孔廣紅 余文才 柳覲

摘要：【目的】明確澳洲堅果品種間雜交的親和性，為快速鑒定品種間雜交親和程度和授粉品種配置提供理論依據(jù)和實踐支撐。【方法】以澳洲堅果13 個品種為母本試材，10 個品種為父本試材，設置115 個雜交組合，利用母本自交花柱提取液培養(yǎng)基培養(yǎng)父本花粉，測定雜交組合的花粉萌發(fā)率及花粉管生長情況，結合花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)（pollengermination，PG）與花粉管生長受影響程度指數(shù)（pollen tube growth，PTG），判定品種間雜交親和性程度?！窘Y果】明確了115 個雜交組合的親和性程度，篩選出54 個強雜交親和性組合，其中有9 對雜交組合可互為親本；另外篩選出28個中等雜交親和性組合和33 個弱雜交親和性組合。品種HAES863、O.C、HAES820 可以作為雜交育種父本材料，在果園構建中可以作為13 個參試母本的授粉樹；品種HAES863、D4、HAES951、HAES816、HAES842 為極好的雜交育種母本材料?！窘Y論】建立了澳洲堅果品種間雜交親和性室內鑒定標準，將雜交親和性劃分為強（PG值≤0.5，PTG值≤0.2）、中（0.5＜PG值≤0.7；0.2＜PTG值≤0.4）和弱（0.7＜PG值＜1；0.4＜PTG值＜1）3 種類型，用于澳洲堅果雜交親和性的快速鑒定，為澳洲堅果種植園品種配置提供參考。

關鍵詞：澳洲堅果；花柱提取液；花粉萌發(fā)率；花粉管長度；花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)；花粉管生長受影響程度指數(shù)

中圖分類號：S664.9 文獻標志碼：A 文章編號：1009-9980（2023）04-0615-15

雜交親和性是果樹雜交育種中合理選配親本的關鍵科學問題。澳洲堅果具有部分自交不親和性（partially self-incompatibility， PSD）及花粉直感效應（xenia effect）r研究其品種間雜交親和性對高產優(yōu)質雜種選育至關重要，能為澳洲堅果產業(yè)健康揭續(xù)發(fā)展提供實踐保障。澳洲堅果（Macadamia spp.）是大量開花樹種，分品種每株樹年產為20-40 萬朵小花“”，但最終坐果率非常低。部分自交不親和性”"和花粉直感效應”“是導致最終坐果率低的重要因素。研究表明，人工補充授粉能夠顯著提高澳洲堅果產量和品質*"。目前，相關研究普追采用田間授粉試驗鑒定同一物種不同品種間的雜交親和性"·i。通過采用此方法，國內外學者獲得了澳洲堅果部分主裁品種的授粉樹"-。澳洲堅果品種繁多品種間雜交親和性機制研究較為缺乏，而且大田利植中品種搭配混亂。通過田間授粉研究品種間雜交親和性需要耗費大量人力物力，而且受限于果樹“大小年”及環(huán)境因素，短期內難以獲得準確數(shù)據(jù)陳騰土等網(wǎng)、張紹鈴等m、齊國輝、丁一鳴等聞、覃屏生等的分別在沙田柚、梨、鴨梨、玫瑰等作物中利用花柱提取液培養(yǎng)基（母本）培養(yǎng)離體花粉（父本）的方法開展了室內雜交親和性的鑒定研究，主要研究原理是如果花柱提取液培養(yǎng)基（母本）與離體花粉（父本）雜交親和，花粉萌發(fā)及花粉管生長得到促進反之則被抑制。目前，國內外未閱通過澳洲堅果花柱提取液培養(yǎng)離體花粉研究品種間雜交親和性的報道。因此，筆者在本研究中采用此方法開展澳洲堅果品種間雜交親和性評價，為快速鑒定品種間雜交親和性和選擇雜交育種親本材料提供技術支持。本研究以澳洲堅果的 13個品種為供試材料，通過統(tǒng)計分析花粉萌發(fā)率及花粉管生長情況，研究花粉前發(fā)及花粉管生長在不同品種培養(yǎng)基條件下的受影響租度，并根據(jù)花粉萌發(fā)率的高低和花粉管生長速率的快慢鑒定品種間的雜交親和性篩選出親和性較強的雜交組合。本研究結果將為澳洲堅果雜交親和性機制研究奠定科學基礎，并為澳洲堅果種植園品種配置推薦授粉品種提供實踐支撐。

1 材料和方法

1.1 材料

供試材料見表 1.選擇來源于云南省熱帶作物科學研究所澳洲堅果新品種比較試驗基地中同一年種植、管理一致、長勢比較一致且無病蟲害的植株。供試品種背景信息參考賀熙勇”的研究1.2 法

1.2.1 花柱采集自交花柱采集方法：于花序開放前 1 d.將母本花序套上特制的濾膜級網(wǎng)袋（網(wǎng)袋孔徑為25 m，透光、透氣、透水、隔離傳粉者及其他花序花粉：花粉粒直徑為34-40 um）。花序開放2 d后的早晨8：00一10：00取下膜袋，采集花柱，此時花尊雄蕊已經(jīng)凋落，帶裸花柱的子房在花序上繼續(xù)保持，柱頭上沒有花粉堆積，采集的花柱長度為雌蕊總長度的2/3，不帶子房；迅速放入2.5 mL EP 管中，立即進行液氮速凍，帶回實驗室保存于-80 ℃冰箱，備用。

1.2.2 花柱提取液制備?稱取保存于-80 ℃超低溫冰箱的花柱0.5 g，用液氮研磨至粉末放入10 mL EP管中，加入4.5 mL 預冷超純水，震蕩混勻3 min，2500 r ·min-1，離心10 min，取出冰上靜置30 min，上清液即為花柱提取液，收集混勻分裝，于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 培養(yǎng)基制備?試驗采用液體培養(yǎng)法培養(yǎng)離體花粉，標準（對照，CK）培養(yǎng)基參照王文莉[28]的方法，略有改動，超純水中加入10%（w，后同）蔗糖、0.01%硼酸即為標準培養(yǎng)基；花柱培養(yǎng)基參照丁一鳴等[25]的方法，略有改動，使用1.2.2 中各品種的花柱提取液與標準培養(yǎng)基按體積比1∶5 的比例混合，即為花柱提取液培養(yǎng)基。現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.4 花粉采集?于各父本品種盛花期采集開放前1 d 的花序，采集時間為晴朗上午10：00—11：00，帶回實驗室，將小花蕾剝去花萼，取出花藥，使花粉散出于硫酸紙上。開放前1 d 的花粉已經(jīng)成熟，而且環(huán)境條件對花粉活力影響顯著[29-30]，所以需要當天采集當天檢測。根據(jù)不同品種的盛花期分批次培養(yǎng)，每次培養(yǎng)均使用對照進行調節(jié)。

1.2.5 花粉培養(yǎng)?用移液槍將花柱提取液培養(yǎng)基和標準培養(yǎng)基分別滴至干凈的單凹載玻片上，用量為100 μL，標記；用小排刷蘸取備好的花粉，鑷子輕輕敲擊均勻點播花粉至不同培養(yǎng)基表面（不能攪拌）；將載玻片放入覆蓋有3 層濕濾紙的培養(yǎng)皿中，蓋上蓋子，培養(yǎng)皿無需封口；置于25 ℃、黑暗條件的光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3 h，每處理3 次重復。

1.2.6 鏡檢?鏡檢時用移液槍吸出單凹載玻片中的部分液體培養(yǎng)基，使液面處于同一平面，在萊卡DM6B顯微鏡100×下進行觀測、拍照。每重復觀察3 個視野以上，總計不少于300 粒花粉；用顯微鏡自帶的顯微尺測量花粉管長度，每重復不少于10 根花粉管。

1.2.7 花粉管長度、花粉萌發(fā)率、花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)、花粉管生長受影響程度指數(shù)的測定?以花粉管長度（pollen tube length， PTL）大于花粉粒直徑作為花粉萌發(fā)的標準統(tǒng)計花粉萌發(fā)率（pollen germinationrate，PGR），花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)（indexof influence degree ofmacadamia pollen germination）用PG 值表示，花粉管生長受影響程度指數(shù)（indexof influence degree ofmacadamia pollen tube growth）用PTG值表示。按照下列公式分別計算各個指標：PGR（%）= 萌發(fā)花粉粒數(shù)總花粉粒數(shù)×100；PG=（對照花粉萌發(fā)率－處理花粉萌發(fā)率）/對照花粉萌發(fā)率；PTG=（對照花粉管平均長度－處理花粉管平均長度）/對照花粉管平均長度。1.2.8 統(tǒng)計分析采用Microsoft Excel 2010 進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計；采用SPSS 12.0 檢驗進行顯著性分析；采用Origin2023 繪圖。

2 結果與分析

2.1 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種HY離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種HY花粉萌發(fā)的影響結果見圖1-A。對照的花粉萌發(fā)率最高（26.10%），各品種花柱提取液培養(yǎng)基不同程度地抑制HY花粉萌發(fā)，與對照相比存在顯著性差異，且花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG值均較大?；ǚ酃苌L情況見圖1-B。對照的花粉管平均長度最長，其次是HAES816，它們之間無顯著性差異；其他培養(yǎng)基條件下，花粉管生長受到不同程度的抑制作用，與對照相比存在顯著性差異。結果表明，HY與12 個參試母本之間雜交親和性弱，因此不建議利用這些品種進行田間試驗選配雜交組合。

2.2 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種

A16 離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種A16 花粉萌發(fā)的影響結果見圖2-A。對照的花粉萌發(fā)率最高（38.25%），各品種花柱提取液對A16 花粉萌發(fā)產生不同程度的抑制作用。培養(yǎng)基D、HAES951、HAES863、A4、O.C 的抑制程度比較低，花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG值較小，說明它們與品種A16 的雜交親和性較好；而HAES695、HAES246 培養(yǎng)基對品種A16 花粉萌發(fā)具有強抑制作用，花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG 值分別達0.78 和0.81?；ǚ酃苌L情況見圖2-B。在HAES863 培養(yǎng)基條件下，花粉管平均長度最長（89.45 μm），顯著高于對照；其他品種培養(yǎng)基不同程度地抑制花粉管生長，其中在HAES951、O.C、D4、A4、D、HAES820 培養(yǎng)基條件下花粉管平均長度與對照相比無顯著性差異。在HAES816、HY、HAES695、HAES246、HAES842 培養(yǎng)基條件下花粉管平均長度顯著低于對照，說明它們對品種A16 花粉管生長具有強抑制作用。不同培養(yǎng)基條件下，通過對花粉萌發(fā)率及花粉管生長情況對比研究發(fā)現(xiàn)，A16 花粉與品種D、HAES951、HAES863、A4、O.C 之間雜交親和性高，可利用這些品種搭配雜交組合，進行田間雜交試驗驗證。

2.3 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種A4離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種A4 花粉萌發(fā)的影響結果見圖3-A。D培養(yǎng)基的花粉萌發(fā)率最高（17.67%），其次為對照和HAES695 培養(yǎng)基，它們處于同一影響水平，無顯著性差異；HAES695、D4、HAES951、A16、HAES246 處于同一影響水平，萌發(fā)率無顯著性差異；HAES863 培養(yǎng)基的花粉萌發(fā)率最低，僅為3.56%，花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG 值達到0.79，說明HAES863 培養(yǎng)基對A4 花粉萌發(fā)具有強抑制作用；O.C、HAES820、HAES842、HAES816與HAES863 處于同一水平，它們之間相比無顯著性差異?；ǚ酃苌L情況見圖3- B。HAES863、HAES816、HAES842、HAES695 和D5 種培養(yǎng)基促進A4 花粉管生長，長度均大于CK，但無顯著性差異，說明5 種培養(yǎng)基與對照處于同一影響水平?；ǚ酃苌L受影響程度指數(shù)PTG 值小于0，直接判定組合具強雜交親和性。其他6 種培養(yǎng)基與對照相比表現(xiàn)為抑制作用，但抑制程度無顯著性差異，說明6種培養(yǎng)基對花粉管的影響程度與對照也處于同一影響水平。根據(jù)A4 花粉在不同培養(yǎng)基條件下的PG值和PTG 值判定組合的雜交親和性，結果表明A4品種可作為11 個參試母本的授粉樹，但是品種A4開花晚，花期短，存在花期不遇問題，雜交育種中可作為父本使用，在生產中則需謹慎使用。

2.4 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種

HAES695 離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種HAES695 花粉萌發(fā)的影響結果見圖4-A。HY培養(yǎng)基的花粉萌發(fā)率最高（52.13%），顯著高于對照2 倍多，說明HY培養(yǎng)基促進HAES695 花粉萌發(fā)，該組合具強雜交親和性；其他培養(yǎng)基的花粉萌發(fā)率高低排序依次為CK＞HAES816＞O.C＞D4＞A16＞HAES820＞HAES842＞A4＞HAES951＞HAES246＞D＞HAES863，其中CK、HAES816、O.C、D4 對花粉萌發(fā)影響處于同一水平，花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG 值較?。籋AES246、D、HAES863 處于同一水平，PG 值較大?；ǚ酃苌L情況見圖4-B。在HY培養(yǎng)基條件下花粉管最長，平均長度達82.61 μm，比對照生長快，無顯著性差異；在其他培養(yǎng)基條件下的花粉管平均長度與對照相比，均受到不同程度的抑制作用，花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG 值表明，在O.C、D4 培養(yǎng)基條件下的花粉管生長受影響程度較低，但HAES863 培養(yǎng)基條件下的花粉管受影響程度最高，而且A16、HAES246、A4、HAES951、HAES820、HAES842 與HAES863 處于同一影響水平。綜合分析花粉萌發(fā)率及花粉管生長情況，發(fā)現(xiàn)品種HAES695 與HY具有強雜交親和性，與O.C 和D4 之間雜交親和性中等，可進行田間雜交驗證篩選；而品種HAES695 與HAES863 具有雜交不親和性。

2.5 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種HAES816 離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種HAES816 花粉萌發(fā)的影響結果見圖5-A。對照花粉萌發(fā)率最高（31.57%），顯著高于其他培養(yǎng)基。在D4、O.C、HAES951、D培養(yǎng)基條件下，花粉萌發(fā)率處于同一影響水平；在HAES246、HAES820、A16、HAES842、HAES863、HY、A4、HAES695 培養(yǎng)基條件下，花粉萌發(fā)率處于同一水平?；ǚ酃苌L情況見圖5-B。對照花粉管最長，其他培養(yǎng)基對品種HAES816 花粉管產生不同程度的抑制作用。在CK、HAES863、HAES951、D4 培養(yǎng)基條件下，它們之間的花粉管平均長度無顯著性差異；而HAES863、HAES951、D4、O.C、HAES842、HAES820 處于同一水平，它們之間無顯著性差異，花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG值較??；在HAES695 和A4 培養(yǎng)基條件下，PTG值分別為0.31和0.34，說明這2個品種的培養(yǎng)基對HAES816花粉管生長具有較強的抑制作用。綜合分析花粉萌發(fā)率與花粉管生長情況，發(fā)現(xiàn)品種HAES816 與母本D4、O.C、HAES951 之間具有強雜交親和性，可進行田間雜交試驗篩選；與母本A4、HAES695 雜交親和顯著性差異：在其他培養(yǎng)基條件下的花粉管平均長度與對照相比，均受到不同程度的抑制作用?；ǚ酃苌L受影響租度指數(shù)PTG值表明，在O.C、D4培養(yǎng)基條件下的花粉管生長受影響程度較低，但HAES863 培養(yǎng)基條件下的花粉管受影響程度最高而 且 A16、HAES246、A4、HAES951、HAES820.HAES842與HAES863 處于同一影響水平。綜合分析花粉萌發(fā)率及花粉管生長情況，發(fā)現(xiàn)品種HAES695與HY具有強雜交親和性，與0.C和D4之間雜交親和性中等，可進行田間雜交驗證篩選：而品種HAES695與HAES863 具有雜交不親和性。2.5 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種HAES816離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響不同品種自交花柱提取液對品種 HAES816 花粉萌發(fā)的影響結果見圖5-A。對照花粉萌發(fā)率最高（31.57%），顯著高于其他培養(yǎng)基。在 D4、0.C、HAES951、D培養(yǎng)基條件下，花粉萌發(fā)率處于同一影響水平：在 HAES246、HAES820、A16、HAES842.HAES863、HY、A4，HAES695培養(yǎng)基條件下，花粉萌發(fā)率處于同一水平。花粉管生長情況見圖5-B。對照花粉管最長，其他培養(yǎng)基對品種HAES816 花粉管產生不同程度的抑制作用。在 CK、HAES863.HAES951、D4 培養(yǎng)基條件下，它們之間的花粉管平均長重無顯著性差異：而 HAES863、HAES951、D4.0.C、HAES842、HAES820 處于同一水平，它們之間無顯著性差異，花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG值較小：在HAES695和A4培養(yǎng)基條件下，PTG值分別為0.31和0.34，說明這2個品種的培養(yǎng)基對HAES816花粉管生長具有較強的抑制作用。綜合分析花粉萌發(fā)率與花粉管生長情況，發(fā)現(xiàn)品種HAES816與母本D4、O.C、HAES951之間具有強雜交親和性，可進行田間雜交試驗篩選;與母本A4，HAES695雜交親和性較弱；與其他品種的雜交親和性中等。

2.6 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種HAES863 離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種HAES863 花粉萌發(fā)的影響結果見圖6-A。HAES842、HAES951、HAES820培養(yǎng)基促進HAES863花粉萌發(fā)，效果好于對照，花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG值≤ 0，無顯著性差異；其他培養(yǎng)基則抑制花粉萌發(fā)，但抑制作用均不明顯，除了HY?；ǚ酃苌L結果見圖6- B。

HAES816、HAES951、HAES842、D4、HAES820 培養(yǎng)基促進HAES863 花粉管生長，花粉管平均長度顯著高于對照，花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG值＜0；其他培養(yǎng)基不同程度抑制花粉管生長，但PTG值較小，表明10 種培養(yǎng)基對花粉管生長的抑制作用不強。綜合分析花粉萌發(fā)率及花粉管生長結果，以及HAES863 品種開花早、花期長、花量大、花粉多的特性，品種HAES863 可作為10個參試品種的父本。

2.7 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種HAES820 離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種HAES820 花粉萌發(fā)的影響結果見圖7-A。在HAES816 培養(yǎng)基條件下，促進花粉萌發(fā)，萌發(fā)率高于對照，花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG值＜0；其他培養(yǎng)基不同程度地抑制HAES820 花粉萌發(fā)，其中HY、HAES246 抑制作用最強，PG 值較大?；ǚ酃苌L結果見圖7-B。與對照相比，有11個花柱提取液培養(yǎng)基促進花粉管生長，花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG 值＜0，只有HY抑制花粉管生長，但PTG值較小，表明抑制作用不強。綜合分析花粉萌發(fā)及花粉管生長結果，表明11 個組合雜交親和性強，1 個組合雜交親和性中等。HAES820 品種具有開花早、花期長、花量大、花粉多的特性，可以將其作為12 個參試品種的父本。

2.8 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種HAES951 離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種HAES951花粉萌發(fā)的影響結果見圖8-A。HAES816、A4 培養(yǎng)基促進品種HAES951 花粉萌發(fā)，其他品種不同程度地抑制花粉萌發(fā)，其中HAES863、D4、HAES820、HAES246、HAES842、HY 的花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG 值較小，說明抑制作用較低，與對照相比，無顯著性差異；O.C 培養(yǎng)基的花粉萌發(fā)率小，PG 值較大，說明抑制作用較強?；ǚ酃苌L情況見圖8-B。與對照相比，所有參試品種的花柱提取液培養(yǎng)基均不同程度地抑制HAES951 花粉管生長，其中HAES863、HAES816、D4、HAES842 培養(yǎng)基的花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG 值較?。辉贏16、A4、D、O.C 培養(yǎng)基條件下PTG 值＞0.3，說明這些培養(yǎng)基對HAES951 花粉管生長具有較強的抑制作用。綜合分析PG值和PTG值，HAES951 花粉與品種HAES816、HAES863、D4、HAES842 之間雜交親和性強，與品種HY、HAES695、HAES820、HAES246 之間雜交親和性中等，與品種A16、A4、D、O.C之間雜交親和性弱。

2.9 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種D離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種D花粉萌發(fā)的影響結果見圖9- A。對照花粉萌發(fā)率最高（37.11%），與對照相比，其他培養(yǎng)基不同程度地抑制花粉萌發(fā)，其中O.C、HAES695、HAES842、D4、HAES816 萌發(fā)率較低，花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG值較大，說明它們對D花粉萌發(fā)抑制作用較強?；ǚ酃苌L結果見圖9-B。對照花粉管平均長度最長，達146.84 μm，與對照相比，其他培養(yǎng)基不同程度地抑制花粉管生長，其中O.C、HAES695、HAES842、A16 培養(yǎng)基對D花粉管生長抑制作用最強，花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG＞0.3；尤其在HAES695培養(yǎng)基條件下，PTG 值高達0.62，說明D 花粉與HAES695 之間可能存在雜交不親和性。綜合分析花粉萌發(fā)率和花粉管生長情況，發(fā)現(xiàn)品種D與參試品種HAES863、HAES820 之間雜交親和性強；與品種HAES816、HAES951、HAES246 之間雜交親和性中等；與剩余品種雜交親和性弱。D花粉在參試的所有父本中花粉萌發(fā)率最高，花粉管生長最快，是研究澳洲堅果花粉管生長的良好材料。

2.10 澳洲堅果不同品種自交花柱提取液對品種O.C離體花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響

不同品種自交花柱提取液對品種O.C花粉萌發(fā)的影響結果見圖10-A。與對照相比，D4、HAES863、HAES816、HAES842、HAES951、D培養(yǎng)基促進花粉萌發(fā)，萌發(fā)率高于對照，PG值＜0；在其他培養(yǎng)基條件下，對花粉萌發(fā)呈現(xiàn)不同程度抑制作用，但只有HY、A16 顯著低于對照，其他培養(yǎng)基與對照相比不存在顯著性差異?；ǚ酃苌L情況見圖10-B。與對照相比，A16、D、HY培養(yǎng)基中花粉管長度低于對照，其他培養(yǎng)基花粉管長度顯著高于對照或者與對照處于同一水平。綜合分析O.C 花粉的花粉萌發(fā)及花粉管生長結果，表明品種O.C 花粉在參試自交花柱培養(yǎng)基條件下，花粉萌發(fā)率高，花粉管生長快速，適合與所有參試父本進行雜交組合選配，特別是與HAES816、HAES863、D4 之間存在極強的雜交親和性。

2.11 澳洲堅果品種間雜交親和性評價標準

本研究中澳洲堅果雜交組合花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG值與花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG值見表2。115 個雜交組合中PG 值的區(qū)間為-1.31～0.87，PTG 值的區(qū)間為-0.64～0.62。PG 值和PTG 值越大，表明品種間雜交親和性越弱；PG值和PTG值越小，表明品種間雜交親和性越強。澳洲堅果屬于配子體自交不親和類型，柱頭抑制花粉萌發(fā)的作用較弱，所以花粉管生長情況是判定品種間雜交親和性的重要指標。本研究結果表明，同一品種花粉在不同自交花柱提取液培養(yǎng)基條件下，花粉萌發(fā)率高時，花粉管生長速率較快；花粉萌發(fā)率低，花粉管長度短，萌發(fā)率與花粉管長度呈正相關。因此，將花粉管生長受影響指數(shù)PTG 值作為判定品種間雜交親和性的主要指標，將花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG值作為判定品種間雜交親和性的輔助指標。首先分析PTG值，當PTG值＜0 時，可以不考慮PG值，判定該組合具有強雜交親和性；當PTG值＞0.4 時，也不必考慮PG 值，直接判定該組合的雜交親和性為弱。綜合分析PG 值和PTG 值，能夠更加準確地判定澳洲堅果品種間雜交親和程度。根據(jù)115 個雜交組合的花粉萌發(fā)率、花粉管長度、花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG 值及花粉萌發(fā)受影響程度指數(shù)PG值，經(jīng)全面比對和綜合分析后，將澳洲堅果品種間的雜交親和性程度劃分為強（PG≤0.5；PTG≤0.2）、中（0.5＜PG≤0.7；0.2＜PTG＜0.4）、弱（0.7≤PG＜1；0.4 ≤PTG＜1）3 種類型（表3）。

2.12 澳洲堅果不同組合的雜交親和性程度

依據(jù)品種間雜交親和性評價標準，本研究中10個父本、13 個母本間雜交組合選配分析結果見表3。結果表明，115 個雜交組合中有54 個組合雜交親和性強，其中有9 對雜交組合可互為親本（表3相同背景顏色標識）；另外有28 個組合雜交親和性中等，33 個組合雜交親和性較弱。本研究的10 個參試父本中，品種HAES863、O.C、HAES820、A4與大部分參試母本組合具強雜交親和性，雜交育種中可作為父本使用，果園中可作為授粉樹搭配種植；但是品種A4 開花較晚，花期較短，使用時需要考慮花期相遇因素。13 個參試母本中，品種HAES863、D4、HAES951、HAES816、HAES842 與大部分參試父本雜交親和性強，是極好的雜交育種母本材料。

部分不同澳洲堅果花粉在不同培養(yǎng)基條件下花粉萌發(fā)及花粉管生長結果見圖11-A～D。圖11-A是品種D花粉在標準培養(yǎng)基（對照）條件下的萌發(fā)及生長結果，其花粉萌發(fā)率高，花粉管生長快，該品種花粉適合作為澳洲堅果花粉管生長的研究材料。圖11-B是品種D花粉在HAES695 花柱提取液培養(yǎng)基條件下的萌發(fā)及生長結果，與對照圖11-A相比，花粉萌發(fā)率顯著降低，花粉管生長受抑制，HAES695 花柱提取液培養(yǎng)基對D花粉萌發(fā)及生長起抑制作用。圖11-C、圖11-D 分別是品種O.C 花粉在標準培養(yǎng)基（對照）和D4 花柱提取液培養(yǎng)基條件下的萌發(fā)及花粉管生長結果。二者對比發(fā)現(xiàn)，D4 培養(yǎng)基促進O.C花粉萌發(fā)及花粉管生長，花粉萌發(fā)率和花粉管長度均顯著高于對照。

3 討論

3.1 不同品種田間雜交親和性與本研究結果的一致性分析

前期，筆者課題組[20]以品種HAES951為母本進行田間雜交試驗，結果表明11個雜交組合中，坐果率高低順序依次為HAES951 ×D＞HAES951 × HAES863＞HAES951 × HAES842＞HAES951 × HAES816＞HAES951 × O.C＞HAES951 ×D4＞HAES951 ×A4＞HAES951×HAES294＞HAES951×HAES900＞開放授粉＞自花授粉。該研究中坐果率高的雜交組合與本研究母本HAES951品種推薦雜交組合一致。陶麗等[19]以7個澳洲堅果品種進行授粉組合選配，發(fā)現(xiàn)品種HAES842 可推薦為HAES863、O.C、HAES816 的母本；該研究結論與本研究結論一致。本研究進一步表明HAES842 可推薦為5 個參試父本的母本，是良好的母本材料。賀熙勇等[17]對澳洲堅果品種Kau 的授粉品種選配及結果性狀進行研究，發(fā)現(xiàn)O.C 和HAES918 適宜做Kau 的授粉樹；陶麗等[18]對品種HAES246 授粉源開展的田間授粉研究結果表明，HAES951、O.C 和Pahala 為其授粉品種；本研究中HAES951和O.C這2個品種適合為父本材料，與上述研究結論一致。綜上所述，本研究驗證了前期澳洲堅果雜交親和性田間研究結果的準確性，而且克服了環(huán)境條件造成的不同年份間的坐果率誤差，能夠為澳洲堅果品種間雜交親和性評價提供技術支撐。

3.2 研究自交花柱提取液培養(yǎng)花粉萌發(fā)及花粉管生長的意義

只有外界環(huán)境條件適宜時，具有活力的成熟花粉才能正常萌發(fā)，花粉管才能快速生長。適量蔗糖和酮酸為花粉萌發(fā)及花粉管生長提供了最佳條件mm，筆者在本研究中參考前人研究結果..9及前期不同試驗條件摸索，確定了促進澳洲堅果花粉萌發(fā)及花粉管生長的最佳液體培養(yǎng)基蔗糖和硼酸濃度，以此作為對照，然后在對照培養(yǎng)基中添加等量的不同品種的自交花柱提取液作為處理培養(yǎng)基。同一物種不同品種間花柱提取液的成分和含量存在差異，使用自交花柱提取液可以保證花柱提取液培養(yǎng)基中無其他品種成分，且自交花柱中含有能夠抑制自交花粉萌發(fā)及花粉管生長的S糖蛋白～.s。所以，筆者采用自交花柱制作提取液，可以減少培養(yǎng)基之間的差異。在果樹中，有許多品種存在雜交不親和現(xiàn)象，而最終坐果率高低是親和性強弱的直接表現(xiàn)響。采用田間雜交授粉研究雜交親和性，工作量巨大，同一年內很難完成多品種間雜交，成效低下。本研究在短期內快速準確地完成了10個父本與13 個母本共 115 個配置組合的雜交親和性初篩，能夠極大地提高工作效率，節(jié)約大量人力物力。

3.3 研究澳洲堅果雜交親和性判定標準的意義

澳洲堅果是大量開花樹種，總狀花序，單花小，花期花量大，開花時間持續(xù) 1-3 個月，但最終坐果率極低，極大地限制了澳洲堅果產業(yè)健康發(fā)展;而且澳洲堅果具有花粉直感效應，父本控制果實品質，為澳洲堅果選配雜交親和性強的授粉品種不僅可以提高產量，還可以改善果實品質，提高果實營養(yǎng)成分pT。因此，為澳洲堅果園主裁品種配置具有強雜交親和性的授粉品種在種植業(yè)中便顯得十分重要。澳洲堅果已經(jīng)有 160多年的馴化裁培歷史，品種繁多，根據(jù)不同的氣候環(huán)境，各地區(qū)適宜裁培的主裁品種不盡相同。目前，主裁品種的授粉樹仍然按照傳統(tǒng)的田間授粉試驗進行搭配，需要進行多次田間雜交試驗才能得到結果：或者按先前經(jīng)驗配置多個授粉品種，這樣又極大地阻礙著果園構建的時效性和科學性。區(qū)域性品種或者新引進及自主研發(fā)新品種授粉樹搭配問題也一直存在。針對以上問題筆者在本研究中探索澳洲堅果自交花柱提取液培養(yǎng)不同品種離體花粉技術，進行澳洲堅果品種間雜交親和性搭配初步篩選，制定澳洲堅果雜交親和性判定標準，即花粉萌發(fā)受影響租度指數(shù)PG 值、花粉管生長受影響程度指數(shù)PTG值的評價區(qū)間，在今后的試驗中，不需要再次進行大規(guī)模試驗，只需針對目的品種進行驗證即可。所以，本研究獲得的雜交親和性判定標準能夠為快速鑒定澳洲堅果品種間雜交親和性程度提供可信性與可靠性參考

4結論

本研究結果明確了澳洲堅果 10個父本與 13 個母本共 115個配置雜交組合的親和性租度，建立了澳洲堅果品種間雜交親和性室內鑒定標準，并劃分為強（PG值≤0.5，PTG值s0.2），中（0.5

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