黃 鑫，劉婷婷，劉峻池

（南京市畜牧獸醫(yī)站，江蘇 南京 210000）

0 引言

傳染性支氣管炎和傳染性喉氣管炎是在雞的養(yǎng)殖過(guò)程中非常常見(jiàn)的兩種疾病，極大地危害了雞群的健康，進(jìn)而造成養(yǎng)殖戶的損失，為了更好地區(qū)分雞傳染性支氣管炎和雞傳染性喉氣管炎，我們從病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化和診斷技術(shù)這五個(gè)方面對(duì)兩種疾病進(jìn)行了比較。

1 病原學(xué)

1.1 傳染性支氣管炎

該病來(lái)自于冠狀病毒科冠狀病毒屬的傳染性支氣管炎病毒所引起，是一種急性以及高度接觸性的呼吸道傳染病，傳染性支氣管炎病毒擁有眾多不同的血清型，繼而引發(fā)出不同癥狀的傳染性支氣管炎。該種病毒的生命力并不算很強(qiáng)，滅活只需要在56℃環(huán)境下作用15分鐘即可，像2%氫氧化鈉溶液這類一般的消毒藥也同樣可以殺死該病毒。

1.2 傳染性喉氣管炎

該病由基因組為線性雙股DNA的皰疹病毒科的傳染性喉氣管炎病毒引起，是一種高度接觸性的上呼吸道感染疾病，傳染性喉氣管炎病毒僅有一個(gè)血清型，但根據(jù)病毒的毒力強(qiáng)弱的不同，依然能夠分為急性型以及溫和型。在60℃左右的生理鹽水中作用15min即可讓其失去病毒活性，若想殺死該病毒，使用普通的化學(xué)性消毒劑就可以實(shí)現(xiàn)。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染性支氣管炎

該病一般情況下只會(huì)對(duì)雞造成感染，包括各個(gè)年齡段和各個(gè)品種，但其中雛雞發(fā)病率和病死率都很高。傳染源主要為發(fā)病雞、痊愈后的帶毒雞和被污染的飼料與水等。病毒主要通過(guò)呼吸道排出，空氣與飛沫都可以作為傳播媒介感染易感雞群。該病的發(fā)生季節(jié)性并不明顯，不過(guò)春、冬季寒冷天氣時(shí)最容易發(fā)生。

2.2 傳染性喉氣管炎

雞作為該病最主要的自然宿主健康最容易受到危害，育成雞最為多發(fā)且癥狀是最為典型的。傳染源參考雞傳染性支氣管炎，主要為發(fā)病雞、痊愈后的帶毒雞和被污染的飼料與水等，主要通過(guò)呼吸道、眼和消化道進(jìn)行傳播。該病毒在高溫下存活率會(huì)大大降低，所以早春、秋冬季這種寒冷天氣最容易感染，夏季就會(huì)很少發(fā)生感染。康復(fù)之后的雞群會(huì)獲得較強(qiáng)保護(hù)力，但仍然是會(huì)帶毒以及排毒的。

3 臨床癥狀

3.1 傳染性支氣管炎

雞傳染性支氣管炎的臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，一方面文章中提到傳染性支氣管炎病毒具有眾多不同血清型而且變異較快，這就導(dǎo)致復(fù)雜多變的臨床癥狀；另一方面與眾多致病因子混合感染有關(guān)。該病有呼吸道型以及腎病變型這兩種病型。

3.1.1 呼吸道型

在呼吸道型中，病雞往往會(huì)忽然發(fā)病并出現(xiàn)呼吸道癥狀，然后迅速地波及整個(gè)雞群。雛雞表現(xiàn)為精神萎靡，食欲減退，伴有伸頸甩頭、張口呼吸和咳嗽等癥狀，呼吸時(shí)有啰音，個(gè)別雞還會(huì)出現(xiàn)鼻竇腫大，流鼻液和眼淚。成年雞的呼吸道癥狀表現(xiàn)相對(duì)較為輕微，癥狀主要表現(xiàn)在產(chǎn)蛋性能上，體現(xiàn)在產(chǎn)蛋量變少，畸形蛋變多，蛋品質(zhì)量變差等各個(gè)方面，蛋雞即使康復(fù)以后，產(chǎn)蛋量也很難再達(dá)到感染之前的水平。

3.1.2 腎病變型

在腎病變型中，發(fā)病初期會(huì)有著非常輕微的呼吸道癥狀或者不出現(xiàn)呼吸道癥狀，包括咳嗽、打噴嚏、甩頭、喘息等，但是非常的不明顯，在夜間可能才會(huì)相對(duì)比較明顯一些，若沒(méi)有其余的并發(fā)癥或者混合感染的明顯癥狀，很容易就會(huì)被忽視掉，待呼吸道的相關(guān)癥狀消失掉以后，患病雞群會(huì)開(kāi)始大量出現(xiàn)異常，比如精神萎靡不振、厭食、口渴和怕冷等，還會(huì)持續(xù)地排出糞便，排出糞便為白色或稀如水狀，雞群因脫水迅速消瘦，體重降低，飲水量也大大增加，病雞胸肌發(fā)紺，更甚者全身皮膚顏色發(fā)暗。死亡高峰在發(fā)病的第10～12d，死亡停止于21d之后，病死率大概為30%。

3.2 傳染性喉氣管炎

相比較于傳染性支氣管炎，傳染性喉氣管炎的臨床癥狀相對(duì)簡(jiǎn)單一些，這歸結(jié)于傳染性喉氣管炎只有一個(gè)血清型。雖然只有一個(gè)血清型，不過(guò)根據(jù)毒力的強(qiáng)弱，臨床上該病可以分為急性型和溫和型。

3.2.1 急性型

高致病性病毒株會(huì)引起急性型傳染性喉氣管炎，在發(fā)病時(shí)，雞會(huì)出現(xiàn)流淚和眼睛分泌物增多的情況，常常伴發(fā)結(jié)膜炎，鼻孔會(huì)流出半透明狀鼻液。病雞呼吸出現(xiàn)異常困難的情況，呼吸時(shí)張開(kāi)嘴巴，一般伏臥于地面，頭部和頸部向前向上伸出，身體伴隨呼吸像波浪式起起伏伏，表情極其的痛苦，精神十分的萎靡。病雞咳嗽強(qiáng)烈，咳嗽聲呈濕啰音，嚴(yán)重者會(huì)咳出干酪狀滲出物甚至咳出血痰，咳出的血痰經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)在料槽或者雞籠上，有的雞嘴角也會(huì)有血色痕跡，部分病雞會(huì)因?yàn)楹粑辣欢露霈F(xiàn)窒息性死亡，病雞死亡時(shí)姿勢(shì)多為仰臥，死后雞冠呈現(xiàn)暗紫色。

3.2.2 溫和型

低致病性病毒株會(huì)引起溫和型傳染性喉氣管炎，溫和型傳染性喉氣管炎主要侵害三十至四十日齡的雞，在發(fā)病時(shí)，癥狀比較緩和，傳播速度較慢，死亡情況也要比急性型少的多。溫和型的癥狀集中在眼部，主要是眼睛流淚和腫脹，出現(xiàn)眼結(jié)膜炎，開(kāi)始只是有泡沫性的分泌物在眼角出現(xiàn)，然后病雞不斷用爪子去抓撓眼部，這時(shí)眼睛開(kāi)始有輕度的充血癥狀，再過(guò)一兩日后開(kāi)始有眼淚流出，先是漿液性質(zhì)的然后就是膿性質(zhì)的，眼瞼也會(huì)腫脹和粘連在一起，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)失明。產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋率出現(xiàn)下降，畸形蛋數(shù)量增多。

首先，高校黨建工作者要增強(qiáng)的思想覺(jué)悟與加大理論研究力度。把馬克思列寧主義、毛澤東思想、鄧小平理論、“三個(gè)代表”重要思想、科學(xué)發(fā)展觀、習(xí)近平新時(shí)代中國(guó)特色社會(huì)主義思想作為自己的行動(dòng)指南并深入貫徹落實(shí)到實(shí)際工作和生活中去。值得格外注意的是十九大確立了習(xí)近平新時(shí)代中國(guó)特色社會(huì)主義思想，這是馬克思主義同中國(guó)的實(shí)際情況結(jié)合的再一次歷史性飛躍，是全黨的智慧結(jié)晶。為此，廣大工作者要真學(xué)真懂真用，做到理論聯(lián)系實(shí)踐，實(shí)現(xiàn)學(xué)以致用，推動(dòng)工作的最佳效果。

4 病理變化

4.1 傳染性支氣管炎

4.1.1 呼吸道型

主要病變表現(xiàn)為氣管、支氣管、鼻腔和竇內(nèi)等呼吸道系統(tǒng)有漿液性、卡他性和干酪樣滲出物，鼻竇、喉頭、氣管黏膜充血、水腫、增厚，氣囊輕度混濁、增厚。產(chǎn)蛋雞腹腔內(nèi)卵泡充血、出血、變形，出現(xiàn)液狀的卵黃物質(zhì)，如果在雛雞階段就發(fā)生了感染，那么成年之后的雞就會(huì)出現(xiàn)輸卵管發(fā)育異常，包括輸卵管長(zhǎng)度不到正常情況的一半，輸卵管的管腔會(huì)狹小以及閉塞，影響蛋雞產(chǎn)蛋。

4.1.2 腎病變型

主要表現(xiàn)為腎臟蒼白腫大出血，整個(gè)腎臟表面會(huì)出現(xiàn)斑駁的網(wǎng)線狀（花斑狀），也就是俗稱的“花斑腎”，這是由于腎小管和輸尿管擴(kuò)張，白色的尿酸鹽沉積于表面而產(chǎn)生，嚴(yán)重的病例可以在心、肝、腹部也發(fā)現(xiàn)尿酸鹽的沉積。

4.2 傳染性喉氣管炎

4.2.1 急性型

喉頭和氣管組織黏膜腫脹、充血、出血。在喉頭和氣管黏膜上有帶血黏液或者血凝塊，有的會(huì)出現(xiàn)酪狀滲出物，滲出物會(huì)使氣管管腔變窄，形成易脫落和剝離的假膜，脫落后很容易阻塞喉頭和氣管，特別是喉裂部。在干酪狀的滲出物從黏膜上脫落之后，黏膜會(huì)迅速地發(fā)生充血，出現(xiàn)輕度增厚的情況，伴隨點(diǎn)狀或者斑狀的出血以及氣管環(huán)的出血。這種點(diǎn)狀出血和黏膜充血的癥狀也會(huì)發(fā)生在鼻腔以及眼眶下竇黏膜，有些病雞會(huì)有血凝塊或干酪樣物伴隨鼻腔的滲出物一起排出。

4.2.2 溫和型

表現(xiàn)為漿液性結(jié)膜炎，結(jié)膜會(huì)出現(xiàn)充血、水腫，甚至伴有點(diǎn)狀出血，有些雞的眼瞼特別是下眼瞼出現(xiàn)腫脹，鼻腔產(chǎn)生多量黏液。

5 診斷技術(shù)

5.1 傳染性支氣管炎

根據(jù)雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)目前有病毒分離、反轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)、微量血凝抑制試驗(yàn)以及氣管環(huán)組織培養(yǎng)血清中和試驗(yàn)這四種診斷方法，以下就其中的反轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)作簡(jiǎn)單的介紹。

首先進(jìn)行樣品的采集，如果是呼吸道型的病例，要將氣管作為采樣位置采集滲出物，剛撲殺的病雞話也可采集支氣管和肺組織；如果是腎病變型和產(chǎn)蛋下降的病雞，要采集腎臟或輸卵管，病料要保持新鮮。

向滅菌過(guò)的0.85%的生理鹽水中加入組織樣品如肺臟或腎臟等1～3g進(jìn)行研磨，研磨后制成5～10倍的懸浮液，在冷凍融化2次～3次后，離心取上清液用于核酸抽提；棉拭子在充分的擰干后除去，取0.5ml樣品液離心后取上清液用于核酸抽提。

在滅菌的1.5ml離心管中放入100μl處理好的上清液，實(shí)驗(yàn)設(shè)立陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，其中陽(yáng)性對(duì)照為傳染性支氣管炎病毒M41株陽(yáng)性病毒液，將900μl冰冷的裂解液分別加入待抽提的樣品和陰陽(yáng)對(duì)照中，劇烈混合15s，然后在室溫下放置5min；把200μl的三氯甲烷加入進(jìn)去后顛倒混勻2次，再劇烈混合10s，4℃以下離心取500μl上層液體放入新拿取的1.5ml滅菌離心管，將500μl異丙醇加入進(jìn)去，在4℃放置10min后離心，將上清液小心地棄去，加入1ml75%乙醇溶液，輕輕緩慢的上下顛倒兩次，離心棄去上清后風(fēng)干5～10min，隨即獲得所需要的RNA。

在0.5ml滅菌PCR管中依次加入5×AMV緩沖液2μl，10mmol/L的dNTPs 0.5μl，反轉(zhuǎn)錄引物20pmol，核糖核酸酶抑制劑10 U，反轉(zhuǎn)錄酶AMV2.5 U，總體積為25μl，剩余部分用無(wú)RNase水補(bǔ)齊；用配制好的反轉(zhuǎn)錄混合液重新懸浮抽提制備得到的RNA，在室溫環(huán)境下放置10min；42℃水浴1h再冰浴兩分鐘即可得到用于PCR的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。

將18.5μl無(wú)RNase水，2.5μl的10×PCR緩沖液，2μl的2.5mmol/L的dNTPs，1.5μl的4PS PCR混合引物，0.5μl2.5U Taq酶和2微升反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物加入0.5ml滅菌PCR管中混勻。

以94℃3min、94℃40s、53℃30s、72℃30s，30個(gè)循環(huán)，72℃7min的條件在PCR儀中運(yùn)行，同時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)對(duì)照。反應(yīng)結(jié)束后每個(gè)樣品吸取5μl進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，參照選擇標(biāo)準(zhǔn)100 bp DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)物，75V恒壓30min，在紫外燈下進(jìn)行觀察。

若陽(yáng)性對(duì)照在740 bp 和290 bp 處分別有DNA條帶，陰性對(duì)照無(wú)相應(yīng)條帶，則實(shí)驗(yàn)成立；待檢測(cè)樣品若出現(xiàn)相應(yīng)條帶，或者僅單獨(dú)在740 bp 和290 bp 處出現(xiàn)條帶，則可判為陽(yáng)性。

5.2 傳染性喉氣管炎

根據(jù)雞傳染性喉氣管炎診斷技術(shù)的農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，可以通過(guò)病毒分離、血清中和試驗(yàn)、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和熒光定量PCR等技術(shù)來(lái)對(duì)傳染性喉氣管炎來(lái)進(jìn)行診斷和檢測(cè)，以下就其中的熒光定量PCR技術(shù)來(lái)進(jìn)行簡(jiǎn)要的介紹。

5.2.1 熒光定量PCR

在加入了500μlDNA提取裂解液的1.5ml離心管中分別加入100μl待檢樣品、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，顛倒混勻，在55℃進(jìn)行裂解30min，將按照25：24：1比例配置好的酚、氯仿和異戊醇等體積加入，混勻后靜置10min，離心取上清加入2倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后可見(jiàn)絮狀DNA，-20℃環(huán)境下沉淀30min離心，用75%乙醇洗滌棄去上清的部分繼續(xù)離心，干燥之后加入20μl無(wú)核酸酶水即得到需要的DNA。也可以使用具有同樣效果的DNA提取試劑和方法，比如自動(dòng)化的核酸提取儀以及配套的提取試劑進(jìn)行提取。

按照工作濃度10pmol/μl去稀釋引物以及探針 ，根據(jù)熒光定量PCR的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反應(yīng)體系的配制，將上下游引物各1μl和探針0.5μl加入PCR管中，分別在PCR管中加入5微升的雞傳染性喉氣管炎病毒DNA和超純水作為陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，其余PCR管中加入待檢測(cè)樣品的DNA模板5μl。在熒光定量PCR儀中設(shè)置反應(yīng)程序，95℃預(yù)變性5min，然后是40個(gè)循環(huán)的95℃10s和60℃30s，在60℃時(shí)收集熒光信號(hào)。

當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增曲線有明顯對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期并且Ct值≤35，且陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線無(wú)對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期，則試驗(yàn)成立。在試驗(yàn)成立條件下，若樣品Ct值≤35且有標(biāo)準(zhǔn)S型擴(kuò)增曲線則為陽(yáng)性；若樣品無(wú)Ct值或者Ct值＞38且沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線則為陰性；若樣品35＜Ct值≤38，且有標(biāo)準(zhǔn)S型擴(kuò)增曲線則為可疑，重新檢測(cè)后若結(jié)果不變則為陽(yáng)性，否則為陰性。