劉孟涓 李秋紅 李春莉

(重慶市婦幼保健院·重慶醫(yī)科大學(xué)附屬婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 401147)

性傳播疾病(Sexually transmitted diseases，STD)是指主要通過性接觸傳播的一組傳染性疾病，近年來我國發(fā)病人數(shù)呈逐年上升的趨勢(shì)[1]。其中沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，CT)和解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum, UU)是引起 STD 的常見病原體，并與男性尿道炎、前列腺炎、附睪炎、精囊炎等，女性陰道炎、宮頸炎、盆腔炎等密切相關(guān)，甚至還可導(dǎo)致流產(chǎn)、不孕不育等嚴(yán)重后果。由于部分患者感染后可無明顯癥狀，很多病例因無典型癥狀或癥狀較輕而漏診[2]，從而造成病情進(jìn)一步加重或病原體的隱匿傳播。因此通過實(shí)驗(yàn)室PCR技術(shù)檢測(cè)患者標(biāo)本中CT、UU DNA，對(duì)于STD的早期發(fā)現(xiàn)和診治極為重要。因不同地區(qū)的檢測(cè)人群、檢測(cè)方式和流行特征的差異， 此前各地的研究結(jié)果均存在一定偏差。本研究對(duì)2017年1月～2021年12月在我院就診的11284例患者的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了回顧性分析，以了解重慶地區(qū)近年來CT、UU的感染情況，旨在為臨床篩查、疾病診治和控制病原體傳播提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2017年1月～2021年12月于重慶市婦幼保健院進(jìn)行CT、UU檢測(cè)的按以下去重標(biāo)準(zhǔn)排除后剩下的11284例成年患者納入研究。其中男性7533例，女性3751例。年齡18～78歲，平均(30.97±5.40)歲。男性患者的臨床診斷主要為附睪炎、前列腺炎、龜頭炎、尿道炎等泌尿生殖道相關(guān)感染，男性不育癥，健康查體等。女性患者的臨床診斷主要為陰道炎、宮頸炎、盆腔炎、尿道炎等泌尿生殖道相關(guān)感染，女性不孕癥，健康查體等。去重標(biāo)準(zhǔn)：①如同一患者多次送檢均為陰性，只計(jì)算一次陰性。②如首次檢查結(jié)果為陽性，治療后結(jié)果為陰性，則按首次陽性結(jié)果統(tǒng)計(jì)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者采樣前一周使用過抗菌藥物。②使用陰道栓劑等外用藥物或沖洗劑。

1.2 儀器與試劑 核酸擴(kuò)增儀采用美國PE公司的ABI7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。CT、UU DNA檢測(cè)試劑盒購自湖南圣湘公司。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集與保存

1.3.1.1 生殖道拭子 取無菌棉拭子插入男性尿道口(尿道拭子)或女性宮頸口(宮頸拭子)1～2 cm，旋轉(zhuǎn)拭子2～3周并停留10 s后取出，將拭子置于無菌管中，立即送檢。

1.3.1.2 精液 按照無菌操作的原則，男性禁欲3～5d后通過手淫法將精液樣本收集到無菌容器中立即送檢。

1.3.1.3 前列腺液 按照無菌操作的原則，經(jīng)肛門直腸按壓前列腺，前列腺液通過尿道滴到無菌容器中立即送檢。所有標(biāo)本4℃保存不超過24 h。

1.3.2 檢測(cè)方法 生殖道拭子加入約1 mL無菌生理鹽水充分震蕩混勻，將洗脫液轉(zhuǎn)入1.5 mL 的離心管中。12000 r/min 離心5 min，棄上清液。沉淀中加入50 μLDNA提取液后充分混勻。精液和前列腺液標(biāo)本先加入約1 mL無菌生理鹽水充分震蕩混勻，12000 r/min 離心1 min后吸取100 μL上清液于1.5 mL的離心管中。12000 r/min 離心5 min，棄上清液，沉淀中加入50 μL DNA 提取液后充分混勻。在室溫下靜置10 min以上取上清液5 μL加入PCR 擴(kuò)增體系，同時(shí)做陰陽性對(duì)照各一管，同標(biāo)本一起置入PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增。所有實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。按說明書要求進(jìn)行結(jié)果判讀：Ct≤39且擴(kuò)增曲線呈明顯S型判定為陽性。同時(shí)每批次陰、陽性對(duì)照和內(nèi)標(biāo)曲線的結(jié)果需符合相應(yīng)要求。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，檢出率以(%)表示，檢出率的比較采用2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 五年總體檢出情況 2017～2021年共檢測(cè)了11284例標(biāo)本，見表1。CT、UU及CT+UU混合感染的總體檢出率分別為4.51%(509/11284)、43.31%(4887/11284)、2.75%(310/11284)。UU的總體檢出率顯著高于CT(2=4668.225，P<0.001)。各項(xiàng)檢出率在2019年略有下降，但五年間總體呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，均在2021年達(dá)到最高，且顯著高于2017年(2=21.230, 12.553, 19.758，均P<0.001)。

表1 2017～2021年CT、UU及CT+UU混合感染檢出情況[n(×10-2)]Table 1 Overall detections of CT, UU and CT+UU mixed infection from 2017 to 2021

2.2 檢出率的性別分布 女性CT、UU、CT+UU混合感染的檢出率均顯著高于男性(均P<0.001)，見表2。相同性別患者中，UU的檢出率也顯著高于CT(2=1983.025、 3085.125, 均P<0.001)。

表2 不同性別患者檢出情況比較[n(×10-2)]Table 2 Comparison of detections of patients of different genders

2.3 檢出率的年齡分布 根據(jù)成年人群育齡段劃分方式[3]，將11284例患者共分為3個(gè)年齡組。各項(xiàng)檢出率在3個(gè)年齡組間總體上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.001)，其中18～<30歲低育齡組患者的各項(xiàng)檢出率均顯著高于30～45歲高育齡組患者(2=15.891, 36.962、17.401，均P<0.001)。而45歲以上組與前兩組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表3。

表3 不同年齡段患者檢出情況比較[n(×10-2)]Table 3 Comparison of detections of patients of different ages

2.4 不同季節(jié)檢出情況比較 根據(jù)季節(jié)劃分及重慶地區(qū)氣候特點(diǎn)，按照標(biāo)本采樣時(shí)間分為春(3～5月)、夏(6～8月)、秋(9～11月)、冬(12～2月)四季。UU檢出率在四季間總體上有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其中冬季檢出率顯著高于夏季(2=10.812，P=0.001)。而CT的檢出率在四季間總體上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但秋季檢出率顯著高于夏季(2=4.624，P=0.032)，見表4。

表4 不同季節(jié)檢出情況比較[n(×10-2)]Table 4 Comparison of detections in different seasons

2.5 男性不同類型標(biāo)本檢出情況比較 男性三種不同類型標(biāo)本CT、UU的檢出率總體上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.001)，其中尿道分泌物CT、UU的檢出率顯著高于精液標(biāo)本(2=117.627、31.957，均P<0.001)，但這兩類標(biāo)本與前列腺液相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見表5。

表5 男性不同類型標(biāo)本檢出情況比較[n(×10-2)]Table 5 Comparison of detections in different types of male specimens

2.6 不同診斷患者檢出情況比較 不同診斷患者的檢出情況見表6。健康查體女性CT、UU的檢出率均顯著高于健康查體男性(2=12.315, 857.605, 均P<0.001)。女性不孕癥患者CT、UU檢出率也顯著高于男性不育癥(2=4.564、158.365，均P<0.05)。泌尿生殖道感染患者中，女性UU檢出率顯著高于男性(2=113.146，P<0.001)，但兩組CT檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=0.282，P=0.595)。男性泌尿生殖道感染患者CT、UU檢出率均顯著高于健康查體者男性(2=126.167、5.983，均P<0.05)。男性不育癥患者UU的檢出率顯著高于健康查體者男性(2=5.311，P=0.021)，但兩組CT的檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=3.109，P=0.078)。女性不孕癥患者CT、UU檢出率均顯著高于健康查體者女性(2=8.113、10.277,P=0.004、 0.001)。女性泌尿生殖道感染患者CT的檢出率顯著高于健康查體者女性(2=59.261，P<0.001)，但兩者UU的檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=0.506，P=0.477)。

表6 不同診斷患者檢出情況比較[n(×10-2)]Table 6 Comparison of detections in patients with different diagnoses

3 討論

成年人群是STD的易感人群，對(duì)該人群進(jìn)行CT、UU的流行病學(xué)分析對(duì)于STD的防治具有重要意義。本次研究結(jié)果顯示，重慶地區(qū)近五年CT、UU及CT+UU混合感染的總體檢出率分別為4.51%、43.31%、2.75%。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道北京地區(qū)CT、UU及CT+UU檢出率分別為8.43%，42.88%、4.13%[4]，柳州地區(qū)CT、UU檢出率分別為10.90%、61.5%[5]。提示CT、UU的檢出率存在一定的地區(qū)差異，可能與各地氣候、醫(yī)療、教育、風(fēng)俗等因素以及當(dāng)?shù)鼐驮\人群差異有關(guān)。本次研究發(fā)現(xiàn)近5年來重慶地區(qū)檢出率呈總體上升的趨勢(shì)，表明本地區(qū)成年人群生殖道感染情況正逐年加重，且顯著高于2000～2002年本地區(qū)女性UU的檢出率5.74%[6]。這可能也與二十年來臨床采樣經(jīng)驗(yàn)不斷積累、相關(guān)檢測(cè)技術(shù)不斷提升有關(guān)。

CT、UU檢出率在不同性別和年齡的患者中也存在一定差異。本次研究發(fā)現(xiàn)女性的各項(xiàng)檢出率均顯著高于男性 (P<0.001)，這與王敬仁等[5]的研究結(jié)果一致。原因可能與女性泌尿生殖道的解剖結(jié)構(gòu)有關(guān)。女性生殖道的微環(huán)境(如溫度、濕度等)可能更適合UU生存。而CT對(duì)人體柱狀上皮的侵入率高于鱗狀上皮，最常見的入侵部位是女性宮頸管，因而女性CT感染率通常高于男性[7]。但北京、深圳地區(qū)的研究結(jié)果均是男性CT檢出率顯著高于女性[4,8]。原因除地區(qū)差異外，可能還與婦幼保健院和綜合性醫(yī)院就診的男性患者群體差異、送檢的男性標(biāo)本類型和標(biāo)本數(shù)量等因素有關(guān)。本次研究發(fā)現(xiàn)，重慶地區(qū)18～<30歲低育齡段患者的檢出率顯著高于30～45歲高育齡段患者，這與陳京[3]報(bào)道的中山地區(qū)的檢測(cè)結(jié)果一致。因30歲以下成年人群處于性活躍期和生育高峰期。該年齡段患者性行為頻繁、不潔性生活和避孕措施不當(dāng)?shù)染钦T發(fā)生殖道病原體感染的危險(xiǎn)因素。育齡期生殖道感染不僅會(huì)增加胎膜早破、不良妊娠結(jié)局的發(fā)生概率，還會(huì)增加新生兒母嬰傳播的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)還有研究顯示CT+UU混合感染的孕產(chǎn)婦胎膜早破的發(fā)生率進(jìn)一步增高[9]。因此提示臨床需加強(qiáng)對(duì)本地區(qū)30歲以下人群的生殖道病原體常規(guī)篩查和重點(diǎn)防治。本次研究還發(fā)現(xiàn)，45歲以上患者各項(xiàng)檢出率較30～45歲年齡段有所增高，雖差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但提示重慶地區(qū)45歲以上人群中可能具有較高的CT、UU感染風(fēng)險(xiǎn)。有文獻(xiàn)表明該年齡段人群性活躍度增高，高危行為可能普遍存在[10]。也需引起重視。

WHO指出，CT、UU感染者中無癥狀患者比例可高達(dá)60%～70%[11]。本次研究的健康查體患者中，男性CT、UU檢出率分別為2.56%、29.55%，女性分別為4.15%、67.99%。因健康查體患者大多無明顯癥狀和體征，這表明重慶地區(qū)成年男女均存在CT、UU隱匿感染，且女性的隱匿感染率顯著高于男性(均P<0.001)。因此臨床上需加強(qiáng)對(duì)無明顯癥狀的患者，尤其是女性患者生殖道病原體的常規(guī)篩查。

診斷明確的男性患者中，泌尿生殖道感染患者CT、UU檢出率均顯著高于健康查體者(均P<0.05)，這與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)論一致[12]。而男性不育癥UU的檢出率顯著高于健康查體患者(P<0.05)。這提示CT與男性泌尿生殖道感染存在相關(guān)性，而UU對(duì)男性不育和泌尿生殖道感染均有相關(guān)性。此前的研究表明，CT感染是男性非淋菌性尿道炎最常見的病因，未經(jīng)及時(shí)有效治療者多數(shù)轉(zhuǎn)變成慢性，并出現(xiàn)周期性加重，?？珊喜⒏讲G炎、前列腺炎等感染性疾病。而UU多寄生在男性尿道、陰莖包皮中，上行感染可引起前列腺炎、附睪炎等，還對(duì)精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)等有一定影響，可導(dǎo)致男性精母細(xì)胞空泡化而影響精子正常發(fā)育而引起不育[13]。提示臨床對(duì)于男性不育癥患者需加強(qiáng)UU常規(guī)篩查，而泌尿生殖道感染患者需同時(shí)進(jìn)行CT、UU篩查。此外本次研究還發(fā)現(xiàn)，男性患者不同類型樣本之間的檢出率有顯著差異。尿道分泌物標(biāo)本的檢出率顯著高于精液(P<0.001)。這與許媛等[14]的研究結(jié)果一致。因尿道拭子采樣在黏膜表面擦拭能夠獲取更多病原體，而精液標(biāo)本中包含的脫落細(xì)胞含病原體較少而檢出率較低[3]。這提示臨床盡量?jī)?yōu)先選擇尿道分泌物標(biāo)本送檢，以提高檢出率避免漏診。

診斷明確的女性患者中，泌尿生殖道感染患者CT檢出率均顯著高于健康查體者(P<0.05)。而女性不孕癥CT、UU的檢出率均顯著高于健康查體者(均P<0.05)。這提示UU與女性不孕存在相關(guān)性，而CT對(duì)女性不孕和泌尿生殖道感染均有相關(guān)性。此前的研究表明，CT侵入女性機(jī)體后主要累及宮頸磷柱交界部以上的柱狀上皮引發(fā)生殖道感染[15]。炎癥可引發(fā)生殖道粘連進(jìn)而堵塞輸卵管阻礙精子上行，并消耗宮頸黏液葡萄糖含量降低精子活力[16]。UU定植于女性生殖道對(duì)精子有黏附、阻礙其運(yùn)動(dòng)的作用，產(chǎn)生的神經(jīng)氨酸酶樣物質(zhì)還可干擾精子和卵子的正常結(jié)合而影響受孕[17]。但有研究顯示UU在女性中定植率可高達(dá)80%左右。正常情況下感染后可不致病[18]，即處于一種攜帶狀態(tài)，但當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)，UU可大量繁殖引起生殖道炎癥等不良后果[19]。本次研究發(fā)現(xiàn)女性健康查體者和泌尿生殖道感染患者之間的UU檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這也表明重慶地區(qū)成年女性中普遍存在較高的UU無癥狀攜帶率，因而有必要加強(qiáng)對(duì)本地區(qū)成年女性生殖道UU的常規(guī)篩查。但單純從患者標(biāo)本中檢出UU DNA并不能確定其是否致病，臨床醫(yī)師應(yīng)結(jié)合患者接觸史、癥狀和體征等方面綜合分析。并嚴(yán)格把握治療指征，既不能盲目濫用抗生素，同時(shí)也要考慮可能引起的感染后果，以免延誤治療。

此前的研究對(duì)CT、UU的季節(jié)檢出率差異分析較少。文獻(xiàn)報(bào)道柳州地區(qū)CT檢出率在夏季最高(P<0.05)，UU無顯著的季節(jié)差異[5]。而南寧地區(qū)UU夏季檢出率最高(P<0.05)，CT無顯著的季節(jié)差異[20]。本研究首次發(fā)現(xiàn)重慶地區(qū)UU的冬季檢出率顯著高于夏季(P<0.05)，而CT在秋季檢出率也顯著高于夏季(P<0.05)。這可能與重慶地區(qū)的氣候特點(diǎn)和就診人群特點(diǎn)有關(guān)，提示臨床可做一些季節(jié)性的預(yù)防措施，但仍有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)本地區(qū)CT、UU感染現(xiàn)狀不容樂觀，不同性別、年齡、標(biāo)本類型、診斷和季節(jié)的檢出率均存在一定差異；臨床需加強(qiáng)對(duì)重點(diǎn)人群的常規(guī)篩查和健康引導(dǎo)，重視無癥狀人群的隱匿感染，積極防治，減少STD 的感染和傳播。