禹博，祁琳，金鑫，曹清文，田晨，李佳穎，王越，周建妹，陳康寅

（1．天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心臟科，天津市心血管病離子與分子機(jī)能重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津心臟病學(xué)研究所，天津 300211；2．武警特色醫(yī)學(xué)中心藥劑科，天津 300162；3．武警后勤學(xué)院軍事藥學(xué)教研室，天津 300309；4．天津中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，天津 301617；5．浙江醫(yī)院干部保健科，杭州 310013）

中國(guó)心血管疾病患病率處于持續(xù)上升階段，急性心肌梗死的死亡率于2002—2018 年總體呈上升態(tài)勢(shì)[1]。急性心肌梗死后，通過(guò)溶栓或經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療及早恢復(fù)心肌灌注是減少心肌梗死面積、改善臨床預(yù)后最有效地方法。但恢復(fù)血供又可能造成心肌頓抑、無(wú)復(fù)流，甚至心肌損傷加重的現(xiàn)象，即心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia－reperfusion injury，MIRI），成為再灌注療法獲益的主要障礙。MIRI 主要涉及氧化應(yīng)激、線粒體損傷、凋亡、自噬等機(jī)制[2－5]，目前MIRI 發(fā)生機(jī)制尚不完全清楚，缺少療效確切的預(yù)防及治療藥物[6]。因此，進(jìn)一步探討MIRI 的機(jī)制，尋找安全有效的治療藥物，仍有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

芹菜素是一種廣泛存在于自然界的黃酮類化合物。作為一種脂溶性還原劑，其可在治療帕金森病、腦缺血再灌注損傷、腫瘤等多種疾病中發(fā)揮重要作用[7－9]。研究表明，芹菜素可通過(guò)抑制p38 絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPKs）信號(hào)通路減輕大鼠離體心肌缺血再灌注損傷，也可通過(guò)上調(diào)Janus 激酶2（JAK2）－信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）和磷脂酰肌醇3 激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信號(hào)通路在物理缺氧誘導(dǎo)的氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖（oxygen－glucose deprivation/restoration，OGD/R） 損傷中發(fā)揮保護(hù)作用[10－12]。但目前尚無(wú)關(guān)于芹菜素對(duì)MIRI中自噬作用的報(bào)道。利用化學(xué)性缺氧模擬劑氯化鈷（cobalt chloride，CoCl2）構(gòu)建OGD/R 模型[13]，相比物理缺氧，無(wú)需專門低氧培養(yǎng)設(shè)備，具有操作更方便，缺氧效果穩(wěn)定等特點(diǎn)。因此，本研究利用氯化鈷建立H9c2 細(xì)胞的OGD/R 模型，初步探討芹菜素對(duì)H9c2細(xì)胞OGD/R 損傷的影響，并探討其調(diào)節(jié)凋亡和自噬相關(guān)分子機(jī)制，為進(jìn)一步研究芹菜素抗MIRI 提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 大鼠H9c2 心肌細(xì)胞（購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)）；胎牛血清、DMEM 高糖培養(yǎng)基和0．25%胰蛋白酶（Gibco，Waltham，MA）；DMEM 無(wú)糖培養(yǎng)基、PBS 緩沖液、CoCl2粉劑、MTT、PMSF 抑制蛋白降解液和二抗（北京索萊寶科技有限公司）；芹菜素（上海源葉生物科技有限公司）；RIPA 裂解液（康為世紀(jì)生物科技有限公司）；BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒（碧云天生物技術(shù)有限公司）；5×蛋白上樣緩沖液（北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司）；PVDF膜（密理博科技有限公司）；HIF－1α 抗體、β－actin抗體及超敏ECL 發(fā)光液（Affinity Biosciences 公司）；SIRT－1、p62、LC3A/B、Bax、Bcl－2 抗體（ABclonal 公司）；LDH 測(cè)定試劑盒、SOD 測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）；Caspase－3 ELISA 檢測(cè)試劑盒（伊特生命科學(xué)研發(fā)有限公司）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 處理大鼠H9c2 心肌細(xì)胞在含有10%FBS、100 U/mL 青霉素/100 μg/mL 鏈霉素的DMEM 高糖培養(yǎng)基中，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)使用的細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。實(shí)驗(yàn)分3 部分：（1）模擬1%低氧等效CoCl2濃度確定實(shí)驗(yàn)：分為①對(duì)照組；②1%O2組；③CoCl2（0．1～1．2 mmol/L）組。1%O2組是將細(xì)胞在三氣培養(yǎng)箱（1%O2、5% CO2、94% N2）中用含1%FBS 的DMEM 高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，CoCl2組是用不同濃度CoCl2處理并在含1%FBS 的DMEM 高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h。（2）模擬1%O2OGD/R 模型等效CoCl2濃度確定實(shí)驗(yàn)：分為①對(duì)照組；②1%O2組；③CoCl2（0．6 和0．8 mmol/L）組。根據(jù)第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的CoCl2濃度處理細(xì)胞，1%O2組是將細(xì)胞置于三氣培養(yǎng)箱中用含1%FBS 的DMEM 無(wú)糖培養(yǎng)基培養(yǎng)16 h 后，置于正常條件（復(fù)氧復(fù)糖）培養(yǎng)4 h；CoCl2組將細(xì)胞用0．6 和0．8 mmol/L CoCl2處理并在含1%FBS 的DMEM 無(wú)糖培養(yǎng)基培養(yǎng)16 h 后，置于正常條件培養(yǎng)4 h。（3）芹菜素對(duì)H9c2 細(xì)胞OGD/R 作用的影響：①對(duì)照組；②OGD/R 組（CoCl2濃度為0．8 mmol/L）；③OGD/R+芹菜素組。不同濃度芹菜素預(yù)處理24 h。

1.3 細(xì)胞活力測(cè)定 將H9c2 細(xì)胞根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組以8×103個(gè)/孔的密度接種于96 孔板，培養(yǎng)24 h 后用含1%FBS 的DMEM 高糖培養(yǎng)基同步化24 h，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組處理細(xì)胞。結(jié)束培養(yǎng)前4 h，棄去上清，避光加入100 μL/孔MTT（0．5 mg/mL，PBS 配制），作用4 h 后棄上清，加入100 μL/孔DMSO，充分震蕩，492 nm 處測(cè)定每孔吸光度值。細(xì)胞活力計(jì)算公式：細(xì)胞活力（%）=（實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對(duì)照組吸光度值）×100%。每組設(shè)5 個(gè)復(fù)孔。

1.4 蛋白提取和Western 印跡 按照實(shí)驗(yàn)分組，將H9c2 細(xì)胞以2×105個(gè)/孔的密度接種于6 孔板中，培養(yǎng)24 h 后用含1%FBS 的DMEM 高糖培養(yǎng)基同步化24 h，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組處理細(xì)胞。棄去培養(yǎng)液，用PBS 清洗細(xì)胞2 遍，每孔加入適量含有1%PMSF 的RIPA 裂解液提取蛋白并用BCA 蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。蛋白變性后，以每泳道20 μg的蛋白上樣量用10% SDS－PAGE 凝膠進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜，TBST 洗膜3 次，每次10 min，使用5%脫脂牛奶阻斷非特異性蛋白結(jié)合，TBST 洗膜3 次，每次10 min，4℃下孵育一抗（1∶500 稀釋）過(guò)夜。次日，吸出一抗，TBST 洗膜3 次，每次10 min，HRP 結(jié)合二抗（1∶10 000）室溫孵育1 h，TBST 洗膜3 次后，ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒顯色，采用Image J 軟件對(duì)蛋白條帶的光密度值進(jìn)行分析。

1.5 細(xì)胞caspase－3 含量測(cè)定 將H9c2 細(xì)胞以2×105個(gè)/孔的密度接種于6 孔板中，依據(jù)實(shí)驗(yàn)分組處理細(xì)胞并收集細(xì)胞，在細(xì)胞沉淀中加入約0．4 mL 的PBS，混勻，在冰水浴中進(jìn)行超聲破碎細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)蛋白充分釋放，4℃3 000 r/min 離心10 min 得到樣品，用BCA 蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔及樣本孔，根據(jù)ELISA 試劑盒操作說(shuō)明加入試劑及待檢樣本，覆膜，37℃溫育1 h；洗滌，加入底物，37℃溫育15 min；加入終止液，在450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算細(xì)胞的caspase－3 濃度。

1.6 細(xì)胞SOD 含量測(cè)定 細(xì)胞分組和處理同1．5，設(shè)置對(duì)照孔、對(duì)照空白孔、樣品孔及樣品空白孔，根據(jù)SOD 試劑盒操作說(shuō)明書加入相關(guān)試劑，混勻后37℃溫育20 min，在450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值，根據(jù)說(shuō)明書計(jì)算SOD 含量。

1.7 細(xì)胞外液LDH 水平測(cè)定 將H9c2 細(xì)胞以2×105個(gè)/孔的密度接種于6 孔板中，依據(jù)實(shí)驗(yàn)分組處理細(xì)胞后收集各自的培養(yǎng)液上清。設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔及對(duì)照孔，根據(jù)LDH 試劑盒說(shuō)明書加入相關(guān)試劑并依次37℃溫育后加入終止液后，在450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值，根據(jù)說(shuō)明書計(jì)算LDH 漏出量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用Graph Pad Prism 9．0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及作圖，計(jì)量資料中符合正態(tài)分布資料以±s 表示，多組間比較采用單因素方差分析，多組內(nèi)兩兩比較采用SNK 法，P＜0．05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 模擬1%O2的等效CoCl2濃度 結(jié)果圖1a 所示，與對(duì)照組相比，1%O2及CoCl2（0．4～1．2 mmol/L）組細(xì)胞活力均明顯降低（P＜0．05）；與1%O2組相比，CoCl2（0．5～0．8 mmol/L）組細(xì)胞活力降低程度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05）。圖1b 所示，與對(duì)照組相比，1%O2及CoCl2（0．5～0．8 mmol/L）組HIF－1α 表達(dá)均明顯上調(diào)（P＜0．05），且與1%O2組相比無(wú)顯著差異（P＞0．05）。因此選取0．6 mmol/L 和0．8 mmol/L CoCl2用于OGD/R 模型構(gòu)建篩選。

圖1 不同濃度CoCl2 對(duì)H9c2 細(xì)胞活力和HIF-1α 表達(dá)的影響Fig 1 The effects of 1%O2 and CoCl2 of different concentrations on the viability and expression of HIF-1α in H9c2 cells

2．2 模擬1%O2OGD/R 模型等效CoCl2濃度 結(jié)果圖2a 所示，與對(duì)照組相比，1%O2及CoCl2（0．6、0．8 mmol/L）組細(xì)胞活力明顯降低（P＜0．05）。與1%O2組相比，0．8 mmol/L CoCl2組細(xì)胞活力降低沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。圖2b 所示，與對(duì)照組相比，1%O2及CoCl2（0．6、0．8 mmol/L）組HIF－1α 表達(dá)均明顯上調(diào)（P＜0．05），且與1%O2組相比無(wú)顯著差異（P＞0．05）。因此選取CoCl2（0．8 mmol/L）用于后續(xù)OGD/R 模型及檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

圖2 OGD/R 條件下不同濃度CoCl2 對(duì)H9c2 細(xì)胞活力及HIF-1α表達(dá)的影響Fig 2 The effect of 1%O2 and CoCl2 of different concentrations on the viability and expression of HIF-1α of H9c2 cells under the condition of OGD/R

2.3 OGD/R 條件下芹菜素對(duì)H9c2 細(xì)胞活力、SOD及LDH 的影響 圖3a 所示，與對(duì)照組相比，OGD/R組的細(xì)胞活力均受到明顯抑制（P＜0．05）；與OGD/R組相比，芹菜素（0．01～10 μmol/L）組細(xì)胞活力有顯著差異（P＜0．05）；圖3b 所示，與對(duì)照組相比，OGD/R 組的SOD 含量明顯下降（P＜0．05）；與OGD/R 組相比，10 μmol/L 芹菜素組SOD 含量顯著提高（P＜0．05）；圖3c 所示，與對(duì)照組相比，OGD/R 組的LDH 漏出量明顯提高（P＜0．05）；與OGD/R 組相比，10 μmol/L 芹菜素組LDH 漏出量顯著下降（P＜0．05）。

圖3 OGD/R 條件下芹菜素對(duì)H9c2 細(xì)胞活力、SOD 及LDH 的影響Fig 3 The effects of API on the viability，SOD and LDH of H9c2 cells under the condition of OGD/R

2.4 芹菜素對(duì)OGD/R H9c2 細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)的影響 圖4a、b、c 所示，與對(duì)照組相比，OGD/R 組Bcl－2 表達(dá)量明顯下降（P＜0．05），Bax 的表達(dá)量明顯增加（P＜0．05）；10 μmol/L 芹菜素可顯著提高Bcl－2的表達(dá)量（P＜0．05），降低Bax 的表達(dá)量（P＜0．05）；圖4d 所示，與對(duì)照組相比，OGD/R 組的caspase－3 含量明顯增加（P＜0．05）；與OGD/R 組相比，10 μmol/L芹菜素組的caspase－3 含量明顯下降（P＜0．05）。

圖4 OGD/R 條件下芹菜素對(duì)H9c2 細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)的影響Fig 4 The effects of API on the apoptosis-related indexes of H9c2 cells under the condition of OGD/R

2.5 芹菜素對(duì)H9c2 細(xì)胞OGD/R 損傷SIRT1 及自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 圖5 所示，與對(duì)照組相比，OGD/R組SIRT1 及LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)量明顯下降（P＜0．05），p62 的表達(dá)量明顯增加（P＜0．05）；10 μmol/L 芹菜素可顯著提高SIRT1 及LC3Ⅱ/Ⅰ的表達(dá)量（P＜0.05），降低p62 的表達(dá)量（P＜0.05）。

圖5 OGD/R 條件下芹菜素對(duì)H9c2 細(xì)胞SIRT1 及自噬相關(guān)指標(biāo)的影響Fig 5 The effects of API on the SIRT1 and autophagy-related indexes of H9c2 cells under the condition of OGD/R

3 討論

MIRI 是由多種細(xì)胞因子和信號(hào)通路參與的復(fù)雜病理過(guò)程，對(duì)心血管病患者的治療和預(yù)后造成了嚴(yán)重影響。因此，MIRI 機(jī)制的研究一直是心血管領(lǐng)域的熱點(diǎn)。如何減輕MIRI 對(duì)改善心肌梗死患者預(yù)后具有重要意義。OGD/R 誘導(dǎo)的H9c2 細(xì)胞損傷是經(jīng)典的體外心肌細(xì)胞損傷模型，常用于心肌梗死和MIRI 的藥物篩選和機(jī)制研究。根據(jù)剝氧方式不同，可分為物理缺氧和化學(xué)缺氧。物理缺氧存在設(shè)備復(fù)雜昂貴，模型穩(wěn)定性差，缺氧程度難以控制的缺點(diǎn)，而化學(xué)缺氧則可以有效避免上述缺點(diǎn)且操作簡(jiǎn)便易行。CoCl2通過(guò)鈷離子代替HIF 的脯氨酰羥化酶活性位點(diǎn)中的Fe2+，能在體外誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生缺氧損傷[14-15]，因此CoCl2常用于化學(xué)缺氧損傷模型。HIF-1α 是由缺氧刺激產(chǎn)生的重要轉(zhuǎn)錄因子，在缺氧誘導(dǎo)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中廣泛表達(dá)，為缺氧應(yīng)答的全局性調(diào)控因子，與氧化應(yīng)激密切相關(guān)[16]。故本研究以H9c2 細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用細(xì)胞活力和HIF-1α 相結(jié)合作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，比較1%O2和CoCl2建立的缺氧和OGD/R 損傷效果，構(gòu)建簡(jiǎn)便易行且穩(wěn)定的H9c2 細(xì)胞化學(xué)OGD/R 模型。結(jié)果顯示，0.8 mmol/L CoCl2聯(lián)合剝糖作用16 h，復(fù)氧復(fù)糖4 h的方案與此條件下1%O2造成的損傷相近，可作為H9c2 細(xì)胞穩(wěn)定的OGD/R 損傷模型。

本研究通過(guò)MTT 實(shí)驗(yàn)闡明了芹菜素對(duì)OGD/R H9c2 細(xì)胞活力的影響。結(jié)果顯示，低濃度的芹菜素（0.000 1、0.001 μmol/L）對(duì)OGD/R H9c2 細(xì)胞沒有作用；中等濃度的芹菜素（0.01～10 μmol/L）對(duì)OGD/R H9c2 細(xì)胞有保護(hù)作用；而高濃度的芹菜素（40～100 μmol/L）對(duì)OGD/R H9c2 細(xì)胞有明顯毒性作用，故接下來(lái)的研究選用1、10 μmol/L 的芹菜素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。OGD/R 會(huì)造成心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，SOD 和LDH 是氧化應(yīng)激損傷的重要標(biāo)志物[17]。SOD 與氧自由基的清除能力密切相關(guān)，檢測(cè)SOD 水平可反映氧自由基攻擊引起的細(xì)胞脂膜損傷的嚴(yán)重程度。LDH作為一種催化酶，主要參與丙酮酸和乳酸的轉(zhuǎn)化，當(dāng)細(xì)胞膜損傷時(shí)其可釋放到細(xì)胞外基質(zhì)，檢測(cè)LDH水平可反映細(xì)胞膜完整性及細(xì)胞損傷程度。本研究顯示芹菜素可提高OGD/R 所致的細(xì)胞SOD 降低，可減少OGD/R 所致的LDH 漏出，提示芹菜素可以保護(hù)OGD/R 導(dǎo)致的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。

心肌細(xì)胞凋亡是MIRI 的主要致病機(jī)制之一，心肌細(xì)胞是永久細(xì)胞，凋亡會(huì)導(dǎo)致心肌收縮功能障礙，阻斷凋亡過(guò)程可防止心肌細(xì)胞的丟失，減少心臟損傷。Bcl-2 家族是重要的細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白，而其中的Bcl-2（抑制凋亡蛋白）和Bax（促進(jìn)凋亡蛋白）發(fā)揮著關(guān)鍵作用，兩者可以結(jié)合，形成二聚結(jié)合體，調(diào)節(jié)線粒體的穩(wěn)定狀態(tài)，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞凋亡[18]。Caspase-3 是細(xì)胞凋亡的主要執(zhí)行者，可引起DNA降解、細(xì)胞核碎裂，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，芹菜素可提高OGD/R 所致的Bcl-2 降低，減少OGD/R 所致的細(xì)胞Bax 和Caspase-3 增加，提示芹菜素可以減少OGD/R 導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。

自噬是一種復(fù)雜保守的自我降解過(guò)程，對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。自噬在心臟疾病中的作用取決于特定的病理情況和發(fā)病階段，適度的自噬有助于保持心臟健康，而自噬不足或過(guò)度則對(duì)心臟造成損傷[20-21]。LC3 是自噬的標(biāo)志物，其中存在LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ兩種形式，泛素樣作用下的LC3-Ⅰ與膜結(jié)構(gòu)上的磷脂共價(jià)結(jié)合，形成LC3-Ⅱ存在于自噬體的內(nèi)外膜上，所以LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值可反映自噬水平[22]。p62 是選擇性自噬接頭蛋白，是連接LC3 與待降解泛素化底物的重要橋梁。作為自噬待降解的產(chǎn)物，自噬流受阻時(shí)大量泛素化蛋白會(huì)堆積到細(xì)胞內(nèi)，此時(shí)p62 表達(dá)水平會(huì)升高；而在自噬流活化狀態(tài)下，p62 被降解，表達(dá)水平降低[23]。因此，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p62 表達(dá)水平能可評(píng)價(jià)細(xì)胞自噬流水平。Liu 等[24]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，鹽誘導(dǎo)蛋白2 可能通過(guò)mTOR/ULK1 信號(hào)通路促進(jìn)自噬，抑制該蛋白可通過(guò)減少異常自噬減輕心肌MIRI。而Li 等[25]通過(guò)動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)促進(jìn)自噬通量可抑制MIRI 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這說(shuō)明自噬在MIRI 中的兩面性。SIRT1 是sirtuins 蛋白家族的一員，主要位于常染色體區(qū)域，可在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中穿梭調(diào)節(jié)，其通過(guò)催化組蛋白和轉(zhuǎn)錄因子的賴氨酸去乙酰化修飾，從而影響細(xì)胞增殖、衰老與代謝等生理活動(dòng)[26]。SIRT1通過(guò)其脫乙酰酶活性參與自噬從起始到降解的不同步驟的調(diào)節(jié)。當(dāng)然，SIRT1 的水平和功能也受自噬過(guò)程的調(diào)節(jié)[27]。Zhang 等[28]發(fā)現(xiàn)去甲腎上腺素抑制劑可在心肌缺血再灌注損傷小鼠中發(fā)揮保護(hù)作用，其機(jī)制與SIRT1 對(duì)自噬小體的清除密切相關(guān)。Zhong等[29]研究表明SIRT1 可通過(guò)減少炎癥和誘導(dǎo)自噬發(fā)揮抗心肌缺血損傷的作用。Wang 等[30]利用H9c2細(xì)胞證實(shí)，SIRT1 可通過(guò)促進(jìn)自噬抑制心肌肥厚。本研究顯示，OGD/R 條件下，SIRT1 和LC3-Ⅱ/Ⅰ明顯降低，p62 蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，提示自噬水平降低。芹菜素可一定程度逆轉(zhuǎn)上述自噬通量的變化，表明芹菜素增強(qiáng)了OGD/R H9c2 的自噬水平，該過(guò)程可能與SIRT1 的作用有關(guān)。

綜上所述，自噬、氧化應(yīng)激和凋亡之間存在復(fù)雜的相互作用關(guān)系。氧化應(yīng)激可以激活自噬，也可促進(jìn)凋亡[31-32]。自噬可以通過(guò)清除受損的線粒體，降低活性氧，減輕細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，進(jìn)而減少細(xì)胞的凋亡[33]。本研究結(jié)果顯示，芹菜素能提高H9c2 細(xì)胞OGD/R 模型的細(xì)胞活力，減少細(xì)胞凋亡，具有明顯抑制氧化應(yīng)激損傷的作用，可能與其通過(guò)調(diào)控SIRT1 促進(jìn)細(xì)胞自噬有關(guān)，但它們之間的相互關(guān)系及深入機(jī)制，仍需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。