張松雨,劉 飛,李 燕,陳 珂

急性心肌梗死是冠心病的嚴(yán)重階段,由于冠狀動(dòng)脈出現(xiàn)阻塞,心肌出現(xiàn)嚴(yán)重缺血而壞死,致殘率及死亡率較高,對(duì)病人的生活質(zhì)量及生命安全產(chǎn)生嚴(yán)重影響[1-2]。因此,早期診斷與及時(shí)評(píng)估對(duì)于降低急性心肌梗死病人死亡率、改善預(yù)后十分重要[3]。黑色素瘤缺乏因子2(absent in melanoma 2,AIM2)能抑制腫瘤的生長(zhǎng),并可引起炎性因子的釋放,從而促進(jìn)機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)展[4-5]。Toll樣受體9(toll-like receptor,TLR9)可識(shí)別病原微生物,進(jìn)而引起免疫應(yīng)答[6]。本研究探討AIM2與TLR9在急性心肌梗死病人中的表達(dá)水平,并分析其對(duì)急性心肌梗死病人預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年8月—2020年8月南陽市中心醫(yī)院收治的急性心肌梗死病人120例作為心肌梗死組,其中,男68例,女52例,年齡42～78(64.18±8.22)歲。另選取同期健康體檢者60名作為健康組,其中,男38名,女22名,年齡40～76(63.38±8.12)歲。兩組病人一般資料比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《急性心肌梗死診斷和治療指南》[7]中急性心肌梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn);②經(jīng)心電圖及心肌壞死標(biāo)志物檢查確診為急性心肌梗死者;③年齡<80歲;④出現(xiàn)癥狀至入院時(shí)間≤12 h;⑤無經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入史者。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴有免疫系統(tǒng)疾病者;②合并惡性腫瘤者;③合并嚴(yán)重心律失常及心功能不全者;④伴有嚴(yán)重感染者;⑤臨床資料不全者。

1.3 方法

1.3.1 臨床資料收集 收集并統(tǒng)計(jì)所有受試者的年齡、性別、血壓[包括收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)]、心率、血脂[包括三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)]、飲酒史、體重、吸煙史、基礎(chǔ)疾病(包括高血壓、糖尿病、高血脂)、心功能指標(biāo)[包括左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、B型鈉尿肽(BNP)、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)]等資料。

1.3.2 標(biāo)本收集與RNA提取 分別采集健康體檢者體檢時(shí)及急性心肌梗死病人入院24 h內(nèi)的空腹靜脈血5 mL,置入抗凝管內(nèi),進(jìn)行離心處理(3 000 r/min,10 min),分離外周血單個(gè)核細(xì)胞,采用Trizol試劑盒(美國(guó)Sigma公司)提取總RNA,將RNA溶于20 μL經(jīng)焦碳酸二乙酯處理的水中,采用UV-1800PC分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司)檢測(cè)RNA的濃度及純度。

1.3.3 AIM2、TLR9相對(duì)表達(dá)量檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)AIM2、TLP9相對(duì)表達(dá)量。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國(guó)Gene-Copoeia)對(duì)提取的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,使用羅氏LightCycler 480Ⅱ擴(kuò)增儀(北京儀聯(lián)四?？萍加邢薰?進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)循環(huán)參數(shù):95 ℃預(yù)變性10 min,95 ℃變性15 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸10 s,共40個(gè)循環(huán)。AIM2以GAPDH作為內(nèi)參,TLR9以β-actin作為內(nèi)參,引物序列由上海生工生物工程股份有限公司合成。AIM2正向引物5′-CAGAAGGAGAAGAAGGAAGTTG-3′,反向引物5′-GAGCAGCACGTTGGTTCG-3′;GAPDH正向引物5′-GCTCTCCTGAATATCAGCCTGCC-3′,反向引物5′-CGTTGTGATACGAGGAACTGAGGTT-3′;TLR9正向引物5′-CAGCAGCTGCGCAGCACGTC-3′,反向引物5′-AAGCCGAGGTAATCGTCATG-3′;β-actin正向引物5′-CGAAGCGCGAGTAGACGACC-3′,反向引物:5′-GATCTACATGAGCTACTCAGT-3′。采用2-△△Ct法計(jì)算AIM2、TLR9的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.4 病例隨訪 對(duì)心肌梗死組病人進(jìn)行為期1年的隨訪,采用門診復(fù)查或電話隨訪的方式,根據(jù)預(yù)后情況將其分為預(yù)后良好組(78例)及預(yù)后不良組(42例)。預(yù)后良好表現(xiàn)為心肌梗死情況不再出現(xiàn),心電圖及心功能指標(biāo)恢復(fù)正常;預(yù)后不良表現(xiàn)為病人心肌梗死加重,出現(xiàn)心源性休克或死亡等情況。

2 結(jié) 果

2.1 心肌梗死組和健康組一般資料及AIM2與TLR9表達(dá)水平比較 兩組病人LVEF、CK-MB、BNP、cTnT、AIM2、TLR9比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 心肌梗死組和健康組一般資料及AIM2與TLR9表達(dá)水平比較

2.2 AIM2、TLR9表達(dá)水平與CK-MB、cTnT、BNP、LVEF的相關(guān)性 Pearson分析顯示,急性心肌梗死病人外周血AIM2、TLR9水平與CK-MB、BNP、cTnT水平呈正相關(guān)(P<0.05),與LVEF水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。詳見表2。

表2 AIM2、TLR9表達(dá)水平與CK-MB、cTnT、BNP、LVEF的相關(guān)性

2.3 AIM2與TLR9的相關(guān)性 Pearson結(jié)果顯示,急性心肌梗死病人外周血單個(gè)核細(xì)胞中AIM2與TLR9呈正相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.458,P<0.001)。詳見圖1。

圖1 AIM2與TLR9的相關(guān)性

2.4 預(yù)后良好組與預(yù)后不良組外周血AIM2與TLR9水平比較 預(yù)后良好組外周血AIM2、TLR9水平低于預(yù)后不良組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 預(yù)后良好組和預(yù)后不良組外周血AIM2與TLR9水平比較(±s)

2.5 AIM2、TLR9對(duì)急性心肌梗死病人預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值 ROC結(jié)果顯示,AIM2、TLR9預(yù)測(cè)急性心肌梗死病人預(yù)后的曲線下面積(AUC)分別為0.813[95%CI(0.749,0.867)]、0.805[95%CI(0.739,0.860)],特異度分別為68.33%、85.00%,靈敏度分別為80.83%、63.33%;AIM2、TLR9聯(lián)合預(yù)測(cè)急性心肌梗死病人預(yù)后的AUC為0.859,特異度為86.67%,靈敏度為75.00%。詳見圖2。

圖2 AIM2、TLR9預(yù)測(cè)急性心肌梗死病人預(yù)后的ROC曲線

3 討 論

急性心肌梗死具有起病急、進(jìn)展快、致死率高的特點(diǎn),當(dāng)心肌缺血時(shí)間>12 h時(shí)會(huì)導(dǎo)致病人死亡風(fēng)險(xiǎn)的增加,而早期恢復(fù)血流是治療心肌梗死的關(guān)鍵[8-9]。但有研究表明,心肌梗死病人早期沒有明顯癥狀,且50%的病人心電圖不會(huì)發(fā)生改變[10]。cTnT是臨床常用的診斷急性心肌梗死的標(biāo)志物,但近年來研究發(fā)現(xiàn),cTnT在腎衰竭病人中也會(huì)增高[11]。因此,尋找更加具體的標(biāo)志物評(píng)估急性心肌梗死病人的預(yù)后具有重要意義。TLR9由1 032個(gè)氨基酸肽鏈編碼,是病毒模式識(shí)別受體,能夠介導(dǎo)免疫應(yīng)答[12]。溫躍萱等[13]研究發(fā)現(xiàn),TLR9能促進(jìn)炎性因子的合成與釋放,在慢性阻塞性肺疾病中呈高表達(dá),并且能夠反映肺損傷程度。吳思沂等[14]研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)血管損傷時(shí),TLR9會(huì)發(fā)揮其促炎作用,促進(jìn)炎癥反應(yīng)及動(dòng)脈粥樣硬化的形成。本研究結(jié)果顯示,TLR9在急性心肌梗死病人中的表達(dá)水平高于健康者,提示TLR9在急性心肌梗死病人中呈高表達(dá);且TLR9在預(yù)后良好組中的表達(dá)水平低于預(yù)后不良組,提示TLR9可能參與了急性心肌梗死的發(fā)生與發(fā)展。

AIM2屬于AIM2樣受體家族成員分子,能夠與凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白結(jié)合形成炎性小體,參與機(jī)體抗感染免疫[15]。靳文等[16]研究發(fā)現(xiàn),AIM2能夠調(diào)控心肌梗死后心肌纖維化,并且是心肌梗死后心力衰竭的重要調(diào)控分子。朱桂啟等[17]研究發(fā)現(xiàn),AIM2在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中呈高表達(dá),并且AIM2表達(dá)水平可反映腎臟損傷程度。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),AIM2在急性心肌梗死病人中呈高表達(dá),且隨著疾病的好轉(zhuǎn),表達(dá)程度逐漸降低,提示AIM2與急性心肌梗死的發(fā)展密切相關(guān)。

CK-MB、cTnT、BNP、LVEF是反映心功能的有效指標(biāo),進(jìn)一步分析AIM2與TLR9表達(dá)水平與CK-MB、cTnT、BNP、LVEF的相關(guān)性,結(jié)果顯示,AIM2與TLR9表達(dá)水平與CK-MB、BNP、cTnT均呈正相關(guān),與LVEF呈負(fù)相關(guān),且進(jìn)一步分析AIM2與TLR9的相關(guān)性,結(jié)果顯示AIM2與TLR9呈正相關(guān),提示AIM2、TLR9與CK-MB、cTnT、BNP、LVEF共同參與急性心肌梗死的發(fā)生與發(fā)展。ROC結(jié)果顯示,外周血單個(gè)核細(xì)胞中AIM2、TLR9二者聯(lián)合預(yù)測(cè)急性心肌梗死病人預(yù)后的AUC為0.859,高于外周血AIM2、TLR9單獨(dú)預(yù)測(cè)急性心肌梗死病人預(yù)后的AUC,提示全面檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中AIM2、TLR9水平對(duì)急性心肌梗死病人預(yù)后有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值,為急性心肌梗死病人后期預(yù)防提供了新思路。

綜上所述,急性心肌梗死病人外周血單個(gè)核細(xì)胞中AIM2與TLR9呈高表達(dá),對(duì)急性心肌梗死病人預(yù)后有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值,有望成為急性心肌梗死的生物學(xué)指標(biāo)。