王思思 謝雙雙 孟玥秀 張翔云 劉云春 王玲玲 王艷飛

（河北北方學院附屬第一醫(yī)院 1.婦產科；2.新生兒科，河北張家口 075000）

宮內炎癥是引起早產兒腦損傷的主要致病因素，可導致腦室周圍白質軟化壞死、神經元凋亡等病理現(xiàn)象，造成早產兒腦性癱瘓、視聽及語言障礙、認知能力下降等神經系統(tǒng)后遺癥［1-2］。小膠質細胞激活引發(fā)的炎癥級聯(lián)反應和細胞焦亡是宮內感染造成早產兒腦損傷的主要機制，控制宮內感染引發(fā)的炎癥和小膠質細胞焦亡是防治早產兒腦損傷的關鍵［3-4］。核因子E2相關因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）是機體主要的抗氧化分子，在各種腦損傷疾病的發(fā)生機制中起到重要調控作用，上調Nrf2可通過減輕神經炎癥而抑制神經元死亡［5］，還可抵抗脂多糖誘導的母嬰炎癥，防治宮內炎癥引起的早產和圍生期腦損傷［6］，由此可知，Nrf2是防治宮內炎癥所致早產腦損傷的重要靶點。

燈盞花素是從燈盞花中提取的一類總黃酮，有抗菌消炎、抗血栓、抗氧化、清除自由基的作用，在臨床常用于腦梗死、冠心病等心腦血管疾病的治療，可明顯減輕腹腔鏡全子宮切除術患者圍術期應激反應及炎癥反應，促進患者術后恢復［7］。燈盞花素還可通過激活Nrf2信號通路下調炎性因子白細胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-6水平，從而抑制大鼠液壓沖擊腦損傷后腦組織炎性損傷［8］。由此推測燈盞花素可能通過激活Nrf2信號通路而抑制宮內炎癥所致早產大鼠腦損傷與小膠質細胞焦亡。

本文以燈盞花素處理宮內炎癥致早產腦損傷模型大鼠，探究燈盞花素是否可通過其抗炎作用減輕宮內炎癥所致早產大鼠腦損傷，以Nrf2抑制劑（ML385）和燈盞花素聯(lián)合處理宮內炎癥致早產腦損傷模型大鼠，檢測ML385是否可逆轉燈盞花素對宮內炎癥致早產大鼠腦損傷的保護作用，進而探究燈盞花素對宮內炎癥致早產大鼠腦損傷的保護作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物

SPF級Sprague-Dawley大鼠購自山西醫(yī)科大學實驗動物中心，生產許可證號SCXK（晉）2019-0007。雄性28只，約7周齡，體重240~270 g；雌性56只，約7周齡，體重190~220 g，均在本院屏障環(huán)境動物房中心適應飼養(yǎng)，1周后用于實驗，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（24±1）℃，濕度為44%±5%，晝夜時長12 h∶12 h。

1.2 主要藥物、試劑及儀器

注射用燈盞花素購自湖南恒生制藥股份有限公司，ML385、脂多糖、兔源抗大鼠血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）一抗購自北京索萊寶科技有限公司，蘇木精-伊紅（hematoxylineosin，HE）染色試劑盒、免疫熒光染色試劑盒-Alexa Fluor 488標記的抗小鼠二抗、免疫熒光染色試劑盒-Alexa Fluor 555標記的抗兔二抗、大鼠IL-1β酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒、RIPA裂解液、山羊抗兔二抗、兔源抗大鼠核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白 3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）一抗、兔源抗大鼠Nrf2一抗、兔源抗大鼠β-肌動蛋白（β-actin）一抗購自上海碧云天生物技術有限公司，兔源抗大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（caspase-1）一抗、小鼠源抗大鼠離子鈣接頭蛋白分子-1（ionized calcium binding adaptor molecule-1，IBA-1）一抗、兔源抗大鼠NLRP3一抗購自美國Abcam公司，BCA法總蛋白定量測定試劑盒、IL-6 ELISA試劑盒、IL-8 ELISA試劑盒購自南京建成生物工程研究所，MF-53N型倒置熒光顯微鏡購自蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司，F(xiàn)lexA-200型全波長酶標儀購自杭州奧盛儀器有限公司，E-Gel Imager型凝膠成像系統(tǒng)購自廣州道一科學技術有限公司。

1.3 宮內炎癥致早產腦損傷仔鼠模型建立及分組給藥

制備宮內炎癥致早產腦損傷大鼠模型［9］：將雄雌大鼠以1∶2的比例合籠，檢查陰栓選出受孕成功的雌鼠，記為妊娠第1天，于孕鼠妊娠第16天腹腔內注射350 μg/kg脂多糖，連續(xù)注射2 d至妊娠第17天結束，孕期≤21 d表明早產造模成功［9］。將早產造模成功的孕鼠隨機分為模型組、燈盞花素低劑量（45 mg/kg）組、燈盞花素高劑量（90 mg/kg） 組［8］、燈盞花素高劑量 （90 mg/kg）+ML385 （30 mg/kg） 組［10］，每組10只孕鼠；再隨機選取10只孕鼠腹腔內注射等量0.9%氯化鈉溶液作為對照組。

用0.9%氯化鈉溶液將燈盞花素和ML385配制成濃度為4.5、9 mg/mL的燈盞花素溶液，9 mg/mL的燈盞花素和3 mg/mL的ML385混合藥液，各組孕鼠于妊娠第17天給藥（注射脂多糖后）。燈盞花素低劑量組、燈盞花素高劑量組孕鼠分別以10 mL/kg的劑量腹腔內注射4.5、9 mg/mL的燈盞花素，使燈盞花素的劑量分別為45 mg/kg、90 mg/kg［8］；燈盞花素高劑量+ML385組孕鼠以10 mL/kg的劑量腹腔內注射9 mg/mL的燈盞花素和3 mg/mL的ML385混合藥液，使燈盞花素和ML385［10］的劑量分別為90 mg/kg、30 mg/kg；模型組和對照組孕鼠以10 mL/kg的劑量腹腔內注射0.9%氯化鈉溶液，每天早上9∶00注射1次，共注射2 d。

每組的10只孕鼠生產后，隨機自每組所有存活仔鼠中各選出10只，于出生后給藥（每天給藥后送回母鼠旁喂養(yǎng)）。燈盞花素低劑量組、燈盞花素高劑量組仔鼠分別腹腔內注射45 mg/kg、90 mg/kg的燈盞花素；燈盞花素高劑量+ML385組仔鼠腹腔內注射90 mg/kg燈盞花素和30 mg/kg的ML385；模型組和對照組仔鼠以10 mL/kg的劑量腹腔內注射0.9%氯化鈉溶液，每天早上9∶00注射1次，共注射7 d。

1.4 測定各組孕鼠產出的仔鼠存活數(shù)和體重及標本收集

各組孕鼠生產后，計數(shù)每只孕鼠產出的仔鼠存活數(shù)，稱量每只仔鼠體重，每組取平均值。異氟醚吸入麻醉產后的孕鼠，分離取出子宮和胎盤，清洗后浸沒入冷凍切片所需的包埋劑中，以液氮迅速冷凍成塊后，經專業(yè)技術員切片得到厚為4 μm的子宮和胎盤組織切片備用。

1.5 HE染色檢測各組孕鼠子宮、胎盤病理形態(tài)及仔鼠腦組織病理形態(tài)

各組仔鼠于7 d給藥結束后24 h，異氟醚吸入麻醉后脫頸椎處死，解剖分離出仔鼠大腦，剪下0.4 g左腦組織加入1 mL 0.9%氯化鈉溶液研磨勻漿，取離心后的上清置于-80℃?zhèn)溆?；再次剪?.4 g左腦組織加入1 mL RIPA裂解液研磨勻漿，100℃加熱變性，以BCA法測定離心后上清中總蛋白濃度，置于-80℃?zhèn)溆?；剩余左腦組織清洗后浸沒入冷凍切片包埋劑中，以液氮迅速冷凍成塊后切片，得到厚為4 μm的腦組織切片，與1.4中子宮和胎盤組織切片一起在室溫下靜置復溫，5 min后孵育冰丙酮固定15 min后取出，每只大鼠取子宮和胎盤組織切片3張，同時取具有腦室周圍白質結構的腦組織切片3張，參照HE染色試劑盒說明進行，蒸餾水洗滌后在正常光下用顯微鏡觀察并拍照。

1.6 免疫熒光染色法檢測各組仔鼠腦皮質小膠質細胞焦亡情況

取出1.4中各組仔鼠腦組織切片，室溫下靜置復溫，5 min后孵育冰丙酮固定，分別孵育3%雙氧水5 min后取出，3%牛血清白蛋白孵育2 h后取出，孵育IBA-1和NLRP3一抗（均1∶200稀釋）過夜后洗滌，孵育Alexa Fluor 488標記的抗小鼠二抗（1∶100）和Alexa Fluor 555標記的抗兔二抗（1∶100）2 h，參照免疫熒光染色試劑盒說明書進行免疫熒光染色，避光洗滌后在熒光顯微鏡激發(fā)光下觀察IBA-1與NLRP3共表達情況并拍照。Image J軟件定量分析IBA-1與NLRP3共表達熒光強度，計算IBA-1與NLRP3共表達相對熒光強度=實驗組IBA-1與NLRP3共表達熒光強度/對照組IBA-1與NLRP3共表達熒光強度。

1.7 ELISA法檢測各組仔鼠腦組織炎性細胞因子IL-6、IL-8、IL-1β水平

將1.4中各組仔鼠腦組織樣品液取出置于4℃解凍，取0.2 mL參照ELISA試劑盒說明測量其中IL-6、IL-8、IL-1β含量。

1.8 免疫印跡法檢測各組仔鼠腦組織中Nrf2通路相關蛋白表達

將1.5中測出總蛋白濃度的各組仔鼠腦組織樣品液取出，置于4℃解凍后每組取出20 μg總蛋白，加入適量上樣緩沖液并置于100℃水浴變性，通過跑電泳后濕轉，將其按分子量大小分離轉移至硝酸纖維素膜，根據目的蛋白分子量將其自膜上剪下后都浸沒入3%牛血清白蛋白溶液中，室溫孵育2 h封閉蛋白非特異位點，然后分別孵育相應的NLPR3、caspase-1、Nrf2、HO-1、β-actin一抗（分別按 1∶1 000、1∶3 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000稀釋）、山羊抗兔二抗（1∶1 500），化學發(fā)光法顯影后掃描出蛋白條帶圖片，運用圖像處理軟件Image J分析各蛋白灰度值，以β-actin為內參，計算目的蛋白相對表達量。

1.9 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 燈盞花素對仔鼠存活數(shù)和體重的影響

與對照組相比，模型組仔鼠存活數(shù)和體重降低（P<0.05）；與模型組相比，燈盞花素低、高劑量組仔鼠存活數(shù)和體重均升高（P<0.05）；與燈盞花素低劑量組相比，燈盞花素高劑量組仔鼠存活數(shù)和體重均升高（P<0.05）。與燈盞花素高劑量組相比，燈盞花素高劑量+ML385組仔鼠存活數(shù)和體重降低（P<0.05）。見表1。

表1 各組仔鼠存活數(shù)和體重 （± s，n=10）

表1 各組仔鼠存活數(shù)和體重 （± s，n=10）

注：a示與對照組比較，P<0.05；b示與模型組比較，P<0.05；c示與燈盞花素低劑量組比較，P<0.05；d示與燈盞花素高劑量組比較，P<0.05。

images/BZ_93_1320_758_1755_817.pngimages/BZ_93_1320_876_1755_935.pngimages/BZ_93_1320_994_1755_1112.pngimages/BZ_93_1755_758_2034_817.pngimages/BZ_93_1755_876_2034_935.pngimages/BZ_93_1755_994_2034_1112.png組別對照組燈盞花素低劑量組燈盞花素高劑量+ML385組仔鼠存活數(shù)(只)11.2±1.7 8.3±0.9b 6.1±0.5d仔鼠體重(g)7.6±0.7 5.1±0.4a 6.2±0.4b 7.4±0.5b,c 5.4±0.4d 54.735<0.000

2.2 燈盞花素對孕鼠子宮、胎盤及仔鼠腦組織病理形態(tài)的影響

對照組孕鼠子宮及胎盤形態(tài)完好正常；仔鼠腦室周圍白質結構完好清晰，神經纖維排列致密且走向整齊，整體形態(tài)正常無損傷。模型組孕鼠子宮及胎盤組織產生病理損傷，子宮壁和胎盤組織中有大量中性粒細胞浸潤且血管充血；仔鼠腦組織產生病理損傷，腦室旁白質結構稀疏并出現(xiàn)軟化灶，神經纖維紊亂、呈網狀或條索狀排列，神經元數(shù)目變少。與模型組相比，燈盞花素低、高劑量組孕鼠子宮、胎盤及仔鼠腦組織病理損傷均減輕；與燈盞花素低劑量組相比，燈盞花素高劑量組孕鼠子宮、胎盤及仔鼠腦組織病理損傷進一步減輕；與燈盞花素高劑量組相比，燈盞花素高劑量+ML385組孕鼠子宮、胎盤及仔鼠腦組織病理損傷加重。見圖1~2。

圖1 各組孕鼠子宮及胎盤病理形態(tài)（蘇木精-伊紅染色，×200） A：對照組；B：模型組；C：燈盞花素低劑量組；D：燈盞花素高劑量組；E：燈盞花素高劑量+ML385組。對照組孕鼠子宮及胎盤形態(tài)完好正常；模型組子宮壁和胎盤組織有大量中性粒細胞浸潤且血管充血；燈盞花素低劑量組子宮壁和胎盤組織有少量中性粒細胞浸潤，血管充血輕微；燈盞花素高劑量組子宮壁和胎盤組織有很少中性粒細胞浸潤，血管幾乎不充血；燈盞花素高劑量+ML385組子宮壁和胎盤組織有大量中性粒細胞浸潤且血管充血。箭頭所指為炎性浸潤。

2.3 燈盞花素對仔鼠腦皮質小膠質細胞焦亡的影響

對照組、模型組、燈盞花素低劑量組、燈盞花素高劑量組、燈盞花素高劑量+ML385組IBA-1與NLRP3共表達相對熒光強度分別為1.00±0、3.12±0.30、2.06±0.33、 1.29±0.32、2.91±0.35，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（F=105.041，P<0.001）。與對照組相比，模型組仔鼠腦皮質產生嚴重小膠質細胞焦亡，IBA-1和NLRP3共表達相對熒光強度升高（P<0.05）；與模型組相比，燈盞花素低、高劑量組仔鼠腦皮質小膠質細胞焦亡均減輕，IBA-1和NLRP3共表達相對熒光強度降低（P<0.05）；與燈盞花素低劑量組相比，燈盞花素高劑量組仔鼠腦皮質小膠質細胞焦亡減輕，IBA-1和NLRP3共表達相對熒光強度降低（P<0.05）；與燈盞花素高劑量組相比，燈盞花素高劑量+ML385組仔鼠腦皮質小膠質細胞焦亡加重，IBA-1和NLRP3共表達相對熒光強度升高（P<0.05）。見圖3。

圖3 各組仔鼠腦皮質中IBA-1和NLRP3共表達情況（免疫熒光染色，×200） A：對照組；B：模型組；C：燈盞花素低劑量組；D：燈盞花素高劑量組；E：燈盞花素高劑量+ML385組。IBA-1在仔鼠腦皮質中呈現(xiàn)明亮的綠色熒光；NLRP3在仔鼠腦皮質中呈現(xiàn)明亮的紅色熒光；DAPI標記仔鼠腦皮質細胞核染色，呈現(xiàn)藍色熒光；Merge為各組IBA-1、NLRP3和DAPI三者合成圖，IBA-1和NLRP3共表達相對熒光強度越低，表明仔鼠腦皮質小膠質細胞焦亡越輕。

2.4 燈盞花素對仔鼠腦組織中IL-6、IL-8及IL-1β水平的影響

與對照組相比，模型組仔鼠腦組織中IL-6、IL-8及IL-1β水平升高（P<0.05）；與模型組相比，燈盞花素低、高劑量組仔鼠腦組織中IL-6、IL-8及IL-1β水平均降低（P<0.05）；與燈盞花素低劑量組相比，燈盞花素高劑量組仔鼠腦組織中IL-6、IL-8及IL-1β水平降低（P<0.05）；與燈盞花素高劑量組相比，燈盞花素高劑量+ML385組仔鼠腦組織中IL-6、IL-8及IL-1β水平升高（P<0.05）。見表2。

表2 各組仔鼠腦組織中IL-6、IL-8及IL-1β水平比較 （± s，n=10）

表2 各組仔鼠腦組織中IL-6、IL-8及IL-1β水平比較 （± s，n=10）

注：［IL-6］白細胞介素-6；［IL-8］白細胞介素-8；［IL-1β］白細胞介素-1β。a示與對照組比較，P<0.05；b示與模型組比較，P<0.05；c示與燈盞花素低劑量組比較，P<0.05；d示與燈盞花素高劑量組比較，P<0.05。

images/BZ_95_273_2878_891_2932.pngimages/BZ_95_273_2985_891_3038.pngimages/BZ_95_273_3091_891_3197.pngimages/BZ_95_891_2878_1353_2932.pngimages/BZ_95_891_2985_1353_3038.pngimages/BZ_95_891_3091_1353_3197.pngimages/BZ_95_1353_2878_1816_2932.pngimages/BZ_95_1353_2985_1816_3038.pngimages/BZ_95_1353_3091_1816_3197.png組別對照組燈盞花素低劑量組燈盞花素高劑量+ML385組IL-6 (pg/g)74±10 178±20b 241±40d IL-8 (ng/g)215±34 628±51b 960±91d IL-1β (ng/g)197±32 835±87a 526±50b 214±46b,c 815±81d 242.669<0.001

圖2 各組仔鼠腦組織病理形態(tài)（蘇木精-伊紅染色，×200） A：對照組；B：模型組；C：燈盞花素低劑量組；D：燈盞花素高劑量組；E：燈盞花素高劑量+ML385組。對照組腦室旁白質結構完好清晰，神經纖維排列致密且走向整齊，整體形態(tài)正常；模型組腦室旁白質結構稀疏并出現(xiàn)軟化灶，神經纖維紊亂、呈網狀或條索狀排列，神經元數(shù)目變少；燈盞花素低劑量組腦室旁白質結構稀疏程度減輕，軟化灶減少，神經纖維紊亂減輕，神經元數(shù)目增多；燈盞花素高劑量組腦室旁白質結構變得緊密，軟化灶大大減少，神經纖維致密且走向整齊，神經元數(shù)目增多；燈盞花素高劑量+ML385組腦室旁白質結構稀疏并出現(xiàn)軟化灶，神經纖維紊亂、呈網狀或條索狀排列，神經元數(shù)目變少。箭頭所指為炎性浸潤。

2.5 燈盞花素對仔鼠腦組織中NLPR3、caspase-1、Nrf2、HO-1蛋白表達的影響

與對照組相比，模型組仔鼠腦組織中NLPR3、caspase-1蛋白表達升高（P<0.05），Nrf2、HO-1蛋白表達降低（P<0.05）；與模型組相比，燈盞花素低、高劑量組仔鼠腦組織中NLPR3、caspase-1蛋白表達降低（P<0.05），Nrf2、HO-1蛋白表達升高（P<0.05）；與燈盞花素低劑量組相比，燈盞花素高劑量組仔鼠腦組織中NLPR3、caspase-1蛋白表達降低 （P<0.05），Nrf2、HO-1蛋白表達升高（P<0.05）；與燈盞花素高劑量組相比，燈盞花素高劑量+ML385組仔鼠腦組織中NLPR3、caspase-1蛋白表達升高（P<0.05），Nrf2、HO-1蛋白表達降低（P<0.05）。見圖4、表3。

圖4 各組仔鼠腦組織中NLPR3、caspase-1、Nrf2、HO-1蛋白表達條帶圖 A：對照組；B：模型組；C：燈盞花素低劑量組；D：燈盞花素高劑量組；E：燈盞花素高劑量+ML385組。

表3 各組仔鼠腦組織中NLPR3、caspase-1、Nrf2、HO-1蛋白相對表達水平比較 （± s，n=10）

表3 各組仔鼠腦組織中NLPR3、caspase-1、Nrf2、HO-1蛋白相對表達水平比較 （± s，n=10）

注：［NLPR3］核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白3；［caspase-1］半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1；［Nrf2］核因子E2相關因子2；［HO-1］血紅素加氧酶-1。a示與對照組比較，P<0.05；b示與模型組比較，P<0.05；c示與燈盞花素低劑量組比較，P<0.05；d示與燈盞花素高劑量組比較，P<0.05。

images/BZ_96_273_1945_800_2008.pngimages/BZ_96_273_2067_800_2126.pngimages/BZ_96_273_2185_800_2244.pngimages/BZ_96_273_2303_800_2421.pngimages/BZ_96_800_1945_1184_2008.pngimages/BZ_96_800_2067_1184_2126.pngimages/BZ_96_800_2185_1184_2244.pngimages/BZ_96_800_2303_1184_2421.pngimages/BZ_96_1184_1945_1567_2008.pngimages/BZ_96_1184_2067_1567_2126.pngimages/BZ_96_1184_2185_1567_2244.pngimages/BZ_96_1184_2303_1567_2421.pngimages/BZ_96_1567_1945_1923_2008.pngimages/BZ_96_1567_2067_1923_2126.pngimages/BZ_96_1567_2185_1923_2244.pngimages/BZ_96_1567_2303_1923_2421.png對照組燈盞花素低劑量組燈盞花素高劑量+ML385組0.19±0.04 0.58±0.07b 0.86±0.09d 0.11±0.02 0.47±0.07b 0.81±0.10d 0.90±0.16 0.53±0.09b 0.36±0.06d HO-1 1.01±0.22 0.24±0.04a 0.57±0.08b 0.96±0.16b,c 0.29±0.05d 77.414<0.001

3 討論

宮內炎癥會導致早產兒腦損傷，不及時治療可遺留運動、智力、精神等方面的神經系統(tǒng)癥狀，采取積極有效措施減輕因早產導致的腦損傷可減少小兒傷殘的發(fā)生，有益于優(yōu)生優(yōu)育的實行［11-12］。小膠質細胞激活引起的細胞焦亡是神經炎癥導致腦損傷的主要病理基礎，NLRP3炎癥小體激活是其中的關鍵事件，減輕NLRP3誘導的小膠質細胞焦亡，可減輕炎癥反應導致的腦神經損傷［13］，IBA-1是小膠質細胞的標記物，檢測NLRP3和IBA-1的共表達情況可評測小膠質細胞激活引發(fā)的細胞焦亡水平［13-14］。本研究于妊娠第16天、第17天向孕鼠腹腔內注射350 μg/kg脂多糖構建宮內炎癥致早產大鼠模型，結果顯示脂多糖可增強促炎性細胞因子IL-6、IL-8及IL-1β表達，引發(fā)孕鼠宮內炎癥及子宮、胎盤組織損傷，最終導致仔鼠腦組織產生病理損傷，造成仔鼠存活數(shù)和體重降低，揭示宮內炎癥可造成孕鼠早產及仔鼠腦損傷。早產仔鼠腦皮質IBA-1和NLRP3共表達增強，腦組織中NLPR3、caspase-1蛋白表達水平升高，表明宮內炎癥可導致仔鼠腦部小膠質細胞焦亡。

宮內感染能觸發(fā)母嬰炎癥，并可誘導仔鼠神經系統(tǒng)炎癥，造成早產大鼠髓鞘發(fā)育不良、神經元減少等腦室周圍白質損傷［15］。控制并減輕宮內炎癥是防治早產小鼠腦損傷的有效手段［16］。燈盞花素是具有顯著抗炎作用的總黃酮類活性物質，臨床中常用其注射液治療顱腦損傷、腦梗死等神經系統(tǒng)疾病，燈盞花素聯(lián)合吡拉西坦可有效降低血清炎癥因子，改善中型顱腦損傷患者神經功能［17］，還可聯(lián)合阿加曲班減輕急性腦梗死患者神經功能缺損［18］，抑制腹腔鏡全子宮切除術患者圍術期炎癥及應激反應［7］，本研究以燈盞花素處理孕鼠和仔鼠，可降低仔鼠腦組織中IL-6、IL-8、IL-1β水平及NLPR3、caspase-1蛋白表達，升高仔鼠存活數(shù)和體重，減弱仔鼠腦皮質IBA-1和NLRP3共表達，并減輕孕鼠子宮、胎盤組織及仔鼠腦組織病理損傷，表明燈盞花素可下調促炎因子表達，抑制孕鼠宮內及仔鼠腦組織炎癥發(fā)生，減輕仔鼠腦組織病理損傷及小膠質細胞焦亡，促使仔鼠發(fā)育，改善孕鼠早產現(xiàn)象，最終對早產大鼠發(fā)揮腦保護作用。

Nrf2可通過調控活性氧自由基和炎性因子生成介導腦部神經炎癥，激活Nrf2信號可顯著抑制活性氧介導的炎癥和神經元細胞凋亡，減輕缺血性卒中后腦損傷［19］，還可促進抗氧化反應，下調促炎細胞因子表達，通過抗氧化和抗炎作用減輕氧自由基介導的早產兒腦損傷，對發(fā)育中大腦發(fā)揮神經保護作用［20］。另有研究顯示燈盞花素可通過上調Nrf2通路減輕液壓沖擊所致腦部炎性損傷［8］，因而推測激活Nrf2信號可能是燈盞花素抑制宮內炎癥所致早產腦損傷大鼠小膠質細胞焦亡的作用機制。本研究結果顯示，燈盞花素可提高宮內炎癥致早產大鼠腦組織中Nrf2及HO-1蛋白表達，且高劑量燈盞花素作用更強，表明Nrf2信號參與燈盞花素對宮內炎癥致早產大鼠腦損傷的保護作用。以燈盞花素高劑量和ML385聯(lián)合處理孕鼠和仔鼠，相比燈盞花素高劑量單獨處理，可降低仔鼠存活數(shù)和體重、仔鼠腦組織中Nrf2及HO-1蛋白表達水平，升高仔鼠腦組織中IL-6、IL-8、IL-1β水平及NLPR3、caspase-1蛋白表達水平，并增強仔鼠腦皮質IBA-1和NLRP3共表達，加重孕鼠子宮、胎盤組織及仔鼠腦組織病理損傷，表明ML385可減弱燈盞花素的抗炎作用，降低其對宮內炎癥致早產大鼠腦組織炎癥反應和小膠質細胞焦亡的抑制作用，最終逆轉燈盞花素的腦保護作用，揭示燈盞花素抑制宮內炎癥所致早產腦損傷大鼠小膠質細胞焦亡是通過激活Nrf2信號實現(xiàn)的。

綜上所述，本研究表明燈盞花素可通過激活Nrf2信號而減輕宮內炎癥，促使胎鼠存活，并抑制早產大鼠腦組織小膠質細胞焦亡和炎癥反應，緩解腦損傷，促使Nrf2信號通路傳導是其作用機制之一，本研究為宮內炎癥致早產兒腦損傷的防治藥物選擇提供了實驗依據和新思路。