劉仙喜，吳 夫，蔣啟程，劉 邦，陳 帥，周海龍

（1.海南省畜牧技術(shù)推廣總站，海南 ?？?571100；2.海南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，海南 ?？?570228）

【研究意義】海南黑山羊是海南省唯一的地方優(yōu)良山羊品種，不但耐高溫濕熱、耐粗飼、合群性好，而且肉質(zhì)鮮美、膻味小，具有獨(dú)特的地方風(fēng)味，名列“海南四大名菜”之一［1］。隨著規(guī)?；B(yǎng)殖，海南黑山羊肺炎、羔羊痢疾、感冒、口瘡等疾病對(duì)其養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重影響，制約了該產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展［2］。這些疾病的發(fā)生與海南黑山羊免疫性能有密切關(guān)聯(lián)。黃芪多糖（Astragalus Polysaccharide，APS）是從黃芪的根莖中提取，含有鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖單糖等的水溶性復(fù)合植物多糖，對(duì)機(jī)體免疫有明顯促進(jìn)作用［3］，已廣泛應(yīng)用于畜禽疾病防控。諾麗（Morinda citrigoliaL.）為茜草科巴戟天屬，熱帶常綠、多年生小喬木或闊葉灌木［4］。近年來(lái)，研究人員對(duì)諾麗果及其提取物的藥用和保健功能開(kāi)展了許多研究工作，發(fā)現(xiàn)其具有增強(qiáng)免疫、抗氧化、抑菌、降糖、抗腫瘤及保護(hù)心肌等多種生理功效［5］。但如何開(kāi)發(fā)利用諾麗，建立海南黑山羊科學(xué)飼養(yǎng)方案，增強(qiáng)其免疫性能，提高養(yǎng)殖水平，促進(jìn)該產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，仍有待深入研究。

【前人研究進(jìn)展】當(dāng)前海南黑山羊疾病主要采用化學(xué)類(lèi)合成藥物、抗生素類(lèi)或激素類(lèi)藥物進(jìn)行治療，但這些藥物的使用不僅會(huì)產(chǎn)生殘留，還會(huì)導(dǎo)致耐藥性等問(wèn)題［6-7］。諾麗作為添加劑在畜禽上已有相關(guān)應(yīng)用，不僅可提高雞的增重、屠宰率［8］，改善熱應(yīng)激［9］等情況，還可降低雞肉膽固醇、增加非飽和脂肪酸含量［10］。諾麗在提高蛋雞和鵪鶉的產(chǎn)蛋量和蛋品質(zhì)［11-12］，促進(jìn)鴨［13］、奶山羊［14］和羅非魚(yú)［15］的生長(zhǎng)等方面均有重要的應(yīng)用價(jià)值。諾麗在抗氧化性［16-17］、抑菌［18］、抗腫瘤［19］、防治結(jié)腸炎［20］及其生化特性［21］等方面的研究已成為熱點(diǎn)。

【本研究切入點(diǎn)】目前有關(guān)海南黑山羊免疫性能的研究較少，而利用諾麗提高海南黑山羊免疫性能的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。雖然諾麗在畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用已有少量研究，但針對(duì)其提高畜禽免疫力的研究較少。如何有效增強(qiáng)海南黑山 羊的免疫性能是黑山羊產(chǎn)業(yè)中面臨的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究以諾麗為材料，以提高海南黑山羊免疫性能為目的，比較諾麗和黃芪多糖提高免疫力的差異，設(shè)置諾麗高、中、低劑量處理等，分別在試驗(yàn)0、30、60 d 測(cè)定各處理海南黑山羊的增重和免疫性能，從而篩選出諾麗和黃芪多糖的最佳飼喂方案，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)海南黑山羊的綠色免疫增效劑奠定基礎(chǔ)，為推動(dòng)其健康養(yǎng)殖及其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2019 年3—7 月，在海南省東方市海南廣鑫牧業(yè)有限公司選取3～4 月齡、體重為11.28(±1.15）kg 的健康海南黑山羊54 只開(kāi)展試驗(yàn)。諾麗購(gòu)自萬(wàn)寧萬(wàn)維諾麗生物科技有限公司，黃芪多糖購(gòu)自南京德澤生物科技有限公司，山羊免疫球蛋白 ELISA 試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)方法

將供試的54 只海南黑山羊隨機(jī)分成6 個(gè)處理：對(duì)照（每只每天飼喂200 g 精料）、低劑量諾麗處理（每只每天飼喂200 g 精料+5 g諾麗果粉）、中劑量諾麗處理（每只每天飼喂200 g 精料+10 g 諾麗果粉）、高劑量諾麗處理（每只每天飼喂200 g 精料+20 g 諾麗果粉）、黃芪多糖處理（每只每天飼喂200 g 精料+1 g 黃芪多糖）、混合處理（每只每天飼喂200 g 精料+5 g 諾麗果粉+1 g 黃芪多糖）。每千克預(yù)混料為日糧提供Mn 130 mg、Se 0.3 mg、VE50 mg、VD5 000 IU、VA15 000 IU、Fe 9 mg、Cu 12.5 mg、Zn 100 mg、I 1.5 mg。每個(gè)處理3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3 只海南黑山羊。每天8: 00和16: 00 分別將諾麗果粉和黃芪多糖粉拌在精料中進(jìn)行飼喂，并補(bǔ)充足量王草。試驗(yàn)期為60 d。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目及方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能 試驗(yàn)0、30、60 d 對(duì)試驗(yàn)羊進(jìn)行空腹稱(chēng)重，試驗(yàn)0～30、30～60、0～60 d 分別記為第一階段、第二階段和全期，統(tǒng)計(jì)每個(gè)時(shí)期各處理的平均日增重。

日增重=（試驗(yàn)?zāi)┢谄骄w重-試驗(yàn)初期平均體重）/飼喂天數(shù)

1.3.2 免疫指標(biāo) 試驗(yàn)0、30、60 d 對(duì)所有試驗(yàn)羊于頸靜脈采血5 mL；3 000 r/min 離心10 min 制備血清，置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩０凑赵噭┖姓f(shuō)明測(cè)定血清Ig G、IL-2 和IFN-γ 的含量，血清總蛋白和球蛋白含量送至海南金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所檢測(cè)。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2012 軟件進(jìn)行處理，通過(guò)SPSS 23.0 進(jìn)行單因素方差分析（One Way Analysis，ANOVA)，并用LSD和Duncan’s法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 諾麗對(duì)海南黑山羊生長(zhǎng)性能的影響

由圖1 可知，試驗(yàn)30 d 各處理海南黑山羊平均體重為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞低劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞對(duì)照，試驗(yàn)60 d 各處理平均體重為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞黃芪多糖處理＞低劑量諾麗處理＞對(duì)照，且高劑量諾麗處理顯著高于對(duì)照、低劑量諾麗處理和黃芪多糖處理。其中，高劑量諾麗處理海南黑山羊平均體重為17.14 (±0.70）kg，黃芪多糖處理平均體重為15.71 (±1.75）kg，可見(jiàn)高劑量諾麗處理的增重效果比黃芪多糖處理的增重效果更顯著。此外，隨著諾麗添加劑量的增加，海南黑山羊平均體重也增加。

圖1 不同處理海南黑山羊平均體重比較Fig.1 Comparison of the average body weight of Hainan black goats in different treatments

由圖2 可知，在試驗(yàn)第一階段各處理日增重為：高劑量諾麗處理＞混合處理＞中劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞低劑量諾麗處理＞對(duì)照，且高劑量諾麗處理和混合處理顯著高于對(duì)照。其中，高劑量諾麗處理日增重為103 (±32.31) g，低劑量諾麗處理日增重為70.33 (±34.87) g。全期各處理的日增重依次為：高劑量諾麗處理＞混合處理＞中劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞低劑量諾麗處理＞對(duì)照，且高劑量諾麗處理和混合處理顯著高于對(duì)照。其中，高劑量諾麗處理日增重為97.27(±20.87) g，黃芪多糖處理日增重為78.00 (±12.24)g，可見(jiàn)高劑量諾麗處理日增重顯著高于黃芪多糖處理。與對(duì)照相比，低劑量諾麗處理、中劑量諾麗處理、高劑量諾麗處理、黃芪多糖處理、混合處理全期日增重分別提高3.38%、21.98%、45.54%、16.71%和33.88%。

圖2 不同階段各處理海南黑山羊日增重比較Fig.2 Comparison of daily gains of Hainan black goats at different stages in different treatments

2.2 諾麗對(duì)海南黑山羊免疫性能的影響

2.2.1 對(duì)血清總蛋白含量的影響 由圖3 可知，試驗(yàn)0、30 d 各處理血清總蛋白含量差異不顯著，隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，黃芪多糖處理血清總蛋白含量為72.97 (±6.28) g/L，試驗(yàn)60 d 血清總蛋白含量為78.23 (±6.39) g/L，而對(duì)照為68.9 (±6.01)g/L，黃芪多糖處理與對(duì)照之間存在顯著差異，表明黃芪多糖具有較強(qiáng)的免疫增效作用。除黃芪多糖處理外，其他處理間差異不顯著。此外，低劑量諾麗處理和黃芪多糖處理內(nèi)，不同處理時(shí)間海南黑山羊血清總蛋白含量差異顯著。

圖3 不同處理海南黑山羊血清總蛋白含量比較Fig.3 Comparison of serum total protein contents in Hainan black goats in different treatments

2.2.2 對(duì)血清球蛋白含量的影響 由圖4 可知，試驗(yàn)30 d 各處理血清球蛋白含量為：黃芪多糖處理＞混合處理＞高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞低劑量諾麗處理＞對(duì)照，黃芪多糖處理最高為42.90 (±6.47) g/L。試驗(yàn)60 d 各處理血清球蛋白含量為：黃芪多糖處理＞混合處理=高劑量諾麗處理＞低劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞對(duì)照，黃芪多糖處理最高為47.57 (±7.11) g/L，而對(duì)照為36.00 (±4.51) g/L，且黃芪多糖處理顯著高于對(duì)照，表明黃芪多糖對(duì)血清球蛋白具有顯著增加作用。隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理血清球蛋白有增加趨勢(shì)，且在試驗(yàn)0～30 d 更明顯。

圖4 不同處理海南黑山羊血清球蛋白含量比較Fig.4 Comparison of serum globulin contents in Hainan black goats in different treatments

2.2.3 對(duì)血清IgG 含量的影響 由圖5 可知，試驗(yàn)30 d 各處理血清IgG 含量為：高劑量諾麗處理＞混合處理＞黃芪多糖處理＞中劑量諾麗處理＞低劑量諾麗處理＞對(duì)照，且中劑量諾麗處理、高劑量諾麗處理、黃芪多糖處理和混合處理血清IgG 含量均與對(duì)照差異顯著，其中高劑量諾麗處理的血清IgG 含量為43.75 (±2.03) g/L，對(duì)照為38.49 (±2.94) g/L。試驗(yàn)60 d 各處理血清IgG 含量為：高劑量諾麗處理＞混合處理＞黃芪多糖處理＞中劑量諾麗處理＞低劑量諾麗處理＞對(duì)照，試驗(yàn)中5 個(gè)處理與對(duì)照均呈顯著差異，其中高劑量諾麗處理血清IgG 含量為49.17 (±3.52) g/L，對(duì)照為38.68 (±4.06) g/L。隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，試驗(yàn)各處理血清IgG 含量有增加趨勢(shì)，且在試驗(yàn)0～30 d 更明顯。其中，試驗(yàn)30 d 高劑量諾麗處理、黃芪多糖處理和混合處理的血清lgG 水平均顯著高于對(duì)照，而試驗(yàn)60 d 中劑量、高劑量諾麗處理、黃芪多糖處理和混合處理的血清lgG 也顯著高于對(duì)照。結(jié)果表明，諾麗和黃芪多糖的添加對(duì)海南黑山羊免疫性能的提高效果均較好。

圖5 不同處理海南黑山羊血清IgG 含量比較Fig.5 Comparison of serum IgG contents in Hainan black goats in different treatments

2.2.4 對(duì)血清IL-2 含量的影響 由圖6 可知，試驗(yàn)30 d 時(shí)各處理血清IL-2 含量為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞低劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞對(duì)照，且中劑量諾麗處理和高劑量諾麗處理血清IL-2 含量與對(duì)照顯著差異，其中高劑量諾麗處理血清IL-2 含量為130.56 (±20.21) ng/L，對(duì)照為82.45 (±15.15) ng/L。試驗(yàn)60 d 各處理血清IL-2 含量為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞低劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞對(duì)照，且各試驗(yàn)處理均顯著高于對(duì)照，其中高劑量諾麗處理血清IL-2 含量為136.24 (±12.77) ng/L，對(duì)照為88.22 (±6.92) ng/L。隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理血清IL-2 含量明顯增加，特別是高劑量諾麗處理，表明諾麗對(duì)IL-2 具有較強(qiáng)的增效作用。此外，IL-2 含量隨 著添加劑量的增加而增加，其中混合處理提高血清IL-2 的含量最顯著。

圖6 不同處理海南黑山羊血清IL-2 含量比較Fig.6 Co mparison of serum IL-2 co ntents in Hainan black goats in different treatments

2.2.5 對(duì)血清IFN-γ 含量的影響 由圖7 可知，試驗(yàn)30 d 各處理血清IFN-γ 含量為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞黃芪多糖處理＞低劑量諾麗處理＞對(duì)照，且各試驗(yàn)處理均顯著高于對(duì)照，其中高劑量諾麗處理血清IFN-γ 含量為1 04.41 (±10.66) ng/L，對(duì)照為58.83 (±9.69) ng/L。試驗(yàn)60 d 各處理血清IFN-γ 含量為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞Ⅵ處理＞低劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞對(duì)照，且各試驗(yàn)處理均顯著高于對(duì)照，其中高劑量諾麗處理的血清IFN-γ 含量為112.72 (±10.94) ng/L，對(duì)照為70.57 (±13.50) ng/L。隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理血清IFN-γ 含量增加顯著，特別是高劑量諾麗處理。結(jié)果表明諾麗對(duì)IFN-γ 具有顯著的促進(jìn)作用，且血清IFN-γ 含量均隨著添加劑量的增加而升高。

圖7 不同處理海南黑山羊血清IFN-γ 含量比較Fig.7 Comparison of serum IFN-γ contents in Hainan black goats in different treatments

3 討論

3.1 諾麗對(duì)海南黑山羊的增重效應(yīng)

研究表明，諾麗在促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)性能方面具有較好作用，如給肉雞飼喂新鮮的諾麗果汁，肉雞體重增加、飼料轉(zhuǎn)化率方面明顯升高；肉鴿的產(chǎn)蛋量（95.24%）也顯著高于對(duì)照（83.11%）［22］。在日本鵪鶉試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，諾麗不僅可提高其產(chǎn)蛋量，還可提升其蛋品質(zhì)［23］；Yancey等［24］用諾麗果肉飼喂育成牛，隨著日糧中諾麗果肉含量的增加，其平均日增重呈線(xiàn)性增加。而本試驗(yàn)中，高劑量諾麗處理海南黑山羊的平均體重最高及日增重效果最佳；隨著添加劑量的增加，平均日增重也增加，與Yancey等［24］的研究結(jié)果相似。此外，在湖羊羔羊［25］和舍飼藏羊［26］飼糧中添加諾麗，平均日增重也顯著升高，這可能是由于諾麗果中富含蛋白質(zhì)，占果汁干物質(zhì)總量的11.3%，其主要氨基酸為天冬氨酸、谷氨酸和異亮氨酸；礦物質(zhì)含量占8.4%（干基重），主要是鉀、硫、鈣和磷［27］，同時(shí)諾麗也是錳和硒的潛在膳食來(lái)源；此外，還含有維生素A、維生素B 和維生素C 等，尤其以維生素C 含量較高［28］?？梢?jiàn)諾麗在促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)性能方面具有較好的開(kāi)發(fā)前景。

3.2 諾麗對(duì)海南黑山羊的免疫增強(qiáng)效應(yīng)

諾麗除了具有顯著的增重效應(yīng)外，還具有明顯的免疫促進(jìn)作用，主要體現(xiàn)在血清總蛋白、免疫球蛋白等方面。Brooks等［6］研究表明，諾麗可以增強(qiáng)新生牛犢（尤其在斷奶前）的免疫力。本研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖處理的血清總蛋白和球蛋白含量顯著高于對(duì)照，添加諾麗果粉各處理的血清球蛋白含量均高于對(duì)照，且隨著添加劑量的增加，血清球蛋白含量也隨著升高，表明諾麗具有較好的免疫增效作用。這可能是由于白蛋白和球蛋白具有調(diào)節(jié)膠體滲透壓、物質(zhì)運(yùn)輸、營(yíng)養(yǎng)及免疫等功能；此外，當(dāng)機(jī)體遭遇病毒入侵時(shí)，可通過(guò)球蛋白來(lái)抵抗病原入侵。

免疫球蛋白是反映機(jī)體免疫性能的重要指標(biāo)之一，其中IgG 約占75%，在血液中含量最高，是機(jī)體免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體，在抗感染中發(fā)揮重要作用［29］。IL-2 是體內(nèi)最主要、最強(qiáng)的T 細(xì)胞生長(zhǎng)因子，是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的核心物質(zhì)，在細(xì)胞及體液免疫中發(fā)揮重要作用。IFN-γ 是動(dòng)物機(jī)體最重要的細(xì)胞因子之一，是主要的巨噬細(xì)胞活化因子，具有強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)作用和抗病毒、抗腫瘤作用。Pratap等［30］研究發(fā)現(xiàn)，諾麗果汁在體內(nèi)外均可增加刀豆素A（Con A），從而誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的增殖，IL-2、IFN-γ 的產(chǎn)生，以及磷酸胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶的表達(dá)。含種籽的諾麗果汁還可促進(jìn)大鼠IL-2 和IFN-γ 的產(chǎn)生［31］。本試驗(yàn)中，添加不同劑量的諾麗均能顯著提高海南黑山羊血清中IgG、IL-2 和IFN-γ 的含量，且血清中IgG、IL-2 和IFN-γ 的含量與其添加劑量呈正相關(guān)。徐榮等［32］給小鼠口服不同劑量的諾麗果粉30 d 后，中、高劑量處理的免疫增強(qiáng)效果較好，這可能與諾麗果中含有豐富的多糖（11.62 g/100g）［33］和豐富的氨基酸有關(guān)［34］。舒迎霜等［35］研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖能顯著提高犬血清IgG 和IFN-γ 含量；蒙洪嬌等［36］研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加黃芪多糖，斷奶仔豬的血清IL-2、IFN-α、IgA、IgG 含量均上升。本研究中，添加1 g 黃芪多糖，海南黑山羊的血清IgG、IL-2 和IFN-γ 含量也顯著增加，可見(jiàn)，諾麗和黃芪多糖在畜禽免疫增效方面均具有顯著作用。

4 結(jié)論

本研究在海南黑山羊飼養(yǎng)60 d 時(shí)，高劑量諾麗處理的平均體重為17.14 (±0.70) kg，日增重為97.27 (±20.87) g，顯著提高了海南黑山羊的生長(zhǎng)性能。黃芪多 糖處理的血清總蛋白和球蛋白含量顯著高于對(duì)照，表明其具有較強(qiáng)的免疫促進(jìn)作用。此外，高劑量諾麗處理血清IgG、IL-2 和IFN-γ 的含量均顯著高于對(duì)照，飼養(yǎng)60 d 分別為49.17 (±3.52) g/L、136.24 (±12.77) ng/L、112.72(±10.94) ng/L，且血清IgG、IL-2 和IFN-γ的含量隨著添加劑量增加而提高，可見(jiàn)諾麗具有較強(qiáng)的免疫增效作用。本研究結(jié)果表明，每只海南黑山 羊每天日糧中添加20 g 諾麗果粉，飼喂 60 d，其平均體重、日增重及其免疫性能均有顯著提升。該研究結(jié)果為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)海南黑山羊的免疫增效劑奠定了基礎(chǔ)，對(duì)諾麗的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用具有重要參考價(jià)值。