黃小瓊，嚴家榮，姚欣伶，梁志健，陳桂煌，白建瑜，馮學軒，黎耀俊，江國健，鄭佳琳

（廣東省醫(yī)學實驗動物中心，廣東 佛山 528248）

緩解動物產生的疼痛是動物福利基本要求，也是獸醫(yī)管理的重要內容，在實驗動物行業(yè)，2014 年實施的《實驗動物機構質量和能力的通用要求》（GB/T27416-2014）明確規(guī)定術后觀察、鎮(zhèn)痛和護理[1]，對疼痛和痛苦已做出相關要求。但目前對小動物模型制備術后鎮(zhèn)痛護理的研究報道很少，特別鎮(zhèn)痛藥物的使用、效果和對研究的不良副作用等可參考的相關研究極少，目前沒有一個很好的指導原則，導致試驗人員不清楚或擔心對研究結果有不良影響而忽略動物術后的鎮(zhèn)痛護理，難以保障動物福利，對研究數(shù)據也會造成偏差。國內越來越意識到使用有效的識別方法和鎮(zhèn)痛藥，疼痛和痛苦是可以被有效控制的，選擇合適的術后鎮(zhèn)痛藥的研究迫在眉睫?，F(xiàn)代研究表明冰片具有保護腦缺血、促進血腦屏障開放、鎮(zhèn)痛、抗炎等藥理作用[2]，但冰片在治療用藥的毒副作用報道比較少。本研究采用冰片灌胃給予腹部切口手術大鼠，檢測血常規(guī)11 項和總膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、肌酸激酶（CK），為動物實驗術后鎮(zhèn)痛用藥和相關實驗研究提供參考數(shù)據，拓展冰片的臨床應用范圍[3]。

1 材料與方法

1.1 動物來源

SPF 級雄性 SD 大鼠 50 只，194~221 g，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供[SCXK（粵）2022-0002]。飼養(yǎng)于屏障設施[SYXK（粵）2022-0002]。動物實驗經廣東省醫(yī)學實驗中心實驗動物倫理委員會審查批準。

1.2 實驗藥物

中藥冰片：批號10917，福建南平青松化工有限公司；雙氯芬酸鈉腸溶片：批號X1506，北京諾華制藥有限公司。冰片低劑量組和高劑量組劑量分別為0.0125 g/kg體重和0.05 g/kg體重（按藥典0.24 g/60kg體重的劑量折算成大鼠用量,每天給藥2 次。低、高劑量組分別相當于臨床正常用量的1、4 倍）。雙氯芬酸鈉腸溶片大鼠劑量為5 mg/kg 體重（按臨床劑量 100 mg/60 kg 體重計算，10 mg/kg 體重分 2 次給藥）。以0.5%的CMC-Na 溶液作為溶媒配制試驗藥物[4~5]。

1.3 主要儀器和試劑

全自動血細胞分析儀：型號BC5000，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；全自動生化分析儀：型號日立7020，日本株式會社日立高新技術。BS-3000A 電子天平：感量0.1 g，上海友聲衡器有限公司；KDC-2046 低速冷凍離心機，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司；R550lP 小動物麻醉機，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；異氟烷，批號20080701，有效期至202308，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；烏來糖（氨基甲酸乙酯），批號20201030，有效期至：20251029，國藥集團化學試劑有限公司；M52LH溶血劑：批號2021101501，有效期至20231014，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；M-52DIFF 溶血劑：批號2021090301，有效期至 20230902，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；DS 稀釋液：批號2021110401，有效期至20231103，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；TBIL 試劑盒：批號20210712，有效期至20221231，上?？迫A生物工程股份有限公司；ALP 試劑盒：批號20210912，有效期至20230325，上?？迫A生物工程股份有限公司；BUN 試劑盒：批號20210722，有效期至 20220704，上?？迫A生物工程股份有限公司；CK 試劑盒：批號20210512，有效期至20221109，上?？迫A生物工程股份有限公司；

0.5 %的CMC-Na 溶液的配制：準確稱量1 g CMC-Na，磁力攪拌器室溫邊攪拌邊緩慢加入裝有約160 mL 氯化鈉注射液的燒杯中，攪拌至溶解，2℃~8 ℃過夜，第二天量筒中定容至200 mL 后混勻，210℃高壓滅菌后2℃~8 ℃保存?zhèn)溆谩?0%烏來糖溶液的配制：準確稱取20 g 烏來糖，加入氯化鈉注射液至100 mL，搖勻。

1.4 實驗方法

50 只大鼠按體重區(qū)組隨機分為假手術組、模型組、雙氯芬酸鈉組、中藥冰片低劑量組、中藥冰片高劑量組，每組10 只/組。模型組、雙氯芬酸鈉組、中藥冰片低劑量組、中藥冰片高劑量組參考文獻建立大鼠腹部切口痛模型，大鼠異氟烷吸入麻醉，4%~5%誘導，1%~2%維持[6]，選擇劍突下 0.5cm 腹正中切口，每層切口長度均為2cm。切割皮膚肌肉腹膜，行內臟探查。探查方法[7]：無菌手套操作，右手食指深入腹腔，先環(huán)行探查腹腔一圈，再用拇指和食指探查腸管，提出靠近十二指腸末端長約10cm 的一段小腸至腹腔外，放在生理鹽水打濕的無菌紗布上，一直探查腸管2min。探查完畢后再按順序回納腸管至腹腔，分層縫合傷口，假手術組大鼠只做相同濃度異氟烷吸入麻醉。術后每天檢查傷口，用碘酊消毒傷口及周圍皮膚。肌注青霉素8 萬U/只，1 次/d，連續(xù)3d，以防并發(fā)感染。術后連續(xù)2 d 中藥冰片低劑量組、中藥冰片高劑量組和雙氯芬酸鈉組分別灌胃給予0.005 g/mL、0.02 g/mL 的冰片和0.5 mg/mL 雙氯芬酸鈉腸溶片混懸液，假手術組、模型組灌胃給予0.5%CMC-Na 溶液。術后24h 內、48 h 內稱重、稱攝食攝水量、測定大鼠術后48 h 內血常規(guī) 11 項和膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、肌酸激酶（CK）（表 1 和表 2）。

1.5 統(tǒng)計方法

數(shù)據以均數(shù)±標準差表示；采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件分析，檢查各種數(shù)據的分布狀況，體重、攝食、攝水采用重復測量資料方差分析方法，組間LSD 法，血生化和血常規(guī)計量資料數(shù)據方差齊，或數(shù)據經轉換后方差齊，則采用多因素方差分析方法，若數(shù)據經轉換后方差仍不齊，采用秩和檢驗進行統(tǒng)計分析，組間LSD 法。檢驗水平α=0.05。

2 結果

2.1 對大鼠體重、攝食量和的攝水量的影響

結果表明（表1），手術后24h 和48h 內模型組和各給藥組大鼠體重有不同程度下降，與模型組比較，24h 內中藥冰片高劑量組和雙氯芬酸鈉腸溶片組體重變化有顯著性增加（P<0.05 或P<0.01），中藥冰片低劑量組體重變化無顯著性增加（P>0.05），48h內雙氯芬酸鈉腸溶片組體重變化有顯著性減少（P<0.05），中藥冰片低劑量組和中藥冰片高劑量組體重變化無顯著性增加（P>0.05）；與雙氯芬酸鈉腸溶片組比較，24 h 內中藥冰片低劑量組體重變化有顯著性減少（P<0.05），48 h 內中藥冰片低劑量組、24h 內和48 h 內中藥冰片高劑量組體重變化均無顯著性減少（P>0.05）；與假手術組比較，模型組、各給藥組24 h 內體重變化有顯著性減少（P<0.01），48 h 內體重變化無顯著性減少（P>0.05）。

表1 中藥冰片對腹部切口大鼠術后體重變化、攝食和飲水的影響 g

與模型組比較，24h 內雙氯芬酸鈉腸溶片組攝食量有顯著性增加（P<0.05），中藥冰片高劑量組和中藥冰片低劑量組攝食量均無顯著性增加（P>0.05），48h 內各給藥組攝食量均無顯著性增加（P>0.05）；與雙氯芬酸鈉腸溶片組比較，24 h 內中藥冰片高劑量組攝食量有顯著性減少（P<0.05），48 h 內中藥冰片高劑量組、24h 內和48 h 內中藥冰片低劑量組體重均無顯著性減少（P>0.05）；與假手術組比較，模型組和各給藥組24 h 內大鼠體重變化和24 h、48h 內大鼠攝食量均有顯著性減少（P<0.05或 P<0.01）。

與模型組比較，24 h 內和48 h 內各給藥組大鼠攝水量均無顯著性增加（P>0.05）；與雙氯芬酸鈉腸溶片組比較，24 h 和48 h 內中藥冰片高劑量組和中藥冰片低劑量組攝水量均無顯著性增加（P>0.05）；與假手術組比較，模型組24 h 內和48 h 內大鼠攝水量均無顯著性減少（P>0.05）。

2.2 對腹部切口大鼠血生化的影響

結果表明（表2），與模型組比較，中藥冰片低劑量組BUN 有顯著性減少（P＜0.05 或P＜0.01），雙氯芬酸鈉腸溶片組BUN 有顯著性增加（P＜0.01）；與雙氯芬酸鈉腸溶片組比較，模型組、中藥冰片高劑量組和中藥冰片低劑量組BUN 有顯著性減少（P＜0.05）；與假手術組比較，模型組、中藥冰片高劑量組和中藥冰片低劑量組BUN有顯著性減少（P＜0.05），中藥冰片高劑量組、中藥冰片低劑量組和雙氯芬酸鈉腸溶片組ALP 有顯著性減少（P＜0.05 或P＜0.01）。

表2 中藥冰片對腹部切口大鼠血生化的影響 umol/L、U/L、mmol/L

2.3 對腹部切口大鼠血常規(guī)的影響

結果表明（表3），與模型組比較，各組血常規(guī)11 項均無顯著性差異（P>0.05）；與雙氯芬酸鈉腸溶片組比較，各組血常規(guī)11 項均無顯著性差異（P>0.05）；與假手術組比較，各組血常規(guī)11 項均無顯著性差異（P>0.05）。

表3 中藥冰片對腹部切口大鼠血常規(guī)11 項的影響

續(xù)表3 中藥冰片對腹部切口大鼠血常規(guī)11 項的影響

3 討論

動物術后鎮(zhèn)痛須由專業(yè)人員判斷和選用最適宜的鎮(zhèn)痛劑、麻醉劑或其他措施，既要符合獸醫(yī)臨床和人道方面的要求，又不能影響科學實驗的結果。國內越來越關注動物福利和獸醫(yī)臨床用藥的安全，減少疼痛痛苦是一項綜合措施，包括藥物、操作、器械、程序等，需要針對特定的實驗制定方案。改善術后疼痛反應，對動物的術后恢復是密不可分的，使用鎮(zhèn)痛藥物時，需要注意監(jiān)測鎮(zhèn)痛藥物的治療反應，若出現(xiàn)副作用或臨床疼痛反應不能改善時，應該改變或停止鎮(zhèn)痛藥物的使用。嗎啡等阿片類鎮(zhèn)痛藥效果鎮(zhèn)痛明顯，但由于價格昂貴和購買困難，同時引起嘔吐、起效時間長等難以得到廣泛應用[8]，朱敏等研究表明中藥雪蓮注射液用于切口痛大鼠有明顯鎮(zhèn)痛效果[9]。中藥冰片具有開竅醒神、清熱止痛作用，其使用的領域非常廣，可應用于熱病神昏、痙厥與中風痰厥等多種疾病的治療中，此外，冰片還能起到抑殺細菌、止痛和對中樞神經保護作用[10]。路艷麗研究提示[11]，冰片重復給藥 6 個月，1.2 g/kg 組雌性大鼠堿性磷酸酶(ALP)增高，雄性大鼠和雌性大鼠尿素氮(BUN)升高，0.3 和1.2 g/kg 組雄性大鼠的總膽紅素(TBIL)升高，其他生化指標與對照組比較未見異常；本研究結果提示，0.05 g/kg 體重中藥冰片可顯著增加術后24h 內動物體重，具有明顯的鎮(zhèn)痛效果，與模型組比較，中藥冰片低劑量組BUN 有顯著性減少（P＜0.05 或 P＜0.01），各組血常規(guī) 11 項、TBIL、ALP 和 CK 均無顯著性差異（P＜0.05）；冰片用于術后鎮(zhèn)痛對血常規(guī)和血生化指標相對安全，在組織損害方面和鎮(zhèn)痛機制有待進一步研究。