邢長亮

（河北省秦皇島市青龍滿族自治縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局基層動物防疫監(jiān)督站，河北 秦皇島 066599）

目前，國內(nèi)外牧場奶牛的人工配種主要是人工授精技術(shù)。將細(xì)管凍精貯存于液氮罐中，對確定發(fā)情奶牛經(jīng)解凍后裝入輸精槍，采用直腸把握法進(jìn)行人工輸精。在實際生產(chǎn)中，受準(zhǔn)確率或經(jīng)濟(jì)、設(shè)備條件的制約，直腸檢查結(jié)合外觀診斷仍被廣泛應(yīng)用。超聲波診斷法因其昂貴的使用價格，使用并不廣泛。

1 冷凍精液的保存

冷凍精液貯存于盛有液氮的容器（液氮罐）中。液氮是一種無色透明的液體，溫度為-196℃。液氮罐多以不銹鋼或鋁合金制成，液氮罐的容量常用的為10L、30L；罐內(nèi)有提筒多個，可分別存放不同公牛的精液，并作好標(biāo)記和數(shù)量的記載。一個10L的液氮罐添足一次液氮約可維持15d左右，當(dāng)液氮容量達(dá)1/3時就要及時補充。測定液氮容量可用木標(biāo)尺或稱重法。液氮罐要專人管理，存放室要清潔干燥，通風(fēng)良好。液氮罐內(nèi)不同部位溫度不相同，管頸處的溫度為-100～-150℃，管頸上溫度更高，故取精時不要把提筒提出頸口，動作要迅速，取畢后迅速把提筒浸沒于液氮中。

2 精液的解凍

將常用的0.25mL細(xì)管精液從液氮罐中取出后，立即投入35～40℃溫水中，約經(jīng)10s取出；也可直接用手搓細(xì)管使凍精液融化，然后把封閉的一側(cè)用經(jīng)干燥消毒的剪刀剪去，放入輸精槍里備用。解凍后的精液要盡快使用，以免溫度升高，縮短精子壽命。

3 精子的檢查

對每批解凍精液都應(yīng)作抽樣檢查，檢查項目有活力、密度、頂體完整率、畸形精子率和微生物指標(biāo)是否符合國家標(biāo)準(zhǔn)（GB 4131-84）中規(guī)定的活力≥0.30，每一劑量（細(xì)管）直線運動精子數(shù)≥1000萬個，頂體完整率≥40%，畸形精子率≤20%，非病原細(xì)菌數(shù)≤1000個/mL。

4 輸精

4.1 輸精前的準(zhǔn)備工作（1）母畜的準(zhǔn)備：母牛作適當(dāng)?shù)谋６?，尾巴系于一?cè)，除去外陰部污垢，并用溫水洗清，用消毒布擦干。（2）輸精器械的準(zhǔn)備：輸精槍經(jīng)清洗、干燥、消毒后備用。（3）術(shù)者的準(zhǔn)備：輸精員要剪短、磨平指甲，手戴經(jīng)充分洗滌消毒后涂上潤滑劑的長臂乳膠手套。

4.2 直腸把握式輸精法施術(shù)要領(lǐng)與步驟（1）術(shù)者將一只手伸進(jìn)直腸內(nèi)，掏去積存的糞便。（2）檢查卵泡成熟情況及在哪一側(cè)卵巢上的位置。（3）抓住子宮頸。（4）另一只手持干凈毛巾擦凈沾于陰門處的牛糞。（5）持已裝好細(xì)管精液的輸精槍插入陰道至子宮頸口，把握子宮頸的手與持輸精槍的手協(xié)同操作，把輸精槍導(dǎo)入子宮頸深部或子宮體；在技術(shù)熟練的條件下，可導(dǎo)入至排卵側(cè)的子宮角膨大部。（6）慢慢注入精液，注畢，緩慢取出輸精槍。（7）施術(shù)手法要輕柔、循序，防止因動作粗暴損傷生殖道黏膜，造成后患。（8）輸精畢，作好發(fā)情、直腸檢查和配種的詳細(xì)記錄。

5 妊娠

受精后的3～5d到達(dá)子宮角，此時受精卵已分裂到16～32細(xì)胞（桑葚期）；胚胎在子宮內(nèi)浮游，繼續(xù)發(fā)育，在20～30d開始疏松附植在子宮內(nèi)膜（也稱“著床”），形成胎膜，到60d附植牢固。早期胚胎死亡率很高，大多發(fā)生在胚胎“著床”階段。據(jù)報道，經(jīng)產(chǎn)牛在受精的28～32d后“著床”率為40%～47%，育成牛接近75%。早期死亡的胚胎被吸收而未發(fā)覺，往往誤認(rèn)為未受孕。造成早期胚胎死亡的原因很多，如遺傳因素、內(nèi)分泌失調(diào)、子宮內(nèi)環(huán)境不良、外界刺激、粗暴的直腸檢查、母畜的疾病等。

6 妊娠診斷

6.1 妊娠征兆母牛妊娠后周期性發(fā)情停止，舉止變得謹(jǐn)慎安穩(wěn)，食欲增進(jìn)，新陳代謝旺盛，營養(yǎng)狀況改善，陰門緊收，陰道黏膜蒼白，有少量厚稠的黏液流出，或黏附于陰毛上。隨著妊娠天數(shù)的增加，腹圍逐漸增大。初孕牛妊娠3個月后，乳房開始漸漸發(fā)育變大。

6.2 直腸檢查主要檢查子宮、卵巢、子宮中動脈等。注意子宮角位置、兩側(cè)子宮角大小的對比、質(zhì)感、胎膜、子葉；卵巢上黃體生長情況；兩側(cè)子宮中動脈粗細(xì)的對比、脈搏的強(qiáng)弱及血流的震顫感等。以上這些指征并不是一成不變的，尤其是經(jīng)產(chǎn)牛，也常因檢查者缺乏經(jīng)驗，影響判斷。妊娠診斷不要憑個別指征輕率下結(jié)論，要綜合考慮，在一時不能確診的情況下，可應(yīng)用其他診斷手段來證實，或間隔20～30d作復(fù)查。如在配種后30d左右作第一次妊娠診斷為孕牛，最好在配種后50～60d作第二次檢查確診，以區(qū)別胚胎是否早期死亡，然后在干乳前再作一次檢查。直腸檢查要注意子宮積液、子宮膿腫、子宮腫瘤等與妊娠子宮的區(qū)別及妊娠黃體與持久黃體、囊腫黃體的區(qū)別。作直腸檢查者還要注意動作不要粗暴，以免人為損傷胚胎或妊娠黃體，引起流產(chǎn)或損傷直腸黏膜。

6.3 超聲波診斷超聲波診斷可分超聲示波（A型）診斷法、超聲顯像（B型）診斷法、超聲光點掃描（M型）診斷法和超聲多普勒（D型）診斷法。超聲多普勒（D型）診斷法系應(yīng)用物理學(xué)上的多普勒效應(yīng)原理，經(jīng)儀器測出多普勒信號或D型聲像圖。對妊娠50d左右探測胎兒血管、心臟和臍帶中血液的流動情況進(jìn)行妊娠診斷。新一代的超聲掃描影像儀作早孕診斷，據(jù)介紹在配種后25～30d，準(zhǔn)確率可達(dá)98%～100%；配種后40d，通過對胚胎的活動和心跳，可確認(rèn)胚胎的存活性；配種后60～70d，可判斷胚胎的性別，還可作雙胎等其他潛在用途。超聲波診斷法應(yīng)用前景廣闊，但制約其推廣使用的主因是目前價格昂貴。