浦同燦　李世靜　周莉　羅時(shí)霞

摘 要：為了解2019～2021年花溪區(qū)的禽流感免疫效果，對其管轄的部分涉農(nóng)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道）隨機(jī)采集120～400日齡的雞群血清樣品4 391份，采用血凝抑制試驗(yàn)對禽流感H5和H7亞型進(jìn)行免疫抗體檢測，根據(jù)高致病性禽流感診斷技術(shù)中抗體效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定，HI抗體效價(jià)≥4log2，判定個(gè)體免疫效力合格；群體免疫抗體合格率≥70%，判為群體抗體合格率達(dá)標(biāo)。檢測結(jié)果顯示，花溪區(qū)（H5+H7亞型）禽流感免疫抗體合格率2019、2020、2021年依次為91.03%、91.78%、96.19%，呈現(xiàn)逐年上升趨勢；H7亞型抗體合格率高于H5亞型，規(guī)模化雞場抗體合格率高于大戶和散養(yǎng)戶。綜上所述，禽流感免疫抗體合格率均高出國家標(biāo)準(zhǔn)，說明全區(qū)免疫工作較扎實(shí)有效；監(jiān)測禽流感免疫抗體為花溪區(qū)科學(xué)預(yù)防H5、H7亞型禽流感的流行提供數(shù)據(jù)支撐，推動(dòng)花溪區(qū)的家禽業(yè)健康持續(xù)發(fā)展。

關(guān)鍵詞：H5、H7亞型禽流感；血凝抑制試驗(yàn)；抗體合格率；評估

中圖分類號：S855.3? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：1673-1085（2023）07-0037-06

禽流感（Avian Influenza，AI）是禽流行性感冒的簡稱，屬于正黏病毒科流感病毒屬A型禽流感病毒（Avian Influenza virus，AIV）引起的人獸共患烈性傳染病之一[1]，能夠感染所有的家禽、野禽。被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）定為A類傳染病，我國將其列為一類傳染病[2-3]。

高致病性禽流感對養(yǎng)禽業(yè)的打擊幾乎是毀滅性的，該病發(fā)生后對雞群的發(fā)病率和致死率極高，給家禽養(yǎng)殖場戶帶來極大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，世界范圍內(nèi)流行的高致病性禽流感亞型主要為H5亞型和H7亞型。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部官網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示，2019年中國一共報(bào)告高致病性禽流感疫情4起，2020年共報(bào)告高致病性禽流感疫情7起，2021年共報(bào)告高致病性禽流感疫情8起，家禽、野禽均存在不同程度感染[4]，高致病性禽流感疫情在我國的發(fā)生呈上升趨勢，防控壓力十分嚴(yán)峻。

為遏制禽流感疫情發(fā)生，我國從2005年開始對全國家禽實(shí)施H5亞型禽流感強(qiáng)制免疫，2017年秋季開始在免疫H5亞型禽流感的基礎(chǔ)上，對全國家禽全面開展H7N9免疫。實(shí)踐證明，疫苗免疫接種是預(yù)防高致病性禽流感的有效手段。我國的禽流感疫苗發(fā)展，從最初的禽流感H5N1（Re-6）單苗到二價(jià)滅活疫苗（H5N1Re-8+H7N9Re-2），直到現(xiàn)在已被廣泛使用的重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（H5N1Re-6株+Re-12株，H7N9 H7-Re2株）。隨著禽流感病毒毒株流行情況的變化，采用最新毒株研制的疫苗能將疫情帶來的風(fēng)險(xiǎn)降到最低水平。

為強(qiáng)化花溪區(qū)家禽養(yǎng)殖持續(xù)引領(lǐng)“強(qiáng)省會”示范帶動(dòng)作用，切實(shí)鞏固花溪“小班哥”“雙無抗”優(yōu)質(zhì)雞蛋品牌，區(qū)農(nóng)業(yè)部門對禽業(yè)疫病的防控尤為重視，對全區(qū)高致病性禽流感免疫抗體水平進(jìn)行長期跟蹤監(jiān)測，以便實(shí)時(shí)掌握花溪區(qū)免疫抗體水平及分布情況，及時(shí)發(fā)現(xiàn)預(yù)警全區(qū)高致病性禽流感防控的薄弱環(huán)節(jié)，實(shí)時(shí)更新或采取科學(xué)防疫措施。本文對花溪區(qū)2019～2021年高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測情況進(jìn)行匯總、整理、分析，以期為花溪區(qū)高致病禽流感流行概況進(jìn)行科學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評估及研判，對下一步完善花溪區(qū)禽流感的防控措施具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

樣品來源和數(shù)量：根據(jù)2019～2022年花溪區(qū)疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃，按鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖存欄分配情況，覆蓋花溪區(qū)轄區(qū)內(nèi)的大部分規(guī)模養(yǎng)雞場、蛋雞養(yǎng)殖大戶和農(nóng)村散養(yǎng)戶，共采集4 391份免疫過重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（H5N1Re-6株+Re-12株，H7N9 H7-Re2株）的雞群血清樣品。樣品采集方法和處理：血清樣品一般于疫苗免疫28 d后采集，雞翅靜脈采血不少于2 mL，放于無抗凝劑的真空采血管，待血液凝固后，3 000 r/min離心5 min，取上層清亮液體移置于1.5 mL EP管中，靜置保存于4 ℃冰箱備用。

1.2 試驗(yàn)試劑

1.2.1 檢測試劑 禽流感H5亞型標(biāo)準(zhǔn)抗原、陽性血清、陰性血清購自哈爾濱國生生物科技有限公司，H7亞型標(biāo)準(zhǔn)抗原、陽性血清、陰性血清購自中國哈爾濱維科生物開發(fā)公司，0.1 mol/L、pH7.2的磷酸鹽緩沖液（PBS）購自博士德生物工程有限公司。

1.2.2 1%濃度的紅細(xì)胞懸液 采用真空抗凝管采集未經(jīng)免疫的健康公雞（由本單位實(shí)驗(yàn)室提供）靜脈全血，輕微搖晃均勻，用配制好的pH7.2、0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS）反復(fù)多次洗滌干凈后，按照比例配制成1%紅細(xì)胞懸液，在4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測方法

本試驗(yàn)操作均參照GB/T 18936-2003、GB/T 18936-2020高致病性禽流感診斷技術(shù)進(jìn)行，使用血凝抑制試驗(yàn)（Heamoglutination Inhibition，HI）檢測雞血清樣品中禽流感抗體效價(jià)。試驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)抗原稀釋倍數(shù)為4 HAU，采取完全抑制4 HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。根據(jù)高致病性禽流感診斷技術(shù)規(guī)范中抗體效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定，即HI效價(jià)≥4log2，即判定為個(gè)體免疫抗體水平合格；群體免疫抗體合格率≥70%，判為群體抗體合格率達(dá)標(biāo)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

通過EXCEL2019軟件對血清樣品檢測結(jié)果進(jìn)行個(gè)體抗體合格率、群體抗體合格率分類統(tǒng)計(jì)，整理分析花溪區(qū)2019～2021年禽流感在家禽群體間的分布情況。

2 花溪區(qū)免疫雞群H5、H7亞型免疫抗體水平

對2019、2020、2021年從花溪區(qū)麥坪鎮(zhèn)、石板鎮(zhèn)、馬鈴鄉(xiāng)等13個(gè)涉農(nóng)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道）的多個(gè)養(yǎng)殖場（規(guī)模場、大戶、散戶）采集的4 391份雞血清樣品通過HI檢測抗體效價(jià)，H5、H7亞型免疫抗體合格率檢測結(jié)果見表1，比較圖見圖1。

2.1? ? H5、H7亞型抗體合格率三年的總體情況

從表1可看出，2019～2021年全區(qū)高致病性禽流感免H5亞型抗體合格的樣品總數(shù)為4 020份，抗體合格率為91.55%；H7亞型抗體合格的樣品總數(shù)為4 098份，抗體合格率為93.33%；（H5+H7）抗體平均合格率為92.42%；抗體合格率均超過了90%，大大高于國家標(biāo)準(zhǔn)水平（70%）。

2.2? ? H5、H7亞型抗體合格率比較

從表1可看出，2019年H5亞型抗體合格率90.7%（1 258/1 387），H7亞型抗體合格率91.35%（1 267/1 387）；2020年H5亞型抗體合格率91.58%（1 392/1 520），H7亞型抗體合格率91.97%（1 398/1 520）；2021年H5亞型抗體合格率92.32%（1 370/1 484），H7亞型抗體合格率96.56%（1 433/1 484）；2019～2021年H5亞型抗體合格率為91.55%，H7亞型抗體合格率為93.33%。

從圖1明顯看出，2019～2021年H5和H7亞型抗體合格率均呈逐年上升趨勢，但2020～2021年間H7亞型抗體水平變化最明顯，而且H7亞型每一年的抗體合格率和三年的抗體平均合格率均高于H5亞型。

2.3? ?規(guī)模場與大戶、散戶的H5、H7亞型免疫抗體水平

檢測結(jié)果見表2，H5、H7亞型抗體合格率比較見圖2所示。

2.3.1 H5亞型抗體合格率 從表2可知，2019年規(guī)模場H5亞型抗體合格率為92.04%，大戶、散養(yǎng)戶為88.17%，二者平均合格率為90.7%；2020年規(guī)模場為91.95%，大戶、散養(yǎng)戶為90.87%，平均抗體合格率為91.58%；2021年規(guī)模場為92.94%，大戶、散養(yǎng)戶為91.3%，平均合格率為92.32%。

2.3.2 H7亞型抗體合格率 從表2可知，2019年規(guī)模場H7亞型抗體合格率為92.98%，大戶、散養(yǎng)戶為88.38%，二者平均合格率91.35%；2020年規(guī)模場為92.05%，大戶、散養(yǎng)戶為91.82%，平均合格率91.97%；2021年規(guī)模場為97.5%，大戶、散養(yǎng)戶為95.03%，平均合格率96.56%。

2.3.3? 規(guī)模場與大戶、散養(yǎng)戶抗體合格率比較 地位比較：從表2可知，規(guī)模場采集的樣品數(shù)占到了總樣品數(shù)的60%以上（2019、2020、2021年分別為65.25%、65.39%、62.06%），說明規(guī)?；u場在花溪區(qū)養(yǎng)雞業(yè)占主流地位。

H5、H7亞型抗體合格率比較：2019～2021年參與隨機(jī)抽樣的免疫雞群的H5亞型和H7亞型抗體合格率，規(guī)模場均在90%以上，大戶、散養(yǎng)戶均在88%以上，規(guī)模場每一年的H5、H7亞型抗體免疫水平總體上要好于大戶、散養(yǎng)戶（圖2），其中2020年規(guī)模場與大戶、散戶的H5、H7亞型抗體合格率差值最小，分別為1.08%、0.23%。但無論是規(guī)模場還是大戶、散養(yǎng)戶，H7亞型抗體合格率均高于H5亞型。

抗體合格率變化趨勢比較：2019、2020、2021年連續(xù)三年，大戶、散養(yǎng)戶的H5、H7亞型抗體合格率變化一直保持上升態(tài)勢，但規(guī)模場抗體合格率在2020年均出現(xiàn)下降趨勢，見圖2所示。

3 分析與討論

3.1 禽流感抗體總體水平逐年上升

2019、2020、2021年，花溪區(qū)高致病性禽流感抗體總水平依次為91.03%、91.78%、96.19%。從監(jiān)測結(jié)果看，三年來，花溪區(qū)禽流感免疫抗體水平合格率逐年上升，均高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的群體合格率（≥70%），說明花溪區(qū)對高致病性禽流感防疫工作高度重視，業(yè)務(wù)技術(shù)督促指導(dǎo)到位，扎扎實(shí)實(shí)做好了家禽群體免疫、防疫工作，且取得良好的成效，為推動(dòng)花溪區(qū)的家禽業(yè)健康持續(xù)發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。

3.2? ?規(guī)模場禽流感抗體水平略好于養(yǎng)殖大戶、散養(yǎng)戶

從監(jiān)測結(jié)果可看出，無論是H5亞型還是H7亞型，規(guī)模雞場的免疫抗體水平均略高于養(yǎng)殖大戶和散養(yǎng)戶，說明規(guī)模場的免疫工作做得更到位。分析主要有兩方面的原因：一是規(guī)模場設(shè)備機(jī)械化程度更高、管理比較規(guī)范、疫病防控意識更強(qiáng)，且場內(nèi)的獸醫(yī)和技術(shù)人員專業(yè)水平相對較高，待遇較好，人員穩(wěn)定性高、流動(dòng)性小，另外制定的免疫程序更科學(xué)合理，因此雞場的免疫工作更為扎實(shí)，雞群整體的抗體水平達(dá)標(biāo)率更高；二是近年來，基層獸醫(yī)工作負(fù)擔(dān)越來越重，各版塊重點(diǎn)技術(shù)工作人員缺乏，為此大多基層單位存在人員混用的現(xiàn)象，加上防疫經(jīng)費(fèi)不足、部分在編人員為非專業(yè)人員，使原本薄弱的基層動(dòng)物疫病防控力量逐漸減弱，因此對散養(yǎng)戶，基層村級防疫人員在每年春秋防疫工作開展難度大，導(dǎo)致部分鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道）、村畜禽免疫環(huán)節(jié)和防控措施未嚴(yán)格落實(shí)到位，免疫環(huán)節(jié)出現(xiàn)“漏網(wǎng)之魚”，是造成抗體水平參差不齊的主要因素之一。

4 小結(jié)

抗體檢測是反映疫苗免疫效果的一個(gè)重要依據(jù)，是評價(jià)和指導(dǎo)動(dòng)物疫病防控工作的重要措施之一，也是評判疫苗免疫效果的重要手段之一。2019～2021年花溪區(qū)監(jiān)測轄區(qū)內(nèi)大部分免疫雞群高致病性禽流感H5和H7亞型免疫抗體水平，群體合格率超出了國家標(biāo)準(zhǔn)達(dá)標(biāo)率，免疫工作成效顯著。目前及今后，花溪區(qū)禽流感防控的重中之重依然是做好高致病性禽流感疫苗免疫工作，無論是監(jiān)管部門、基層防疫部門還是各類型養(yǎng)殖場，在禽流感防控工作中要杜絕一切僥幸和倦怠心理。區(qū)鄉(xiāng)都要充分認(rèn)識到這項(xiàng)工作的重要性，尤其是部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)，要加強(qiáng)對村級防疫人員的監(jiān)督管理，認(rèn)真組織開展對散養(yǎng)戶家禽免疫工作，確保不漏戶、不漏禽。抗體監(jiān)測不僅僅是為了完成上級部門安排的任務(wù)，還要區(qū)級嚴(yán)格建立免疫效果的追溯機(jī)制，對抗體檢測效果不理想的養(yǎng)殖場（大戶、散戶），加強(qiáng)督促、指導(dǎo)鄉(xiāng)鎮(zhèn)對轄區(qū)家禽群體完成補(bǔ)免工作，確保在二次監(jiān)測時(shí)達(dá)到群體免疫合格達(dá)標(biāo)，減少一切影響禽流感疫情的風(fēng)險(xiǎn)因素，為當(dāng)?shù)丶仪蒺B(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)快速發(fā)展提供安全和保障。

參考文獻(xiàn)：

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Surveillance and Analysis of Immune Antibodies against Avian Influenza H5 and H7 in Huaxi District during 2019 to 2021

PU Tongcan，LI Shijing，ZHOU Li，LUO Shixia

（Guiyang Huaxi District Agriculture and Rural Bureau，

Guiyang? 550025，Guizhou，China）

Abstract：? To understand the immunization effect of avian influenza in Huaxi district，during 2019 to 2021， 4 391 serum samples were randomly collected from scale field （free-range farm） in some agriculture-related townships （streets） in Huaxi District， and antibodies against H5 and H7 subtypes of avian influenza were detected by hemagglutination inhibition test，according to the antibody titers of diagnostic techniques for highly pathogenic avian influenza，the HI antibody titers were ≥4log2，which indicated that the individual's immune efficacy was qualified.The qualified rate of group antibody was ≥70%， which was judged as the qualified rate of group antibody.The results showed that during 2019 to 2021， the total antibody levels of highly pathogenic avian influenza were 91.03%， 91.78%， 96.19%， indicating that the qualified rate of avian influenza antibody in Huaxi district showed an increasing trend year by year.The antibody level of H7 subtype was higher than H5 subtype. The level of immune antibody in scale farm was higher than that in large and free-range farm. In conclusion，the qualified rate of immune antibody for avian influenza is higher than the national standard，indicating that the prevention and control of avian influenza in Huaxi District was relatively solid. Monitoring of AIV antibody provides data support for scientific prevention of H5 and H7 subtype avian influenza in Huaxi District， and promotes the healthy and sustainable development of poultry industry in Huaxi District.

Keywords：H5 and H7 subtypes of Avian influenza; Hemagglutination inhibition; Qualified rate of antibody; Evaluate

收稿日期：2023-05-31

第一作者簡介：浦同燦（1980—），男，博士研究生，高級獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病預(yù)防控制及畜牧技術(shù)推廣工作，E-mail：447236210@qq.com。

*通信作者簡介：李世靜（1990—），女，碩士研究生，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病預(yù)防控制及衛(wèi)生監(jiān)督工作，E-mail：3316867704@qq.com。