李明陽(yáng) 趙海東 張文福

1 Hp 影響Wnt/β-catenin 信號(hào)通路的機(jī)制探討

胃癌是一種起源于胃上部皮膚的惡性腫瘤。在我國(guó),胃癌的發(fā)病率僅次于肺癌,死亡率居第三位。全球每年約有120 萬(wàn)胃癌新發(fā)病例,其中中國(guó)約占40%。早期胃癌在中國(guó)的比例很低,只有20%左右,發(fā)現(xiàn)時(shí)大多處于晚期,總體5 年生存率不到50%。近年來(lái),隨著胃鏡檢查的普及,早期胃癌所占率逐步增加,而且,它已經(jīng)威脅到了人類的健康,而導(dǎo)致胃癌最重要的因素是幽門螺桿菌(Hp)感染,全世界80%的胃癌都跟Hp 感染有關(guān),胃癌Ⅰ類致癌因子在1994 年就已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織(WHO)定位,另外Hp 感染患者發(fā)生胃癌的風(fēng)險(xiǎn)是非感染患者的4～6 倍［1-3］。目前中晚期胃癌治療的方法還是以外科及放化療為主的綜合治療,但是,大多數(shù)患者中,無(wú)論是保守治療還是通過(guò)手術(shù)治療,其效果都不太理想,因此,尋找胃癌發(fā)生的關(guān)鍵因素,運(yùn)用中醫(yī)藥參與改善患者的臨床癥狀和預(yù)后是目前可以探討的方法之一。胃癌的發(fā)生方式通常包括慢性淺表性胃炎、腸上皮化生、正常胃黏膜、慢性萎縮性胃炎、增生和胃癌。其與腫瘤基因腫瘤抑制基因失活、過(guò)活化或者是調(diào)控失敗,凋亡和抗凋亡基因表達(dá)失衡等。從現(xiàn)在研究來(lái)看,Fas/Fas 配體、Notch、c-Jun 氨基末端激酶、核因子-κB、Wnt 等與細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)有關(guān)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和胃癌的發(fā)生、發(fā)展是有關(guān)的。調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等生理活動(dòng)的關(guān)鍵信號(hào)其中之一就是Wnt 通路。經(jīng)典的Wnt/β-catenin 途徑是配體蛋白與LDL 受體相關(guān)蛋白5/6 和卷曲相關(guān)蛋白結(jié)合在細(xì)胞膜表面形成三聚體。抑制Axin、GSK-3β、腺瘤性息肉病(Adenomatous polyposis coli)和腺瘤性息肉病(Adenomatous polyposis coli)的活性。APC 基因降解復(fù)合物與β-catenin 的穩(wěn)定結(jié)合抑制了β-catenin 的降解。β-catenin 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核后與T 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子/淋巴增強(qiáng)子相互作用,激活下游靶基因。Wnt/β-catenin 信號(hào)通路激活的核心是β-catenin 在細(xì)胞質(zhì)中積累,然后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核,通路成分的任何改變都可能導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常。與β-catenin 結(jié)合的基因組成的降解復(fù)合物的穩(wěn)定性抑制了β-catenin 的降解。在正常的胃上皮細(xì)胞中,所有細(xì)胞中基本都有Wnt 配體蛋白,但Wnt 信號(hào)通路只是在胃窩底部被激活。這是因?yàn)榧羽つぶ械某衫w維細(xì)胞可以分泌特定的壁層和基底反應(yīng)蛋白(RSPOs)［4-6］。RSPOs 是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的穩(wěn)定Wnt 受體和增強(qiáng)Wnt/β-catenin 信號(hào)通路的分泌蛋白家族。生理上,Wnt/β-catenin 信號(hào)通路激活E3 泛素連接酶和下游靶基因,介導(dǎo)配體/卷曲蛋白/LDL 受體相關(guān)蛋白5/6 三聚體泛素的內(nèi)吞和降解,下調(diào)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。這種負(fù)反饋是平衡Wnt 信號(hào)的重要機(jī)制。然而,RSPOs與富亮氨酸重復(fù)G 蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合成二聚體,消除了RNF43/ ZnRF3 對(duì)Wnt/β-catenin 通路的抑制,導(dǎo)致通路的持續(xù)激活。因此,可以認(rèn)為Wnt/β-catenin信號(hào)通路是維持胃內(nèi)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵信號(hào)通路,Wnt/β-catenin 信號(hào)通路的激活是胃癌發(fā)生的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素。參與腫瘤細(xì)胞周期的調(diào)控,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,在上皮細(xì)胞的發(fā)育、侵襲轉(zhuǎn)移乃至胃癌的抵抗中發(fā)揮重要作用。Hp 感染在一定程度上激活Wnt/β-catenin 信號(hào)通路。加速胃癌的發(fā)生進(jìn)展和術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)率,在很大程度上決定了胃癌患者的預(yù)后。

2 胃癌分型探討

有關(guān)胃癌,在古代醫(yī)書中,《歸章遠(yuǎn)行》中就有記載“腫瘤”一詞,《黃帝內(nèi)經(jīng)》中有“噎膈、反胃、膈塞”類似于癌癥的癥狀,如記載“隋,巢元芳”之致病證,分別論述了“祛塊”、“積塊”、“食扼”、“反胃”等疾病,其中包括癌癥的癥狀,疾病的病因病機(jī)《黃帝內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為,主要是情緒失調(diào)、內(nèi)客感冒?！短K文·同論真假論》中說(shuō):“膈完全閉鎖,上下梗阻為突憂之病。”《藏經(jīng):潰瘍與巫果論》認(rèn)為“臟腑含毒而不流”是致癌的重要原因。按照中醫(yī)辨證分型原則,中醫(yī)內(nèi)科學(xué)將胃癌分為：肝胃不和、瘀毒內(nèi)結(jié)、痰濕凝滯、脾胃虛寒、胃熱傷陰五個(gè)證型,中晚期胃癌主要是痰濕凝滯、瘀毒內(nèi)結(jié)型,而瘀毒內(nèi)結(jié)是其發(fā)展的最終結(jié)果,多發(fā)生在臟腑、陰陽(yáng)、氣血失調(diào)的基礎(chǔ)上,在氣虛、外邪侵入、痰、濕、氣、瘀、毒等中風(fēng)的基礎(chǔ)上,隨著時(shí)間的推移,逐漸積累。其臨床特點(diǎn)是胃包塊,表面粗糙、堅(jiān)硬如石,并伴有臟腑虛證的表現(xiàn)。且由于胃癌患者全身狀況差,加之放化療副作用較大,因此探索有效的中醫(yī)藥診治手段對(duì)于瘀毒內(nèi)結(jié)型等中晚期胃癌患者的預(yù)后有重要的臨床意義。而中醫(yī)藥在改善胃癌患者臨床癥狀、提高生存質(zhì)量、延緩腫瘤的進(jìn)展、減輕化療的毒副作用、減少耐藥、減少?gòu)?fù)發(fā)率等多方面發(fā)揮著重要作用。

3 李可三畏湯治療瘀毒內(nèi)結(jié)型中晚期胃癌機(jī)制

李可老中醫(yī)認(rèn)為：本病當(dāng)屬奇經(jīng)八脈病變,緣由正氣先虛,痰濕內(nèi)生、寒傷督脈,真陽(yáng)失運(yùn),日久,濁陰僭居陽(yáng)位,濕痰死血,深伏督脈要沖,而成有形癥積,本病因虛成實(shí),治當(dāng)養(yǎng)正消積,扶正溫陽(yáng)為先,遵傷寒、金匱之理,邪之來(lái)路即邪之去路。故李可老中醫(yī)在此原則下擬定三畏湯治療瘀毒內(nèi)結(jié)型中晚期胃癌療效顯著,藥物組成：紅參、五靈脂、公丁香、郁金、肉桂、赤石脂。此方由三對(duì)畏藥相伍,相畏相成,功能“益氣活血、啟脾進(jìn)食、溫腎止久瀉、久帶、消寒脹,寬胸利氣,定痹散結(jié)消癥”,方中人參與五靈脂均氣味甘、無(wú)毒；人參其性微寒,歸脾、肺、心、腎四經(jīng)；《神農(nóng)本草經(jīng)》曰：主要補(bǔ)五臟,鎮(zhèn)定精神,安定靈魂,止驚,消邪,亮眼喜益。五靈脂性溫,《本草衍義補(bǔ)遺》曰：能行血止血。二藥相配,人參得五靈脂補(bǔ)氣而不滯邪,五靈脂配人參祛瘀而不傷正,一補(bǔ)一通,用于虛中夾瘀之癥,具有益氣活血,啟脾進(jìn)食,化積消癥,化瘀定痛之效。其中公丁香氣味辛而性溫,《雷公炮制藥性解》曰：入脾、胃、肺、腎四經(jīng)。《日華子本草》記載：“治口氣,反胃……消痃癖,除冷勞”。郁金氣味苦而性寒,《唐本草》記載：“主血積,下氣,生肌止血,破惡血,血淋,尿血,金瘡”。二者均無(wú)毒,相配伍具有溫通理氣,開郁止痛,寬胸利膈,消脹除滿,啟脾醒胃之功。肉桂,《玉楸藥解》云：“氣味甘、辛,氣香,性溫,入足厥陰肝經(jīng),溫肝暖血,破瘀消癥,退腰腿寒濕,驅(qū)腹脅疼痛”；《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“主百病,養(yǎng)精神,和顏色,為諸藥先聘通使”。赤石脂氣味甘性平,無(wú)毒,陳修園云“赤石脂氣平稟金氣,味甘得土味,手足太陰藥也……石脂具濕土之質(zhì),而有燥金之用,所以主之?！倍幭嗪?能益陽(yáng)消陰,宣導(dǎo)百藥,溫中定痛,收斂止瀉,活血消腫。三對(duì)畏藥相配伍,相畏相成,具有相得益彰之功,入煎劑,安全無(wú)副作用［7-9］。

4 李可三畏湯相畏相需藥理研究

根據(jù)現(xiàn)代中藥藥理研究：①人參的主要成分為人參皂苷,并含有人參多糖、單糖、寡糖。此外,還含有多肽、氨基酸、揮發(fā)油等?！叭藚⒃碥湛梢种艫DP、凝血酶、AA 誘導(dǎo)的血小板聚集和抑制凝血酶誘導(dǎo)的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,從而抑制血栓形成?！薄叭藚⒃碥蘸腿藚⒍嗵鞘侨藚⑻岣呙庖吖δ艿挠行С煞?。”“人參皂苷Ro 可明顯抑制乙酸和角叉萊膠引起的大鼠足腫脹,降低炎癥組織中的羥脯氨酸濃度,對(duì)急慢性炎癥有明顯的抑制作用?！惫嗜藚⒕哂锌寡?、增強(qiáng)免疫功能、抗炎及抗腫瘤等多種作用。②五靈脂中含多量的樹脂、尿素、尿酸及維生素A 類物質(zhì)。五靈脂水提物可抑制血小板聚集,降低全血、血漿粘度；乙酸乙酯提取物具有抗炎作用?！拔屐`脂與人參配伍,血瘀模型動(dòng)物的全血粘度、血細(xì)胞比容和紅細(xì)胞電凝時(shí)間均有明顯改善。臨床應(yīng)用：人參五苓聯(lián)合治療胃潰瘍、慢性胃炎等。此外,臨床上兩者相配用于治療腫瘤,對(duì)小鼠恩氏腹水癌細(xì)胞(EBC)有抑制作用,并能延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間,且效果明顯優(yōu)于人參單用。③公丁香含揮發(fā)油,油中主要成分是丁香油酚、乙酰丁香油酚；其水提取物、醚提取物均有鎮(zhèn)痛抗炎作用；其煎劑對(duì)葡萄球菌、鏈球菌及大腸桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌等有抑制作用；另有抗血小板聚集、抗凝、抗血栓形成等作用。④郁金含有揮發(fā)油、姜黃素、姜黃酮等化學(xué)成分。入煎劑可降低全血粘度,抑制血小板聚集,醇提物可降低血漿纖維蛋白含量。此外,郁金能抑制很多種細(xì)菌,特別是革蘭氏陰性菌比革蘭氏陽(yáng)性菌更受抑制。還具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用。⑤肉桂中含有揮發(fā)油(桂皮油),主要成分為桂皮醛,此外還有肉桂醇、肉桂酸等。其中肉桂提取物及桂皮醛有抗血小板聚集、抗凝血酶作用；肉桂酸具有使人肺腺癌細(xì)胞逆轉(zhuǎn)的作用；桂皮油對(duì)革蘭陰性菌及陽(yáng)性菌有抑制作用。⑥赤石脂主要含四水硅酸鋁,并含相當(dāng)多的氧化鐵等物質(zhì)。這些物質(zhì)可以保護(hù)胃腸黏膜,吸附消化道內(nèi)的有毒物質(zhì)、細(xì)菌毒素及代謝產(chǎn)物,以免胃腸道出血,顯著縮短家兔血漿再鈣化時(shí)間［10-12］。

雖然三畏湯臨床應(yīng)用廣泛,但目前對(duì)其是否具有抗Hp 感染、抗凝血、增強(qiáng)免疫力及抗腫瘤等作用尚無(wú)研究。而我們通過(guò)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐證實(shí),該方用于瘀毒內(nèi)結(jié)的惡性腫瘤及放化療患者,具有增效減毒,祛瘀散結(jié),改善患者惡病質(zhì),防治腫瘤復(fù)發(fā)的作用。本課題擬研究三畏湯是否影響Hp 從而參與瘀毒內(nèi)結(jié)型胃癌Wnt/β-catenin 信號(hào)通路的調(diào)節(jié),為該方治療胃癌提供參考依據(jù)。