張 尊綜述 孫圣榮審校

乳腺癌是最常見的惡性腫瘤，也是全世界女性癌癥相關(guān)死亡的主要原因[1]。盡管在免疫靶向治療方面取得了重大進(jìn)展，但是乳腺癌患者的整體預(yù)后仍然有待提高，并且尚且缺乏早期診斷，預(yù)警遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和藥物耐藥性的檢測標(biāo)志物[2]。一些研究表明，長非編碼RNA(Long Noncoding RNAs，lncRNAs)可以影響免疫細(xì)胞的分化和功能以及腫瘤的進(jìn)展[3]。本文綜述了lncRNAs對(duì)乳腺癌免疫治療反應(yīng)的潛在預(yù)測價(jià)值。

1 lncRNAs概述

編碼RNA(ncRNA)轉(zhuǎn)錄物，大多數(shù)在1 000到10 000個(gè)核苷酸之間。lncRNA的生物發(fā)生與mRNA有一些相似之處，由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄，之后大部分轉(zhuǎn)錄物被剪接。但是，與mRNAs主要定位于細(xì)胞漿不同，大多數(shù)lncRNAs定位于細(xì)胞核中，部分以循環(huán)lncRNAs形式出現(xiàn)，lncRNAs在細(xì)胞核的表達(dá)水平較低，并且lncRNA表達(dá)模式具有細(xì)胞類型特異性。lncRNAs不編碼肽或蛋白質(zhì)，通過產(chǎn)生二級(jí)和三維結(jié)構(gòu)，發(fā)揮雙重RNA和蛋白質(zhì)樣作用，與多種分子相互作用，包括轉(zhuǎn)錄因子、成熟mRNA、染色質(zhì)修飾復(fù)合物、RNA結(jié)合蛋白、DNA、新生RNA轉(zhuǎn)錄物、microRNA和染色質(zhì)，主要在轉(zhuǎn)錄、翻譯和翻譯后水平調(diào)節(jié)下游靶基因的表達(dá)水平，從而廣泛參與細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[4]。lncRNAs的功能發(fā)揮涉及各種機(jī)制，包括介導(dǎo)染色體間的相互作用、充當(dāng)內(nèi)源性RNA的海綿、調(diào)節(jié)mRNA代謝和表觀遺傳修飾等方式，通過改變靶點(diǎn)基因的表達(dá)而發(fā)揮相應(yīng)的作用。因此，lncRNA表達(dá)水平的變化在各種疾病發(fā)生、發(fā)展過程均發(fā)揮重要的作用，包括乳腺癌[5]。

2 乳腺癌發(fā)生發(fā)展與免疫微環(huán)境

乳腺癌是女性最常見的癌癥，也是全球第二大癌癥死亡原因[6]。免疫靶向治療改善了乳腺癌患者的預(yù)后，但仍有許多患者進(jìn)展為轉(zhuǎn)移性疾病且很難治愈，這可能是因?yàn)槟壳笆褂玫拇蠖鄶?shù)抗癌藥物主要針對(duì)癌細(xì)胞。事實(shí)上， 乳腺癌不僅由腫瘤細(xì)胞組成，而且還由不同細(xì)胞類型組成的腫瘤微環(huán)境(Tumor Microenvironment， TME)，包括內(nèi)皮細(xì)胞、幾種基質(zhì)細(xì)胞和免疫細(xì)胞。構(gòu)成TME的細(xì)胞通過細(xì)胞間接觸或細(xì)胞外基質(zhì)復(fù)合物和形成微環(huán)境的可溶性因子與癌細(xì)胞進(jìn)行復(fù)雜的相互作用。癌細(xì)胞與TME之間的持續(xù)動(dòng)態(tài)相互作用可以促進(jìn)或阻礙癌癥進(jìn)展。特別是腫瘤浸潤性免疫細(xì)胞通過消除免疫原性腫瘤細(xì)胞來防止腫瘤進(jìn)展，但與此同時(shí)，它們可以促進(jìn)腫瘤對(duì)治療的抵抗，形成腫瘤免疫原性，并選擇能夠逃避免疫反應(yīng)的耐藥腫瘤克隆。免疫療法的引入改善了許多乳腺癌患者的預(yù)后，然而來自診所的數(shù)據(jù)強(qiáng)調(diào)，免疫TME的組成對(duì)其有很大影響。在腫瘤的進(jìn)化史中，腫瘤細(xì)胞與TME中的細(xì)胞之間建立了復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的通信，形成了一些腫瘤特征，如持續(xù)增殖信號(hào)、避免免疫破壞、誘導(dǎo)血管生成以及激活侵襲和轉(zhuǎn)移。重要的是，不同類型的免疫細(xì)胞發(fā)揮著特定的作用，與癌細(xì)胞建立了強(qiáng)大的串?dāng)_網(wǎng)絡(luò)。從這個(gè)意義上說，由先天性和適應(yīng)性免疫細(xì)胞群共同構(gòu)成所謂的乳腺癌免疫微環(huán)境(Breast Cancer Immune Microenvironment，BCIM)的腫瘤免疫編輯是腫瘤進(jìn)展的重要決定因素。免疫編輯過程中涉及免疫抑制細(xì)胞和免疫刺激細(xì)胞。一些證據(jù)表明，這些細(xì)胞在BCIM中的存在對(duì)乳腺癌進(jìn)展和治療反應(yīng)有顯著影響。特別是，通過免疫刺激細(xì)胞(如一些巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞、固有淋巴細(xì)胞(ILC)、樹突狀細(xì)胞(DC)和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤腫瘤對(duì)腫瘤控制至關(guān)重要[7]。然而，這些細(xì)胞產(chǎn)生的抗癌免疫反應(yīng)被免疫抑制細(xì)胞的作用所抑制，例如骨髓源性抑制細(xì)胞(MDSC)、肥大細(xì)胞(MC)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和2型極化腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(M2樣TAM)，這些細(xì)胞與發(fā)育中的TME有內(nèi)在聯(lián)系。了解BCIM中存在的主要免疫亞群，特別關(guān)注它們對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響，以及它們對(duì)當(dāng)前免疫療法反應(yīng)的影響，對(duì)于我們可能通過恢復(fù)免疫抑制以增強(qiáng)抗癌免疫反應(yīng)的治療策略很有幫助。

3 lncRNAs調(diào)控乳腺癌免疫微環(huán)境機(jī)制研究

3.1 lncRNAs在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用

在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用的lncRNAs主要有HOTAIR、ARNILA、MALAT1、HULC和AWPPH等。例如，HOTAIR(Hox Transcript Antisense Intergenic RNA，HOTAIR)是研究最為明確的lncRNA，它是一個(gè)剪接的、多聚腺苷酸化的轉(zhuǎn)錄本，包含6個(gè)外顯子，長度約為2200個(gè)核苷酸，定位在染色體12q13.13[8]。HOTAIR表達(dá)水平上調(diào)時(shí)能促進(jìn)多種腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，包括胰腺癌，結(jié)直腸、肝細(xì)胞、胃、肺、卵巢和基底細(xì)胞癌，并且與患者預(yù)后差相關(guān)。HOTAIR誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲，是第一個(gè)作為轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的lncRNA[9]。在乳腺癌中，癌組織以及血液中的HOTAIR表達(dá)水平上調(diào)和乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切的聯(lián)系[10]。此外，HOTAIR上調(diào)的乳腺癌患者往往生存率較低。由于lncRNAs在體液中高度穩(wěn)定，檢測乳腺癌患者血液樣本中的HOTAIR可以提供預(yù)后信息，并有助于監(jiān)測治療反應(yīng)。上調(diào)的lncRNA ARNILA作為致癌lncRNA在乳腺癌局部區(qū)域浸潤和轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用，它可以通過競爭性結(jié)合miR-204，釋放SOX4，促進(jìn)EMT和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散。相反的，ARNILA的沉默有效地抑制了癌癥的侵襲、遷移和轉(zhuǎn)移[11]。

抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲遷移的lncRNAs主要有RMST、NEF和Airn。與癌旁組織相比，lncRNA RMST在乳腺癌組織中的表達(dá)水平非常低。RMST主要定位于細(xì)胞質(zhì)，可以通過調(diào)控細(xì)胞質(zhì)中的mRNA或蛋白發(fā)揮其生物學(xué)功能。RMST的過表達(dá)使TNBC細(xì)胞阻滯在G0/G1期，轉(zhuǎn)染RMST的細(xì)胞遷移能力較低，表明RMST阻止了乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲[12]。

3.2 lncRNAs調(diào)控乳腺癌免疫微環(huán)境免疫細(xì)胞

免疫細(xì)胞，如T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和髓樣細(xì)胞等，受到lncRNAs相關(guān)途徑的調(diào)節(jié)從而影響乳腺癌免疫的生物作用及機(jī)制。

3.2.1 CD8+T細(xì)胞：在突變衍生的腫瘤抗原中， MHC-I類復(fù)合物是以蛋白的形式存在于癌細(xì)胞膜上，并介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞被細(xì)胞毒性CD8+T淋巴細(xì)胞識(shí)別、殺死。在抗原肽合成過程中， 抗原在細(xì)胞質(zhì)蛋白酶體中被降解，這個(gè)降解的抗原隨后被輸送到細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中與MHC I類分子結(jié)合，經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體修飾后并被呈遞到細(xì)胞表面。腫瘤中失調(diào)的抗原呈遞機(jī)制可能促進(jìn)癌細(xì)胞逃逸免疫監(jiān)視。

據(jù)報(bào)道，三陰性乳腺癌癌組織中LINK-A(一種組織特異性lncRNA)的表達(dá)高于非TNBC組織。Hu等[13]證明，在基底樣乳腺癌中，LINK-A的表達(dá)與APC和CD8+T細(xì)胞的豐度呈負(fù)相關(guān)，這表明LINK-A與免疫抑制之間存在正相關(guān)性。在轉(zhuǎn)基因MMTV-Tg(LINK-A)小鼠模型中，LINK-A作為致癌lncRNA發(fā)揮作用，并啟動(dòng)轉(zhuǎn)移性乳腺腫瘤，其表型與人類TNBC相似。此外，抗原肽負(fù)載復(fù)合物(PLC)對(duì)MHC I復(fù)合體的穩(wěn)定和細(xì)胞呈現(xiàn)至關(guān)重要。通過抑制性GPCRs/PKA途徑，LINK-A能促進(jìn)多泛素化介導(dǎo)的降解PLC元件和腫瘤抑制因子(Rb和p53)的檢測。在腫瘤治療中，使用LINK-A或GPCR的鎖定核酸(LNA)體內(nèi)拮抗劑增加了MHC I類復(fù)合體和PLC組件的穩(wěn)定性。

3.2.2 Trg細(xì)胞：Ni等[14]對(duì)40對(duì)乳腺癌患者標(biāo)本和正常組織樣本進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中，CD3+T細(xì)胞大多數(shù)是γδT1細(xì)胞；進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)CD73+γδT1細(xì)胞是乳腺癌中主要的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)群體，并且其在外周血中的發(fā)現(xiàn)率也與腫瘤負(fù)擔(dān)有關(guān)。此外，CD73+γδT1細(xì)胞通過生成腺苷發(fā)揮免疫抑制作用。乳腺癌細(xì)胞以非接觸方式調(diào)節(jié)γδT細(xì)胞上CD73的表達(dá)。微陣列分析和功能實(shí)驗(yàn)表明，乳腺癌細(xì)胞源性的lncRNA-SNHG16可以上調(diào)Vδ1 T細(xì)胞中CD73的表達(dá)。SNHG16作為ceRNA，通過吸附miR-16-5p，導(dǎo)致其靶基因SMAD5的表達(dá)降低，并導(dǎo)致TGF-β1/SMAD5通路增強(qiáng)，從而上調(diào)Vδ1 T細(xì)胞中CD73的表達(dá)。這項(xiàng)研究結(jié)果表明，乳腺癌衍生的外源性SNHG16/miR-16-5p/SMAD5調(diào)控軸增強(qiáng)了TGF-β1/SMAD5通路的激活，從而誘導(dǎo)Vδ1 T細(xì)胞中CD73的表達(dá)。這項(xiàng)研究確定了CD73+Vδ1 Tregs在BC中的意義，針對(duì)該亞群或阻斷TDEs的治療可能在將來用于乳腺癌的治療。

3.2.3 浸潤性T細(xì)胞：lncRNAs可能影響腫瘤浸潤性T細(xì)胞的功能。Huang等[15]報(bào)道， NKILA是一種與NF-κB相互作用的長非編碼RNA(lncRNA)，它通過抑制NF-κB活性來調(diào)節(jié)T細(xì)胞對(duì)活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(AICD)的敏感性，使得癌細(xì)胞逃避免疫攻擊。在乳腺癌和肺癌微環(huán)境中，抗腫瘤CTL和TH1細(xì)胞比Tregs和TH2細(xì)胞對(duì)AICD更敏感。在抗原刺激的T細(xì)胞中，NKILA啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙?；黠@增加，進(jìn)而增強(qiáng)了由STAT1介導(dǎo)的NKILA轉(zhuǎn)錄。體外實(shí)驗(yàn)表明，Lnc-Tim3抑制小鼠體內(nèi)CD8+T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和IL-2，并增強(qiáng)了抗凋亡基因的表達(dá)，如Bcl-2和MDM2。過表達(dá)Jurkat T細(xì)胞中的Lnc-Tim3上調(diào)了耗竭相關(guān)標(biāo)志物，如PRDM1、LAG-3和PBX3。因此，Lnc-Tim3可以促進(jìn)CD8+T淋巴細(xì)胞出現(xiàn)耗竭樣表型。

3.2.4 巨噬細(xì)胞：巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出高度的可塑性，這賦予了它們具有響應(yīng)微環(huán)境信號(hào)的多種功能[16]。典型激活的巨噬細(xì)胞(M1)通常是由病原體相關(guān)分子模式(PAMP)刺激產(chǎn)生，而交替激活的巨噬細(xì)胞(M2)在IL-4、IL-13或IL-10刺激下產(chǎn)生。不同極化的巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出不同受體、細(xì)胞因子和趨化因子的分泌以及效應(yīng)因子的表達(dá)職能。M1巨噬細(xì)胞釋放促炎癥因子如IL-6和TNF-α有助于抗腫瘤免疫反應(yīng)，而M2巨噬細(xì)胞通過上調(diào)IL-10和IL-2的表達(dá)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。目前已經(jīng)開發(fā)了多種策略以靶向腫瘤微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞，例如已證明通過重新極化M2巨噬細(xì)胞為抗腫瘤的M1巨噬細(xì)胞或增強(qiáng)抗原呈遞能力可提高臨床前模型的存活率[16]。 研究顯示lncRNAs對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響，如linc00514通過增加轉(zhuǎn)錄因子STAT3的磷酸化，以轉(zhuǎn)錄方式促進(jìn)Jagged1的表達(dá)。隨后，Jagged1介導(dǎo)的Notch信號(hào)通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞分泌IL-4和IL-6，并最終誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化[17]。GNAS-AS1/miR-433-3p/GATA3軸通過加速M(fèi)2巨噬細(xì)胞極化促進(jìn)ER+乳腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，該機(jī)制可能為ER+乳腺癌的治療提供新的靶點(diǎn)和策略[18]。LincRNA-p21基因敲除促進(jìn)了腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞極化為促炎性M1巨噬細(xì)胞，這可能是由MDM2誘導(dǎo)蛋白酶體依賴性降解為p53并激活NF-κB和STAT3途徑引起的。具有l(wèi)incRNA-p21基因敲除的TAMs可誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲。在體內(nèi)，lincRNA-p21敲除巨噬細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移可抑制乳腺癌發(fā)展。該研究表明，lincRNA-p21是腫瘤環(huán)境中TAMs功能的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，揭示了以單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞浸潤為特征的腫瘤的新治療靶點(diǎn)[19]。LINC00337通過M2型巨噬細(xì)胞加速乳腺癌細(xì)胞的惡性表型并誘導(dǎo)對(duì)紫杉醇的耐藥性[20]。lncRNA SNHG1作為M2巨噬細(xì)胞極化的調(diào)節(jié)劑發(fā)揮作用，并調(diào)節(jié)腫瘤生長和血管生成。Zhong等發(fā)現(xiàn)SNHG1的敲除通過抑制STAT6磷酸化抑制M2巨噬細(xì)胞極化。SNHG1沉默顯著減輕MCF-7細(xì)胞的遷移和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的管形成。此外， MCF-7細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的細(xì)胞混合物的植入促進(jìn)了腫瘤生長和血管生成，而巨噬細(xì)胞中SNHG1的敲除逆轉(zhuǎn)了這種效應(yīng)。這說明lncRNA SNHG1在巨噬細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞相互作用中的重要作用，可能為預(yù)防和治療乳腺腫瘤轉(zhuǎn)移提供了一種新方法[21]。研究發(fā)現(xiàn)lncRNA-Xist通過與miR-101競爭調(diào)節(jié)C/EBPα和KLF6的表達(dá)來介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化并影響乳腺癌增殖和遷移的機(jī)制。因此，促進(jìn)M1巨噬細(xì)胞中Xist的表達(dá)和抑制M2巨噬細(xì)胞中miR-101的表達(dá)可能在抑制乳腺癌的增殖和遷移能力方面發(fā)揮重要作用[22]。

3.2.5 樹突狀細(xì)胞：樹突狀細(xì)胞在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的分化和在腫瘤組織中的分布也可能受到lncRNAs的影響。SNHG1-lncRNA通過影響Treg的分化來介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸。此外，SNHG1-lncRNA通過直接抑制miR-448的表達(dá)下調(diào)IDO的表達(dá)，并減小腫瘤體積，下調(diào)SNHG1、IL-10、IDO和Foxp3的表達(dá)水平[23]。

3.2.6 成纖維細(xì)胞：腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(Cancer-associated Fibroblasts, CAF)是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分。CAF和癌細(xì)胞之間的動(dòng)態(tài)相互作用在腫瘤的發(fā)展和進(jìn)展中起著至關(guān)重要的作用。Li等[24]人發(fā)現(xiàn)CAFs的外泌體lncRNA可以介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的代謝重編程。敲除CAF分泌的外顯體中SNHG3基因，通過增加腫瘤細(xì)胞中的miR-330-5p和降低PKM表達(dá)來抑制糖酵解代謝和細(xì)胞增殖。SNHG3作為miR-330-5p海綿發(fā)揮作用，積極調(diào)節(jié)PKM表達(dá)，抑制線粒體氧化磷酸化，增加糖酵解羧化，增強(qiáng)乳腺腫瘤細(xì)胞增殖。

3.3 lncRNAs調(diào)控乳腺癌免疫微環(huán)境免疫細(xì)胞細(xì)胞因子

研究表明，腫瘤細(xì)胞可能上調(diào)非經(jīng)典基因表達(dá)HLA分子，如HLA-G，可通過細(xì)胞因子如IL-10和IFN-γ逃避免疫監(jiān)視。HLA-G與不同免疫細(xì)胞表面表達(dá)的抑制性受體結(jié)合，導(dǎo)致抑制性免疫反應(yīng)，如抑制CD8+T的細(xì)胞毒性細(xì)胞和NK細(xì)胞。最近的研究報(bào)告說HOTAIR是一種ceRNA，可通過競爭性結(jié)合miR-152或miR-148a來調(diào)節(jié)HLA-G的表達(dá)在癌細(xì)胞中[25]。HOTAIR在不同的人類惡性腫瘤組織中過度表達(dá)，且與癌癥有關(guān)進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。在T細(xì)胞中，吲哚胺對(duì)色氨酸的還原作用和2,3-雙加氧酶1(IDO1)可激活應(yīng)激反應(yīng)激酶GCN2，抑制T細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)將幼稚的CD4+T細(xì)胞分化為Treg。因此腫瘤中IDO1的表達(dá)可能有助于免疫逃避。腫瘤細(xì)胞表達(dá)的PD-L1與T細(xì)胞表達(dá)的PD-1相互作用，可促進(jìn)特異性T細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞因子抑制信號(hào)的生產(chǎn)。據(jù)報(bào)道，lncRNAs通過多種機(jī)制介導(dǎo)PD-L1作用于腫瘤細(xì)胞。研究表明，通過調(diào)節(jié)PD-L1的表達(dá)與蛋白質(zhì)相互作用，lncRNA-MALAT1是腫瘤進(jìn)展過程中的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)器，尤其是在腫瘤免疫逃避過程中[26]。

一些研究表明腫瘤細(xì)胞來源的lncRNAs可能還參與CCL2、凝血因子X(FX)和外源性miRNA等因子的分泌，通過影響巨噬細(xì)胞的募集、增殖和分化促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。Lnc BM是一種轉(zhuǎn)移相關(guān)的lncRNA，可能通過促進(jìn)腦TME中巨噬細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞之間的通訊，進(jìn)而加速乳腺癌腦轉(zhuǎn)移患者的腫瘤進(jìn)展。腫瘤細(xì)胞來源的Lnc BM促進(jìn)STAT3依賴性的CCL2和ICAM1表達(dá)，并分別介導(dǎo)了腦內(nèi)巨噬細(xì)胞的募集和血管的選擇。被招募的巨噬細(xì)胞分泌IL-6和抑瘤素M，激活乳腺癌細(xì)胞中的Lnc BM/JAK2/STAT3通路[27]。有研究表明，lncRNA X-非活性特異性轉(zhuǎn)錄本(X-inactive-specifific Transcript，XIST)可以作為腦轉(zhuǎn)移性乳腺癌中的腫瘤抑制因子[28]。在乳腺癌患者的腦轉(zhuǎn)移瘤中，XIST顯著下調(diào)。敲除小鼠乳腺中的XIST基因刺激了原發(fā)腫瘤的生長和腦轉(zhuǎn)移。XIST的缺失也增強(qiáng)了外體miRNA-503的分泌，并促進(jìn)了小膠質(zhì)細(xì)胞的M2極化，上調(diào)了小膠質(zhì)細(xì)胞中的免疫抑制細(xì)胞因子，進(jìn)而抑制T細(xì)胞的增殖。腫瘤來源的lncRNAs已被證實(shí)可以作為在TME中腫瘤細(xì)胞和巨噬細(xì)胞之間協(xié)調(diào)通信的信號(hào)傳遞媒介[29]。

在TME中，lncRNAs在腫瘤細(xì)胞中受到一些可溶性免疫抑制細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，因此其表達(dá)可能受到抑制，從而促進(jìn)了腫瘤的免疫逃逸。這種調(diào)節(jié)模式表明基質(zhì)細(xì)胞和癌細(xì)胞之間存在交聯(lián)。在乳腺癌細(xì)胞中，由CAFs分泌的TGF-β可增加癌易感候選基因9(CASC9)lncRNA的表達(dá)，其通過應(yīng)答miR-215上調(diào)TWIST2來促進(jìn)體外和體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞遷移[30]。此外，生物信息學(xué)分析預(yù)測了miR-215和CASC9之間存在互補(bǔ)序列。TME中的促炎細(xì)胞因子IL-6可能促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展。IL-6可以激活A(yù)rid5a(AT-rich Interactive Domain 5a，Arid5a)表達(dá)，促進(jìn)lncRNA AU021063的轉(zhuǎn)錄。接下來，AU021063通過穩(wěn)定Tribbles同源物3(Trib3)和激活Mek/Erk信號(hào)通路促進(jìn)了乳腺癌轉(zhuǎn)移。將Arid5a、AU021063或Trib3敲除可減少乳腺癌在體外和體內(nèi)的轉(zhuǎn)移[31]。

4 lncRNAs在乳腺癌臨床免疫治療中的應(yīng)用

盡管一些研究已經(jīng)證明了lncRNAs在腫瘤進(jìn)展和免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)中的作用，但lncRNAs在腫瘤臨床免疫治療中的應(yīng)用有限。一項(xiàng)關(guān)于lncRNA作為乳腺癌的生物標(biāo)志物的臨床研究：研究者前期已成功識(shí)別并獨(dú)立驗(yàn)證了一個(gè)與乳腺癌預(yù)后相關(guān)的RNA特征，該RNA特征可用于區(qū)分乳腺癌患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的高與低；該研究旨在驗(yàn)證前期識(shí)別的mRNA-lncRNA標(biāo)志物的有效性，并進(jìn)一步探索能否對(duì)由RNA特征預(yù)測出的高危三陰性乳腺癌(TNBC)患者進(jìn)行更精準(zhǔn)的化療，即向高風(fēng)險(xiǎn)患者予以多西他賽、阿霉素、環(huán)磷酰胺、吉西他濱聯(lián)合順鉑方案，向低風(fēng)險(xiǎn)患者予以多西他賽、阿霉素聯(lián)合環(huán)磷酰胺方案(NCT02641847)。目前該項(xiàng)研究正在進(jìn)行中。

lncRNAs參與了腫瘤免疫治療中的關(guān)鍵分子表達(dá)和通路的調(diào)控，也能夠預(yù)測接受腫瘤免疫治療患者的預(yù)后。臨床腫瘤免疫治療包括腫瘤疫苗、基于T細(xì)胞的免疫治療和免疫檢查點(diǎn)阻斷(Immune Checkpoint Blocking，ICB)等。ICB治療的有效性在本質(zhì)上取決于MHCs顯示的T細(xì)胞識(shí)別的腫瘤細(xì)胞新抗原，腫瘤新抗原識(shí)別的缺乏會(huì)使腫瘤對(duì)PD-L1/PD-1通路阻斷治療不敏感。因此，基于新抗原的癌癥疫苗，包括新抗原疫苗、肽疫苗、DNA疫苗、RNA疫苗和DC疫苗均是為了克服這些局限性而開發(fā)的癌癥免疫治療，其中部分疫苗已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)研究[32]。在PD-L1+的TNBC患者中，乳腺癌ICB治療的總有效率在10%到18.5%之間。HLA-A2+的轉(zhuǎn)移性TNBC患者使用PVX-410癌癥疫苗和彭布羅利珠單抗聯(lián)合治療(NCT03362060)正在進(jìn)行Ib期臨床試驗(yàn)。此外，lncRNAs參與抗原的調(diào)節(jié)臨床表現(xiàn)可能作為治療的靶點(diǎn)腫瘤疫苗。LINK-A是一種組織特異性lncRNA[13]。研究發(fā)現(xiàn)，LINK-A在乳腺癌小鼠模型的乳腺腫瘤中被誘導(dǎo)表達(dá)。抑制LINK-A的表達(dá)可以抑制腫瘤的進(jìn)展。此外，LINK-A鎖定核酸(Locked Nucleic acids，LNAs)和ICB的聯(lián)合治療可協(xié)同抑制腫瘤生長并且顯著延長荷瘤小鼠的存活時(shí)間?；謴?fù)腫瘤抗原呈現(xiàn)途徑的治療策略可能提高缺乏腫瘤抗原性的乳腺癌對(duì)ICB治療的敏感性。因此，LINK-A作為預(yù)測接受ICB治療的乳腺癌患者預(yù)后的有效生物標(biāo)志物具有巨大潛力。LINK-A也可能作為一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)，使乳腺癌對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑敏感。

過繼性T細(xì)胞療法，尤指嵌合抗原受體(CAR)T細(xì)胞療法在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的臨床治療中取得了顯著療效。美國食品和藥物管理局(FDA)已經(jīng)批準(zhǔn)Yescarta和Kymriah兩種CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品用于治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤。然而，CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體惡性腫瘤的療效有限，這可能是由于缺乏足夠CAR-T細(xì)胞運(yùn)輸?shù)侥[瘤部位、T細(xì)胞激活不足、從體內(nèi)別處轉(zhuǎn)移的T細(xì)胞或腫瘤中增強(qiáng)的免疫抑制腫瘤微環(huán)境。為了克服這些限制，需要探索提高移植T細(xì)胞存活率的創(chuàng)新途徑。最近的一篇綜述總結(jié)了提高T細(xì)胞抗凋亡能力的策略，如在CAR基因中使用共刺激結(jié)構(gòu)域，抑制特定的死亡受體途徑，以及插入抗凋亡分子(BCL-XL或BCL-2)的基因[33]。對(duì)于T細(xì)胞凋亡的表觀遺傳調(diào)控，lncRNAs可能作為CAR-T細(xì)胞治療的輔助靶點(diǎn)。據(jù)報(bào)道，NKILA能夠增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。Huang等[15]用shRNA敲降CD8+T細(xì)胞的NKILA后，乳腺癌異種移植小鼠模型腫瘤的生長被顯著抑制。與未敲降組相比，敲降組中NF-κB活性、抗腫瘤T細(xì)胞(CTL、TH1)的毒性和抗凋亡基因的表達(dá)增強(qiáng)。該研究提示了乳腺癌中CAR-T療效不佳的原因。靶向NKILA后再將腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)和CAR-T細(xì)胞轉(zhuǎn)入，沉默的NKILA通過抑制T細(xì)胞活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(AICDs)來克服腫瘤免疫逃避，將提高CAT-T治療癌癥的療效[16]。

5 結(jié)論和展望

lncRNAs對(duì)基因調(diào)控的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)是各種病理生理過程中的關(guān)鍵因素。lncRNAs在免疫抑制性TME調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵作用提示lncRNAs可作為乳腺癌診斷的生物標(biāo)志物和預(yù)后評(píng)估。此外，lncRNAs是潛在的乳腺癌的治療靶點(diǎn)。當(dāng)然，需要進(jìn)一步的研究包括建立lncRNA特異性動(dòng)物模型等從而更好了解lncRNA在TME中的作用，以便臨床應(yīng)用。

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