吳通奎 包濤濤 黃功明 彭彩麗 楊先富 趙孝木

（黔東南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 貴州凱里 556000）

禽腺病毒（Fowl adenovirus，F(xiàn)AdV）為腺病毒科禽腺病毒屬成員，是一種能夠引起禽類(lèi)發(fā)生傳染性疾病的重要傳染源。根據(jù)FAdV不同的特異性抗原結(jié)構(gòu)，通?？梢詫⑵浞譃棰駘Ⅲ三個(gè)亞群。Ⅰ及Ⅱ亞群與火雞出血性腸炎及雞的相關(guān)病毒病關(guān)系較為密切，而Ⅲ亞群則主要與禽的產(chǎn)蛋下降相關(guān)。使用血清交叉中和試驗(yàn)，可以將Ⅰ群FAdV分為12個(gè)血清型（FAdV-1-7，F(xiàn)AdV-8a，F(xiàn)AdV-8b，F(xiàn)AdV-9-11等），不同血清型FAdV毒株均能感染雞且引起雞的包涵體肝炎，對(duì)我國(guó)禽類(lèi)疾病防控帶來(lái)巨大威脅[1]。本文就Ⅰ群禽腺病毒病的流行現(xiàn)狀及其疫苗研究進(jìn)展加以論述，旨在為該病防控提供理論基礎(chǔ)。

1 Ⅰ群禽腺病毒病流行現(xiàn)狀

通常來(lái)講，Ⅰ群禽腺病毒感染動(dòng)物后主要能夠引起禽類(lèi)包涵體肝炎 （IBH）、心包積液綜合征（HHS），Ⅰ群禽腺病毒中所有血清型均能引起IBH，而危害最嚴(yán)重的血清型是FAdV-4，該血清型能引起動(dòng)物產(chǎn)生HHS[2]。1963年，Helmboldt等在美國(guó)首次報(bào)道IBH，而后世界各地均有IBH的報(bào)道，綜合來(lái)看，該病感染性較高，無(wú)明顯臨床表現(xiàn)，大多以隱性感染為主，主要以肉仔雞及患有免疫抑制性疾病的動(dòng)物感染較為多見(jiàn)，偶有健康成年雞感染的報(bào)道。1987年，在巴基斯坦卡拉奇附近的安卡拉地區(qū)一大型肉雞場(chǎng)首次報(bào)道發(fā)生HHS病例，由于在安卡拉地區(qū)首次發(fā)生，故又將該病稱(chēng)為安卡拉病，該病感染前期無(wú)明顯臨床癥狀，3周齡后動(dòng)物出現(xiàn)發(fā)病開(kāi)始死亡，發(fā)病高峰持續(xù)1周左右，整個(gè)發(fā)病過(guò)程在8~16 d，病死率可高達(dá)80%，自該病報(bào)道以后，全球其他國(guó)家也陸續(xù)出現(xiàn)該病不同程度暴發(fā)的報(bào)道[3]。2013年11月，我國(guó)江蘇一蛋雞場(chǎng)首次開(kāi)始發(fā)病，隨后該病多以零星暴發(fā)為主。直至2015年，我國(guó)山東省暴發(fā)該病，并相繼在河北、江蘇、安徽等多個(gè)省份廣泛流行。不同地區(qū)的家禽開(kāi)始出現(xiàn)IBH與HHS疫情，根據(jù)發(fā)病動(dòng)物病原的血清型分析顯示，IBH主要由FAdV-7、8a、8b與FAdV-2、11引起，而HHS則主要由FAdV-4血清型引起，病死率高于30%[4]。

Ⅰ群禽腺病毒在雞群中普遍存在，3~5周齡肉仔雞最為易感，大多成年雞體內(nèi)常呈現(xiàn)隱形感染狀態(tài)，動(dòng)物感染后有1~2 d潛伏期，3~4 d動(dòng)物病死率達(dá)到峰值，5 d后死亡情況開(kāi)始減少，隨后進(jìn)入轉(zhuǎn)歸期，整個(gè)病程長(zhǎng)達(dá)10~15 d不等，個(gè)別病程可長(zhǎng)達(dá)20 d[5]。Niu Y等[6]通過(guò)對(duì)2015-2016年商品雞感染FAdV的病例開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示，Ⅰ群禽腺病毒已在不同品種雞中流行，且與雞傳染性貧血病毒、馬立克氏病病毒等免疫抑制性病原體出現(xiàn)共感染。因此，為了有效地控制Ⅰ群禽腺病毒病的流行，有必要采取有效的生物安全措施，持續(xù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)雞群中免疫抑制性疾病的感染情況。

2 Ⅰ群禽腺病毒病疫苗研究進(jìn)展

隨著FAdV感染范圍的不斷擴(kuò)大，由該病毒所引發(fā)的IBH和HHS給我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，為此研制出一種可適用于禽腺病毒病防控安全有效的疫苗成為當(dāng)前研究者們所重點(diǎn)關(guān)注的方向。目前已分離出FAdV固定的血清型有12種，不同血清型之間的致病力差異不盡相同，這也對(duì)禽腺病毒病疫苗的研發(fā)帶來(lái)了一定困難。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外有關(guān)于使用滅活疫苗、弱毒疫苗及基因工程苗等用于該病預(yù)防的報(bào)道。如在亞洲、非洲及拉丁美洲等國(guó)家地區(qū)已出現(xiàn)了商品化滅活苗，但大多以FAdV-4單價(jià)苗、FAdV-8/8a多價(jià)苗及與其他禽類(lèi)疾病的多聯(lián)苗較為常見(jiàn)。僅有一種在澳大利亞未致弱的FAdV-8a毒株Esurient活疫苗。結(jié)合現(xiàn)有報(bào)道來(lái)看，這些疫苗在該病的防控中均取得了一定的保護(hù)效果，但是并不足以完全用于該病的防控[7]。為加快禽腺病毒病疫苗的研發(fā)，各國(guó)學(xué)者一直在努力，根據(jù)現(xiàn)有禽腺病毒病疫苗的報(bào)道，可暫將疫苗研發(fā)種類(lèi)分為滅活疫苗、弱毒疫苗及基因工程疫苗3種。

2.1 滅活疫苗滅活疫苗是一種使用甲醛或β-丙內(nèi)酯等滅活劑來(lái)滅活病毒，使病原體失去感染能力，但同時(shí)又能保留其免疫原性，在加入佐劑后接種動(dòng)物可以有效地刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生較好的體液免疫，其所產(chǎn)生的抗體可以中和甚至清除來(lái)自胞外的抗原。具體來(lái)講，滅活疫苗具有研發(fā)周期短、方法便捷、穩(wěn)定性好、能長(zhǎng)時(shí)間保存且有利于運(yùn)輸及保存等優(yōu)點(diǎn)，但不可忽視的是滅活疫苗只能刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，因此，其也有保護(hù)周期短的缺點(diǎn)。

Kim等[8]研究的滅活疫苗可以有效地預(yù)防不同血清型的FAdV，其中對(duì)FAdV-5、8a及11這3種血清型具有完全保護(hù)作用，對(duì)已免疫的家禽在一定時(shí)間內(nèi)能檢測(cè)出其血清抗體。巴基斯坦在暴發(fā)HHS時(shí)，當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶曾用雞肝臟的組織勻漿滅活疫苗來(lái)預(yù)防該病，最終取得了較為顯著的預(yù)防效果[9]。劉聚祥等[10]使用FAdV-8制備出了IBH油乳劑滅活疫苗，可以有效地預(yù)防FAdV-8所引起的疾病。韋悠等[11]分別將FAdV-4和FAdV-8兩種血清型制備成單價(jià)及雙價(jià)滅活苗，其雙價(jià)滅活疫苗對(duì)FAdV-4和FAdV-8的感染達(dá)到了100%的保護(hù)率。此外。陸瑋[12]也研制出了FAdV-2、4、5及FAdV-8b多價(jià)滅活苗，其保護(hù)率可高達(dá)100%。

2.2 弱毒疫苗弱毒活疫苗是一種使用物理、化學(xué)或生物方法對(duì)自然的細(xì)菌或病毒進(jìn)行多次傳代，經(jīng)過(guò)連續(xù)傳代使其自身毒力減弱（致弱毒株仍能保持良好免疫原性及遺傳特性），然后再加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑后凍干而制成。Mansoor等[13]選取了1株可引起HHS的病毒分離株，先經(jīng)雞胚盲傳4次，待其適應(yīng)雞胚環(huán)境后再連續(xù)傳代12次，通過(guò)毒力致弱，連續(xù)多次傳代研制出了一種可用于HHS預(yù)防的弱毒疫苗。將其用于接種2周齡肉仔雞驗(yàn)證免疫效果，同時(shí)將傳代結(jié)束后的毒株制備成疫苗與商品化的滅活疫苗對(duì)雞進(jìn)行免疫，用ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行抗體水平評(píng)估，結(jié)果顯示弱毒活疫苗免疫的雞保護(hù)率可達(dá)95%以上，并且免疫雞群的肝臟和心臟的損傷率也有所減少，以此證實(shí)該弱毒活疫苗在一定程度上能預(yù)防FAdV感染。弱毒疫苗免疫效果尚可，但應(yīng)引起重視的是其也往往存在毒力返強(qiáng)等致命缺點(diǎn)，容易引發(fā)生物安全隱患。

2.3 基因工程疫苗基因工程疫苗是一種利用現(xiàn)代生物技術(shù)在分子水平上研制而成的新型疫苗，目前己有NDV、AIV等病毒的基因工程疫苗可用于動(dòng)物疾病的防控研究，且均能達(dá)到理想的保護(hù)效果。盡管當(dāng)前已有使用滅活疫苗或弱毒疫苗用于預(yù)防FAdV感染的報(bào)道，但病毒滅活不徹底、弱毒苗的毒力返強(qiáng)等安全隱患也在一定程度上限制了滅活疫苗及弱毒疫苗的應(yīng)用。而作為一種使用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)研制的基因工程亞單位疫苗，可以較好地彌補(bǔ)滅活疫苗及弱毒疫苗所帶來(lái)的不足，因?yàn)榛蚬こ虂唵挝灰呙绮o(wú)病毒核酸，無(wú)致病性且也不需要滅活，安全性較高。已有很多學(xué)者針對(duì)FAdV作了前期初步研究，并均取得了預(yù)期的試驗(yàn)結(jié)果。

唐熠等[14]將I亞群禽腺病毒（CELO病毒）的Hexon基因、雞IL-2基因和真核表達(dá)載體pcDNA3.1進(jìn)行融合，構(gòu)建一種重組真核質(zhì)粒pc DNA3.1-hexon-Linker-ChIL2，以其為免疫原將其注射到試驗(yàn)動(dòng)物后檢測(cè)其抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，能在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生抗體，且能夠有效地抑制感染機(jī)體排毒，該試驗(yàn)的順利進(jìn)行，也使得更多的研究者們將目光轉(zhuǎn)移至對(duì)FAdV基因工程疫苗的研發(fā)。Shah等[15]使用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)出FAdV-4 penton base蛋白，制備出一種亞單位疫苗，以其為免疫原免疫肉雞，同時(shí)開(kāi)展免疫原性測(cè)定及強(qiáng)毒攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果表明，該疫苗能促使肉雞產(chǎn)生較強(qiáng)的體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答，可以較好地抵御FAdV-4的攻擊，可作為防控HHS的候選疫苗。Hess等[16]通過(guò)表達(dá)纖維-2蛋白以及纖維蛋白，研制出了FAdV的亞單位疫苗，對(duì)禽類(lèi)尤其是肉雞的HHS及IBH均有較好的預(yù)防作用。

3 小 結(jié)

隨著我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的快速發(fā)展，禽類(lèi)疾病種類(lèi)也呈現(xiàn)出不斷增加的趨勢(shì)，I亞群禽腺病毒病便是一種近年來(lái)在禽業(yè)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中一直困擾著養(yǎng)殖戶的重要疾病，經(jīng)常會(huì)有關(guān)于I亞群禽腺病毒所引起禽類(lèi)疾病的病例報(bào)道，對(duì)禽業(yè)健康養(yǎng)殖造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。疫苗接種是病毒性疾病的重要防控方法，然而對(duì)于血清型繁多的FAdV，目前尚未研制出一種可針對(duì)所有血清型的疫苗。因此，在FAdV的商品化疫苗尚未成功上市之前，為更好地控制該病的發(fā)生，在平時(shí)生產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行動(dòng)物引種程序，加強(qiáng)場(chǎng)內(nèi)飼養(yǎng)管理，規(guī)范場(chǎng)內(nèi)免疫程序，定期接種，同時(shí)也必須做好養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中各項(xiàng)衛(wèi)生消毒及生物安全等其他工作。