何子順，賈藝凡，李貴美

（1聊城市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，山東 聊城 252000；2江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，南京 210000）

梨胴枯病又稱干枯病，是梨枝干的重要病害之一，與梨樹(shù)枝干上發(fā)生的干腐病癥狀相近，主要為害砂梨系統(tǒng)和白梨系統(tǒng)的品種。以為害枝干為主，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)病斑能延伸至整個(gè)枝干，造成樹(shù)皮壞死、枝干死亡，樹(shù)勢(shì)衰弱，甚至整株死亡，給生產(chǎn)造成很大損失。該病最早發(fā)現(xiàn)于日本梨區(qū)，主要表現(xiàn)在砂梨上[1]，隨著引種傳入我國(guó)。我國(guó)梨產(chǎn)區(qū)發(fā)生普遍，云南、浙江、江蘇、遼寧、吉林、黑龍江等省都有分布[2]。2000年以后，我國(guó)多個(gè)梨產(chǎn)區(qū)相繼發(fā)現(xiàn)該病，并引起生產(chǎn)者的重視。當(dāng)前聊城梨產(chǎn)區(qū)尚未見(jiàn)該病報(bào)道。筆者先后在聊城的茌平、東阿、高唐和冠縣發(fā)現(xiàn)疑似胴枯病癥狀，經(jīng)鑒定確定為是。為準(zhǔn)確鑒別該病、做好防控，綜合前人研究的結(jié)果，提出鑒別方法和防控措施。

1 病原菌鑒定

1.1 病原材料

病原材料樣品取自山東省高唐縣三十里鋪鎮(zhèn)后辛村 梨 園，園 面 積4.70 hm2，樹(shù) 齡8年，感 病 株 率51.20%。樣品為1年生發(fā)病梨樹(shù)枝條，于2021年12月21日從病株剪下，共50條，及時(shí)通過(guò)快遞發(fā)往江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，進(jìn)行病原菌鑒定。

1.2 病原菌分離

采用組織分離法。用已滅菌的手術(shù)刀在病健交界處切取少量組織；對(duì)所取的組織用75%酒精消毒，再用滅菌水洗2次；將消毒后的組織置于新鮮的PDA平板上，25℃培養(yǎng)2 d；待長(zhǎng)出真菌，從邊緣打孔，將菌絲塊移植到新的PDA培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)3d。

1.3 病原菌鑒定

分離純化后，分離病原物的鑒定采用分子鑒定方法。采用擴(kuò)增其內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列，在測(cè)序后進(jìn)行BLAST分析。

PCR擴(kuò)增。選用20 μL體系，包括dd H2O 8.5 μL，Mix 10 μL，上游引物0.5 μL，下游引物0.5 μL，模板0.5 μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，53℃褪火30 s，72℃延伸40 s，30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。

擴(kuò)增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠，TBE為緩沖液，140 mv，上樣5μL電泳檢測(cè)。電泳條帶亮，大小在750 bp。

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送到擎科公司測(cè)序，將得到的序列在NCBI上進(jìn)行Blastn比對(duì)。

1.4 鑒定結(jié)果

枝干病害樣品分離得到5株真菌:球黑孢菌(Nigrospora sphaerica)、間座殼屬(Diaporthesp.)、蕓薹生 鏈 格 孢(Alternaria brassicicola)、 密 實(shí) 鏈 格 孢(Alternaria compacta)、鏈格孢(Alternariasp.)，最終確定該病為梨胴枯病。通常認(rèn)為，梨胴枯病致病真菌是福士擬莖點(diǎn)霉(Phomopsis fukushiiTanaka et Endo)，屬半知菌亞門球殼孢目擬莖點(diǎn)菌屬真菌，有性態(tài)屬于間座殼屬(Diaporthe)。但郭雅雙研究指出，我國(guó)梨產(chǎn)區(qū)梨胴枯病的病原菌種類具有多樣性，共檢測(cè)到19種，其中榆樹(shù)間座殼菌(Diaporthe eres)引起的梨胴枯病分布廣[1](圖1)。

圖1 病枝上檢測(cè)鑒定病源菌

2 病害發(fā)生情況

2.1 為害情況

該病在我國(guó)發(fā)現(xiàn)于20世紀(jì)80年代，發(fā)病范圍廣，但沒(méi)有引起足夠的重視。1988年吉林省延吉梨樹(shù)胴枯病發(fā)病株率達(dá)16.9%[3]；1997年浙江桐廬的‘黃花’‘新世紀(jì)’梨發(fā)病株率5%~10%，重者發(fā)病株率達(dá)20%[4]；2008年河北省泊頭重點(diǎn)產(chǎn)梨鄉(xiāng)鎮(zhèn)發(fā)病株率平均為13.6%[5]；2011年以來(lái)梨胴枯病嚴(yán)重影響了甘肅武威梨產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[6]；2013年在江西贛東的梨園病株率達(dá)到2%~5%[7]。2021年，筆者在聊城的茌平、東阿、高唐和冠縣發(fā)現(xiàn)，梨胴枯病的感病品種以‘秋月’為主。對(duì)發(fā)生該病的縣(區(qū))各調(diào)查1個(gè)果園。由表1看出，高唐縣后辛村8年生樹(shù)發(fā)病株率51.20%，冠縣韓路村1年生樹(shù)發(fā)病株率32.00%，東阿縣北崔村2年生樹(shù)發(fā)病株率15.00%，茌平區(qū)耿店村3年生樹(shù)發(fā)病株率12.00%。由此可見(jiàn)，該病在我國(guó)梨產(chǎn)區(qū)呈現(xiàn)蔓延態(tài)勢(shì)。

表1 梨胴枯病發(fā)病情況調(diào)查

2.2 發(fā)病癥狀

梨胴枯病為害部位，多數(shù)文獻(xiàn)顯示的是枝條，且以一二年生枝為主。1988年Uecker[8]研究指出，梨胴枯病菌可以導(dǎo)致‘豐水’梨的芽死亡。在聊城，梨胴枯病明顯的特征是為害花芽和一二年生枝，受害花芽不能正常開(kāi)花，甚至死亡；受害枝形成病斑，枝勢(shì)削弱，甚至枯死。受害花芽外觀癥狀是休眠期芽的鱗片散開(kāi)，受害較輕時(shí)，花芽鱗片干死，內(nèi)部花原基存活，但不能正常開(kāi)花；受害重時(shí)，入冬后至花芽萌動(dòng)期用手輕輕一觸，花芽就脫落，嚴(yán)重影響梨樹(shù)產(chǎn)量和質(zhì)量。受害枝的表面起初形成圓形病斑，隨后慢慢擴(kuò)大成橢圓形、方形等，病斑呈褐色或紅褐色，最后病部下陷，病健部交界處出現(xiàn)裂縫，有的樹(shù)皮卷翹；當(dāng)病斑繼續(xù)擴(kuò)展，病部超過(guò)枝條周長(zhǎng)1/2時(shí)，病部以上的部分就會(huì)枯死，遇大風(fēng)易在病部折斷。

2.3 傳播源分析

通常認(rèn)為，梨胴枯病近距離傳播是靠風(fēng)雨，遠(yuǎn)距離傳播是靠苗木或種條調(diào)運(yùn)。在筆者調(diào)查的4個(gè)梨園中，冠縣梨園的梨苗來(lái)源于調(diào)查的高唐梨園，可以認(rèn)為，冠縣梨園的病源來(lái)源于高唐的梨園。茌平梨園和高唐梨園的苗木都來(lái)源于河北省衡水市深州，東阿梨園的梨苗木來(lái)源于河北省衡水市安平。由此推斷，河北衡水生產(chǎn)的‘秋月’梨苗木存有梨胴枯病的風(fēng)險(xiǎn)較高。

2.4 同梨干腐病癥狀的比較

梨胴枯病和梨干腐病為害梨枝的癥狀相似，準(zhǔn)確區(qū)別兩種病害是做好防控的前提。二者之間的共同特點(diǎn)是病部褐色、壞死、凹陷、有龜裂，表面有黑色小粒點(diǎn)。不同點(diǎn):梨胴枯病以一二年生枝為主，且擴(kuò)展慢，梨干腐病以多年生枝為主，且擴(kuò)展快；梨胴枯病病斑多呈橢圓形或方形，褐色至紅褐色，病皮常卷起，梨干腐病的病斑多呈梭形，褐色至黑褐色，病皮不卷起；梨胴枯病涌出的絲狀物顏色為白色，而干腐病的絲狀物顏色為淡黃色(圖2)。

圖2 梨胴枯病和梨干腐病為害枝的癥狀

3 發(fā)生規(guī)律

3.1 侵染循環(huán)

梨胴枯病以菌絲體及分生孢子器在被害枝皮內(nèi)越冬。次年春季氣溫適合時(shí)，病菌在遇雨水后涌出分生孢子，引起初次侵染，主要從傷口或新芽侵入，借風(fēng)雨進(jìn)行短距離傳播，靠苗木或種條調(diào)運(yùn)實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)距離傳播。病組織內(nèi)的菌絲體在適宜條件下不斷擴(kuò)展，形成危害。

3.2 發(fā)病條件

氣溫 春天氣溫達(dá)15℃時(shí)病菌開(kāi)始萌發(fā)，5月上中旬開(kāi)始擴(kuò)展，6月病斑擴(kuò)展加快。在一年中有春秋兩個(gè)快速擴(kuò)展期，夏季溫度高時(shí)病斑擴(kuò)展減緩。該病擴(kuò)展快慢、出現(xiàn)的季節(jié)，在我國(guó)不同梨產(chǎn)區(qū)有差異。黃窈軍等[4]指出，在浙江省桐廬病斑于3―4月擴(kuò)展最快，4―5月逐漸停止擴(kuò)展。王煥英等[5]指出，在河北省泊頭病斑于5―6月擴(kuò)展較快，當(dāng)年秋季即可形成大型病灶斑塊。黃冬華等[7]指出，在江西省贛東病斑于3月下旬開(kāi)始擴(kuò)展，4―5月擴(kuò)展最快。在武威發(fā)病時(shí)期為6―8月。何彩等[10]研究指出，梨胴枯病菌在PDA培養(yǎng)基中表現(xiàn)為:在5℃和40℃條件下菌落不生長(zhǎng)，在10℃和35℃下生長(zhǎng)速度很慢，適宜生長(zhǎng)的溫度是25~28℃。高溫高濕有利于發(fā)病。

栽培條件 病菌有潛伏侵染特性，發(fā)病程度與樹(shù)勢(shì)密切相關(guān)，樹(shù)勢(shì)弱發(fā)病重；土壤瘠薄、肥水供應(yīng)不合理、化肥施入不均衡、負(fù)載過(guò)量的梨園發(fā)病重；修剪過(guò)重、傷口過(guò)多的梨樹(shù)發(fā)病重。趙成范等[3]指出，樹(shù)體是否發(fā)病與幼樹(shù)主干凍害密切相關(guān)。

品種 在日本梨中，‘幸水’易感病，‘豐水’‘新水’次之，‘長(zhǎng)十郎’‘二十世紀(jì)’等較抗病[11]。在我國(guó)不同梨產(chǎn)區(qū)的不同品種發(fā)病輕重也有差異。趙成范等[3]指出，吉林省延吉主要發(fā)生在‘蘋果梨’上；黃窈軍等[4]指出，在浙江省桐廬‘黃花’梨比‘新世紀(jì)’梨發(fā)病重；黃冬華等[7]指出，在江西省贛東‘翠玉’‘初夏綠’‘翠冠’發(fā)病重，‘黃花’‘清香’‘晚秀’發(fā)病輕或不發(fā)病。

4 防控措施

4.1 做好檢疫

在進(jìn)行苗木和種條調(diào)運(yùn)時(shí)須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)帶病苗木和種條禁止運(yùn)出，并及時(shí)銷毀。

4.2 加強(qiáng)梨園管理

施肥應(yīng)做到氮、磷、鉀肥比例適當(dāng)。增加有機(jī)肥施入量，以動(dòng)物糞便作有機(jī)肥時(shí)要經(jīng)過(guò)腐熟。加強(qiáng)土壤水分管理，避免發(fā)生旱、澇災(zāi)害。適時(shí)疏花疏果，達(dá)到合理負(fù)載。結(jié)合冬季修剪剪除病枝，并及時(shí)帶出園外銷毀。冬季修剪造成的大傷口(直徑在2cm以上)要及時(shí)涂抹殺菌劑。

4.3 化學(xué)藥劑防控

萌芽前用藥 萌芽前7~10 d樹(shù)上噴施5°Be石硫合劑1次，枝干全噴。仔細(xì)查找病斑，用刀在病斑處劃道，深達(dá)木質(zhì)部，然后涂藥，可選腐殖酸銅原液、9281藥劑5倍液或5°Be石硫合劑。

生長(zhǎng)期用藥 幼果套袋前、麥?zhǔn)涨昂筒晒髽?shù)上各噴1次殺菌劑，枝葉全噴，注意交替用藥?？蛇x擇50%多菌靈可濕性粉劑、70%甲基托布津可濕性粉劑、75%百菌清可濕性粉劑、80%代森錳鋅可濕性粉劑，一般使用濃度是700~800倍液。40%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑3 000~4 000倍、430 g/L戊唑醇懸浮劑3 000~4 000倍、40%氟硅唑乳油8000~10000倍液。