劉瑞苛，董艷珍*，徐大勇，鄧思紅

（1.西昌學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，四川 西昌 615013；2.喜德正源水產(chǎn)有限公司，四川 喜德 616750）

0 引言

青海湖裸鯉（Gymnocyprisprzewalskii）俗稱“湟魚”，隸屬鯉形目（Cypriniformes）、鯉科（Cyprinidae）、裂腹魚亞科（Schizothoracinae）、裸鯉屬（Gymnocypri）。該物種是青海湖中經(jīng)過長期地理隔離演化而成的冷水性特有無磷魚種，主要分布于青海湖及其附屬河流等［1］。青海湖裸鯉適應(yīng)性強(qiáng)，幼魚孵出后，就會成群游泳，一般多集群于河口淺水地區(qū)，作為青海湖唯一的優(yōu)勢種類，在青海湖生態(tài)系統(tǒng)處于核心地位［2］?；ò呗沲帲℅ymnocypriseckloni）也隸屬鯉形目（Cypriniformes）、鯉科（Cyprinidae）、裂腹魚亞科（Schizothoracinae）、裸鯉屬（Gymnocypri），體背呈暗褐色或者青灰色，腹部呈淺黃色或是銀灰色［3］。花斑裸鯉為黃河上游經(jīng)濟(jì)魚類，屬于雜食性魚類，食性范圍廣，一般棲息于水的中層，許多特征與青海湖裸鯉相似，其不同點(diǎn)在于口裂大，上頜稍突于下頜之前，在四川涼山彝族自治州的喜德縣、越西縣等都有養(yǎng)殖。由于近幾年來環(huán)境破壞嚴(yán)重，造成青海湖裸鯉漁業(yè)資源枯竭［4］，野生種群數(shù)量快速減少。為了保護(hù)國內(nèi)相關(guān)資源，學(xué)者對于青海湖裸鯉進(jìn)行繁殖、營養(yǎng)等方面的研究［5-7］，但是目前對于青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交后代相關(guān)研究卻未曾見到。本試驗(yàn)材料為青海湖裸鯉與花斑裸鯉的雜交后代，雜交不僅可以綜合雙親的優(yōu)良性狀，還可以產(chǎn)生雙親沒有的新性狀，使后代獲得可利用的雜種優(yōu)勢。

聚維酮碘（povidone iodine）又稱碘優(yōu)、強(qiáng)力碘［8］，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中廣泛使用的殺菌劑，具有極強(qiáng)的殺菌能力，也是國際公認(rèn)的高效、廣譜、無毒的消毒殺菌產(chǎn)品，對細(xì)菌有很強(qiáng)的滅殺作用，常用于防治水產(chǎn)動物爛鰓、腐皮等細(xì)菌性疾?。?-10］，但超過一定的劑量也會對水產(chǎn)動物產(chǎn)生危害。目前，國內(nèi)不少學(xué)者研究了聚維酮碘對魚類毒性，如泥鰍［11］、鯽魚［12］、梭魚［13］等，但其對青海湖裸鯉及花斑裸鯉毒性的相關(guān)報道卻很少。

本試驗(yàn)研究了聚維酮碘對青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚的急性毒性，在此基礎(chǔ)上探索了不同濃度聚維酮碘對于青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚耗氧率的影響，為今后青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚的人工養(yǎng)殖過程中正確使用該藥提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及藥品

材料：青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚（以下簡稱試驗(yàn)魚），由喜德正源水產(chǎn)良種場提供，體長7~8 cm，體質(zhì)量（15.34±0.23）g，體型勻稱，健康活潑。試驗(yàn)前在室內(nèi)魚缸暫養(yǎng)4 d，每天投餌2次（每日早上9點(diǎn)及下午6點(diǎn)），停食24 h再開始試驗(yàn)，試驗(yàn)期間不投飼料。

藥品：聚維酮碘，由河南新鄉(xiāng)市華畜有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號20230402，有效碘質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 急性毒性試驗(yàn)

試驗(yàn)在（45 cm×38 cm×20 cm）的玻璃缸中進(jìn)行，試驗(yàn)用水為曝氣3 d以上的自來水，加水量為30 L，水溫（19±1）℃，pH 7.5±0.3，溶解氧（dissolved oxygen，DO）（7.6±0.2）mg/L。

在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過等差間距法設(shè)置聚維酮碘1.64、2.74、3.84和4.93 μmol/L共4個濃度梯度，設(shè)置一組空白對照，每個濃度梯度設(shè)置3個平行組，每個平行組放入試驗(yàn)魚10尾。試驗(yàn)開始后持續(xù)觀察試驗(yàn)魚的情況，記錄24、48、72、96 h聚維酮碘各濃度下試驗(yàn)魚的死亡情況。試驗(yàn)期間每24 h更換藥液1次。在試驗(yàn)過程中，除停食外，其他條件都和常規(guī)培養(yǎng)的條件相同。以魚體失去活力，玻璃棒輕輕接觸魚體30 s內(nèi)無反應(yīng)為死魚的判斷依據(jù)［14］。

聚維酮碘對試驗(yàn)魚的急性毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)以3個平行組的平均值表示。根據(jù)所得數(shù)據(jù)擬合聚維酮碘溶液濃度（Y）與試驗(yàn)魚死亡率（X）的回歸方程，通過回歸方程計(jì)算出聚維酮碘對試驗(yàn)魚24、48、72、96 h的半數(shù)致死濃度（median lethal concentration，LC50），并計(jì)算聚維酮碘對試驗(yàn)魚的安全濃度（safe concentration，SC）［15］，計(jì)算公式如式（1）所示：

式中：cSC表示安全濃度，μmol/L；c48表示48 h時的半致死濃度，μmol/L；c24表示24 h時的半致死濃度，μmol/L。

1.2.2 耗氧率試驗(yàn)

根據(jù)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，選擇安全濃度以及生產(chǎn)上的使用濃度進(jìn)行耗氧率的測定，每個濃度設(shè)置3個平行組，每個平行組放入10尾試驗(yàn)魚。將試驗(yàn)魚放入盛有30 L水的玻璃缸（45 cm×38 cm×20 cm）中，試驗(yàn)用水為曝氣3 d以上的自來水，水溫（19±1）℃，pH 7.5±0.3，使用保鮮膜密封玻璃缸。玻璃缸中試驗(yàn)魚死亡半數(shù)時結(jié)束試驗(yàn)，魚體死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)同1.2.1。使用碘量法［16］測量試驗(yàn)前和試驗(yàn)后水體的溶解氧質(zhì)量濃度，計(jì)算耗氧率，計(jì)算公式如式（2）所示：

式中：Q為耗氧率，mg/（g·h）；V為容器實(shí)際體積，L；A1為放魚前水體的溶解氧質(zhì)量濃度，mg /L；A2為試驗(yàn)魚死亡半數(shù)時水體的溶解氧質(zhì)量濃度，mg /L；M為試驗(yàn)魚的體質(zhì)量，g；T為試驗(yàn)時間，h。

1.3 數(shù)據(jù)分析

用Excel 2019對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行圖表制作和基本計(jì)算；利用SPSS27軟件算出線性回歸方程。利用SPSS27軟件進(jìn)行耗氧率以及窒息點(diǎn)的方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 聚維酮碘對試驗(yàn)魚的毒性癥狀及急性毒性

試驗(yàn)剛開始時各濃度組均未出現(xiàn)明顯中毒現(xiàn)象，2 h以后4.93 μmol/L組的試驗(yàn)魚出現(xiàn)焦慮不安的現(xiàn)象，之后魚體翻肚，倒懸于水中，7 h左右出現(xiàn)死亡個體，死亡個體鰓和皮膚出現(xiàn)大量黏液，體色發(fā)黑。對照組幼魚未出現(xiàn)異常現(xiàn)象和死亡個體。

不同濃度聚維酮碘處理下試驗(yàn)魚平均死亡率不同，隨著聚維酮碘濃度升高，試驗(yàn)魚死亡數(shù)量增加，即青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚（試驗(yàn)魚）的死亡率隨著聚維酮碘濃度的增大而升高；最高濃度試驗(yàn)組試驗(yàn)魚在24 h的死亡率達(dá)到100%，最低濃度組試驗(yàn)魚在72 h才出現(xiàn)死亡個體，空白對照組96 h未出現(xiàn)死亡個體（表1）。

表1 不同濃度聚維酮碘處理下試驗(yàn)魚的死亡率

聚維酮碘溶液濃度（Y）與試驗(yàn)魚死亡率（X）呈顯著或極顯著的線性相關(guān)；聚維酮碘溶液對試驗(yàn)魚24、48、72、96 h 的 LC50分別為3.37 、3.15、2.75和2.51 μmol/L，安全濃度為0.84 μmol/L（表2）。

表2 聚維酮碘對試驗(yàn)魚半致死濃度（LC50）和安全濃度（SC）

2.2 聚維酮碘對試驗(yàn)魚的耗氧率及窒息點(diǎn)的影響

本試驗(yàn)測定青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚在聚維酮碘下安全濃度0.84和生產(chǎn)使用濃度0.22 μmol/L的耗氧率與窒息點(diǎn)如表3所示。對于耗氧率，安全濃度組和生產(chǎn)使用濃度組均顯著高于對照組（P<0.05），而安全濃度組的耗氧率又顯著高于生產(chǎn)濃度組（P<0.05）。對于窒息點(diǎn)，安全濃度組顯著高于生產(chǎn)濃度組和對照組（P<0.05），生產(chǎn)濃度組高于對照組，但二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

表3 試驗(yàn)魚的耗氧率及窒息點(diǎn)

3 討論與結(jié)論

聚維酮碘會影響青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚的存活，濃度越高、作用時間越長，青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚的死亡率越高。聚維酮碘是一類廣譜消毒殺菌劑，作用于體表，具有強(qiáng)氧化性。當(dāng)前市售的聚維酮碘大多沒有詳細(xì)的使用說明，養(yǎng)殖戶在水產(chǎn)養(yǎng)殖中通常憑借經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行潑灑，有相當(dāng)高的不確定性［17］，在水產(chǎn)苗種培育過程中聚維酮碘的用量一般控制在0.16~0.33 μmol/L。相關(guān)研究也表明魚類種類、規(guī)格等都會影響魚類對聚維酮碘的耐受性，如聚維酮碘對異育銀鯽的安全濃度為2.05 μmol/L［18］，對斜帶石斑魚幼魚的安全濃度為3.94 μmol/L［19］，對泥鰍的安全濃度為24.66 μmol/L［11］。本研究得出的安全濃度為0.84 μmolL，表明青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚對聚維酮碘的耐受力較低，參考《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗(yàn)準(zhǔn)則》中農(nóng)藥對魚類毒性的分類標(biāo)準(zhǔn)（表4），聚維酮碘對青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚為中毒藥物，在生產(chǎn)中可以使用，但是需要根據(jù)實(shí)際情況綜合考慮各因素（如水溫、水質(zhì)、魚體情況等）的影響來確定用量。

表4 不同質(zhì)量濃度藥物對魚類毒性的分類標(biāo)準(zhǔn)

雷曼紅等［20］認(rèn)為，魚類窒息點(diǎn)能反映其生理機(jī)能狀態(tài)，窒息點(diǎn)最低時是魚類抵抗力最強(qiáng)、體質(zhì)最好、生理機(jī)能最佳的時候。本研究表明安全濃度及生產(chǎn)濃度下，聚維酮碘顯著提高青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚的耗氧率，提高幼魚窒息點(diǎn)。

高濃度的聚維酮碘會使青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚直接死亡，低濃度的聚維酮碘會使青海湖裸鯉（♀）×花斑裸鯉（♂）雜交幼魚的耗氧率和窒息點(diǎn)都顯著升高，因此生產(chǎn)上在使用聚維酮碘時要嚴(yán)格控制用量，密切關(guān)注用藥后幼魚的反應(yīng)，及時處置。