陳櫻君，勞可干，賴天鳳

欽州市第二人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣西 欽州 535000

引言

肺癌已成為目前全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤，其中80%肺癌為非小細(xì)胞肺癌，發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)[1]。由于早期無特征性病癥，難以診斷，一旦確診往往已進(jìn)展至中晚期，錯(cuò)過了最佳手術(shù)治療時(shí)機(jī)，因此對(duì)肺癌進(jìn)行早期診斷并及時(shí)采取有效治療措施對(duì)于降低肺癌死亡率具有重要臨床價(jià)值[2]。與常規(guī)影像學(xué)診斷以及病理活檢等檢查手段相比，檢測(cè)外周血中的腫瘤標(biāo)志物能夠更為方便、快速地診斷腫瘤，其臨床優(yōu)勢(shì)日益突出[3]。熱休克蛋白90α（Heat Shock Protein 90α，HSP90α）作為一種重要的熱休克蛋白，其在發(fā)熱、炎癥、組織損傷、腫瘤等應(yīng)激情況下均可被誘導(dǎo)表達(dá)，并分泌至細(xì)胞外，其可以與腫瘤細(xì)胞內(nèi)的相關(guān)癌基因蛋白相結(jié)合，具有更高的靈敏性和特異性[4]。趨化因子 CXC 配 體 12（Spinal Cord Chemokine CXC Ligand 12，CXCL12）屬于趨化因子蛋白家族中的重要成員之一，研究證實(shí)其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，且與腫瘤預(yù)后不良存在明顯相關(guān)性，目前臨床上常認(rèn)為CXCL12是潛在的腫瘤標(biāo)志物之一[5]。HSP90α、CXCL12均是肺癌的正性調(diào)節(jié)因子，兩者可能通過多種細(xì)胞信號(hào)通路協(xié)同調(diào)控腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲等病理生理過程，兩者的聯(lián)合診斷可有效避免單一指標(biāo)的波動(dòng)誤差?；诖耍狙芯客ㄟ^對(duì)原發(fā)性肺癌患者外周血HSP90α、CXCL12因子水平進(jìn)行測(cè)定，探討兩者單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷價(jià)值，旨在為肺癌的早期診斷和治療提供參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2019年6月我院收治的232例原發(fā)性肺癌患者作為研究對(duì)象，并選擇168名健康體檢者作為健康對(duì)照組。病例組包括非小細(xì)胞肺癌195例和小細(xì)胞肺癌37例，其中男性124例、女性108例；年齡52～78歲，平均年齡（65.41±4.36）歲。健康組男性86名、女性82名；年齡56～74歲，平均年齡（64.78±4.58）歲。兩組患者的一般資料之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。本研究方案已得到我院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（201601005）。

原發(fā)性肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《中國(guó)原發(fā)性肺癌診療規(guī)范(2015年版)》[6]中關(guān)于原發(fā)性肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，主要癥狀為胸痛、氣促、發(fā)熱、痰中帶血或血痰、刺激性干咳等，體格檢查出現(xiàn)原因不明、久治不愈的肺外征象，如共濟(jì)失調(diào)、靜脈炎、男性乳腺增生等，經(jīng)胸部CT、X線檢查以及CT引導(dǎo)下經(jīng)皮肺穿刺活檢確診為肺癌。

納入標(biāo)準(zhǔn)：① 于我院進(jìn)行影像學(xué)檢查、組織病理學(xué)活檢（石蠟切片、免疫組化）確診原發(fā)性肺癌；② 臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期；③ 初次就診，未進(jìn)行任何化療、放療、手術(shù)及分子靶向等治療；④ 病歷資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：① 在進(jìn)行CT前接受過放化療或接受過穿刺活檢；② 合并其他部位原發(fā)惡性腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移；③ 有嚴(yán)重心、腎、胃腸道功能障礙；④ 合并免疫、神經(jīng)、血液系統(tǒng)疾病。

對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：① 于我院行常規(guī)體格檢查，結(jié)果正常；② 排除既往腫瘤史。

1.2 檢測(cè)外周血HSP90α、CXCL12表達(dá)水平

分別于患者確診為原發(fā)性肺癌而未進(jìn)行治療時(shí)和健康體檢者體檢時(shí)抽取靜脈血5 mL于肝素抗凝管中，30 min內(nèi)離心機(jī)離心15 min（3500 r/min），取上清液置于-30℃冰箱保存。冷凍血清樣品需2個(gè)月之內(nèi)完成樣品分析，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）試劑盒對(duì)外周血HSP90α、CXCL12表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，所有操作均按照說明書進(jìn)行，繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算外周血HSP90α、CXCL12表達(dá)水平。HSP90α、CXCL12檢測(cè)試劑盒分別購自Cusabio公司和R&D公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血HSP90α、CXCL12表達(dá)水平比較

病例組外周血HSP90α、CXCL12表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見表1。

表1 兩組外周血HSP90α、CXCL12表達(dá)水平比較（±s）

表1 兩組外周血HSP90α、CXCL12表達(dá)水平比較（±s）

組別 HSP90α/（ng/mL） CXCL12/（pg/mL）病例組（n=232） 284.73±15.04 841.62±30.15對(duì)照組（n=168） 34.12±7.85 209.48±17.02 t值 216.348 266.120 P值 ＜0.001 ＜0.001

2.2 聯(lián)合診斷模型建立

以肺癌的發(fā)生情況（賦值：發(fā)生=1，未發(fā)生=0）為因變量，外周血HSP90α、CXCL12為自變量，進(jìn)行Logistic回歸擬合，得到聯(lián)合診斷模型為L(zhǎng)ogit(P)=1.678+0.845×HSP90α+0.689×CXCL12，進(jìn)一步以模型預(yù)測(cè)概率值P進(jìn)行ROC分析，見表2。

表2 外周血HSP90α、CXCL12單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)與肺癌的診斷模型

2.3 外周血HSP90α、CXCL12表達(dá)水平單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)的敏感度、特異度比較

HSP90α以121.41 ng/mL為診斷截?cái)嘀禃r(shí)，診斷肺癌的敏感度為73.28%，特異度為76.19%%，AUC為0.746（95%CI：0.691～0.802）；CXCL12以458.41 pg/mL為診斷截?cái)嘀禃r(shí)，診斷肺癌的敏感度為70.69%，特異度為77.98%，AUC 為 0.681（95%CI：0.616～0747）；外 周 血 HSP90α、CXCL12聯(lián)合檢測(cè)的敏感度（85.34%）顯著高于單項(xiàng)檢測(cè)的敏感度，AUC為 0.867（95%CI：0.8291～0.906），顯著高于單項(xiàng)檢測(cè)，診斷效能最佳，見表3。外周血HSP90α、CXCL12單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)診斷肺癌的ROC曲線如圖1所示。

圖1 外周血HSP90α、CXCL12單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)診斷肺癌的ROC曲線

表3 外周血HSP90α、CXCL12單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)診斷肺癌的診斷效能比較

3 討論

肺癌在腫瘤發(fā)生早期確診患者的術(shù)后5年生存率高達(dá)80%左右，但腫瘤發(fā)展至局部中晚期時(shí)，患者的5年生存率僅為20%[7]。因此，對(duì)肺癌患者做到“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療”對(duì)于提高疾病的治愈率和降低死亡率具有重要意義。已有研究證實(shí)，早期肺癌發(fā)生發(fā)展過程中常伴隨腫瘤標(biāo)志物的異常表達(dá)，對(duì)一些特異性腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行診斷研究已成為目前臨床研究的熱點(diǎn)[6]。

HSP90是具備分子伴侶功能且進(jìn)化上呈高度保守特性的一種蛋白質(zhì)，其可以與細(xì)胞周期信號(hào)通路中的多種關(guān)鍵性蛋白酶產(chǎn)生相互作用，對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)、分化以及代謝等生理過程具有重要調(diào)控作用，同時(shí)HSP90還可以發(fā)揮抗氧化、協(xié)同免疫反應(yīng)以及抗細(xì)胞凋亡等其他多種生物學(xué)功能[8]。Mao等[9]的研究證實(shí)，HSP90在正常細(xì)胞內(nèi)的含量?jī)H占細(xì)胞總蛋白的2%左右，但其在腫瘤細(xì)胞中的含量占比可高達(dá)7%。HSP90α作為HSP90的重要亞型之一，也是唯一一種能夠在血漿中被準(zhǔn)確檢測(cè)的HSP90亞型。Du等[10]研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)的HSP90α在細(xì)胞核內(nèi)的DNA損傷修復(fù)過程中發(fā)揮重要作用。另有研究表明，細(xì)胞外HSP90α可以促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶2活化和降低其降解量，從而有效提升癌細(xì)胞的侵襲能力，且HSP90α的分泌量與腫瘤細(xì)胞的惡性程度存在明顯正相關(guān)性，并認(rèn)為HSP90α可用于腫瘤早期診斷檢測(cè)以及治療后的療效預(yù)測(cè)[11-12]。本研究結(jié)果表明，肺癌患者外周血中HSP90α表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組（P＜0.001），與許露等[13]的研究結(jié)果一致，提示外周血HSP90α在肺癌早期篩查中具有重要臨床意義。Huang等[14]研究證實(shí)，已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌患者外周血HSP90α水平明顯高于未產(chǎn)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，與本研究結(jié)果具有相似性，說明外周血HSP90α對(duì)于評(píng)估肺癌診斷和進(jìn)展程度具有一定臨床參考價(jià)值。本研究通過進(jìn)一步的ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，HSP90α對(duì)于肺癌診斷具有一定的敏感度和特異性。HSP90α參與腫瘤細(xì)胞增殖的細(xì)胞周期調(diào)控，與腫瘤無限增殖的特性具有密切相關(guān)性，但其作為腫瘤標(biāo)志物更深入的作用機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。

CXCL12基因位于人體的10號(hào)染色體長(zhǎng)臂上，可以與CXCR4 N端發(fā)生特異性結(jié)合，從而構(gòu)成CXCL12/CXCR4生物軸，不僅可以控制其下游信號(hào)通路的啟動(dòng)過程，還可有效調(diào)控胚胎發(fā)育、介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)、誘導(dǎo)血管生成等生理和病理過程[15]。Daniel等[16]研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12及其受體CXCR4除介導(dǎo)炎性和免疫反應(yīng)外，CXCL12/CXCR4與乳腺癌、胃癌、肺癌、結(jié)直腸癌多種惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肺癌患者外周血中CXCL12表達(dá)水平相較于健康對(duì)照組明顯升高（P＜0.001）。Zhang等[17]研究結(jié)果顯示，已發(fā)生遠(yuǎn)處擴(kuò)散的肺癌患者相較于局限期肺癌患者，血清中CXCL12、CXCR4水平更高（P＜0.05）；此外，肺癌患者CXCL12、CXCR4表達(dá)水平與腫瘤大小及是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在明顯相關(guān)性，提示CXCL12、CXCR4參與了肺癌的發(fā)生以及侵襲轉(zhuǎn)移過程，甚至可能對(duì)于肺癌病理進(jìn)展具有重要促進(jìn)作用。Pisani等[18]研究證實(shí)，CXCL12、CXCR4通路可通過多種信號(hào)通路參與和介導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞增殖過程，CXCL12、CXCR4能夠改變G蛋白的化學(xué)結(jié)構(gòu)，對(duì)應(yīng)激活化蛋白激酶/JNK、絲裂原活化蛋白激酶和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2通路均具有一定活化作用。Roversi等[19]研究也發(fā)現(xiàn)CXCL12、CXCR4能夠激活PI3K/AKT信號(hào)通路，進(jìn)而對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖以及轉(zhuǎn)移過程產(chǎn)生激活作用；此外，CXCL12還能夠通過旁分泌和自分泌等多種方式誘導(dǎo)和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，介導(dǎo)肺癌的惡性發(fā)展過程，因此提示CXCL12可以作為肺癌診斷的一種生物分子標(biāo)記物。本研究ROC曲線研究結(jié)果顯示，CXCL12以458.41 pg/mL為診斷截?cái)嘀禃r(shí)，診斷肺癌的敏感度為70.69%，特異度為77.98%，AUC 為0.681（95%CI：0.616～0747），敏感度和特異度有待進(jìn)一步提高。聯(lián)合診斷結(jié)果顯示，外周血HSP90α、CXCL12聯(lián)合檢測(cè)的敏感度（85.34%）及AUC[0.867（95%CI：0.8291～0.906）]顯著高于單項(xiàng)檢測(cè)，診斷效能最佳。但是聯(lián)合檢測(cè)雖然有效提高了肺癌診斷敏感度，但特異度發(fā)生了一定程度的下降，因此在診斷時(shí)需對(duì)假陽性進(jìn)行重點(diǎn)排查。同時(shí)臨床上在應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)診斷肺癌時(shí)，還應(yīng)緊密結(jié)合患者臨床表現(xiàn)、影像特點(diǎn)以及病理組織學(xué)檢查等其他指標(biāo)進(jìn)行綜合判斷和動(dòng)態(tài)觀察。

本研究仍存在一定的局限性，本文為單中心研究且樣本量相對(duì)較少，未來還需在多中心大樣本臨床中對(duì)研究結(jié)果和結(jié)論進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，對(duì)2種標(biāo)志物進(jìn)行更深入的臨床作用機(jī)制研究和應(yīng)用探索。

4 結(jié)論

肺癌患者外周血HSP90α、CXCL12呈顯著高表達(dá)，兩者聯(lián)合檢查可提高診斷效能，對(duì)于原發(fā)性肺癌患者診斷具有潛在應(yīng)用價(jià)值。