劉欣　張華　潘宇峰　馬曉乾

摘要：? 從野生黑木耳材料中，分離、純化得到25個(gè)不同菌株，通過生物學(xué)特性和拮抗試驗(yàn)，選出8個(gè)獨(dú)立菌株。綜合測(cè)定8個(gè)菌株的長(zhǎng)滿袋天數(shù)、污染率、耳片形狀及顏色、干木耳子實(shí)體產(chǎn)量四個(gè)指標(biāo)，HM07表現(xiàn)優(yōu)異，是適合在該地區(qū)栽培的菌株。

關(guān)鍵詞：? 野生黑木耳；? 菌株；? 栽培

中圖分類號(hào)：? ?S 759. 81? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：? ?A? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)：１００1 － 9499（２０23）03 － 0042 － 03

Abstract 25 different strains were isolated and purified from wild Auricularia auricula collected in Daxing'an Mountains. By observing the biological characteristics of each strain and through antagonistic test， 8 independent strains were selected. Based on the four indexes of full bag days， pollution rate， ear shape and color and dry ear fruiting body yield of 8 strains， HM07 has excellent performance and is suitable for cultivation in this area.

Key words wild Auricularia auricula; strain; cultivation

黑木耳（Auricularia auricula）具有較高的藥用和食用價(jià)值[ 1 - 3 ]。大興安嶺是我國(guó)最北、面積最大的現(xiàn)代國(guó)有林區(qū)，野生黑木耳在黑龍江大興安嶺分布廣泛，種質(zhì)資源十分豐富[ 4 ]。本研究通過馴化該地區(qū)野生黑木耳菌株，從而選育出適合寒地栽培的品質(zhì)優(yōu)良、產(chǎn)量高的黑木耳菌株，通過將其應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中，使高寒地區(qū)黑木耳生產(chǎn)具有良好的種源供應(yīng)，更好的促進(jìn)大興安嶺地區(qū)黑木耳產(chǎn)業(yè)發(fā)展，為林區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整提供有利資源。

1 材料與方法

1. 1 黑木耳材料來源

在加格達(dá)奇林業(yè)局古里林場(chǎng)、塔河林業(yè)局盤古林場(chǎng)及西林吉林業(yè)局金溝林場(chǎng)選擇具有代表性的地點(diǎn)，收集了15株生長(zhǎng)良好的野生黑木耳子實(shí)體，連同其生長(zhǎng)的耳木一同帶回。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 供試培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基配方（一級(jí)菌種）（改良的PDA培養(yǎng)基），分別加入：馬鈴薯200 g、KH4PO4 3 g、MgS04 1.5 g、葡萄糖20 g、瓊脂粉18 g、水1 000 ml。

栽培種培養(yǎng)基配方（三級(jí)菌種），分別加入：闊木屑80%、麥麩18%、1%石膏、蔗糖1%、干料∶水=1∶12（高壓滅菌3 h）。

1. 2. 2 分離、純化黑木耳菌株

組織分離法：首先使用70%的酒精棉球?qū)谀径訉?shí)體的表面進(jìn)行消毒，切取一小部分組織塊。切取組織塊時(shí)需要在無菌條件下使用70%酒精，進(jìn)行表面消毒l min，馬上移入含0.1%升汞溶液中進(jìn)行消毒1～2 min，使用無菌純水沖洗3次，再用滅菌過的剪刀將組織塊剪成2 mm大小，接入改良過的PDA平板培養(yǎng)基上，在25℃恒溫下進(jìn)行培養(yǎng)。

基內(nèi)菌絲分離法：選擇皮下生有耳芽、長(zhǎng)有子實(shí)體的耳木，用酒精將其表面浸濕，點(diǎn)燃后使用無菌刀片劈開耳木，通過橫斷面分辨出有菌絲的部位，分離材料選取1 cm厚的木塊，在0.1%升汞中無菌條件下浸泡15～20 s后取出，用無菌水洗去殘留的消毒液，將無菌紗布吸干水分后置于另一塊無菌紗布之上，用解剖刀滅菌后將木塊劈成火柴頭大小的木塊，使用無菌針少量挑取長(zhǎng)有菌絲的耳木接種到改良的PDA平板培養(yǎng)基上，在25℃恒溫下進(jìn)行培養(yǎng)。

純化培養(yǎng)：在菌落邊緣選取前端菌絲體，斜面進(jìn)行接種，恒溫培養(yǎng)。反復(fù)移植2～3次，得到純菌株。純化后的菌種轉(zhuǎn)接、擴(kuò)繁到斜面培養(yǎng)基的試管中保藏，作為備份。

1. 2. 3 拮抗試驗(yàn)

將供試黑木耳菌株兩兩塊接種到直徑90 mm的平板培養(yǎng)基中，接種塊相距30 mm，25℃下靜置培養(yǎng)7～15天后，待平板內(nèi)不同菌絲菌株接觸后，觀察菌絲接觸部位、菌絲的親和程度及拮抗線形成情況，做好記錄，具體形態(tài)特征隆起、隔離型、溝型參照《GB/T12728食用菌術(shù)語(yǔ)》的規(guī)定來判定[ 5 ]。通過該試驗(yàn)，可以初步排除采集菌株中的相同菌株，提高后續(xù)試驗(yàn)的效率。

1. 2. 4 菌絲長(zhǎng)勢(shì)、長(zhǎng)速對(duì)比試驗(yàn)

（1）將得到的純化菌株置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期觀察各菌株在室溫下的生長(zhǎng)情況，如菌絲粗壯、濃密程度、顏色等。精確測(cè)量菌落半徑并記錄結(jié)果。通過對(duì)比菌絲濃密度和菌落形態(tài)可以得出菌種的生長(zhǎng)勢(shì)。

菌絲生長(zhǎng)速率（mm/d ）= 菌落半徑（mm）/菌絲生長(zhǎng)天數(shù)（d）

（2）各菌株分別接種三級(jí)菌100 袋，待菌絲鋪滿料面時(shí)，隨機(jī)選取 10 袋，每隔 2天觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)，測(cè)量其長(zhǎng)度并記錄菌絲長(zhǎng)滿袋的時(shí)間，計(jì)算日均菌絲生長(zhǎng)速度。

1. 2. 5 栽培出耳試驗(yàn)

每個(gè)菌株平行做 100 袋栽培袋，閉光恒溫培養(yǎng)直到菌絲長(zhǎng)滿袋，然后散色光照促使耳基形成，最后將菌袋移到耳場(chǎng)進(jìn)行出耳栽培，記錄菌株袋料栽培菌絲特征、出耳產(chǎn)量、滿袋天數(shù)和耳片特征，并計(jì)算污染率。

2 結(jié)果與分析

2. 1 黑木耳菌株的分離、純化及拮抗試驗(yàn)

從采集的野生黑木耳材料中， 通過組織分離法和基內(nèi)菌絲分離，共分離、純化得到25個(gè)不同菌株，經(jīng)室內(nèi)觀測(cè)各菌株?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)和生殖生長(zhǎng)的生物學(xué)特性，通過拮抗試驗(yàn)，排除了采集菌株中的相同菌株，選出其中8 個(gè)獨(dú)立菌株進(jìn)入后續(xù)試驗(yàn)， 分別編號(hào)為HM01、HM02、HM03……HM08。

2. 2 菌絲長(zhǎng)勢(shì)、長(zhǎng)速對(duì)比試驗(yàn)

不同菌株菌絲生長(zhǎng)速度見表1，不同菌株菌絲的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)性狀見表2、表3。

從表1中可以看出，HM07號(hào)菌絲生長(zhǎng)最快，為（5.9±0.02）mm/d，HM01、HM05次之，達(dá)到了5.0 mm/d，HM08號(hào)菌絲生長(zhǎng)最慢，僅有3.8 mm/d。

從表2、表3中可以看出供試菌株中HM01、HM05及HM07號(hào)菌絲生長(zhǎng)旺盛、菌絲粗壯、潔白、長(zhǎng)勢(shì)好。HM02、HM03及HM04菌絲生長(zhǎng)菌絲生長(zhǎng)較好，HM06、HM08號(hào)菌絲長(zhǎng)勢(shì)較差、菌絲稀疏、較細(xì)不健壯。

2. 3 栽培出耳試驗(yàn)

不同黑木耳菌株產(chǎn)量情況見表4，黑木耳菌株子實(shí)體商品性能見表5。

從表4可以看出，HM07號(hào)菌絲生長(zhǎng)最快，且菌絲活性最強(qiáng)，污染率相對(duì)較低，木耳產(chǎn)量最高，達(dá)到了39.62 g；HM01和HM05次之，HM02、HM08號(hào)長(zhǎng)勢(shì)最差，產(chǎn)量相對(duì)較低，僅為28.17 g。

目前市場(chǎng)對(duì)黑木耳商品性能分析的指標(biāo)如下：耳片形狀為碗狀和小片為優(yōu)，耳片顏色正面黑褐色為質(zhì)量好，顏色發(fā)黃色均為劣質(zhì)。由表5 可知HM01、HM05、HM07 號(hào)菌株商品性能表現(xiàn)符合優(yōu)秀黑木耳商品的要求且優(yōu)于其他試驗(yàn)菌株。

3 結(jié)論與討論

（1）從采集的野生黑木耳材料中，分離、純化得到25個(gè)不同菌株，觀測(cè)各菌株的生物學(xué)特性，進(jìn)一步通過拮抗試驗(yàn)，選出其中8個(gè)獨(dú)立菌株進(jìn)入后續(xù)試驗(yàn)。

（2）平板菌絲生長(zhǎng)速度和袋料菌絲生長(zhǎng)速度基本上保持一致，菌袋菌絲的生長(zhǎng)速度高低和干木耳子實(shí)體產(chǎn)量的多少呈正相關(guān)的關(guān)系。綜合8個(gè)菌株的污染率、長(zhǎng)滿袋天數(shù)、耳片形狀及顏色、干木耳子實(shí)體產(chǎn)量這四個(gè)指標(biāo)，只有HM01、HM05及HM07在3個(gè)方面都表現(xiàn)較好，是適合在該地區(qū)栽培的菌株。其中HM07菌株菌絲體潔白色，濃密，生長(zhǎng)整齊，后期分泌出褐色液體；菌絲呈管狀，有橫隔，分枝，有鎖狀聯(lián)合。子實(shí)體特征表現(xiàn)為：新鮮的子實(shí)體呈半透明狀，膠質(zhì)，碗型，極富有彈性，直徑一般為 8～10 cm，厚為 0.8～1mm，干燥后快速縮成角質(zhì)狀，且又脆又硬。子實(shí)體顏色為黑褐色，有背腹面區(qū)分，背面部位平滑且有毛，腹面具有羊肚狀的皺褶，顏色區(qū)分不為明顯，品質(zhì)優(yōu)良。

參考文獻(xiàn)

［1］ 李玉.? 中國(guó)黑木耳［M］.? 長(zhǎng)春：? 長(zhǎng)春出版社， 2001.

［2］ 李紅衛(wèi).? 黑木耳的營(yíng)養(yǎng)［J］.? 中國(guó)果蔬， 2004（2）： 47．

［3］ 張燕燕，? 劉新春，? 王雪，? 等.? 黑木耳營(yíng)養(yǎng)成分及生物活性研究進(jìn)展［J］.? 南方農(nóng)業(yè)， 2018， 12（29）： 130 - 134.

［4］ 樓隆后，? 朱慧真，? 湯華光，? 等.? 木耳屬種類的初步研究［J］.中國(guó)食用菌， 1992，15（4）： 30 - 32.

［5］ 國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局食用菌術(shù)語(yǔ)GB/T12728-2006［S］.? 2006，12.

［6］ 陶梅，? 趙存玉，? 張曉燕.? 寒地野生黑木耳人工馴化技術(shù)研究［J］.林業(yè)科技， 2017，42（1）：40-41.

［7］ 郭鑫.? 地栽黑木耳菌種選育、? 鑒定與替代原料研究［D］. 哈爾濱： 黑龍江大學(xué)， 2010.

［8］ 殷培峰.? 桑金錢菌的培養(yǎng)性狀及其生理活性物質(zhì)的研究［D］.蘇州： 蘇州大學(xué)， 2005.