)啟動(dòng)子DNA 甲基化狀態(tài)可能是粥樣硬化的重要機(jī)制［37］。有研究表明，miRNA 的生物發(fā)生依賴于DNA 甲基化。當(dāng)miRNA 編碼序列的兩側(cè)區(qū)域高度甲基化時(shí)，miRNA 的表達(dá)水平更高，具有更大的序列保守性，比未甲基化位點(diǎn)編碼的miRNA 更有可能驅(qū)動(dòng)癌癥相關(guān)表型［38］。

miR-155 是一種多功能的microRNA，最初被認(rèn)為具有免疫調(diào)節(jié)功能，因?yàn)樗谙忍旌瓦m應(yīng)性免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用［39］。隨著研究的深入，miR-155 的功能逐漸被揭示。miR-155 富集的外泌體抑制成纖維細(xì)胞增殖，促進(jìn)成纖維細(xì)胞炎癥［40］。miR-155 缺失顯著降低了急性心肌梗死（AMI）后心臟破裂的發(fā)生率，改善了心功能。miR-155 也出現(xiàn)在巨噬細(xì)胞來源的外泌體中，它可以通過巨噬細(xì)胞來源的外泌體轉(zhuǎn)入心臟成纖維細(xì)胞。miR-155 模擬體或包含miR-155 的外泌體通過下調(diào)Son of Sevenless-1的表達(dá)來抑制心臟成纖維細(xì)胞增殖，并通過降低細(xì)胞因子信號(hào)抑制因子1 的表達(dá)來促進(jìn)炎癥反應(yīng)［41］。目前，已有眾多研究發(fā)現(xiàn)miR-155 在內(nèi)皮細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、血管平滑肌細(xì)胞遷移等方面同樣發(fā)揮著重要作用，進(jìn)而影響著缺血性心肌病和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制過程［42］。筆者團(tuán)隊(duì)前期研究已經(jīng)證實(shí)miR-155 具有心肌保護(hù)作用，然而，miR-155 的DNA 甲基化對(duì)于心肌缺血的影響并未見明顯報(bào)道。故筆者大膽猜想miRNA155-DNA 甲基化在MIRI 的調(diào)控中發(fā)揮重要作用。

5 芪參益氣滴丸改善心肌缺血再灌注損傷

傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)理論中無“心肌缺血”的描述，但結(jié)合患者臨床表現(xiàn)，心肌缺血當(dāng)屬“胸痹心痛”、“真心痛”、“頭痛”、“眩暈”、“中風(fēng)”等病范疇。芪參益氣滴丸是由黃芪、丹參、三七、降香組成的中藥復(fù)方制劑，具有益氣通脈、活血止痛的作用。目前，芪參益氣滴丸被廣泛用于輔助治療心肌梗死和心力衰竭。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明芪參益氣滴丸具有心肌保護(hù)作用，其可調(diào)節(jié)7nAChR 抗炎通路、SIRT3/β -catenin/PPARγ 信號(hào)通路以減輕AMI 損傷引發(fā)的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡及心室重構(gòu)進(jìn)而改善心臟功能［43，44］。代倩倩等［45］從循證醫(yī)學(xué)的思路證實(shí)芪參益氣滴丸可有效改善臨床PCI 術(shù)后的不良心血管事件，提高臨床療效，改善生活質(zhì)量和預(yù)后，且安全可靠。筆者團(tuán)隊(duì)的前期研究亦證實(shí)，芪參益氣滴丸改善心肌梗死后心肌微循環(huán)障礙，抵抗MIRI 方面效果顯著［46-48］。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究表明，芪參益氣滴丸具有多通路、多靶點(diǎn)、多途徑的作用特性，其主要活性成分包括黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、芒柄花黃素、人參皂苷Rg1、丹參酮ⅡA 等，涉及鈣信號(hào)通路、cAMP 信號(hào)通路、CGMP-PKG 等多條通路，在能量代謝、氧化應(yīng)激、炎癥與凋亡、纖維化、線粒體功能調(diào)節(jié)等發(fā)揮作用，多方面保護(hù)心肌細(xì)胞，改善心臟重塑［49］。黃芪甲苷對(duì)AMI 具有心臟保護(hù)作用，其通過調(diào)節(jié)PTEN/PI3K/Akt 信號(hào)通路來促進(jìn)血管生成［50］。此外，黃芪甲苷可減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，減緩心肌損傷［51］。丹參酮ⅡA 可通過調(diào)控AngⅡ-（AT-1R）-Cx43 信號(hào)通路，改善冠心病血瘀證大鼠再灌注損傷的癥狀［52］。丹參酮ⅡA 磺酸鈉可減輕I/R 誘導(dǎo)的心肌損傷，通過減少炎癥和凋亡改善心功能，同時(shí)增強(qiáng)自噬［53］。人參皂苷1 可通過改善MIRI 后心肌梗死面積、心肌血流量和心功能下降、心肌結(jié)構(gòu)的改變，對(duì)心肌損傷起到抑制作用。同時(shí)，人參皂苷1 通過與RhoA 結(jié)合抑制心肌凋亡、調(diào)節(jié)能量代謝［54］。筆者在前期實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，芪參益氣滴丸可減少M(fèi)IRI 的梗死面積，減輕心肌損傷，改善心臟功能。而miR-155 在內(nèi)皮細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、血管平滑肌細(xì)胞遷移等方面發(fā)揮著重要作用。因此，筆者推測(cè)益氣滴丸或可通過miRNA155-DNA 甲基化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，影響線粒體自噬，最終達(dá)到改善MIRI 的目的。

6 小結(jié)

筆者在前期研究的基礎(chǔ)上提出假說：芪參益氣滴丸可調(diào)控miR155-DNA 甲基化介導(dǎo)miKATP 通道，調(diào)節(jié)線粒體自噬，進(jìn)而抑制心肌缺血再灌注損傷，改善AMI 后心功能的作用。本理論的提出或可為臨床有效抑制MIRI，為提高心肌梗死中醫(yī)藥治療效果奠定堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

作者貢獻(xiàn)度說明：

何貴新：確定文章題目方向，構(gòu)建文章框架，書寫文章摘要、開頭。負(fù)責(zé)文章書寫后的審閱及修改。馮雨菲：負(fù)責(zé)文章1～2 點(diǎn)的書寫，查閱文獻(xiàn)，后期協(xié)助一作審閱及修改文章。秦偉彬、林琳：負(fù)責(zé)文章3～5 點(diǎn)的書寫，查閱文獻(xiàn)，后期負(fù)責(zé)參考文獻(xiàn)的格式審閱。甲子永、黃振樂、劉誓海：負(fù)責(zé)整理查閱參考文獻(xiàn)，協(xié)助一作檢查文章。