張 磊，葉小惠，周 宙

（安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，合肥 230051）

0 引言

隨著我國(guó)醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)的不斷進(jìn)步和發(fā)展，患者和醫(yī)護(hù)人員的安全衛(wèi)生意識(shí)逐步提升，靜脈留置針在臨床上的使用率逐年增高。在靜脈留置針的使用過(guò)程中，沖管、封管是非常重要的環(huán)節(jié)，只有正確進(jìn)行沖管和封管操作才能確保輸液通暢、安全。預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器是一種無(wú)針化、可預(yù)充0.9%氯化鈉注射液的導(dǎo)管沖洗裝置，其設(shè)計(jì)的活塞鎖止環(huán)能有效防止血液回流，可以有效、安全地封管，因此預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器備受廣大患者和醫(yī)護(hù)人員的青睞[1-2]。近年來(lái)，各國(guó)監(jiān)管部門越來(lái)越重視醫(yī)療器械的生物學(xué)評(píng)價(jià)，尤其在ISO 10993-1：2018發(fā)布及實(shí)施后，國(guó)內(nèi)的醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)工作進(jìn)入高速發(fā)展期[3]。為了預(yù)測(cè)預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器在與人體間接接觸過(guò)程中可導(dǎo)致的潛在不良反應(yīng)，有必要對(duì)其進(jìn)行一系列的生物學(xué)性能評(píng)價(jià)。本研究參考GB/T 16886.1—2011[4]生物學(xué)評(píng)價(jià)總則，擬通過(guò)細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、凝血試驗(yàn)、皮膚致敏試驗(yàn)、皮內(nèi)刺激試驗(yàn)及急性全身毒性試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器的生物相容性，以期為預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

一次性預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器，由安徽省某生物技術(shù)有限公司提供。其他涉及材料包括小鼠成纖維細(xì)胞L-929（中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏中心昆明細(xì)胞庫(kù)）、改良的Eagle培養(yǎng)基（Gibco）、弗氏完全佐劑（Sigma）、棉籽油（J&K）、胎牛血清（Gibco）等。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

普通白化豚鼠30只，體質(zhì)量300～500 g，由南京市浦口區(qū)萊芙養(yǎng)殖場(chǎng)提供[SCXK（蘇）2019-0005]；無(wú)特定病原體級(jí)小鼠20只，體質(zhì)量18～22 g，由北京斯貝福生物技術(shù)有限公司提供[SCXK（京）2019-0010]；新西蘭兔6只，體質(zhì)量＞2.0 kg，由南京市浦口區(qū)萊芙養(yǎng)殖場(chǎng)提供[SCXK（蘇）2019-0005]。所有試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于本院動(dòng)物房[SYXK（皖）2020-005]，飼養(yǎng)條件均為溫度21～26℃、相對(duì)濕度40%～70%、換氣次數(shù)＞8次/h、12 h光照與12 h黑暗。

1.3 儀器設(shè)備

儀器設(shè)備包括生物安全柜（BSC-1604IIA2）、立式高壓滅菌器（YM50）、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（Cary 60）、全自動(dòng)血凝儀（ACL Elite Pro）、倒置熒光顯微鏡（CKX41）、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱（Thermo3111）、酶標(biāo)儀（Synergy2）、細(xì)菌內(nèi)毒素凝膠法測(cè)定儀（ET-96）、智能熱原儀（ZRY-2D）。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)

在無(wú)菌環(huán)境下，將預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的氯化鈉注射液經(jīng)無(wú)菌操作全部排出作為供試品溶液，參照《中華人民共和國(guó)藥典：四部》（2020年版）通則1143“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”進(jìn)行試驗(yàn)[5]，選擇凝膠法。根據(jù)細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)＜0.5 EU/mL的要求，按照表1制備供試品管溶液、供試品陽(yáng)性管溶液、陽(yáng)性對(duì)照管溶液和陰性對(duì)照管溶液，每組平行2管。將全部試管置于細(xì)菌內(nèi)毒素凝膠法測(cè)定儀上，在37℃下保溫60 min后，觀察試驗(yàn)結(jié)果，未形成凝膠并從管壁滑落為陰性，且預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的0.9%氯化鈉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)＜0.5 EU/mL。

表1 細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)溶液的制備方法

1.4.2 熱原試驗(yàn)

在無(wú)菌環(huán)境下，將預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的氯化鈉注射液經(jīng)無(wú)菌操作全部排出作為供試品溶液，參照《中華人民共和國(guó)藥典：四部》（2020年版）通則1142“熱原檢查法”進(jìn)行試驗(yàn)[5]。選取3只新西蘭兔，根據(jù)新西蘭兔體質(zhì)量按10 mL/kg由耳緣靜脈注射供試品溶液，注射后每隔30 min測(cè)量一次溫度，連續(xù)測(cè)量6次，取6次溫度中最高的一次溫度減去注射前溫度，記錄為最大溫升。每只新西蘭兔體溫升高不得超過(guò)0.6℃，3只新西蘭兔體溫升高總和不得超過(guò)1.3℃。

1.4.3 體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)

參照GB/T 16886.12—2017中的試驗(yàn)方法[6]，取不含0.9%氯化鈉注射液的導(dǎo)管沖洗器，以含10%胎牛血清的改良的Eagle培養(yǎng)基為浸提介質(zhì)，按照每0.2 g加入1 mL浸提介質(zhì)的比例，在37℃條件下浸提24 h，制備供試品溶液1。再取含0.9%氯化鈉注射液的預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器，于37℃條件下浸提24 h后，將預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的0.9%氯化鈉注射液作為供試品溶液2，另設(shè)置空白對(duì)照液（同批浸提介質(zhì)）、陰性對(duì)照液（高密度聚乙烯）和陽(yáng)性對(duì)照液（5 g/L苯酚）。參照GB/T 16886.5—2017附錄C中的噻唑藍(lán)比色法[7]，選用小鼠成纖維細(xì)胞L-929，分別將待測(cè)樣品加入到已接種細(xì)胞的96孔板中，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24 h后，觀察細(xì)胞形態(tài)。吸出培養(yǎng)液加入噻唑藍(lán)溶液50 μL，繼續(xù)培養(yǎng)2 h后除去噻唑藍(lán)溶液加入異丙醇100 μL，輕微震蕩后在570 nm處測(cè)量吸光度，并根據(jù)以下公式計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率＞70%則視為無(wú)潛在細(xì)胞毒性風(fēng)險(xiǎn)。

1.4.4 溶血試驗(yàn)

參照GB/T 16886.4—2003中的試驗(yàn)方法[8]，取不含0.9%氯化鈉注射液的導(dǎo)管沖洗器，剪碎待用。試驗(yàn)前采集健康新西蘭兔心臟血20 mL配制成新鮮抗凝兔血稀釋液備用。設(shè)置陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和供試品組，在陰性對(duì)照組的3支試管中分別加入10 mL 0.9%氯化鈉注射液，陽(yáng)性對(duì)照組的3支試管中各加入10 mL純化水，供試品組的3支試管中各加入導(dǎo)管沖洗器碎塊5 g及10 mL 0.9%氯化鈉注射液。將所有試管于37℃恒溫水浴箱中靜置30 min，然后每管加入新鮮抗凝兔血稀釋液0.2 mL，輕輕混勻后繼續(xù)保溫60 min。倒出管內(nèi)液體，以800g的離心力離心5 min，取上清液用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)量吸光度（波長(zhǎng)為545 nm），并根據(jù)以下公式計(jì)算溶血率：溶血率應(yīng)低于5%。

1.4.5 凝血試驗(yàn)

參照GB/T 16886.4—2003中的試驗(yàn)方法[8]，取不含0.9%氯化鈉注射液的導(dǎo)管沖洗器，剪碎待用。取新西蘭兔動(dòng)脈血后離心收集貧血小板血漿（PPP）。設(shè)置供試品組、對(duì)照品組及空白組，每組6支試管。供試品組的每支試管按照0.2 g/mL比例加入導(dǎo)管沖洗器碎塊和PPP，對(duì)照品組的每支試管按照0.2 g/mL比例加入剪碎的市售同類型導(dǎo)管沖洗器碎塊和PPP，空白組的每支試管僅加入PPP。將全部試管封閉置于37℃恒溫水浴箱中保持15 min，然后轉(zhuǎn)移至全自動(dòng)血凝儀專用測(cè)試杯中，采用試劑盒在全自動(dòng)血凝儀上檢測(cè)各組的凝血酶原時(shí)間（PT）。

1.4.6 皮膚致敏試驗(yàn)

參照GB/T 16886.12—2017中的試驗(yàn)方法[6]，取不含0.9%氯化鈉注射液的導(dǎo)管沖洗器，剪碎待用。分別以0.9%氯化鈉注射液和棉籽油為浸提介質(zhì)，按照0.2 g/mL的比例，在37℃條件下浸提72 h，制備0.9%氯化鈉注射液樣品浸提液和棉籽油樣品浸提液。取同批號(hào)0.9%氯化鈉注射液和棉籽油，不加剪碎的導(dǎo)管沖洗器碎塊，分別于37℃條件下保持72 h，記為空白溶劑對(duì)照液。選用30只白化豚鼠，隨機(jī)分為2組，每組15只（其中樣品浸提液組10只、空白溶劑對(duì)照組5只），參照GB/T 16886.10—2017中的方法[9]，采用豚鼠最大劑量試驗(yàn)（guinea-pig maximization test，GPMT），試驗(yàn)前剃除白化豚鼠背部區(qū)域毛發(fā)，在其背部?jī)蓚?cè)部位進(jìn)行皮內(nèi)注射誘導(dǎo)，注射部位如圖1所示。A部位左右兩側(cè)樣品浸提液組分別注射含50%樣品浸提液、50%弗氏安全佐劑的混合液，空白溶劑對(duì)照組分別注射50%空白溶劑對(duì)照液、50%弗氏安全佐劑的混合液；B部位左右兩側(cè)樣品浸提液組分別注射樣品浸提液，空白溶劑對(duì)照組僅注射相應(yīng)空白對(duì)照溶劑；C部位左右兩側(cè)樣品浸提液組分別注射含25%樣品浸提液、25%弗氏安全佐劑、50%空白溶劑對(duì)照液的混合液，空白溶劑對(duì)照組分別注射空白溶劑對(duì)照液與弗氏安全佐劑配制成的乳化劑。皮內(nèi)注射7 d后在白化豚鼠背部?jī)蓚?cè)區(qū)域進(jìn)行局部敷貼誘導(dǎo)，48 h后去除敷貼片。局部敷貼誘導(dǎo)結(jié)束后14 d剃除白化豚鼠腹部毛進(jìn)行激發(fā)。最后在除去腹部敷貼片24 h和48 h后觀察腹部皮膚的紅斑和水腫情況，對(duì)樣品浸提液組和空白溶劑對(duì)照組白化豚鼠激發(fā)部位的皮膚情況進(jìn)行分級(jí)。

圖1 皮內(nèi)注射部位

1.4.7 皮內(nèi)刺激試驗(yàn)

參照GB/T 16886.12—2017中的試驗(yàn)方法[6]，取不含0.9%氯化鈉注射液的導(dǎo)管沖洗器，剪碎待用。分別以0.9%氯化鈉注射液和棉籽油為浸提介質(zhì)，按0.2 g/mL的比例在37℃條件下經(jīng)72 h制備2種樣品浸提液，并在相同條件下制備0.9%氯化鈉注射液和棉籽油的溶劑對(duì)照液。參照GB/T 16886.10—2017中的方法[9]，選用3只體質(zhì)量大于2.0 kg的新西蘭兔，試驗(yàn)前在兔脊柱兩側(cè)部位剃毛，4 h后在兩側(cè)部位進(jìn)行皮內(nèi)注射，一側(cè)10個(gè)注射點(diǎn)，每點(diǎn)注射0.2 mL。一側(cè)前5個(gè)點(diǎn)注射由0.9%氯化鈉注射液制備的樣品浸提液，后5個(gè)點(diǎn)注射其溶劑對(duì)照液。另一側(cè)前5個(gè)點(diǎn)注射由棉籽油制備的樣品浸提液，后5個(gè)點(diǎn)注射其溶劑對(duì)照液。注射后立刻觀察新西蘭兔注射部位的皮膚狀況，且分別在24、48和72 h記錄注射部位皮膚狀況。根據(jù)皮內(nèi)反應(yīng)記分系統(tǒng)分別計(jì)算出2種樣品浸提液與其溶劑對(duì)照液注射部位的總平均記分之差，對(duì)供試品在該試驗(yàn)條件下產(chǎn)生的刺激反應(yīng)潛能做出評(píng)定。

1.4.8 急性全身毒性試驗(yàn)

參照GB/T 16886.12—2017中的試驗(yàn)方法[6]，取不含0.9%氯化鈉注射液的導(dǎo)管沖洗器部分，分別以0.9%氯化鈉注射液和棉籽油為浸提介質(zhì)，按照0.2 g/mL比例在37℃條件下經(jīng)72 h制備樣品浸提液。取同批號(hào)0.9%氯化鈉注射液和棉籽油在相同條件下制備溶劑對(duì)照液。選用無(wú)特定病原體級(jí)小鼠20只，5只尾靜脈注射0.9%氯化鈉注射液浸提液、5只尾靜脈注射0.9%氯化鈉注射液對(duì)照液（作為樣品浸提液組），5只腹腔注射棉籽油浸提液、5只腹腔注射棉籽油對(duì)照液，注射劑量為50 mL/kg（作為溶劑對(duì)照組）[10]。注射完畢后，觀察小鼠的即時(shí)反應(yīng)，并于4、24、48和72 h觀察和記錄各組小鼠的反應(yīng)，包括所有小鼠狀態(tài)和死亡數(shù)量，最后于72 h記錄臨床毒性表現(xiàn)和小鼠死亡數(shù)量。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)

將所有試管緩慢倒轉(zhuǎn)180°，可見(jiàn)供試品陽(yáng)性管和陽(yáng)性對(duì)照管管內(nèi)均形成凝膠，且凝膠不變形、不滑落，結(jié)果為陽(yáng)性。供試品管和陰性對(duì)照管管內(nèi)均未形成凝膠，結(jié)果為陰性。預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的0.9%氯化鈉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素含量＜0.5 EU/mL，符合安全性要求。

2.2 熱原試驗(yàn)

熱原試驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表2。試驗(yàn)中的3只新西蘭兔體溫升高分別為0.00、0.00和0.28℃，均未超過(guò)0.6℃，體溫升高總和為0.28℃，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于1.3℃。結(jié)果表明，預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的0.9%氯化鈉注射液無(wú)致熱作用，符合安全性要求。

表2 熱原試驗(yàn)結(jié)果

2.3 體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯微鏡觀察結(jié)果如圖2所示?？瞻讓?duì)照液和陰性對(duì)照液的細(xì)胞形態(tài)均正常，無(wú)明顯形態(tài)學(xué)方面的改變，貼壁生長(zhǎng)良好。供試品溶液1和供試品溶液2的細(xì)胞形態(tài)均正常，呈菱形或不規(guī)則三角形，貼壁生長(zhǎng)良好。陽(yáng)性對(duì)照液的細(xì)胞皺縮，呈圓形，細(xì)胞層幾乎完全破壞。各溶液的細(xì)胞存活率比較結(jié)果如圖3所示。供試品溶液1和供試品溶液2的細(xì)胞存活率分別為92%和94%，均大于70%，細(xì)胞毒性分級(jí)均為1級(jí)，陰性對(duì)照液細(xì)胞存活率為98%，陽(yáng)性對(duì)照液細(xì)胞存活率為12%。結(jié)果顯示，試驗(yàn)成立且樣品無(wú)潛在細(xì)胞毒性風(fēng)險(xiǎn)。

圖2 體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯微鏡觀察結(jié)果

圖3 體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)中各溶液的細(xì)胞存活率比較結(jié)果

2.4 溶血試驗(yàn)

離心后觀察各組試管，其中陰性對(duì)照組和供試品組試管內(nèi)的上清液澄清透明，紅細(xì)胞沉底。陽(yáng)性對(duì)照組試管內(nèi)的紅細(xì)胞破裂分散于溶液中，溶液鮮紅。經(jīng)計(jì)算可得溶血率為0.59%，遠(yuǎn)低于5%。結(jié)果顯示，溶血率符合產(chǎn)品安全性要求。

2.5 凝血試驗(yàn)

空白組、對(duì)照品組與供試品組的PT比較結(jié)果如圖4所示，供試品組與對(duì)照品組的PT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果顯示，預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器未導(dǎo)致凝血發(fā)生，具有良好的血液相容性。

圖4 凝血試驗(yàn)中各組PT比較結(jié)果

2.6 皮膚致敏試驗(yàn)

在除去敷貼片后24 h和48 h觀察期內(nèi)，樣品浸提液組和空白溶劑對(duì)照組白化豚鼠腹部的皮膚均未出現(xiàn)紅斑、焦痂或水腫情況，如圖5所示。根據(jù)Magnusson和Kligman分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，樣品浸提液組與空白溶劑對(duì)照組的分級(jí)均為0，試驗(yàn)中未發(fā)生皮膚致敏反應(yīng)，符合安全性要求。

圖5 皮膚致敏試驗(yàn)結(jié)果

2.7 皮內(nèi)刺激試驗(yàn)

在72 h觀察期內(nèi)，對(duì)每只新西蘭兔注射部位的皮膚進(jìn)行觀察，2種樣品浸提液和其溶劑對(duì)照液注射部位的皮膚均無(wú)明顯異常現(xiàn)象，如圖6所示。根據(jù)皮內(nèi)反應(yīng)記分系統(tǒng)記分，2種樣品浸提液與其溶劑對(duì)照液平均記分之差均為0，未見(jiàn)皮膚刺激現(xiàn)象。

圖6 皮內(nèi)刺激試驗(yàn)結(jié)果

2.8 急性全身毒性試驗(yàn)

在72 h觀察期內(nèi)，樣品浸提液組和其溶劑對(duì)照組的小鼠均沒(méi)有發(fā)生死亡現(xiàn)象，臨床觀察所有小鼠的呼吸、肌肉運(yùn)動(dòng)、痙攣和反射等癥狀均正常，沒(méi)有明顯異常的情況出現(xiàn)，同時(shí)小鼠的體質(zhì)量普遍增加，未見(jiàn)小鼠明顯急性全身毒性反應(yīng)。

3 討論

目前，臨床上大部分病患都需要通過(guò)外周或者中心靜脈置管裝置進(jìn)行輸液、輸血和藥物治療，外周靜脈和中心靜脈置管的廣泛應(yīng)用使導(dǎo)管相關(guān)性血流感染等并發(fā)癥的發(fā)生率越來(lái)越高，因此封管成為臨床關(guān)注的重點(diǎn)[11]。常規(guī)封管是采取生理鹽水稀釋肝素鈉的方法。在長(zhǎng)期臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，該方法需反復(fù)抽吸，同樣存在導(dǎo)管相關(guān)性感染和靜脈炎等并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)患者十分不利。而預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器是一種采用高標(biāo)準(zhǔn)滅菌技術(shù)、一次性使用無(wú)菌包裝、灌注0.9%氯化鈉注射液的新型醫(yī)療器械。研究表明，其與手工配置的肝素鈉稀釋液沖管、封管相比，能夠減少堵管的發(fā)生率，降低導(dǎo)管相關(guān)性感染并發(fā)癥的發(fā)生率，可有效保證封管質(zhì)量及后續(xù)輸液通暢[12]。同時(shí)，預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器使用方便，可減少操作時(shí)間，無(wú)需進(jìn)行傳統(tǒng)的配藥操作，可減少配藥劑量差錯(cuò)，提高用藥的準(zhǔn)確性和療效[13]。

在臨床使用過(guò)程中，預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器與患者的血液、組織存在間接接觸，其生物相容性安全與否直接關(guān)系著患者的生命健康。然而，相關(guān)文獻(xiàn)僅報(bào)道了預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器的臨床使用價(jià)值，比如其在正壓型無(wú)針連接式留置針?lè)夤苤械膽?yīng)用價(jià)值[14]、對(duì)預(yù)防中心靜脈導(dǎo)管相關(guān)性血流感染的系統(tǒng)綜述[15]。對(duì)于與人體直接或間接接觸的醫(yī)療器械來(lái)說(shuō)，生物相容性評(píng)價(jià)是風(fēng)險(xiǎn)管理過(guò)程中非常重要的方面，貫穿于產(chǎn)品全生命周期，需對(duì)此類醫(yī)療器械進(jìn)行充分、可靠的生物相容性評(píng)價(jià)。參照現(xiàn)行的GB/T 16886.1—2011標(biāo)準(zhǔn)附錄A中推薦的生物學(xué)評(píng)價(jià)終點(diǎn)，考慮器械的物理/化學(xué)信息、與人體接觸的程度、頻次和時(shí)間（即預(yù)期用途），預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器與人體接觸的性質(zhì)屬于外部接入器械中的與血路直接、間接接觸的器械，接觸時(shí)間分類為短期（接觸時(shí)間＜24 h），不存在反復(fù)多次接觸。故本研究選擇細(xì)菌內(nèi)毒素、熱原、血液相容性（溶血和凝血）、體外細(xì)胞毒性、皮膚致敏、皮內(nèi)刺激和急性全身毒性試驗(yàn)對(duì)預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器進(jìn)行生物相容性評(píng)價(jià)。

熱原反應(yīng)是臨床靜脈輸液過(guò)程中常見(jiàn)的不良反應(yīng)之一，對(duì)藥品、醫(yī)療器械及藥包材進(jìn)行熱原檢測(cè)，使其致熱物質(zhì)含量控制在一定限度范圍內(nèi)，是臨床使用的重要保障。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)和熱原試驗(yàn)（家兔法）是目前應(yīng)用最多的材料致熱原性檢測(cè)方法。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)是利用鱟試劑遇到內(nèi)毒素會(huì)產(chǎn)生凝集的原理進(jìn)行測(cè)定；熱原試驗(yàn)（家兔法）是利用測(cè)量家兔溫度變化情況來(lái)判斷供試品是否具有潛在致熱作用[16]。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)僅能檢測(cè)由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，不能檢測(cè)其他類型引起的熱原反應(yīng)?？紤]其各自固有的缺點(diǎn)，本研究采用2種方法結(jié)合的方式檢測(cè)預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的氯化鈉注射液的熱原含量是否超過(guò)限度，為患者使用提供安全保障。本次試驗(yàn)中預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的0.9%氯化鈉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素含量＜0.5 EU/mL，3只新西蘭兔體溫升高均低于0.6℃，最大體溫升高總和為0.28℃，低于1.3℃的要求，表明供試品無(wú)潛在致熱作用。

血液相容性研究對(duì)于與人體血液、血液成分直接或間接接觸的醫(yī)療器械至關(guān)重要，目前主要采用體外、半體內(nèi)和體內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，而體外試驗(yàn)由于快速、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)，在血液相容性初步篩選試驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用。溶血試驗(yàn)一直是一種重要的反映器械材料與血液相互作用的篩選試驗(yàn)，而凝血試驗(yàn)主要是判斷器械是否對(duì)機(jī)體凝血系統(tǒng)造成影響[17]。本研究選取溶血試驗(yàn)和凝血試驗(yàn)對(duì)預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器進(jìn)行血液相容性評(píng)價(jià)，試驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液的溶血率為0.59%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)＜5%，符合安全標(biāo)準(zhǔn)，且其PT測(cè)定結(jié)果與同類型對(duì)照品比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)是醫(yī)療器械生物安全性評(píng)價(jià)的一個(gè)重要檢測(cè)項(xiàng)目，因其簡(jiǎn)便、快捷、敏感度高等優(yōu)點(diǎn)被列為首選試驗(yàn)項(xiàng)目，并作為評(píng)價(jià)醫(yī)療器械生物相容性的重要指標(biāo)。其中噻唑藍(lán)比色法因具有分級(jí)清晰、敏感度高等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用[18]。鑒于預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器所含氯化鈉注射液雖然用于不同藥物治療的間隙，處于封閉、沖洗導(dǎo)管的管路末端，但會(huì)有一定體積的液體進(jìn)入人體循環(huán)系統(tǒng)，為保證產(chǎn)品的安全性，本研究對(duì)導(dǎo)管沖洗器部分和預(yù)灌封的0.9%氯化鈉注射液分別進(jìn)行體外細(xì)胞毒性檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果表明二者均無(wú)潛在的細(xì)胞毒性，細(xì)胞相容性良好。

皮內(nèi)刺激試驗(yàn)是通過(guò)皮內(nèi)注射樣品浸提液，對(duì)其在試驗(yàn)條件下產(chǎn)生刺激反應(yīng)的潛能做出評(píng)定[16]。GPMT試驗(yàn)是評(píng)價(jià)樣品是否導(dǎo)致豚鼠產(chǎn)生致敏反應(yīng)的最敏感、最常用的試驗(yàn)方法[17]。而急性全身毒性試驗(yàn)可以判斷樣品是否會(huì)造成不可預(yù)知的毒性作用。因此本文選擇上述3個(gè)試驗(yàn)研究供試品的刺激性和毒性。試驗(yàn)結(jié)果表明，預(yù)充式導(dǎo)管沖洗器內(nèi)的0.9%氯化鈉注射液未引起新西蘭兔刺激反應(yīng)，未導(dǎo)致白化豚鼠出現(xiàn)皮膚致敏反應(yīng)，未見(jiàn)小鼠明顯急性全身毒性反應(yīng)。

生物學(xué)評(píng)價(jià)研究是醫(yī)療器械質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，良好的生物相容性是醫(yī)療器械臨床使用安全有效的重要保證。本研究主要參照GB/T 16886.1—2011中推薦的生物相容性試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)研究，但需要注意的是，并不能僅依據(jù)生物學(xué)試驗(yàn)數(shù)據(jù)確認(rèn)醫(yī)療器械是否可以上市使用，還應(yīng)該結(jié)合器械的材料表征、動(dòng)物研究或臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析判斷。