任周新, 余海濱, 梅曉峰, 董浩然, 沈俊嶺, 李建生

（1.河南中醫(yī)藥大學(xué)呼吸疾病中醫(yī)藥防治省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心藥理平臺，河南 鄭州 450046；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥科學(xué)院，河南 鄭州 450046；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院河南省病毒性疾病中醫(yī)藥防治重點實驗室，河南 鄭州 450000)

肺動脈高壓（pulmonary hypertension，PH）是肺血管阻力和肺動脈壓力異常升高的病理生理綜合征，可繼發(fā)成為右心衰竭（right heart failure，RHF）。肺部疾病和（或）低氧所致的PH 是臨床最常見的PH 類型之一，其中慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是最常見的病因［1-3］。COPD 并發(fā)PH 的患者預(yù)后更為兇險，死亡率更高。但目前臨床指南推薦的治療方法僅有針對COPD 的長程氧療［1］。理論上，干預(yù)肺血管的異常病變或擴(kuò)張肺血管有益于患者的治療，但臨床上由于該類疾病的復(fù)雜性，針對肺血管重構(gòu)或降低肺動脈壓的藥物應(yīng)用存在爭議［4-5］。補(bǔ)肺益腎組分方Ⅲ（effective-compound compatibilityⅢ of Bufei Yishen prescription，ECC-BYP Ⅲ；專利申請?zhí)枺?01811115372.3），由人參皂苷 Rh1 和黃芪甲苷等成分組成，具有改善COPD 大鼠肺功能、減輕肺組織損傷和抑制炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激及黏 液 高 分 泌 等 效 應(yīng)［6-7］。近 期 研 究［8］顯 示：ECC-BYP Ⅲ能夠減少COPD 大鼠肺血管管壁厚度，增加管腔口徑。但ECC-BYP Ⅲ是否具有改善COPD 相關(guān)PH 的效應(yīng)尚未見報道，ECC-BYP Ⅲ對肺血管異常重構(gòu)的影響仍不清楚。本研究以煙霧暴露復(fù)合克雷伯桿菌（Klebsiellapneumoniae，Kp）誘導(dǎo)的大鼠PH 模型為研究對象，觀察ECC-BYPⅢ對PH 的影響，從肺小血管炎癥和肺小動脈肌化等方面，進(jìn)一步探討該方對肺血管重構(gòu)的影響，為ECC-BYP Ⅲ干預(yù)COPD 相關(guān)PH 的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、細(xì)菌和香煙149 只SPF 級SD 大鼠，雌性，體質(zhì)量150～180 g，購自南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（蘇）2017-0001。本實驗經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物 倫 理 委 員 會 審 核 批 準(zhǔn)，批 準(zhǔn) 編 號：DWLL2018030063。Kp購自中國食品藥品檢定研究院，編號：CMCC （B）46117，使用前配成6×108CFU·mL－1的混懸液。紅旗渠牌過濾嘴香煙（烤煙型，焦油量10 mg，煙氣煙堿量0.8 mg，煙氣一氧化碳量12 mg）由河南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司提供。

1.2 藥物、主要試劑和儀器ECC-BYP Ⅲ按20（S）-人參皂苷Rh1∶丹皮酚∶淫羊藿苷∶川陳皮素∶黃芪甲苷=12.5∶3.125∶50∶2∶2.5 比例組成。20（S）-人參皂苷Rh1、丹皮酚、淫羊藿苷和黃芪甲苷均為成都克洛瑪生物科技有限公司產(chǎn)品，川陳皮素為西安匯林生物科技有限公司產(chǎn)品。大鼠白細(xì)胞介素6（interleukin 6，IL-6）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（E-EL R0015-c）、大鼠腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA 試劑盒（E-EL-R2856c）、大鼠內(nèi)皮素-1（endothelin-1，ET-1）試劑盒（E-EL-R1458c）和前列環(huán)素2（prostacyclin 2，PGI2）ELISA 試 劑 盒（E-EL-0022c）均為武漢Elabscience 公司產(chǎn)品。萬分之一分析天平為梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司產(chǎn)品，Multiskan Go 型全波長酶標(biāo)儀為美國Thermo Scientific 公司產(chǎn)品，BL-420S 生物機(jī)能實驗系統(tǒng)購自成都泰盟軟件有限公司，YH-4 型生理壓力傳感器購自北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所，聚乙烯導(dǎo)管購自美國史密斯醫(yī)療器械有限公司。

1.3 模型制備、分組及給藥大鼠適應(yīng)環(huán)境7 d，隨機(jī)分為對照組（n=9）和造模組（n=140），對照組大鼠正常飼養(yǎng)；其余大鼠采用香煙煙霧暴露聯(lián)合細(xì)菌感染的方法制備模型［8-9］：在大鼠吸氣時，經(jīng)鼻腔滴入Kp 液6×108CFU·mL－1，0.1 mL，每5 d 1 次，持續(xù)8 周；點燃香煙并使煙熏箱煙霧濃度達(dá)到（3 000±500）ppm，每次40 min，每天2 次，2 次煙熏間隔至少3 h，持續(xù)8 周。造模期間大鼠死亡21 只。

造模結(jié)束后，按照肺功能均勻的原則將造模大鼠分為模型組（n=10）和低劑量（n=9）、中劑量（n=10）及高劑量（n=10）ECC-BYP Ⅲ組。用無菌生理鹽水制備藥物混懸液，每只大鼠每日按照組 別 分 別 灌 胃3.24、6.48 和12.96 mg·kg－1ECC-BYP Ⅲ。對照組和模型組大鼠給予等量生理鹽水。共給藥4 周。

1.4 實驗動物麻醉采用戊巴比妥鈉（9 g·L－1生理鹽水溶液）腹腔注射的方式麻醉大鼠。部分大鼠進(jìn)行肺動脈壓檢測。

1.5 各組大鼠肺動脈壓測定參照文獻(xiàn)方法［9-10］檢測各組大鼠肺動脈壓，每組隨機(jī)選擇5 只。大鼠腹腔麻醉后，分離頸動脈及右頸外靜脈。將與壓力換能器連接并充滿肝素鹽水（1 g·L－1）的 PE 管連接BL-420S 生物機(jī)能實驗系統(tǒng)，將PE 管經(jīng)右頸外靜脈插入肺動脈后，固定插管，靜止5 min 后開始描記肺動脈壓，包括肺動脈平均壓（mean pulmonary artery pressure，mPAP）、肺動脈收縮壓（pulmonary artery systolic pressure，PASP）和肺動脈舒張壓（pulmonary artery diastolic pressure，PADP）。麻醉致死大鼠，剪斷腹主動脈和靜脈，經(jīng)PE 管先后灌注1×PBS 緩沖液和4%多聚甲醛，至腹主動脈流出液無色。其余大鼠不檢測肺動脈壓，按上述方法麻醉插管進(jìn)行PBS 緩沖液和多聚甲醛灌注。

1.6 各組大鼠右心室肥大指數(shù)（right ventricularhypertrophy index，RVHI）測定各組大鼠開胸取心臟和肺臟，4%多聚甲醛固定左肺和心臟。24 h取出浸泡的心臟，在通風(fēng)櫥中，沿冠狀溝去除心房、主動脈和肺動脈，沿前后室間溝分離右心室游離壁，衛(wèi)生紙吸干組織表面液體。稱量右心室游離壁及室間隔+左室壁。RVHI=右心室游離壁質(zhì)量/（室間隔質(zhì)量+左室壁質(zhì)量）。

1.7 ELISA 法檢測各組大鼠肺組織中IL-6、TNF-α、ET-1和PGI2水平取大鼠右肺稱質(zhì)量，加入4 ℃生理鹽水，冰浴條件下用勻漿器制備10%肺組織勻漿。按照試劑盒說明書，采用雙抗體夾心ELISA 法 檢 測IL-6、TNF-α 和ET-1 水 平，競 爭ELISA 法 檢 測PGI2 水 平。

1.8 各組大鼠肺組織HE 染色和維多利亞藍(lán)染色

取大鼠左肺，切片、乙醇脫水、石蠟包埋和制片，切片厚度4 μm。采用碧云天公司的蘇木素-伊紅 （hematoxylin-eosin，HE）染 色 試 劑 盒 和Solarbio 公司的維多利亞藍(lán)彈力纖維染色液，按照說明書分別進(jìn)行肺組織的HE 染色和維多利亞藍(lán)染色。

1.9 各組大鼠肺小動脈血管分型百分比的計算顯微鏡下觀察維多利亞藍(lán)染色切片。匯總長徑<100 μm 肌性動脈（具有內(nèi)層和外層完整彈力板）、部分肌性動脈（內(nèi)層彈力板不完整，外層彈力板完整）和非肌性動脈（單層彈力板）的數(shù)量及動脈總數(shù)量，按照如下公式計算每個樣本3 種類型動脈的百分比，某種類型動脈百分比=該類型動脈總數(shù)/動脈總數(shù)×100%［11-12］。

1.10 各組大鼠肺肌性小動脈厚度和管腔面積的檢測參照參考文獻(xiàn)［11-12］中的方法，選擇維多利亞藍(lán)染色的病理切片，顯微鏡下觀察，選擇<200 μm 直徑的肺小動脈（排除非肌性動脈和部分肌性動脈）進(jìn)行檢測，每張切片隨機(jī)選擇5 支血管，采用ipp6.0 圖像分析軟件檢測血管壁厚度（wall thickness，WT）、血 管 管 徑 （external diameter，ED）、血管總面積（total area，TA）和血管腔面積（luminal area，LA）。根據(jù)上述數(shù)據(jù)計算如下指標(biāo)：肺小動脈管壁厚度占管徑的百分比（WT%）=2×WT/ED×100%，血管腔面積占血管總面積百分比（LA%）= LA/TA×100%。

1.11統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué) 分 析。各 組 大 鼠mPAP、PASP、PADP 和RVHI，肺 組 織 中IL-6、TNF-α、ET-1 和PGI2 水平及ET-1/PGI2 比值，各型肺小動脈百分比、WT%和LA%均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠mPAP、PASP、PSDP 和RVHI與對照組比較，模型組大鼠mPAP、PASP 和PADP升高（P<0.05 或P<0.01）；與模型組比較，高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠mPAP 和PADP 降低（P<0.05）。見表1。與對照組比較，模型組大鼠RVHI升高（P<0.01）；與模型組比較，低、中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠RVHI 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表1 各組大鼠mPAP、PASP 和PADPTab.1 mPAP,PASP,and PADP of rats in various groups(n=5,±s,P/mmHg)

表1 各組大鼠mPAP、PASP 和PADPTab.1 mPAP,PASP,and PADP of rats in various groups(n=5,±s,P/mmHg)

*P<0.05，**P<0.01vscontrol group；△P<0.05vsmodel group.

Group Control Model ECC-BYP ⅢmPAP 13.10±1.32 19.43±3.26**PASP 16.27±1.39 21.62±3.63*PADP 11.52±1.63 18.33±3.12**Low dose Medium dose High dose 16.35±6.43 15.06±1.99 13.32±2.38△18.06±6.20 16.08±1.59 14.83±2.30△21.48±5.83 18.11±1.06 17.85±2.28

表2 各組大鼠RVHI 值Tab.2 Values of RVHI of rats in various groups (±s）

表2 各組大鼠RVHI 值Tab.2 Values of RVHI of rats in various groups (±s）

*P<0.01vscontrol group.

Group Control Model ECC-BYP Ⅲn 9 10 RVHI 0.128 8±0.021 2 0.182 1±0.044 3*Low dose 0.162 9±0.050 2 0.173 9±0.049 4 0.158 3±0.041 2 9 Medium dose High dose 10 10

2.2 各組大鼠肺小動脈周圍炎癥細(xì)胞浸潤和肺組織炎癥因子水平對照組大鼠肺小動脈管壁結(jié)構(gòu)清晰，小動脈周圍、肺間質(zhì)及肺泡無明顯炎癥細(xì)胞浸潤；模型組大鼠肺小動脈周圍、肺間質(zhì)及肺泡淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤明顯；中和高劑量ECC-BYPⅢ組大鼠肺小血管周圍、肺間質(zhì)及肺泡炎癥細(xì)胞浸潤較輕。見圖1。與對照組比較，模型組大鼠肺組織TNF-α 和IL-6 水平升高（P<0.01）；與模型組比較，中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中TNF-α 和IL-6 水 平 降 低（P<0.01）；與 低 劑 量ECC-BYP Ⅲ組比較，中劑量ECC Ⅲ組大鼠肺組織 中TNF- α 水 平 降 低（P<0.05），高 劑 量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中IL-6 水平降低（P<0.05）。見表3。

表3 各組大鼠肺組織中TNF-α 和IL-6 水平Tab.3 Levels of TNF-α and IL-6 in lung tissue of rats in various groups [-±s，ρB/（ng·L－1）］

表3 各組大鼠肺組織中TNF-α 和IL-6 水平Tab.3 Levels of TNF-α and IL-6 in lung tissue of rats in various groups [-±s，ρB/（ng·L－1）］

*P<0.01vscontrol group；△P<0.01vsmodel group；#P<0.05vslow dose of ECC-BYP Ⅲ group.

Group Control Model ECC-BYP Ⅲn 9 10 TNF-α 42.49±3.39 72.04±4.97*IL-6 32.25±5.14 47.47±6.70*Low dose 9 Medium dose High dose 10 10 68.03±5.11 63.02±4.48△#64.30±4.45△45.43±5.77 40.28±6.00△38.38±5.79△#

2.3 各組大鼠肺小動脈血管分型百分比按維多利亞藍(lán)染色大鼠肺動脈壁彈力纖維將肺小動脈區(qū)分為非肌性血管、部分肌性血管和肌性血管。見圖2。與對照組比較，模型組大鼠肌性血管百分比增加（P<0.01），非肌性血管百分比減少（P<0.01），部分肌性血管百分比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與模型組比較，中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肌性血管百分比減少（P<0.01），低、中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠部分肌性血管百分比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

表4 各組大鼠肺組織中非肌性、部分肌性和肌性肺小動脈百分率Tab.4 Percentages of non-muscular, partial muscular,and muscular pulmonary arterioles in lung tissue of rats in various groups(±s，η/%）

表4 各組大鼠肺組織中非肌性、部分肌性和肌性肺小動脈百分率Tab.4 Percentages of non-muscular, partial muscular,and muscular pulmonary arterioles in lung tissue of rats in various groups(±s，η/%）

*P<0.01vscontrol group；△P<0.01vsmodel group.

Group n Percentage Control Model ECC-BYP Ⅲ9 10 Non muscular pulmonary arterioles 40.0±18.8 16.0±12.6*Partial muscular pulmonary arterioles 38.0±14.8 34.0±12.2 Muscular pulmonary arterioles 22.0±14.8 50.0±16.9*Low dose 9 Medium dose High dose1029.1±16.9 37.4±17.2 28.4±14.4△29.5±13.9△10 22.1±11.9 23.9±15.2 40.5±13.7 47.7±17.9 41.3±17.6

圖2 各組大鼠肺組織中非肌性、部分肌性和肌性肺小動脈形態(tài)表現(xiàn)(維多利亞藍(lán)，Bar=50 μm)Fig.2 Morphology of non-muscular, partial muscular, and muscular pulmonary arterioles in lung tissue of rats in various groups (Victorian blue, Bar=50 μm)

2.4 各組大鼠肺組織中肌性小動脈壁厚度和管腔面積對照組大鼠肺組織中肌性小動脈壁薄，周圍少見炎癥細(xì)胞，管腔面積大；模型組大鼠肺組織中肌性小動脈管壁增厚，周圍炎癥細(xì)胞浸潤明顯，管腔狹窄變形；中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中肌性小動脈管壁較薄，周圍炎癥細(xì)胞浸潤較輕，管腔面積較大。見圖3。與對照組比較，模型組大鼠肺組織中肌性肺小動脈WT%升高（P<0.01），LA%降低（P<0.01）；與模型組比較，中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中WT%降低（P<0.01），LA%升高（P<0.01）；與低劑量ECC-BYP Ⅲ組比較，中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中WT%降低（P<0.01），LA%升高（P<0.01）。見表5。

表5 各組大鼠肌性肺小動脈WT%和LA%Tab.5 WT% and LA% of pulmonary muscular arterioles of rats in various groups (±s，η/%）

表5 各組大鼠肌性肺小動脈WT%和LA%Tab.5 WT% and LA% of pulmonary muscular arterioles of rats in various groups (±s，η/%）

*P<0.01vscontrol group；△P<0.01vsmodel group；#P<0.01vslow dose of ECC-BYP Ⅲ group.

Group Control Model ECC-BYP Ⅲn 9 10 WT%22.52±1.95 30.01±2.31*LA%33.86±5.51 19.00±5.47*20.29±4.46 25.44±4.84△#26.81±4.63△#Low dose 9 Medium dose High dose 10 10 28.77±3.24 25.21±1.99△#25.47±2.36△#

圖3 各組大鼠肺組織中肌性小動脈形態(tài)表現(xiàn)(維多利亞藍(lán)，Bar=50 μm)Fig.3 Morphology of muscular pulmonary arterioles in lung tissue of rats in various groups(Victorian blue,Bar=50 μm)

2.5 各組大鼠肺組織中ET-1 和PGI2 水平及ET-1/PGI2 比值與對照組比較，模型組大鼠肺組織ET-1水平和ET-1/PGI2 比值升高（P<0.05或P<0.01），PGI2 水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與模型組比較，中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中ET-1 水平降低（P<0.05 或P<0.01），高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中ET-1/PGI2 比值降低（P<0.05），低、中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中PGI2 水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與低劑量ECC-BYP Ⅲ組比較，中和高劑量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中ET-1 水 平 降 低（P<0.05 或P<0.01），高 劑 量ECC-BYP Ⅲ組大鼠肺組織中ET-1/PGI2 比值降低（P<0.05）。見表6。

表6 各組大鼠肺組織中ET-1 和PGI2 水平及ET-1/PGI2 比值Tab.6 Levels of ET-1 and PGI2 and ratios of ET-1/PGI2 in lung tissue of rats in various groups (±s）

表6 各組大鼠肺組織中ET-1 和PGI2 水平及ET-1/PGI2 比值Tab.6 Levels of ET-1 and PGI2 and ratios of ET-1/PGI2 in lung tissue of rats in various groups (±s）

*P<0.05，**P<0.01vscontrol group；△P<0.05，△△P<0.01vsmodel group；#P<0.05，##P<0.01vslow dose of ECC-BYP Ⅲ group.

Group Control Model ECC-BYP Ⅲn 9 10 ET-1[ρB/（ng·L－1）]41.99±14.36 84.49±33.09**PGI2[ρB/（ng·L－1）]42.99±5.67 40.40±2.97 Ratio of ET-1/PGI2 0.983 1±0.352 2 2.197 0±0.905 7*Low dose 9 Medium dose High dose 2.198 0±0.736 3 1.438 1±0.687 8 1.102 5±0.371 1△#10 10 84.71±30.91 58.49±24.35△#44.81±13.74△△##40.39±1.84 41.49±3.92 41.57±6.65

3 討 論

吸煙誘導(dǎo)PH 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與炎癥反應(yīng)、肺動脈內(nèi)皮功能紊亂、肺動脈平滑肌異常增殖和細(xì)胞外基質(zhì)沉積等有關(guān)［13-14］。肺部的細(xì)菌感染引起炎性細(xì)胞的擴(kuò)散，加重了肺血管周圍炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步惡化PH。本研究采用煙草煙霧暴露復(fù)合Kp 感染的方法建立PH 大鼠模型，結(jié)果顯示：大鼠模型出現(xiàn)肺小動脈肌化、肺動脈壁增厚和肺小動脈腔狹窄等典型肺血管異常重構(gòu)的病理變化及mPAP、PASP和PADP 明顯升高，表明PH 模型建立成功。前期研究［8］顯示：ECC-BYP Ⅲ可降低COPD 大鼠肺小血管壁厚度，減輕管腔狹窄，改善肺血管重構(gòu)。本研究結(jié)果顯示：ECC-BYP Ⅲ能夠降低模型大鼠的PH，在3.24～12.96 mg·kg－1范圍內(nèi)抑制效應(yīng)顯示出劑量依賴性。另外，在本研究中，模型大鼠的肺動脈血管阻力增高引起右心室代償性肥厚，而ECC-BYP Ⅲ未能明顯改善右心肥大，可能與給藥時間短和劑量低等有關(guān)。

COPD 肺小動脈血管重塑主要有無肌性正常動脈周圍肌化、平滑肌細(xì)胞增殖導(dǎo)致的肌型動脈管壁增厚以及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的大量沉積等病理變化［15］。無肌性小動脈周圍肌化是肺小血管重塑常見的表現(xiàn)，是PH 形成和發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)［15-16］。盡管前期的研究［8］顯示：COPD 大鼠血管內(nèi)皮生長 因 子 （vascular endothelial growth factor，VEGF）和ET-1 的表達(dá)明顯增加，ECC-BYP Ⅲ降低這2 種指標(biāo)的表達(dá)水平，但其結(jié)果仍不能明確ECC-BYP Ⅲ對肺小動脈肌化的影響。本研究結(jié)果顯示：模型大鼠肌性肺小血管百分比升高和非肌性百分比降低，反映了肺小血管肌化的病理變化；ECC-BYP Ⅲ對肺血管肌性血管百分比異常變化的抑制，顯示出ECC-BYP Ⅲ改善肺小動脈肌化的作用，提示減輕肺小動脈肌化是ECC-BYP Ⅲ抑制COPD 肺小動脈血管重塑和降低PH 的機(jī)制之一。

既 往 的 研 究［6-7］顯 示：ECC-BYP Ⅲ減 輕COPD 大鼠肺支氣管和肺組織的炎癥反應(yīng)，通過多條信號通路的干預(yù)，降低多種炎癥因子的水平。本研究結(jié)果顯示：模型組大鼠肺肌性動脈外膜周圍有大量單個核炎癥細(xì)胞浸潤，主要由淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組成，上述炎癥細(xì)胞分泌大量的炎性蛋白，如趨化因子和細(xì)胞因子等，維持炎癥反應(yīng)的持續(xù)，導(dǎo)致血管壁的破壞和功能異常，惡化肺血管異常重構(gòu)，其中細(xì)胞因子IL-6 和TNF-α 產(chǎn)生了重要作用。IL-6 促進(jìn)血管周圍炎癥細(xì)胞的浸潤和肺動脈平滑肌增殖，過表達(dá)IL-6 轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)嚴(yán)重肺血管重塑，如遠(yuǎn)端小動脈肌化和特征性的叢樣病變［17］。敲除IL-6 基因表達(dá)的小鼠，肺血管重構(gòu)和PH 得到改善［18］。TNF-α 主要由活化的 巨噬細(xì)胞分泌，刺激其他炎性因子的合成，與其他炎性因子協(xié)同產(chǎn)生炎癥瀑布反應(yīng)。應(yīng)用TNF-α 拮抗劑Infliximab 可有效減少PH 大鼠腺泡內(nèi)肌性肺動脈的數(shù)量和肺動脈中膜的厚度［19］。ECC-BYP Ⅲ減少肺動脈血管周圍的炎癥細(xì)胞浸潤，抑制肺組織IL-6 和TNF-α 的升高，提示其降低肺動脈壓和抑制肺血管重構(gòu)的效應(yīng)與改善肺動脈血管周圍的炎癥反應(yīng)有關(guān)。

肺動脈周圍的收縮血管因子水平和舒張血管因子水平之間平衡被破壞，是導(dǎo)致肺血管管腔狹窄和PH 的重要原因。ET-1 是強(qiáng)效的血管收縮因子，在肺組織中主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺上皮細(xì)胞等分泌。PGI2 具有高效的肺血管舒張作用。肺部疾病和（或）低氧所致PH 患者肺組織中存在PGI2 水平 不 足［20］和ET-1 水 平 升 高［21］的 表 現(xiàn)，而 在COPD 小鼠或大鼠肺組織中ET-1 水平也明顯升高［22-23］。本 研 究 中，PH 大 鼠 肺 組 織 中ET-1 水 平 明顯升高，盡管PGI2 含量無明顯變化，但ET-1/PGI2 比值明顯增加，表明肺血管周圍可能存在縮血管因子水平/舒張血管因子水平失衡。ECC-BYP Ⅲ可降低肺組織中ET-1 水平，改善ET-1/PGI2失衡，通過減輕肺動脈血管狹窄降低PH。綜上所述，ECC-BYP Ⅲ減輕肺小動脈肌化和肺血管周圍炎癥，改善肺血管的異常重構(gòu)，改善肺血管周圍血管因子水平/舒張血管因子水平失衡，減輕肺血管管腔狹窄和降低肺動脈壓。本研究闡明ECC-BYP Ⅲ通過多個環(huán)節(jié)改善PH 和肺血管異常重構(gòu)，為COPD 相關(guān)PH 的臨床治療提供了參考，為進(jìn)一步的機(jī)制研究指明了方向。