陳 琦，田來明，李 男

長春市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林長春 130111

布魯氏菌病是制約梅花鹿產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要人畜共患病，感染較為普遍，甚至存在垂直傳播的風(fēng)險(xiǎn)。該病由布魯氏菌（Brucella）引發(fā)，鹿發(fā)生本病多呈慢性經(jīng)過，早期癥狀不明顯，隨病情發(fā)展，患病的梅花鹿食欲有所減退，體質(zhì)明顯減弱，皮下淋巴結(jié)腫大，生長速度緩滯，被毛蓬松無光澤、精神遲鈍。鹿布魯氏菌病特征性臨床表現(xiàn)為母鹿發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)出多為死胎，公鹿發(fā)生附睪炎和睪丸炎。

梅花鹿布魯氏菌病給畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來的危害是十分嚴(yán)重的，因此采取科學(xué)的防疫措施迫在眉睫。近年來，采用嚴(yán)格的凈化技術(shù)，建立長效的凈化機(jī)制已經(jīng)成為日后防控工作的要點(diǎn)。凈化技術(shù)主要是通過監(jiān)測、檢測發(fā)現(xiàn)患病動物，通過淘汰這些動物逐步控制鹿場布病感染源和傳播途徑，使得該區(qū)域的梅花鹿不發(fā)生布魯氏菌病和無感染布魯氏菌病的狀態(tài)。該項(xiàng)技術(shù)對于梅花鹿產(chǎn)業(yè)發(fā)展意義深遠(yuǎn)，前景廣闊。本文主要闡述了梅花鹿的布病凈化措施，為梅花鹿行業(yè)布病凈化提供參考與借鑒。

1 監(jiān)測

疫病監(jiān)測是防控梅花鹿布魯氏菌病的重要內(nèi)容，監(jiān)測過程中對梅花鹿整個過程進(jìn)行記錄，對于掌握生長規(guī)律、把握健康情況具有重要的作用；監(jiān)測最重要的一點(diǎn)就是可在第一時間發(fā)現(xiàn)梅花鹿布魯氏菌病，可根據(jù)監(jiān)測記錄采取針對性的制定防疫措施，控制梅花鹿布魯氏菌病大規(guī)模傳播。

1.1 監(jiān)測方法

監(jiān)測主要方法有以下幾種：臨床監(jiān)測主要采取定期監(jiān)測的方式。通過監(jiān)測可了解布魯氏菌病流行變化的趨勢、影響疫病發(fā)生、流行和分布的因素以及預(yù)期疫病未來的流行趨勢，進(jìn)而提早制定防疫措施；病原學(xué)監(jiān)測是根據(jù)疫病流行現(xiàn)狀，應(yīng)用各種病原學(xué)檢測方法重點(diǎn)檢測布魯氏菌病病原體；血清學(xué)監(jiān)測是對血清采取流行病學(xué)的調(diào)查方法，通過研究機(jī)體內(nèi)特定病原血清抗體出現(xiàn)和分布的規(guī)律，以闡明所監(jiān)測疫病在動物群體中的分布及其原因。

1.2 監(jiān)測方案

在制定監(jiān)測方案時一要明確監(jiān)測的目的；二是對梅花鹿布魯氏菌病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，調(diào)查有無疫病發(fā)生；三是明確采樣的時機(jī)、采樣的數(shù)量；四是根據(jù)監(jiān)測的目的確定檢測的方法。

1.2.1 目標(biāo)群監(jiān)測

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果將已感染鹿群全部淘汰或撲殺；未感染的鹿群按照證明無疫公式（置信水平=95%，預(yù)期流行率=3%）；隨機(jī)進(jìn)行抽樣，繼續(xù)進(jìn)行監(jiān)測。

1.2.2 持續(xù)監(jiān)測

達(dá)到布魯氏菌病凈化狀態(tài)或通過評估認(rèn)證后，梅花鹿養(yǎng)殖場每半年開展1次維持性監(jiān)測。

2 診斷

主要有以下幾種常見的檢測方法，分別為病原學(xué)診斷方法（布魯氏菌病原體分離鑒定）、血清學(xué)診斷方法（虎紅平板凝集、試管凝集、補(bǔ)體結(jié)合、ELISA等）、PCR分子生物學(xué)診斷以及膠體金免疫層析技術(shù)。各診斷方法優(yōu)缺點(diǎn)及適用范圍見表1。

表1 診斷方法優(yōu)缺點(diǎn)及適用范圍

布魯氏菌病原體分離鑒定方法是將組織樣品接種于培養(yǎng)基上，放于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，觀察菌落狀態(tài)，使用結(jié)晶紫進(jìn)行染色，初步鑒定是否為布魯氏菌，進(jìn)一步通過對CO2需求試驗(yàn)、H2S試驗(yàn)、氯化酶試驗(yàn)、脲酶試驗(yàn)等試驗(yàn)判定是否為布魯氏菌。

虎紅平板凝集試驗(yàn)是將被檢血清與抗原相混合，觀察混合后的結(jié)果，陽性(+)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為肉眼觀察可見凝集現(xiàn)象；陰性(-)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為無凝集現(xiàn)象且反應(yīng)混合液呈粉紅色。

試管凝集試驗(yàn)是將抗原稀釋后，加入不同稀釋度的被檢血清，觀察是否有凝集現(xiàn)象，陽性(+)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為被檢血清出現(xiàn)“++”及以上凝集現(xiàn)象；陰性(-)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為被檢血清出現(xiàn)“-”時現(xiàn)象；若被檢血清出現(xiàn)“+”凝集現(xiàn)象，則為疑似現(xiàn)象。

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是將滅能的被檢血清與抗原及補(bǔ)體混合使其反應(yīng)，再加入溶血素及紅細(xì)胞，觀察是否出現(xiàn)溶血，陽性(+)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為40%溶血；陰性(-)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為100%溶血；若50%～90%溶血則為疑似現(xiàn)象。

ELISA試驗(yàn)是參照說明書檢測被檢血清的OD值，陽性(+)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為被檢血清的OD值≤臨界值；陰性(-)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為被檢血清的OD值＞臨界值。

PCR分子生物學(xué)診斷是使用凝膠電泳實(shí)驗(yàn)觀察電泳圖上是否有相對應(yīng)目標(biāo)條帶出現(xiàn)，在電泳圖上出現(xiàn)所對應(yīng)目標(biāo)條帶則為陽性(+)；在電泳圖上未出現(xiàn)所對應(yīng)目標(biāo)條帶則為陰性(-)。

膠體金免疫層析技術(shù)是將被檢血清滴入膠體金檢測卡中，陽性(+)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為在檢測線位置出現(xiàn)特異性條帶；陰性(-)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為在檢測線位置未能出現(xiàn)特異性條帶。

3 免疫

第一年使用布氏桿菌羊型5號弱毒凍干疫苗皮下注射，成年鹿和育成鹿按250億活菌數(shù)/每次/每頭皮下注射；哺乳期仔鹿30～40億活菌數(shù)/每次/每頭皮下注射?？诜r每頭鹿每次400億活菌數(shù)飲用。

4 疫病的凈化

4.1 確定流行病區(qū)域

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，劃分感染等級，按其陽性感染率分為低感染地區(qū)、中感染地區(qū)和高感染地區(qū)，確定流行病分布區(qū)域。

4.2 凈化模式

4.2.1 快速凈化模式，主要為檢測、淘汰、不免疫的模式。

4.2.2 免疫凈化模式，主要為免疫、監(jiān)測、自然淘汰為主的模式。

4.2.3 快速控制防控模式，主要為檢測、淘汰、免疫為主的模式。

根據(jù)不同區(qū)域采取不同的凈化模式，低感染區(qū)域若經(jīng)濟(jì)較好、疫情較輕，可采用快速凈化模式，若經(jīng)濟(jì)狀況一般且陽性率較低，可采用免疫凈化模式。中感染地區(qū)和高感染地區(qū)若陽性率較高且近年來持續(xù)發(fā)病，采取快速控制防控模式。

4.3 凈化措施

4.3.1 采取嚴(yán)格的防疫體系。對梅花鹿生活的場所、用具要落實(shí)嚴(yán)格的消毒措施，定期地對梅花鹿進(jìn)行布魯氏菌病的檢測，嚴(yán)格按規(guī)范免疫程序免疫接種，同時對抗體效價進(jìn)行定期監(jiān)測，若發(fā)現(xiàn)抗體效價低的情況下及時進(jìn)行免疫接種。

4.3.2 落實(shí)嚴(yán)格的生物安全措施。無疫病的鹿場或種群應(yīng)盡量保持“自繁自養(yǎng)”，若因擴(kuò)大鹿群需要引進(jìn)鹿只，則引進(jìn)鹿時要從非疫區(qū)且是布魯氏菌病凈化場引進(jìn)，引進(jìn)時需要進(jìn)行檢疫。引進(jìn)后認(rèn)真執(zhí)行隔離觀察制度，隔離45 d，經(jīng)2次檢測陰性后方能合群。根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際情況，對鹿群進(jìn)行定期監(jiān)測，同時每年至少應(yīng)進(jìn)行2次集中檢測。

4.3.3 嚴(yán)格執(zhí)行無害化處理制度。若發(fā)現(xiàn)陽性鹿只，將其全部淘汰或撲殺，同時將同群未被感染的鹿放入隔離點(diǎn)進(jìn)行至少45 d的隔離觀察；定期消毒，隔離期滿后經(jīng)檢測沒有陽性鹿后方可混群飼養(yǎng)，阻斷傳染源頭繼續(xù)傳播，防止梅花鹿布魯氏菌病的進(jìn)一步擴(kuò)散。

5 凈化效果的評估

凈化的效果主要是分為兩種，一種是無疫，一種是無感染。對鹿群實(shí)施連續(xù)監(jiān)測、撲殺相結(jié)合的防控措施，確認(rèn)該梅花鹿群體中連續(xù)2年未出現(xiàn)陽性病例且未發(fā)現(xiàn)布魯氏菌病抗體呈現(xiàn)陽性的梅花鹿，即認(rèn)為達(dá)到布魯氏菌病凈化狀態(tài)。

6 結(jié)論

布魯氏菌病對于梅花鹿具有很強(qiáng)的危害性，甚至存在傳播給人類的風(fēng)險(xiǎn)，布病凈化技術(shù)通過定期監(jiān)測、多種方法檢測、嚴(yán)格隔離、及時撲殺和無害化處理等措施，可以大概率消滅鹿布魯氏菌病的傳染源，及時切斷傳播途徑，逐步的使種群內(nèi)個體實(shí)現(xiàn)不發(fā)病和無感染的狀態(tài)。該項(xiàng)技術(shù)可以有效的推進(jìn)布病向凈化階段轉(zhuǎn)變，降低人畜共患病的發(fā)生概率，促進(jìn)畜牧業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。