王漢霞,馬巧云,單福華,田立平,權(quán) 威,張勝全

(北京市農(nóng)林科學(xué)院雜交小麥研究所/雜交小麥分子遺傳北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100097 )

小麥?zhǔn)侨祟愔饕Z食作物之一,在世界各地被廣泛種植。氮是作物生長(zhǎng)發(fā)育不可或缺的營(yíng)養(yǎng)元素,也是影響作物代謝的限制因素之一。人們?yōu)榱颂岣咦魑锂a(chǎn)量而投入大量的氮肥到土壤中,張福鎖等[1]研究表明,我國(guó)大多數(shù)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)區(qū)域施氮量過(guò)多,造成土壤和水污染,甚至使作物產(chǎn)量降低。因此,提高氮肥利用效率、選育氮高效小麥品種至關(guān)重要。關(guān)于小麥氮效率的研究已有較多報(bào)道,如張國(guó)平等[2]研究表明,不同基因型小麥的氮利用效率存在差異;趙 瑞等[3]對(duì)108份小麥的氮效率進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)不同基因型成株期的氮效率存在差異。前人研究發(fā)現(xiàn),在特定氮素水平下,小麥的產(chǎn)量、群體質(zhì)量與氮效率存在正相關(guān)關(guān)系[4];小麥單株總根長(zhǎng)、根總表面積、單株根尖數(shù)、莖葉干重、根干重、葉面積、全氮含量可以作為小麥苗期不同氮效率類型的篩選指標(biāo)[5-7];低氮脅迫使小麥葉片和根部的硝酸還原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)活性及氮含量和氮積累量均降低[8]。

Kant等[9]和侯文通等[10]認(rèn)為,選育氮高效品種可提高小麥氮肥利用效率。王琳琳等[11]發(fā)現(xiàn),低氮高效和高氮高效小麥品種雜交,低氮環(huán)境有利于選擇優(yōu)良后代。我國(guó)小麥氮高效利用的研究主要集中在不同氮素利用效率品種的評(píng)價(jià)方法及指標(biāo)的篩選,對(duì)不同氮水平下,不同氮效率品種的雜種優(yōu)勢(shì)研究較少。本研究選用5個(gè)不同氮效率小麥品種及其組配的6個(gè)雜交F1,在兩個(gè)氮水平下對(duì)其苗期形態(tài)及氮代謝相關(guān)酶的活性進(jìn)行分析,探討不同氮效率小麥及其雜交F1苗期相關(guān)指標(biāo)的差異,以期為小麥氮高效育種的親本選配提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試材料為本課題組前期篩選出的5個(gè)不同氮效率的小麥品種京冬8(JD8,氮低效)、矮抗58(AK58,氮低效)、京農(nóng)18-8(JN18-8,氮高效)、京農(nóng)18-96(JN18-96,氮高效)、鄭麥366(ZM366,氮高效)及將其作為親本組配成的6個(gè)雜交F1,組合分別為JN18-8/JD8、JN18-8/AK58、JN18-96/JD8、JN18-96/AK58、ZM366/JD8、ZM366/AK58。

1.2 幼苗培養(yǎng)方法

幼苗采用水培培養(yǎng),設(shè)置兩個(gè)氮水平:低氮(LN,0.4 mmol·L-1)和正常供氮(CK, 4.0 mmol·L-1),氮源為Ca(NO3)2。各材料均取100粒種子用5%的H2O2消毒5 min,用去離子水洗凈;置于培養(yǎng)盒中,于光照培養(yǎng)箱中去離子水培養(yǎng)至一葉一心;將幼苗移入氮水平為0.2和2.0 mmol·L-1的1/2 Hoagland營(yíng)養(yǎng)液中緩苗2 d,后分別轉(zhuǎn)入氮含量0.4和4.0 mmol·L-1的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液中,繼續(xù)培養(yǎng)25 d,期間每隔3 d換一次營(yíng)養(yǎng)液,用電動(dòng)氣泵連續(xù)通氣,每個(gè)處理三次重復(fù)。試驗(yàn)在光照培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行,光照強(qiáng)度為 4.8×104Lx,光/暗時(shí)間為16 h/8 h,溫度為 25 ℃/20 ℃,相對(duì)濕度為60%。

1.3 取樣方法

將1.2中培養(yǎng)25 d的幼苗從培養(yǎng)盒中取出,用流動(dòng)的去離子水沖洗干凈,用吸水紙吸干附著水;每個(gè)處理取10株材料,按根、苗分開,測(cè)定鮮重;于105 ℃的烘箱中殺青30 min后80 ℃烘干至恒重,測(cè)定根、苗干重后,用于氮含量的測(cè)定。

按上述方法每個(gè)處理取樣10株,分別取葉片和根,液氮速凍后置于-80 ℃保存,用于氮代謝相關(guān)酶活性的測(cè)定。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

氮含量:采用半微量凱氏定氮法測(cè)定[12]。

采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)活性、過(guò)氧化物酶(POD)活性、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性、硝酸還原酶(NR)活性、谷氨酰胺合成酶(GS)活性、谷氨酸脫氫酶(GDH)活性、丙二醛(MDA)含量。

可溶性蛋白含量:采用考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定[13]。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

中親優(yōu)勢(shì)(mid-parent heterosis,MH)=(F1值-雙親平均值)/ 雙親平均值×100%;超高親優(yōu)勢(shì)(better parent heterosis,BH)=(F1值-高值親本值)/高值親本值×100%;超低親優(yōu)勢(shì)(lower parent heterosis,LH)=(F1值-低值親本值)/低值親本值×100%;偏低親優(yōu)勢(shì)表示F1雜種優(yōu)勢(shì)大于超低親優(yōu)勢(shì)但小于中親優(yōu)勢(shì);若F1值超過(guò)親本均值,為正雜種優(yōu)勢(shì),若低于親本均值,則為負(fù)雜種優(yōu)勢(shì)。

數(shù)據(jù)用Excel 2007和DPS v 7.05進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同氮水平下小麥苗期植株干鮮重的遺傳分析

由表1可知,正常氮水平下小麥苗鮮重均高于低氮水平,不同材料差異程度不同;兩個(gè)氮水平下,組合ZM366/AK58和JN18-8/AK58的F1均表現(xiàn)出正向雜種優(yōu)勢(shì),其中組合ZM366/AK58的F1在正常供氮水平下表現(xiàn)出超親優(yōu)勢(shì);JN18-96/AK58的F1在正常供氮水平下表現(xiàn)中親優(yōu)勢(shì),組合JN18-8/JD8和JN18-96/JD8的F1在低氮水平下表現(xiàn)出中親優(yōu)勢(shì)。

表1 不同氮水平下小麥苗期植株干鮮重及雜種優(yōu)勢(shì)

大部分供試材料在低氮條件下的根鮮重高于正常氮水平,不同基因型的增減幅度不同,其中,組合JN18-8/JD8的F1在兩個(gè)氮水平下均表現(xiàn)為超親優(yōu)勢(shì),其他組合在低氮水平下表現(xiàn)為超中親或偏低親優(yōu)勢(shì)。6個(gè)F1中,僅有2個(gè)F1(JN18-8/AK58和JN18-8/JD8)的苗干重同時(shí)在兩個(gè)氮水平下表現(xiàn)出超中親優(yōu)勢(shì);有3個(gè)F1(ZM366/JD8 、ZM366/AK58和JN18-8/JD8)的根干重同時(shí)在兩個(gè)氮水平下表現(xiàn)出超中親優(yōu)勢(shì)或超高親優(yōu)勢(shì)。ZM366/AK58和 JN18-8/AK58的F1表現(xiàn)出較好的根、苗干重和鮮重雜種優(yōu)勢(shì)。

2.2 不同氮水平小麥苗期氮含量與氮積累量的遺傳分析

由表2可以看出,低氮水平下,各材料地上部含氮量較正常供氮水平降低1.5～1.7倍,根部氮含量降低1.8～2.1倍;除組合ZM366/JD8外,其他組合F1的地上部含氮量均表現(xiàn)正向雜種優(yōu)勢(shì)。低氮較正常供氮水平,各供試材料地上部氮積累量降低1.9～3.2倍,根部氮積累量降低0.9～1.4倍。組合ZM366/JD8、ZM366/AK58和JN18-8/D8的F1地上部和根的氮積累量均表現(xiàn)正向雜種優(yōu)勢(shì)。正常氮水平下,組合JN18-96/AK58的F1地上部和根的氮積累量均表現(xiàn)為超中親優(yōu)勢(shì);在低氮條件下,組合JN18-8/JD8的F1地上部和根的氮積累量均表現(xiàn)為超中親優(yōu)勢(shì)。所有組合中,只有JN18-96/JD8的F1地上部和根的氮積累量在低氮條件下表現(xiàn)為超低親雜種優(yōu)勢(shì)。

表2 不同氮水平下小麥苗期植株氮含量、氮積累量及雜種優(yōu)勢(shì)

2.3 不同氮水平下小麥苗期氮代謝相關(guān)酶活性的遺傳分析

硝酸還原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸脫氫酶(GDH)是植物葉片涉及氮代謝的主要同化酶。由表3可見,正常氮水平下,各供試材料葉片中GS、GDH和NR活性整體高于低氮水平;除ZM366/JD8的F1中NR活性表現(xiàn)為偏低親優(yōu)勢(shì)外,其他組合F1葉片中的GS、GDH和NR活性均表現(xiàn)超中親甚至超高親優(yōu)勢(shì)。低氮水平下,除JN18-8/AK58的F1中GS和GDH活性表現(xiàn)低親優(yōu)勢(shì)外,其他組合F1的GS和GDH活性和NR活性均表現(xiàn)超親或者超高親優(yōu)勢(shì)。氮高效品種葉片氮代謝酶活性均高于氮低效品種。

表3 不同氮水平下小麥苗期葉片氮代謝相關(guān)酶活性及雜種優(yōu)勢(shì)

由表4可知,正常氮水平下各供試材料根系GS、GDH和NR活性高于低氮水平。正常氮水平下,除組合JN18-8/AK58、JN18-8/JD8的F1中GDH活性表現(xiàn)為低親優(yōu)勢(shì)外,其他組合F1的GS、GDH和NR活性均表現(xiàn)超中親甚至超高親優(yōu)勢(shì)。低氮水平下,除ZM366/JD8的F1根系中NR活性、JN18-96/AK58與ZM366/AK58的F1中GDH、NR活性表現(xiàn)低親優(yōu)勢(shì)外,其他組合F1根系中的GS、GDH和NR活性均表現(xiàn)超中親或者超高親優(yōu)勢(shì)。氮高效品種根系GS、GDH活性高于氮低效品種。

表4 不同氮水平下小麥苗期根系氮代謝相關(guān)酶活性及雜種優(yōu)勢(shì)

2.4 不同氮水平下小麥苗期抗氧化酶活性的遺傳分析

SOD、POD、CAT是生物防御活性氧傷害的重要保護(hù)酶類,能有效的阻止活性氧的快速積累。由表5可以看出,正常氮水平下葉片中SOD、POD、CAT活性高于低氮水平,說(shuō)明氮素水平升高可提高小麥幼苗葉片內(nèi)的抗氧化酶活性。正常氮水平下,組合JN18-96/AK58、ZM366/AK58、 JN18-96/JD8的F1葉片中SOD活性表現(xiàn)為低親優(yōu)勢(shì),組合ZM366/JD8的F1的葉片POD活性表現(xiàn)為超低親優(yōu)勢(shì),其他組合F1的SOD活性、POD活性、CAT活性均表現(xiàn)為超親優(yōu)勢(shì)或者超高親優(yōu)勢(shì)。低氮條件下,除組合JN18-96/JD8的F1葉片POD活性表現(xiàn)為低親優(yōu)勢(shì)外,其他組合F1的SOD、POD、CAT活性均表現(xiàn)為超親優(yōu)勢(shì)或者超高親優(yōu)勢(shì)。

表5 不同氮水平下小麥苗期葉片抗氧化酶活性及雜種優(yōu)勢(shì)分析

由表6可以看出,正常氮水平下根系中SOD、POD、CAT活性高于低氮水平,說(shuō)明氮素水平升高可提高小麥幼苗根系內(nèi)抗氧化酶活性。正常氮水平下,雜交組合JN18-96/AK58的F1根系SOD活性、ZM366/AK58和JN18-8/AK58的F1根系SOD和POD活性、 JN18-8/JD8和JN18-96/JD8的F1根系的POD活性表現(xiàn)為低親或超低親優(yōu)勢(shì)外,其他組合F1的SOD、POD、CAT活性均表現(xiàn)為超親優(yōu)勢(shì)或者超高親優(yōu)勢(shì)。低氮條件下,組合ZM366/JD8、JN18-96/AK58、ZM366/AK58、JN18-8/AK58的F1根系SOD活性、JN18-96/JD8的F1根系POD活性、JN18-96/AK58和JN18-96/JD8的F1根系CAT活性表現(xiàn)為低親優(yōu)勢(shì)或超低親優(yōu)勢(shì),其他組合F1的SOD、POD、CAT活性均表現(xiàn)為超親優(yōu)勢(shì)或者超高親 優(yōu)勢(shì)。

表6 不同氮水平下小麥苗期根系抗氧化酶活性及雜種優(yōu)勢(shì)分析

2.5 不同氮水平下小麥苗期葉片MDA含量與可溶性蛋白含量遺傳分析

由表7可知,在低氮水平下葉片MDA含量較正常氮水平提高,且氮低效品種JD8的MDA含量最高,氮高效品種JN18-8的MDA含量最低,說(shuō)明氮高效品種在低氮條件下能維持細(xì)胞膜的穩(wěn)定狀態(tài)。正常氮水平下,組合JN18-96/AK58、JN18-8/AK58的F1葉片MDA含量表現(xiàn)為偏低親優(yōu)勢(shì),組合ZM366/AK58、JN18-8/JD8的F1表現(xiàn)為超中親優(yōu)勢(shì),組合ZM366/JD8、JN18-96/JD8的F1表現(xiàn)為超高親優(yōu)勢(shì),但F1與其親本間差異不顯著。低氮條件下,組合ZM366/AK58的F1葉片MDA含量表現(xiàn)為超高親優(yōu)勢(shì),組合JN18-8/AK58、 JN18-8/JD8的F1表現(xiàn)為超中親優(yōu)勢(shì),組合ZM366/JD8、JN18-96/JD8的F1表現(xiàn)為偏低親優(yōu)勢(shì),組合JN18-96/AK58的F1表現(xiàn)為超低親優(yōu)勢(shì)。

由表7可以看出,正常氮水平下,各供試材料葉片的可溶性蛋白含量高于低氮水平;除組合JN18-96/JD8的F1外,其他組合F1的葉片可溶性蛋白含量均表現(xiàn)出超中親或超高親優(yōu)勢(shì)。低氮條件下,氮高效品種的葉片可溶性蛋白含量稍高于氮低效品種,6個(gè)F1葉片的可溶性蛋白含量均表現(xiàn)超高親優(yōu)勢(shì)。

表7 不同氮水平下小麥苗期葉片MDA、可溶性蛋白含量及雜種優(yōu)勢(shì)

由表8可知,正常條件下,6個(gè)F1的根系MDA 含量表現(xiàn)為中親、低親或超低親優(yōu)勢(shì)。在低氮條件下,供試材料根系的MDA含量增加,且氮低效品種根系的MDA含量較氮高效品種高,說(shuō)明氮低效品種受到的傷害大,6個(gè)F1均表現(xiàn)為中親或低親優(yōu)勢(shì)。

由表8可以看出,正常條件下,除組合JN18-96/AK58的F1外,其他組合F1的根系的可溶性蛋白含量均表現(xiàn)出超中親或超高親優(yōu)勢(shì),與葉片表現(xiàn)一致。在低氮條件下,除JN18-96/JD8外,其他組合的F1根系可溶性蛋白含量表現(xiàn)為偏低親或者超低親優(yōu)勢(shì)。

3 討論與結(jié)論

氮素是作物生長(zhǎng)發(fā)育的重要營(yíng)養(yǎng)元素之一,選育氮高效小麥品種是提高小麥氮效率、實(shí)現(xiàn)減氮豐產(chǎn)的有效措施[14-17]。前人研究表明,不同基因型小麥具有不同的氮利用效率,低氮脅迫下,不同基因型小麥均表現(xiàn)出地上部生物量降低、根部生物量升高,且氮高效品種的根部生物量增幅更大[18-19];苗期根系的主要形態(tài)數(shù)量性狀可作為衡量氮效率的篩選指標(biāo)[7]。本研究表明,低氮水平下,各基因型小麥的根系鮮重高于正常氮水平下,這與前人的研究結(jié)果一致,這說(shuō)明低氮可誘導(dǎo)根系的生長(zhǎng),在一定程度上促進(jìn)根系對(duì)氮素的吸收,緩解氮脅迫對(duì)植株生長(zhǎng)的不良影響。本研究中,組合ZM366/AK58、JN18-8/AK58的F1葉片和根系鮮重均表現(xiàn)為超中親或超高親優(yōu)勢(shì)。

在氮脅迫下,小麥會(huì)產(chǎn)生更多的活性氧使小麥細(xì)胞膜脂過(guò)氧化,損傷細(xì)胞膜,抗氧化酶能快速清除細(xì)胞中的活性氧,保護(hù)細(xì)胞膜受到損傷[28]。有研究表明,小麥旗葉的SOD、POD、CAT活性在一定的范圍內(nèi)隨施氮水平的增加而提高[29-30]。本研究表明,氮高效小麥品種葉片和根系的抗氧化酶活性高于氮低效小麥品種,更利于細(xì)胞完整性的維持;組合JN18-8/AK58和JN18-8/JD8的F1葉片中三種抗氧化酶活性在兩個(gè)氮素水平下的均表現(xiàn)出超中親或超高親優(yōu)勢(shì)。

MDA含量是植物膜脂過(guò)氧化程度的體現(xiàn),本研究發(fā)現(xiàn),在低氮條件下,小麥MDA含量增加,且氮低效品種的MDA含量大于氮高效小麥品種,說(shuō)明氮低效小麥品種的細(xì)胞膜受的傷害較大?？扇苄缘鞍资羌?xì)胞重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),本研究中,葉片可溶性蛋白含量在正常施氮條件下高于低氮,且在低氮條件下,氮高效小麥品種的可溶性蛋白含量高于氮低效小麥品種,組合ZM366/AK58和JN18-8/JD8的F1葉片的MDA和可溶性蛋白含量均表現(xiàn)出了超中親或超高親優(yōu)勢(shì),組合JN18-96/JD8的F1根系的MDA和可溶性蛋白含量均表現(xiàn)出了超中親或超高親優(yōu)勢(shì)。說(shuō)明利用氮效率雜種優(yōu)勢(shì)配置雜交組合可以作為培育小麥氮高效小麥新品種的一種途徑。

王琳琳等[11]研究發(fā)現(xiàn),不同氮效率小麥品種配置的雜交組合在不同氮水平下,大多數(shù)指標(biāo)表現(xiàn)為正向雜種優(yōu)勢(shì)。本研究中,6個(gè)雜交組合F1葉片的NR、GS、GDH、SOD、POD、CAT活性、可溶性蛋白含量大多存在中親或高親優(yōu)勢(shì),根系的NR、GS、GDH、CAT活性、MDA含量大多存在中親或高親優(yōu)勢(shì)。正常施用氮肥能夠有效提高小麥苗期葉片SOD、POD、CAT活性,增加可溶性蛋白含量,降低膜脂過(guò)氧化程度,提高NR、GS、GDH活性。在低氮條件下,氮高效品種比氮低效品種生長(zhǎng)的更好,雜交F1也表現(xiàn)出了較好的耐低氮性,所以以氮高效小麥品種作為親本配制雜交組合可以作為氮高效育種的有效方法。