張 躍，李 剛，殷雨晴，吳惠明，周德剛，沈光年，程汝佳，吳 迪，鄭雪瑩，李 蕊，范君文，趙浩軍，劉曉冬

（北京市動物疫病預(yù)防控制中心，北京 102629）

偽狂犬?。╬seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的急性、高度接觸性人獸共患傳染病。多種動物都可感染PRV，其中豬最敏感?；疾∝i、臨床健康帶毒豬和帶毒鼠類為PR主要傳染源，而豬是PRV的主要儲存宿主。該病可致妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎及胎兒干尸化；對初生仔豬則引起神經(jīng)癥狀，表現(xiàn)運動失調(diào)、麻痹，最后衰竭死亡，病死率達100%；成年豬感染后不易死亡，但可長期帶毒。PRV既可垂直傳播，也可水平傳播。2011年以來，由于PRV變異株[1-4]的出現(xiàn)，我國許多已接種gE基因缺失疫苗的豬場仍然暴發(fā)了PR，從而給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失。

目前北京市種豬場使用Bartha-k61株P(guān)RV基因缺失疫苗進行豬群免疫，因而可以通過檢測gE抗體來確定被檢個體是否存在PR野毒感染。為掌握北京市PR野毒感染情況，給控制和凈化PR提供依據(jù)，對2019—2021年從北京市3個區(qū)種豬場采集的豬血清樣品，采用PRV gE-ELISA 進行了PRV感染情況調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2019—2021年北京市3個區(qū)分別共有種豬場32、18和17個，各種豬場存欄3 000～13 000頭，所有種豬均免疫了gE基因缺失疫苗。按照各年度北京市動物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計劃，2019年對所有種豬場進行了1次PRV-gE抗體檢測，多數(shù)豬場在第一或第二季度檢測，少數(shù)豬場在第三或第四季度檢測；2020年和2021年對所有種豬場每季度開展了1次集中檢測。按照估計流行率方法進行個體抽樣量計算，設(shè)定參數(shù)為預(yù)期流行率5%、置信水平95%、試驗敏感性100%、可接受誤差5%，每場每次隨機采集樣品70份，共采集10 850份血清樣品。采樣豬群涵蓋經(jīng)產(chǎn)母豬、育成豬、育肥豬和后備母豬。

1.2 主要試劑與儀器

gE-ELISA抗體檢測試劑盒，西班牙Hipra公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀（SUNRISE），奧地利TECAN公司生產(chǎn)；洗板機（ELX50），美國Biotek公司生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 樣品抽樣 場內(nèi)采用分群隨機抽樣法。每場按照經(jīng)產(chǎn)母豬、育成豬、育肥豬和后備母豬分群，每次隨機抽取其中1個群。

1.3.2 抗體檢測 采用 gE-ELISA 抗體檢測試劑盒，按照試劑盒使用說明書進行抗體檢測及結(jié)果判定。豬場中如檢出1份及以上gE抗體陽性樣品，則該豬場為PR陽性場。

1.3.3 數(shù)據(jù)分析 用 Excel 軟件整理檢測數(shù)據(jù)，運用 SPSS 軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 時間分布

不同年份統(tǒng)計結(jié)果（表1）顯示：2019—2021年，PRV-gE抗體場群陽性率呈逐年下降趨勢，其中表觀場群陽性率由84.38%下降至64.71%，真實場群陽性率由86.10%（95%CI：73.95%～98.24%）下降至66.03%（95%CI：43.22%～88.83%），但年度下降趨勢不顯著（P＞0.05）；樣品陽性率呈顯著下降趨勢（P＜0.05），其中表觀樣品陽性率由53.95%下降至35.59%，真實樣品陽性率由55.05%（95%CI：53.05%～57.05%）下降至36.32%（95%CI：34.85%～37.79%）。

表1 2019—2021年北京市種豬場PRV-gE抗體檢測結(jié)果

不同季度檢測結(jié)果（表2）顯示：PR一年四季均可發(fā)生。2020年第一季度樣品陽性率最高（53.33%），4個季度間差異顯著（P＜0.05）；2021年第三季度樣品陽性率最高（61.43%），一、二季度間差異不顯著（P＞0.05），其他季度間差異顯著（P＜0.05）。

表2 2020—2021年不同季度種豬場豬偽狂犬gE抗體檢測結(jié)果

2.2 地區(qū)分布

不同地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果（表3）顯示：3個區(qū)的種豬場均有不同程度的PR野毒感染，其中區(qū)1感染最嚴(yán)重，區(qū)2次之，區(qū)3最輕。

表3 2019—2021年不同區(qū)種豬場PRV-gE抗體檢測結(jié)果 單位：%

2.3 群間分布

不同生長階段豬群統(tǒng)計結(jié)果（表4）顯示：不同生長階段豬群均可感染PRV。2019年和2021年不同生長階段樣品陽性率差異均顯著（P＜0.05），2020年育成豬與經(jīng)產(chǎn)母豬樣品陽性率差異不顯著（P＞0.05），其他生長階段差異均顯著（P＜0.05）。2019年經(jīng)產(chǎn)母豬PRV 樣品陽性率最高（75.89%），2020年后備母豬最高（47.82%），2021年育肥豬最高（60.79%）。

表4 2019—2021年不同生長階段豬群PRV-gE抗體檢測結(jié)果

3 討論

張躍等[5]報道2017年北京市規(guī)?；i場的PRV-gE樣品陽性率為47.71%，全炎銘等[6]報道2016年北京市規(guī)模場PRV-gE樣品陽性率為33.66%，寧慧波等[7]報道2014—2019年北京市種豬場PRV-gE樣品陽性率一直高于61.30%，最高達 88.83%。這說明PR在北京市種豬場長期流行，且多數(shù)豬場均存在PRV感染。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，北京市種豬場PRV-gE感染率呈逐年下降趨勢，感染率由2019年的55.05%下降至2021年的36.32%，說明種豬場凈化效果明顯。2018年8月非洲豬瘟在我國暴發(fā)后，各種豬場均采取了嚴(yán)格的綜合防控措施，北京市2020年發(fā)布了《生豬養(yǎng)殖場生物安全規(guī)范》，種豬場均按照規(guī)范建成了標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖場，構(gòu)建了高水平生物安全防控屏障，并且種豬場也采取了嚴(yán)格的凈化措施，從而導(dǎo)致PRV感染率逐年下降。

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，PR一年四季均可發(fā)生，但有一定的季節(jié)分布特征。2021年第三季度樣品陽性率最高，與張躍等[5]報道的一致，2020年第一季度樣品陽性率最高。本次調(diào)查第一季度采樣時間為1月初，第三季度為7月初，說明冬季和夏季為PR高發(fā)季節(jié)，與段群棚等[8]報道的廣西部分豬場PR夏季多發(fā)一致，但與其報道的冬季發(fā)病率較低不一致，這可能與南、北方冬季氣候不同有關(guān)，具體原因有待進一步研究探討。

從不同生長階段的豬群檢測結(jié)果來看，經(jīng)產(chǎn)母豬、育成豬、育肥豬和后備母豬PRV感染率均較高，為19.86%～75.89%，但經(jīng)產(chǎn)母豬、育成豬和后備母豬感染率逐年降低，而育肥豬的感染率呈增高趨勢。這可能與豬場免疫程序有關(guān)，本次調(diào)查的育肥豬為120～180日齡，有的豬場只在8～10周齡時免疫1次PRV疫苗，4周后未加強免疫，導(dǎo)致出現(xiàn)免疫空白期。部分育肥豬會選為后備母豬留用，因此選種時應(yīng)確保其為gE抗體陰性，否則會垂直傳播給仔豬，造成PRV在場內(nèi)循環(huán)傳播。本次調(diào)查考慮到仔豬受母源抗體的影響，未采集仔豬樣品。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，PRV-gE抗體陽性的成年豬無臨床癥狀。但這些隱性感染的成年豬可成為PR主要傳染源，持續(xù)向外排毒，造成PRV野毒感染在豬場長期存在。因此，各種豬場應(yīng)根據(jù)抗體消長規(guī)律制定適合本場的免疫程序，確保免疫接種效果；定期檢測不同生長階段豬只gE抗體，尤其加強育肥豬抗體監(jiān)測，及時淘汰陽性豬；定期開展免疫抑制病的病原學(xué)監(jiān)測，及時剔除陽性豬；進一步完善豬場生物安全防控體系，降低PR傳播風(fēng)險。

區(qū)1和其他2個區(qū)的豬場數(shù)量差異明顯，北京市的種豬場主要集中于區(qū)1，因而區(qū)1的感染率較高。其他2個區(qū)種豬場數(shù)量較少，感染率也較低，具備開展凈化的基礎(chǔ)，建議加快PRV凈化場建設(shè)進程。

本次調(diào)查抽樣有一定的局限性。從檢測結(jié)果來看，樣品陽性率較高，可能與每次每場抽取的樣品數(shù)量少有關(guān)。本次調(diào)查在抽樣設(shè)計時，用預(yù)期流行率5%、可接受誤差5%進行樣本量計算，每場僅抽取樣本70份。今后需繼續(xù)開展調(diào)查，可將設(shè)定的預(yù)期流行率提高，增加抽樣數(shù)量，使調(diào)查結(jié)果更加代表性。

4 結(jié)論

調(diào)查表明，北京市種豬場PR野毒感染得到一定的控制，但感染率依然較高，尤其是育肥豬，因此各種豬場應(yīng)繼續(xù)加強監(jiān)測和生物安全體系建設(shè)，及時調(diào)整免疫程序，逐步實現(xiàn)種豬場凈化和根除PR的目標(biāo)。