徐莉，李敏

國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，北京 100022

腺病毒為無包膜雙鏈DNA 病毒，分為哺乳動物腺病毒屬和禽類腺病毒屬。至今已分離鑒定人腺病毒100 多個型別，6 個亞群（A ~ F），50 多種血清型。腺病毒感染免疫功能正常的人后多表現(xiàn)為自限性［1］。

腺病毒具有穩(wěn)定的基因組、不整合至人體基因、有多種血清型供選擇等優(yōu)勢［1］，已作為基因遞送載體用于基因治療產(chǎn)品［2］及疫苗的開發(fā)。腺病毒載體已廣泛用于包括埃博拉病毒、HIV、流感病毒、呼吸道合胞病毒、瘧原蟲、結(jié)核分枝桿菌、丙型肝炎病毒、新型冠狀病毒等候選疫苗的研發(fā)中［3］。其中，基于人腺病毒5 型、26 型和黑猩猩腺病毒作為載體的新型冠狀病毒疫苗已獲附條件上市［4］或緊急使用［5-6］，相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)及使用目前正在進(jìn)行中。本文簡要綜述了腺病毒載體疫苗的研究進(jìn)展，從細(xì)胞基質(zhì)、毒種、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制等方面，結(jié)合相關(guān)法規(guī)要求及國內(nèi)外指南等，對此類產(chǎn)品的藥學(xué)評價考慮進(jìn)行探討，為該類品種研制及注冊等提供參考。

1 用于疫苗生產(chǎn)的腺病毒載體改造

目前，研究應(yīng)用最廣泛的腺病毒載體為人Ad5，但考慮到人群中腺病毒血清型流行及腺病毒預(yù)存抗體情況，也選擇應(yīng)用人類稀有的血清型或者非人類如黑猩猩腺病毒等作為載體，從而克服對載體的預(yù)存免疫。

腺病毒基因組中包括方向末端重復(fù)序列（ITR）、包裝信號（Ψ）、早期轉(zhuǎn)錄單位（E1 ~ E4）和晚期轉(zhuǎn)錄單位（L1 ~ L5），早期轉(zhuǎn)錄單位的表達(dá)為病毒DNA的復(fù)制奠定了基礎(chǔ)［7］。早期轉(zhuǎn)錄單位也是腺病毒載體改造的重點區(qū)域，疫苗生產(chǎn)用腺病毒載體通常改造為復(fù)制缺陷型重組腺病毒載體。

腺病毒載體的改造通常與其包裝用細(xì)胞的改造配套進(jìn)行。如刪除腺病毒復(fù)制所必需的E1 基因區(qū)域，為外源基因插入提供空間同時使病毒尚失復(fù)制能力。同時將人Ad5 的E1 區(qū)域（E1A 和E1B 基因）穩(wěn)定整合至HEK293 細(xì)胞染色體中，HEK293 細(xì)胞及其衍細(xì)胞株（如T-REx-293 細(xì)胞系）表達(dá)E1 區(qū)基因，改造后細(xì)胞可用于刪除E1 區(qū)域復(fù)制缺陷的腺病毒復(fù)制［8］。又如通過使用由四環(huán)素阻遏蛋白（tet repressor protein，TetR）和四環(huán)素操縱子（tet operator，TetO）組成的阻遏蛋白-操縱子系統(tǒng)抑制腺病毒疫苗載體生產(chǎn)過程中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)，從而可提高病毒產(chǎn)量［9］。以 PER.C6 TetR 細(xì)胞系與 Ad26 病毒載體系統(tǒng)為例［10］，將 TetO 序列插入 Ad26 載體轉(zhuǎn)基因上游的CMV 啟動子序列中，構(gòu)建重組腺病毒載體，同時將TetR 基因整合至PER.C6 細(xì)胞構(gòu)建PER.C6 TetR細(xì)胞系，表達(dá)TetR 蛋白。TetR 蛋白通過與插入腺病毒載體中轉(zhuǎn)基因表達(dá)盒啟動子序列中的TetO 結(jié)合，從而阻斷轉(zhuǎn)錄啟動，降低轉(zhuǎn)基因表達(dá)。

此外，對于腺病毒載體的改造，有時還需考慮盡量避免發(fā)生同源重組產(chǎn)生復(fù)制腺病毒（replication competent adenovirus，RCA）。如 HEK293 細(xì)胞整合E1 序列包含足夠的側(cè)翼腺病毒序列，可與載體發(fā)生同源重組，從而導(dǎo)致產(chǎn)物被含E1 的RCA 污染［11］。PER.C6 細(xì)胞經(jīng)過工程改造，使其包含最小區(qū)域，可防止重組并減少RCA 的發(fā)生［12］。也可考慮刪除復(fù)制所需的其他病毒基因，如同時刪除E1、E3 以及E2 和 ／ 或 E4 區(qū)域［13］，具有多種缺失可明顯降低產(chǎn)品中RCA 污染的可能性，但需要開發(fā)特異的生產(chǎn)細(xì)胞系。

2 腺病毒載體疫苗的藥學(xué)研究開發(fā)

國內(nèi)外已發(fā)布可指導(dǎo)病毒載體疫苗研究開發(fā)的多項技術(shù)指導(dǎo)原則 ／ 法規(guī) ／ 指南等。包括《人基因治療研究和制劑治療控制技術(shù)指導(dǎo)原則》［14］、《中國藥典》［15］“人用基因治療制品總論”及“疫苗總論”、WHO《埃博拉病毒病疫苗指南》［16］及國內(nèi)外載體疫苗相關(guān)技術(shù)指南［17-19］等，可用于指導(dǎo)此類產(chǎn)品的研究開發(fā)。

2.1 載體設(shè)計及構(gòu)建 重組載體構(gòu)建一般包括載體設(shè)計、載體構(gòu)建、構(gòu)建載體的確證等。通常應(yīng)對腺病毒載體開發(fā)的基本原理進(jìn)行描述，應(yīng)明確構(gòu)建的載體中所有基因組成及其功能來源，所有有義和無義的基因修飾，如任何位點特異性突變、插入、缺失和／或重排，均應(yīng)與天然序列進(jìn)行比較。如載體構(gòu)建中包含插入控制目的抗原表達(dá)的基因元件，應(yīng)提供研究數(shù)據(jù)證明其可行性。

腺病毒載體生產(chǎn)毒株的構(gòu)建一般采用質(zhì)粒系統(tǒng)通過適宜的細(xì)胞基質(zhì)重組構(gòu)建并經(jīng)克隆噬斑篩選、純化后制備，篩選的指標(biāo)一般包括腺病毒基因組的完整性、目的蛋白表達(dá)正確性及表達(dá)效率、外源因子檢測、傳代穩(wěn)定性研究等。應(yīng)詳細(xì)描述構(gòu)建疫苗載體的方法，并對最終構(gòu)建的病毒載體進(jìn)行遺傳學(xué)特性分析；描述從原材料（腺病毒載體、基因、質(zhì)粒等）衍生到病毒主種子水平的所有步驟。

對于構(gòu)建的重組腺病毒載體，應(yīng)對病毒基因組的完整序列進(jìn)行分析，或至少應(yīng)確認(rèn)重要區(qū)域如目的抗原基因和調(diào)控元件區(qū)域，以及被認(rèn)為修改的任何區(qū)域及其側(cè)翼區(qū)域的序列，測定序列應(yīng)與理論序列一致。對于異源插入基因序列的任何改變應(yīng)進(jìn)行調(diào)查，并證明其不影響目的氨基酸序列（即保守改變）或疫苗的抗原特性。除基因序列測定外，應(yīng)考慮進(jìn)行重組載體的限制性內(nèi)切酶圖譜分析。

2.2 起始原材料

2.2.1 病毒種子批 通常需對病毒主種子進(jìn)行完整的描述，包括遺傳和表型特性等。一般要描述與異源基因（包括相關(guān)連接區(qū)）表達(dá)有關(guān)的各個元件，進(jìn)行核苷酸序列分析并與親本載體進(jìn)行比較，輔以限制性內(nèi)切酶圖譜、Southern 印跡、PCR 或 DNA 圖譜等分析。應(yīng)進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性研究，證明疫苗種子可達(dá)到與最終原液相當(dāng)?shù)膫鞔?，最好超過預(yù)期的最大傳代水平，研究包括遺傳基因穩(wěn)定性、目的基因表達(dá)穩(wěn)定性和生產(chǎn)穩(wěn)定性等。其中，遺傳穩(wěn)定性研究可考慮重點考察傳代過程中RCA、目的基因拷貝數(shù)及序列的改變等；目的基因表達(dá)穩(wěn)定性側(cè)重于異源抗原的修飾（如有）和表達(dá)（如抗原表達(dá)量、抗原鑒別等），同時考慮對感染性滴度及病毒顆粒數(shù)等進(jìn)行分析。

對于構(gòu)建的生產(chǎn)用毒種庫應(yīng)符合《中國藥典》三部（2020 版）“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理及質(zhì)量控制”規(guī)定。根據(jù)具體情況設(shè)定質(zhì)控項目，一般包括如鑒別試驗（載體和目的基因）、病毒滴度、外源污染因子檢查（無菌、分枝桿菌、支原體、外源病毒因子檢查）、逆轉(zhuǎn)錄病毒、種屬特異性病毒、腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus，AAV）、RCA 檢測、重要功能基因和遺傳標(biāo)志物測定、免疫原性檢查及全基因序列測定等。通常毒種庫需送第三方進(jìn)行復(fù)核檢定。

實際大規(guī)模生產(chǎn)過程中，病毒接種量通常需求較大，開發(fā)者可能會為保證持續(xù)生產(chǎn)，研究在三級毒種庫的基礎(chǔ)上建立中間毒種庫。如因生產(chǎn)工藝需要建立中間毒種庫，需對中間毒種庫建立放行標(biāo)準(zhǔn)及內(nèi)部控制標(biāo)準(zhǔn)。對于中間毒種庫，應(yīng)重點考慮對外源因子傳播風(fēng)險的控制。如建立的毒種庫及采用的生產(chǎn)工藝過程控制可良好控制外源因子污染風(fēng)險，則中間毒種庫檢定方式可由研發(fā)者自行根據(jù)對照細(xì)胞檢定等風(fēng)險分析，并權(quán)衡利弊綜合考慮。對于中間毒種庫，通常應(yīng)重點監(jiān)測病毒滴度、無菌檢查、外源因子和支原體等，考慮到培養(yǎng)法對特異型支原體如豬鼻支原體等靈敏度不高，對于支原體檢測采用《中國藥典》三部（2020 版）培養(yǎng)法的同時，補充開展核酸法檢測是非常必要的。此外，中間毒種庫的保存條件及使用期限的確定需基于貯存穩(wěn)定性研究，在實際生產(chǎn)使用過程中可考慮按照最短時間方式使用中間毒種庫。

2.2.2 生產(chǎn)細(xì)胞庫 目前，應(yīng)用最廣泛的腺病毒載體疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞包括HEK293 細(xì)胞和PER.C6 細(xì)胞等。通過對細(xì)胞進(jìn)行改造，如整合Ad5 型的E1基因、整合TetR 基因等，可使復(fù)制缺陷型重組腺病毒在細(xì)胞中復(fù)制，同時抑制目的抗原蛋白的表達(dá)提高病毒滴度。通過對細(xì)胞進(jìn)行馴化，采用無血清懸浮高密度培養(yǎng)，可滿足大規(guī)模生產(chǎn)的要求。

對于細(xì)胞庫的構(gòu)建，通常應(yīng)建立細(xì)胞庫構(gòu)建歷史記錄，記錄應(yīng)包括有關(guān)其來源、鑒定、改造等信息。需說明包裝細(xì)胞系構(gòu)建的全部細(xì)節(jié)，包括輔助病毒核酸（如有）及其編碼蛋白質(zhì) ／ 功能的性質(zhì)和特性。如有，還應(yīng)提供輔助病毒核酸的染色體位置信息。

需對細(xì)胞系的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行研究。細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性常通過比較前細(xì)胞或主細(xì)胞庫水平上的細(xì)胞系關(guān)鍵區(qū)域（和側(cè)翼區(qū)域）與其預(yù)期最大傳代水平或超過預(yù)期最大傳代水平的序列進(jìn)行評估。通常根據(jù)傳代穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)確定從主細(xì)胞庫（master cell bank，MCB）到工作細(xì)胞庫（working cell bank，WCB）以及疫苗生產(chǎn)代次所允許的最大傳代次數(shù)或群體倍增水平（population doubling level，PDL）（根據(jù)懸浮細(xì)胞細(xì)胞的增殖特性，一般在實際開發(fā)及生產(chǎn)過程中對生產(chǎn)細(xì)胞統(tǒng)一采用PDL 進(jìn)行計算和控制）。

研究建立的生產(chǎn)用主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫除應(yīng)符合《中國藥典》三部（2020 版）“生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”相關(guān)規(guī)定外，還應(yīng)考慮額外的檢測，如人源病毒、AAV、RCA 等檢測。

2.3 原材料及輔料 生產(chǎn)過程中使用的原輔料應(yīng)符合《中國藥典》三部（2020 版）相關(guān)要求，包括毒種、細(xì)胞庫構(gòu)建過程中使用的原材料。對可能影響產(chǎn)品安全的原材料，應(yīng)評估在終產(chǎn)品或工藝最適階段中的殘留情況。對于動物來源材料，應(yīng)評估其來源及生產(chǎn)過程對產(chǎn)品帶來的外源因子風(fēng)險，如牛血清和 ／ 或豬胰蛋白酶，檢測牛源和 ／ 或豬源病毒，且應(yīng)證明不存在細(xì)菌、真菌和支原體等，動物來源性物質(zhì)還應(yīng)符合相關(guān)的傳染性海綿狀腦?。╰ransmissible spongiform encephalopathy，TSE）指導(dǎo)原則，將外源因子污染的風(fēng)險降至最低。

2.4 生產(chǎn)工藝開發(fā)及生產(chǎn)過程的控制 腺病毒載體疫苗的制備工藝通常包括細(xì)胞擴增、病毒感染、收獲、裂解、澄清、純化、原液、半成品配制和成品制備等步驟。對于原液制備，通常采用批試培養(yǎng)或灌流培養(yǎng)方式制備目的腺病毒。灌流培養(yǎng)一般可較批試培養(yǎng)采用的細(xì)胞密度更高，且收獲的病毒滴度更高。純化工藝的開發(fā)應(yīng)重點關(guān)注病毒滴度、病毒顆粒數(shù)的回收以及雜質(zhì)如宿主細(xì)胞蛋白、宿主細(xì)胞DNA、核酸酶等的去除等。

腺病毒載體疫苗制劑處方開發(fā)是影響此類產(chǎn)品穩(wěn)定性及流通使用的難點。一般根據(jù)用法用途、病毒本身理化性質(zhì)及其生物學(xué)特性開發(fā)制劑處方。對于活性成分通常采用病毒顆粒進(jìn)行規(guī)格的擬定，具體劑量將通過非臨床及臨床研究予以確認(rèn)。腺病毒疫苗產(chǎn)品制劑成分通常包括緩沖劑、冷凍保護(hù)劑、鹽、非離子表面活性劑等。如pH 為影響病毒活性的重要因素，可通過腺病毒的最適pH［20］選擇合適的緩沖體系；為抑制凍融相關(guān)的病毒感染滴度損失并維持制劑滲透壓，應(yīng)選擇合適的鹽及冷凍保護(hù)劑；為提高其物理穩(wěn)定性，通常選擇加入非離子表面活性劑減少界面吸附。研究表明，在二價陽離子存在下可維持腺病毒的熱穩(wěn)定性［21］，二價陽離子通過與基因組中磷酸鹽基團的靜電相互作用來提高基因組的穩(wěn)定性［22］。此外，為抑制自由基氧化和穩(wěn)定病毒感染性，還可考慮加入金屬離子螯合劑和羥基自由基清除劑等［23］。如有同一平臺的腺病毒產(chǎn)品已進(jìn)入臨床或批準(zhǔn)上市，其制劑處方可作為重要參考。

對于生產(chǎn)過程的控制及驗證，整體上同疫苗生產(chǎn)的通用原則，應(yīng)基于確定關(guān)鍵工藝參數(shù)、關(guān)鍵質(zhì)量屬性，設(shè)置過程控制項目并制定相應(yīng)可接受標(biāo)準(zhǔn)對生產(chǎn)過程進(jìn)行控制及驗證，以確保工藝的重現(xiàn)性、穩(wěn)健性和產(chǎn)品的批間一致性。生產(chǎn)過程控制一般包括病毒培養(yǎng)物的制備以及純化、原液、半成品、成品制備的工藝過程。對于活病毒產(chǎn)品而言，鑒于目的病毒的大小和物理特性，可能無法采用過濾或改變pH 來去除外源病毒，應(yīng)實施全面質(zhì)控策略，包括原料、細(xì)胞庫及病毒種子庫、生產(chǎn)收獲液及對照細(xì)胞培養(yǎng)等。

3 腺病毒載體疫苗的質(zhì)量控制

3.1 特性分析

3.1.1 結(jié)構(gòu)分析 一般包括蛋白和基因兩個層面。如對病毒蛋白（包括衣殼及核心蛋白）進(jìn)行鑒別；對目的抗原基因及其兩翼序列進(jìn)行測序分析，并對目的病毒進(jìn)行適宜的限制性內(nèi)切酶酶切圖譜分析等。

3.1.2 含量及生物學(xué)活性 含量指標(biāo)通常包括病毒顆粒數(shù)和感染性滴度，可通過兩指標(biāo)比值確定比活，為生物學(xué)活性指標(biāo)之一。腺病毒載體類疫苗病毒滴度無法直接推斷產(chǎn)品的有效性，如生產(chǎn)過程中目的基因是否丟失，尤其當(dāng)產(chǎn)品出現(xiàn)RCA 時。通常，初步可通過檢測抗原定量表達(dá)和動物免疫原性反應(yīng)生物學(xué)活性?？蛇M(jìn)一步通過開展病毒滴度與目的抗原蛋白及比活和動物效力試驗相關(guān)性的研究，開展對目的抗原的表達(dá)率、抗體結(jié)合效力與具有人體保護(hù)水平的病毒中和抗體效力以及與真病毒或假病毒中和抗體效力的相關(guān)性研究等，最終建立和確定簡化的生物學(xué)活性表征和質(zhì)量控制指標(biāo)。

3.1.3 純度、雜質(zhì)和污染物

3.1.3.1 工藝相關(guān)雜質(zhì) 對于腺病毒載體類疫苗產(chǎn)品，工藝相關(guān)雜質(zhì)通常主要包括宿主細(xì)胞DNA、宿主細(xì)胞蛋白、生產(chǎn)工藝中可能添加的消泡劑、抗結(jié)團劑、細(xì)胞裂解劑以及核酸酶等，工藝步驟應(yīng)能對相關(guān)雜質(zhì)有效去除，開發(fā)者應(yīng)對其殘留量進(jìn)行研究并建立殘留量限度控制標(biāo)準(zhǔn)。

以重點關(guān)注的工藝相關(guān)雜質(zhì)殘留DNA 為例，包括病毒核酸和宿主細(xì)胞DNA。DNA 的存在會干擾純化柱層析，干擾病毒顆粒的定量檢測，且低水平的DNA 與目的病毒聚集相關(guān)［24］。出于安全考慮，對于致瘤性生產(chǎn)細(xì)胞系需嚴(yán)格控制宿主細(xì)胞DNA 殘留量及片段大小，推薦DNA 殘留量控制在10 ng ／ 劑以下［25］，片段大小控制在 200 bp 以下［26］。開發(fā)者應(yīng)采用經(jīng)驗證的方法對各工藝步驟DNA 的去除及殘留（包括殘留量及片段大?。┻M(jìn)行研究。以目前相對廣泛使用的宿主細(xì)胞HEK293 為例，基于HEK293細(xì)胞基因組的高度不穩(wěn)定、高致瘤性等特點，產(chǎn)品開發(fā)過程中對宿主細(xì)胞殘留DNA 片段大小及其分布進(jìn)行深入研究非常必要，通常應(yīng)考慮采用兩種不同原理的檢測方法進(jìn)行佐證研究，如qPCR、毛細(xì)管電泳法等。對于毛細(xì)管電泳法，考慮到樣品中宿主細(xì)胞DNA 實際殘留量及該方法檢測限水平，需選擇DNA殘留量較高階段的樣品進(jìn)行DNA 片段大小分布研究，如核酸酶解后樣品。

3.1.3.2 產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì) 腺病毒載體疫苗產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)可能包括RCA、空殼病毒［27-28］、不完整病毒顆粒、病毒聚集體、游離腺病毒蛋白、腺病毒蛋白降解物或翻譯后修飾產(chǎn)物等，這些雜質(zhì)可能對產(chǎn)品安全性和有效性產(chǎn)生潛在影響。因此實際研發(fā)及生產(chǎn)過程中應(yīng)考慮采用不同的方法對不同生產(chǎn)階段產(chǎn)物及貯存期間上述雜質(zhì)的變化進(jìn)行分析。如采用細(xì)胞培養(yǎng)法和qPCR 法檢測RCA，沉降率-分析超速離心檢測空殼或不完整病毒顆粒，DLS 法檢測病毒聚集體等。

“你可以隨意化成人形嗎？”安潔西問，她以前在銀盾軍團撫養(yǎng)院只是聽說過蟲族的一些事，并沒有機會真正面對面去了解他們。

3.1.4 其他特性 一般包括但不限于如病毒DNA測序、對轉(zhuǎn)基因及載體病毒骨架的鑒別、目的抗原表達(dá)譜、病毒相對分子質(zhì)量、病毒粒度分布等。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的建立，總體上建議可參照《中國藥典》“人用基因治療制品總論”［15］等相關(guān)要求，對于生物學(xué)活性、感染滴度、病毒顆粒數(shù)等檢測指標(biāo)建立和制備相關(guān)參考品，通?？紤]采用經(jīng)全面結(jié)構(gòu)確證的臨床研究批次樣品制備生物學(xué)活性相關(guān)參考品。

3.3 穩(wěn)定性考察 通常將對溫度等條件較敏感的指標(biāo)作為考察項目，如病毒滴度、比活等，同時可考慮對病毒顆粒大小、病毒聚集體、病毒降解蛋白等進(jìn)行考察?；诓Ａ顟B(tài)的蛋白和病毒不能發(fā)生擴散或構(gòu)象變化，病毒可長期儲存在其玻璃轉(zhuǎn)化溫度以下。如因?qū)嶋H需求，對于腺病毒載體疫苗產(chǎn)品原液和成品的貯存及運輸處于不同溫度條件，涉及產(chǎn)品凍融等情況，開發(fā)者應(yīng)對此類混合存放方式進(jìn)行嚴(yán)格的驗證并進(jìn)行明確的限制。

3.4 產(chǎn)品檢定 質(zhì)控通常包括生產(chǎn)過程控制和終產(chǎn)品放行質(zhì)量控制，質(zhì)控關(guān)鍵階段樣品通常包括病毒收獲液、原液、半成品和成品。腺病毒載體疫苗產(chǎn)品質(zhì)控項目一般包括但不限于：①鑒別試驗。如載體鑒別、目的基因及抗原鑒別等；②純度和雜質(zhì)。如總純度、宿主細(xì)胞蛋白質(zhì) ／ 宿主DNA 殘留量、核酸酶殘留、復(fù)制型腺病毒、腺相關(guān)病毒等；③生物學(xué)活性。如比活、抗原表達(dá)、免疫原性等；④含量。如病毒感染滴度、病毒顆粒數(shù)等；⑤一般性安全試驗。如支原體、無菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查、異常毒性等；⑥其他檢測項目。如可見異物、裝量、pH、滲透壓摩爾濃度等。

對于效力相關(guān)的指標(biāo)如病毒顆粒數(shù)、病毒滴度、目的蛋白表達(dá)量等，需參照最低有效劑量包括動物攻毒試驗、臨床保護(hù)力試驗、臨床免疫原性研究等擬定標(biāo)準(zhǔn)限度下限，參照人體安全性數(shù)據(jù)擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上限［16］。對貯存期間的敏感指標(biāo)可設(shè)置放行標(biāo)準(zhǔn)和貨架期標(biāo)準(zhǔn)。

4 藥學(xué)評價的考慮

對于此類產(chǎn)品的藥學(xué)評價一般圍繞全過程評價及藥學(xué)相關(guān)風(fēng)險評價開展。

關(guān)于重組腺病毒載體類疫苗藥學(xué)相關(guān)風(fēng)險，重點關(guān)注該類品種可能存在的外源因子、致瘤性、RCA等：①對于外源因子的控制。應(yīng)對產(chǎn)品從毒株建庫至整個生產(chǎn)過程中可能引入外源因子進(jìn)行相關(guān)分析和評估，制定對外源因子傳播風(fēng)險的生產(chǎn)工藝全過程控制策略。如對 MCB ／ WCB、MSL ／ WSL 進(jìn)行全面的檢定［包括《中國藥典》三部（2020 版）要求以外的額外檢定］；生產(chǎn)全過程盡可能避免動物源性原材料；生產(chǎn)過程中［包括中間毒種庫等的制備（如有）］設(shè)置對照細(xì)胞并進(jìn)行外源因子檢測；對中間毒種庫（如有）參照WSL 要求進(jìn)行放行檢測和內(nèi)控檢測；對生產(chǎn)過程中的收獲液開展外源因子放行檢測、對原液開展外源因子放行檢測等。②對于致瘤性風(fēng)險控制。工藝開發(fā)過程中對中間產(chǎn)物、原液等進(jìn)行全面DNA 清除率以及殘留DNA 含量、片段大小和分布研究，以證實殘留水平及大小分布符合WHO 等國際技術(shù)指南要求，且工藝清除性能穩(wěn)定。③對于RCA風(fēng)險的控制。需常規(guī)對細(xì)胞庫、種子庫、收獲液、原液進(jìn)行定性RCA 檢測，且應(yīng)符合擬定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；監(jiān)測生產(chǎn)連續(xù)傳代過程中存在RCA 增加的可能，如對毒種、中間毒種庫（如有）、收獲液、原液以及成品等生產(chǎn)各階段樣品進(jìn)行定量PCR 檢測，均應(yīng)符合要求，且未見RCA 持續(xù)增加。

5 結(jié) 語

近年來國內(nèi)外腺病毒載體疫苗的研發(fā)和臨床試驗快速發(fā)展，已有多項此類品種目前正處于臨床前和或進(jìn)入臨床試驗階段，另有多項獲緊急使用或獲準(zhǔn)附條件上市。部分開發(fā)者已建立了較為成熟的工藝平臺。

在突發(fā)疫情的背景下，整體上而言，采用此類工藝平臺進(jìn)行應(yīng)急疫苗的開發(fā)為獲得產(chǎn)品的較快技術(shù)路線。如對于新型冠狀病毒變異株疫苗的開發(fā)，在已有成熟腺病毒載體疫苗平臺及附條件上市產(chǎn)品的情況下，理論上針對變異株疫苗的開發(fā)可能僅為抗原序列的改變，對工藝、制劑處方、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)生影響的可能性較小，基本可沿用原型疫苗的相關(guān)研究資料，開發(fā)過程中重點關(guān)注內(nèi)容為疫苗特異性鑒別項目的建立。

已有處于臨床試驗研究階段的呼吸道合胞病毒疫苗［29］采用腺病毒載體疫苗與對應(yīng)相同抗原重組蛋白疫苗混合接種，旨在誘導(dǎo)高于腺病毒載體疫苗單獨接種的中和抗體應(yīng)答，并在單次免疫后產(chǎn)生較強的細(xì)胞應(yīng)答。為腺病毒載體疫苗使用方式的開發(fā)提供了一條較好的思路。

本文基于對腺病毒載體疫苗的已有知識，參考國內(nèi)已有通用法規(guī)、要求，WHO 埃博拉病毒病疫苗指南以及國外腺病毒基因治療產(chǎn)品、活病毒載體疫苗等相關(guān)指導(dǎo)原則，并結(jié)合此類產(chǎn)品藥學(xué)審評情況，對此類產(chǎn)品的藥學(xué)研究與評價考慮點提出探討，以便為此類產(chǎn)品的研制及注冊等提供參考。隨著對此類產(chǎn)品認(rèn)知的深入及知識的進(jìn)一步擴充，可能將進(jìn)一步完善相關(guān)考慮點。