李善敏，曾歆花，黃衛(wèi)昌，付 浩，黃清俊

（1.上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)生態(tài)技術(shù)與工程學(xué)院，上海 201418；2.上海辰山植物園華東野生瀕危資源植物保育中心，上海 201602）

蘭科內(nèi)生真菌是指在蘭科植物生活史中共生在其根或類根器官當(dāng)中的所有類群真菌，包括菌根真菌、非菌根真菌及病原真菌等，其中蘭科菌根真菌（Orchid mycorrhizal fungi，OMF）是一類對(duì)蘭花單向或?qū)φ婢?植物兩者雙向有利的真菌類群[1]。菌根真菌對(duì)于提高蘭科植物種子萌發(fā)率、原球莖的發(fā)芽率以及移栽植株的存活率至關(guān)重要[2]。有研究表明，不同生境下同種蘭科植物可與不同種類的真菌共生，如生長(zhǎng)在草甸和林地下的歐洲對(duì)葉蘭（Neottia ovata）的內(nèi)生真菌的物種組成存在顯著差異[3]。緯度梯度和地理距離對(duì)蘭科內(nèi)生真菌也有較大影響，如歐亞綬草（Spiranthes spiralis）的OMF多樣性會(huì)隨著緯度的增加而降低[4]。加上區(qū)域間真菌的物種更替，OMF 群落會(huì)隨著地理距離的增加，其相似性逐漸降低[5]。土壤養(yǎng)分也是影響蘭科內(nèi)生真菌類型的主要因素，BUNCH 等[6]的研究結(jié)果表明，杓蘭（Cypripedium calceolus）的分布范圍及其內(nèi)生真菌類型不僅與其地理位置相關(guān)，還與土壤養(yǎng)分有密切聯(lián)系。DAVIS 等[7]的研究結(jié)果表明，土壤養(yǎng)分是影響青須蘭（Pheladenia deformis）分布和菌根真菌組成的主要限制性因素。但目前研究蘭花內(nèi)生真菌類型多與其廣域的分布范圍以及地理距離相聯(lián)系，對(duì)于明確蘭花內(nèi)生真菌類型在不同生境下與生長(zhǎng)狀況的相關(guān)性方面的影響可能需要開展更多的研究。

白及（Bletilla striata）為蘭科白及屬多年生草本植物，具有很高的藥用和觀賞價(jià)值，其藥用成分白及多糖被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域[8]。此外，由于白及花色艷麗多樣，花期較長(zhǎng)和適應(yīng)性強(qiáng)，在園藝方面也具有較好的應(yīng)用。隨著白及市場(chǎng)需求量的逐漸增加，白及開始大規(guī)模生產(chǎn)[9]。在林地資源緊張的情況下，復(fù)合經(jīng)營(yíng)成為一種常見且重要的種植方式。農(nóng)林復(fù)合系統(tǒng)不僅有利于優(yōu)化植物對(duì)資源和空間的合理利用，而且具有提高系統(tǒng)生物多樣性，改善系統(tǒng)內(nèi)部生態(tài)環(huán)境等多種生態(tài)系統(tǒng)服務(wù)功能[10-11]。目前，我國(guó)白及復(fù)合系統(tǒng)較多，主要有針葉林-白及[12]、銀杏-白及-羊肚菌[13]、竹林-白及[13-14]等。但不同的林地類型對(duì)白及的生長(zhǎng)發(fā)育有不同的影響[15-16]。為明確不同林地類型對(duì)白及生長(zhǎng)發(fā)育及其與內(nèi)生真菌共生關(guān)系的影響，擬選擇上海市幾種常見的林地類型[毛竹（Phyllostachys edulis）、紅哺雞竹（Phyllostachys iridescens）、落羽杉（Taxodium distichum）與水杉（Metasequoia glyptostroboides）]開展研究，篩選適合種植白及的林地類型，為實(shí)現(xiàn)白及林下有效栽培和林地綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)地位于上海辰山植物園（31°04′26.31″N、121°10′50.37″E），該地屬于北亞熱帶季風(fēng)濕潤(rùn)氣候，年平均氣溫15.6 ℃，年日照時(shí)長(zhǎng)1 817 h，降水量1 313 mm。選擇植物園主要的4種林地（紅哺雞竹、落羽杉、毛竹、水杉）類型開展研究。

挑選大小和長(zhǎng)勢(shì)基本一致的同批白及實(shí)生苗，于2021 年3 月在4 種林地以30 cm×30 cm 的株行距種植。于2022 年6 月進(jìn)行樣品采集，每種林地設(shè)置3個(gè)1 m×1 m 的樣方，每個(gè)樣方內(nèi)隨機(jī)采收8株。同時(shí)測(cè)定每個(gè)樣方白及葉片光合指標(biāo)，并采集每個(gè)樣方0～10 cm 土壤樣品，每種林地3個(gè)重復(fù)，共12個(gè)土壤樣品。

1.2 測(cè)定方法

1.2.1 生長(zhǎng)指標(biāo)及生物量測(cè)定 白及苗采收后用清水將葉片、塊莖和根系清洗干凈，晾干水分。同時(shí)測(cè)量白及株高、葉寬、葉長(zhǎng)、根長(zhǎng)、地上部鮮質(zhì)量、塊莖鮮質(zhì)量和根鮮質(zhì)量等指標(biāo)。隨后將樣品置于烘箱105 ℃殺青30 min、80 ℃烘干至恒質(zhì)量，測(cè)量地上部干質(zhì)量和地下部干質(zhì)量等指標(biāo)。

1.2.2 光合氣體交換參數(shù)測(cè)定 于晴天9：00—11：00，使用Li-6400 便攜式光合分析儀（Li-Cor，USA）進(jìn)行氣體交換參數(shù)測(cè)定，采用LED 紅藍(lán)光源，將光照強(qiáng)度（PAR）設(shè)置為1 000 μmol∕（m2·s），CO2濃度為400 μmol∕mol，流速為500 μmol∕mol。每種林地選擇3～5 株生長(zhǎng)狀況基本一致的白及植株，對(duì)其同一生長(zhǎng)部位的成熟葉片進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)3～5次。測(cè)定的指標(biāo)包括凈光合速率（Pn）、氣孔導(dǎo)度（Gs）、蒸騰速率（Tr）、胞間二氧化碳濃度（Ci）等氣體交換參數(shù)。

1.2.3 土壤養(yǎng)分測(cè)定 采用電位法測(cè)定土壤pH值；利用重鉻酸鉀容量法測(cè)定土壤有機(jī)質(zhì)含量（OM）；利用半微量凱氏法測(cè)定土壤總氮含量（TN）；利用堿解擴(kuò)散法測(cè)定土壤堿解氮含量（AN）；利用硫酸-高氯酸消煮法測(cè)定土壤全磷含量（TP）；利用火焰光度計(jì)法測(cè)定土壤全鉀含量（TK）；利用碳酸氫鈉法測(cè)定土壤速效磷含量（AP）；利用紫外分光光度計(jì)法測(cè)定土壤速效鉀含量（AK）；利用土壤總氮與全磷含量的比值計(jì)算氮磷比[總氮∕全磷（N∶P）]。

1.2.4 高通量測(cè)序 每組處理選擇3～5 株白及，每株采集3～5 個(gè)根段，用流動(dòng)的清水洗凈后，于超凈工作臺(tái)中滅菌（75%乙醇30 s、3.5%次氯酸鈉4 min，用無菌水沖洗3 次后裝入5 mL 離心管中）后存放于-80 ℃冰箱。參照E.Z.N.A.?Soil DNA Kit（Omega Bio-tek，Norcross，GA，U.S.）試劑盒說明書，提取白及樣本中的微生物總DNA。采用ITS 全長(zhǎng)引物ITS1Fngs（5′ - GGTCATTTAGAGGAAGTAA - 3′ ）∕TW14ngs（5′-CTATCCTGRGRGAAAYTTC-3′）進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系：5×FastPfu Buffer 4 μL、2.5 mmol∕L dNTPs 2 μL、5 μmol∕L 正向引物0.8 μL、5μmol∕L反向引物0.8μL、FastPfu Polymerase 0.4μL和模板DNA 10 ng，以ddH2O 補(bǔ)足至20μL。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，10 ℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳后，采用 AxyPrep DNA Gel Extraction Kit（Axygen Biosciences，Union City，CA，U.S.）試劑盒進(jìn)行純化。根據(jù)說明書（Pacific Biosciences）通過平連接從擴(kuò)增的DNA 中制備SMRTbell 文庫(kù)。將每個(gè)樣本連接特定的barcode序列后等質(zhì)量混合，擴(kuò)增子混合物使用Pacific Biosciences SMRTbellTMTemplate Prep kit 1.0試劑盒構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)并在PacBio Sequel Ⅱ上測(cè)序。所有擴(kuò)增子測(cè)序均由上海凌恩生物科技有限公司（中國(guó)上海）承擔(dān)。使用SMRT Link Analysis 6.0 軟件處理PacBio 原始read，以獲得環(huán)形一致性序列（CCS）read：參數(shù)設(shè)置最小通過次數(shù)為3，最小預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度為0.99。原始read 通過SMRT Portal 處理，以篩選序列的長(zhǎng)度（＜800 bp 或＞2 500 bp）和質(zhì)量。通過去除barcode、引物序列、嵌合體并包含10 個(gè)連續(xù)相同堿基的序列進(jìn)行進(jìn)一步過濾。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

使用上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司（Shanghai Majorbio Bio-pharm Technology Co.，Ltd.）的云平臺(tái)進(jìn)行交互式生物信息云分析。利用UPARSE 軟件（Version7.1 http:∕∕drive5.com∕uparse∕）根據(jù)97%的相似度對(duì)序列進(jìn)行OTU 聚類并剔除嵌合體。利用RDP classifier（http:∕∕rdPh.cme.msu.edu∕）對(duì)每條序列進(jìn)行物種分類注釋，比對(duì)SILVA 和UNITE 數(shù)據(jù)庫(kù)。利用OTU 分析微生物群落結(jié)構(gòu)組成、α 多樣性、β 多樣性、微生物與環(huán)境因子的相關(guān)性并制作圖形。利用SPSS 22 對(duì)不同林地白及的生長(zhǎng)指標(biāo)、光合指標(biāo)以及土壤養(yǎng)分指標(biāo)進(jìn)行ANOVA、相關(guān)性及差異顯著性分析（P＜0.05）。利用Origin 2018 繪圖，利用Adobe Photoshop CC 2018 進(jìn)行后期圖形處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同林地白及生長(zhǎng)指標(biāo)分析

不同林地白及生長(zhǎng)表現(xiàn)出一定差異。如圖1所示，毛竹林地白及株高、葉長(zhǎng)顯著高于落羽杉林地，株高、葉長(zhǎng)與葉寬顯著高于水杉林地。紅哺雞竹林地白及株高、葉長(zhǎng)、葉寬雖低于毛竹林地，但差異不顯著；株高與落羽杉、水杉林地也無顯著性差異；葉長(zhǎng)顯著高于落羽杉林地；葉寬顯著高于水杉林地。毛竹林地白及分蘗芽數(shù)5 個(gè)，顯著高于紅哺雞竹、水杉林地。毛竹林地白及根長(zhǎng)顯著高于其他3 種林地，其他3 種林地之間白及根長(zhǎng)差異不顯著。毛竹林地白及地上部、地下部鮮質(zhì)量分別為352.34、689.25 g，均顯著高于其他3 種林地。此外，紅哺雞竹林地白及地上部、地下部鮮質(zhì)量低于落羽杉、水杉林地，但差異不顯著。毛竹林地白及根冠比顯著高于其他3種林地，具體表現(xiàn)為毛竹林地＞落羽杉林地＞水杉林地＞紅哺雞竹林地。

圖1 4種林地白及生長(zhǎng)指標(biāo)Fig.1 Growth indices of four forest types of Bletilla striata

對(duì)4種林地白及葉片氣體交換參數(shù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，毛竹林地白及的Pn為8.89μmol∕（m2·s），顯著高于水杉、紅哺雞竹、落羽杉林地，其他3 種林地白及之間不存在顯著差異。毛竹林地白及Gs 顯著高于落羽杉、紅哺雞竹林地，Tr 顯著高于落羽杉林地。水杉林地白及Ci為66.34μmol∕mol，高于其他3種林地，且顯著高于落羽杉林地。落羽杉林地白及4 項(xiàng)光合指標(biāo)均為最低（表1）。

表1 4種林地白及光合指標(biāo)Tab.1 Photosynthetic indexes of four forest types of Bletilla striata

2.2 不同林地土壤養(yǎng)分分析

不同林地土壤OM、TN、AN、AP、TK 差異不顯著（表2）。其中，水杉林地土壤OM、TN、AN、TP 高于其他3 種林地，但整體上差異不顯著。毛竹、水杉、紅哺雞竹林地土壤pH 值顯著低于落羽杉林地，其中紅哺雞竹林地土壤pH 值最低，為6.43。水杉、毛竹林地土壤TP顯著高于紅哺雞竹林地，但與落羽杉林地不存在顯著性差異。紅哺雞竹林地土壤AK 顯著高于落羽杉林地，但與毛竹、水杉林地不存在顯著性差異。紅哺雞竹林地土壤N∶P 顯著高于其他3種林地（表2）。

表2 4種林地土壤養(yǎng)分指標(biāo)Tab.2 Soil nutrient indices of four forest types

2.3 不同林地白及內(nèi)生真菌物種組成分析

對(duì)4 種林地白及內(nèi)生真菌種類進(jìn)行OTU 水平α多樣性分析發(fā)現(xiàn)，落羽杉林地白及內(nèi)生真菌的Sob豐富度指數(shù)與Shannon 多樣性指數(shù)最高，而毛竹林地白及最低（圖2A、B）。Coverage 指數(shù)表明，4種林地的樣本覆蓋度在98.99%～99.06%（圖2C），說明4種林地的數(shù)據(jù)量充足，每組樣品的微生物種類均得到充分測(cè)量。

圖2 基于OTU水平的4種林地白及內(nèi)生真菌α多樣性分析Fig.2 α-diversity analysis of endophytic fungi in four forest types of Bletilla striata at the OTU level

基于Bray-Curtis 距離對(duì)4 種林地樣本進(jìn)行非度量多維標(biāo)尺分析（Nonmetric multidimensional scaling，NMDS）的結(jié)果表明，其stress 值為0.089，該值小于0.1，表明模型效果較好，說明不同林地間白及內(nèi)生真菌組成存在一定差異（圖3）。4 種林地的組間差異大于組內(nèi)差異，表明林地類型對(duì)白及內(nèi)生真菌組成存在較大影響，同時(shí)紅哺雞竹、水杉林地白及內(nèi)生真菌群落組成變異較大，高于毛竹、落羽杉林地。

圖3 4種林地白及內(nèi)生真菌β多樣性分析Fig.3 β diversity analysis of endophytic fungi in four forest types of Bletilla striata

不同林地白及的內(nèi)生真菌種類在屬水平存在一定差異，其中水杉林地白及內(nèi)生真菌種類最多，達(dá)44 屬；毛竹林地白及內(nèi)生真菌種類最少，為30 屬（圖4A）。4種林地白及內(nèi)生真菌的共有屬為17個(gè)，紅哺雞竹、落羽杉、毛竹、水杉林地白及內(nèi)生真菌特有屬分別為12、7、6、17 個(gè)。4 種林地白及內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)屬均為擔(dān)子菌門（Basidiomycota）的梨形孢屬（Serendipita）（圖4B）。但不同林地梨形孢屬相對(duì)豐度有較大差異，其中毛竹林地白及梨形孢屬相對(duì)豐度最大，為84.76%，水杉林地相對(duì)豐度最小，僅為43.11%，不同林地白及梨形孢屬相對(duì)豐度具體表現(xiàn)為毛竹林地＞紅哺雞竹林地＞落羽杉林地＞水杉林地。毛竹、紅哺雞竹、落羽杉3種林地白及第二優(yōu)勢(shì)內(nèi)生真菌均為擔(dān)子菌門的Unclassified_c_Agaricomycetes，水杉林地白及第二優(yōu)勢(shì)內(nèi)生真菌為子囊菌門的Unclassified_p_Ascomycota。紅哺雞竹、落羽杉、毛竹、水杉林地白及擔(dān)子菌門內(nèi)生真菌相對(duì)豐度分別為81.90%、74.50%、94.45%、47.95%，子囊菌門內(nèi)生真菌相對(duì)豐度分別為17.50%、24.50%、4.530%、49.80%。除毛竹林地白及外，紅哺雞竹、落羽杉、水杉林地白及內(nèi)生真菌中均含有子囊菌門莖點(diǎn)霉屬（Dactylonectria）真菌和外瓶霉屬（Exophiala）真菌，且相對(duì)豐度較高。

圖4 4種林地白及內(nèi)生真菌數(shù)量在屬水平的Venn（A）和群落組成（B）分析Fig.4 Analysis of Venn（A）and community composition（B）of endophytic fungi abundance in four forest types of Bletilla striata at genus level

2.4 白及內(nèi)生真菌與生長(zhǎng)指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性分析

冗余分析（Redundancy analysis，RDA）結(jié)果（圖5A）表明，門水平上，99.67%的內(nèi)生真菌都與白及的生長(zhǎng)發(fā)育具有相關(guān)性。各生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)均與擔(dān)子菌門呈正相關(guān)關(guān)系，與子囊菌門呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。其中內(nèi)生真菌與白及的株高、葉長(zhǎng)、葉寬3項(xiàng)指標(biāo)相關(guān)性最強(qiáng)。在屬水平上，白及株高與擬棘殼孢屬（Pyrenochaetopsis）呈顯著正相關(guān)關(guān)系，與Unclassified_p_Ascomycota、莖點(diǎn)霉屬、外瓶霉屬呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（圖5B）。白及葉長(zhǎng)與梨形孢屬、擬棘孢殼屬呈顯著或極顯著正相關(guān)關(guān)系，與羅丹賽伯林納德氏屬（Cyberlindnera）、Unclassified_p_Ascomycota、莖點(diǎn)霉屬、Unclassified_f_Nectriaceae、外瓶霉屬呈顯著或極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。白及根粗與Unclassified_c_Herpotrichiellaceae、Unclassified_c_Sordariomycetes 呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。白及地上部、地下部鮮質(zhì)量和干質(zhì)量均與梨形孢屬呈顯著正相關(guān)關(guān)系，同時(shí)除地下部干質(zhì)量外，均與Unclassified_f_Herpotrichiellaceae、莖點(diǎn)霉屬呈極顯著或顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。白及根長(zhǎng)與Nepyrenochaeta呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。白及葉寬與盤刺孢屬（Colletotrichum）呈顯著正相關(guān)關(guān)系，與Unclassified_p_Ascomycota、背 芽 突 霉 屬（Cadophora）、Unclassified_c_Sordariomycetes 呈顯著或極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。分蘗芽數(shù)與梨形孢屬、Unclassified_o_Sebacinales 呈顯著正相關(guān)關(guān)系，與背芽突霉屬呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。

圖5 白及生長(zhǎng)指標(biāo)與內(nèi)生真菌關(guān)聯(lián)性分析Fig.5 Correlation analysis between growth indicators and endophytic fungi in Bletilla striata

2.5 白及內(nèi)生真菌與土壤養(yǎng)分的關(guān)聯(lián)性分析

基于斯皮爾曼系數(shù)（Spearman coefficient），將pH 值和8 種土壤養(yǎng)分AK、N∶P、TP、AP、TK、AN、OM、TN與白及內(nèi)生真菌進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析發(fā)現(xiàn)，在門水平上，79.12%的真菌與土壤養(yǎng)分具有相關(guān)性。其中TP、AN、TK、OM 以及AP 主要與子囊菌門真菌呈正相關(guān)關(guān)系，與擔(dān)子菌門呈負(fù)相關(guān)關(guān)系；AK、N∶P主要與擔(dān)子菌門呈正相關(guān)關(guān)系，與子囊菌門呈負(fù)相關(guān)關(guān)系；pH 值和TN 與兩者的相關(guān)性較弱（圖6A）。整體而言，白及內(nèi)生真菌種類受土壤pH 值、TP、AN、OM、TN 影響較大。在屬水平上，N∶P 與Unclassified_c_Leotiomycetes 呈顯著正相關(guān)關(guān)系。OM 與Neopyrenochaeta呈顯著正相關(guān)關(guān)系，與Unclassified_c_Agaricomycetes、枝 孢 霉 屬（Cladosporium）呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。pH 值、TP、AN、TN 分 別 與 Unclassified_c_Herpotrichiellaceae、Unclassified_c_Leotiomycetes、Unclassified_o_Xylariales、Unclassified_o_Xylariales 呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（圖6B）。

圖6 白及其內(nèi)生真菌與土壤養(yǎng)分的關(guān)聯(lián)性分析Fig.6 Correlation analysis between endophytic fungi and soil nutrients in Bletilla striata

3 結(jié)論與討論

3.1 討論

3.1.1 林地類型對(duì)白及生長(zhǎng)發(fā)育的影響 林地類型對(duì)白及生長(zhǎng)發(fā)育有重要影響。本研究中，毛竹林地白及株高、葉長(zhǎng)、葉寬、分蘗芽數(shù)、根長(zhǎng)、地上部和地下部鮮質(zhì)量以及根冠比等各個(gè)指標(biāo)均顯著高于其他3 種林地類型。這表明相比其他林地類型，毛竹林地白及的生長(zhǎng)狀況最佳。推測(cè)這與不同林地條件下植被類型、光照條件和土壤養(yǎng)分等的差異有關(guān)。有研究表明，植被類型影響了根系代謝物、免疫系統(tǒng)功能及根系分泌物的組成，進(jìn)而影響了微生物的活動(dòng)和結(jié)構(gòu)[17]。此外，植被類型還會(huì)影響溫度和光照的日、年變化[18]。周一冉[19]研究發(fā)現(xiàn)，白及在林地郁閉度為20%～90%的地區(qū)均可生長(zhǎng)，但當(dāng)郁閉度在45%～55%時(shí)，其生長(zhǎng)狀況最好。一定范圍內(nèi)光強(qiáng)的增加可以提高光合產(chǎn)物的積累，利于根、冠的生長(zhǎng)[20]，這與本研究中毛竹林地白及葉片的Pn、根冠比顯著高于其他3 種林地類型的研究結(jié)果一致。土壤養(yǎng)分對(duì)植株生物量有較大影響[21]。磷、鉀含量增加可促進(jìn)光合產(chǎn)物向地下部的運(yùn)輸積累[22]，這與本研究中毛竹林地土壤的AP、TK 最高，且地下生物量極顯著高于其他3組的結(jié)果相一致。菌根真菌是影響蘭科植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要因子，同時(shí)也是決定蘭科植物的物種豐度以及分布范圍的重要因素[23]。本研究中，4 種林地白及內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)種均為擔(dān)子菌門的梨形孢屬真菌。門水平上，毛竹、落羽杉和紅哺雞竹林地白及內(nèi)生真菌以擔(dān)子菌門真菌占主要地位，而水杉林地白及則以子囊菌門真菌占優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，從生長(zhǎng)指標(biāo)與內(nèi)生真菌的關(guān)聯(lián)性分析中可以看出，白及的生長(zhǎng)發(fā)育與擔(dān)子菌門真菌呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，與子囊菌門呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。這表明擔(dān)子菌門真菌對(duì)4種林地白及的生長(zhǎng)發(fā)育起到關(guān)鍵性作用。屬水平上，白及的生長(zhǎng)指標(biāo)主要與梨形孢屬等真菌呈顯著正相關(guān)關(guān)系，與莖點(diǎn)霉屬和Unclassified_f_Herpotrichiellaceae 等真菌呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。本研究中，毛竹林地白及生長(zhǎng)狀況最好，其地下部生物量也顯著高于其他3 種林地，同時(shí)其梨形孢屬真菌的相對(duì)豐度也最高。這表明菌根真菌的相對(duì)豐度越高越有利于白及的生長(zhǎng)，這與學(xué)者得出的梨形孢屬真菌有利于蘭花地下部生長(zhǎng)的結(jié)論[15]較為一致。子囊菌門作為土壤中廣泛的真菌類型，多作為土壤中的分解者存在，為腐生菌[24]。本研究中，除毛竹林地外，其他3 種林地白及菌根均檢測(cè)到子囊菌門的莖點(diǎn)霉屬真菌，而莖點(diǎn)霉屬真菌是白及根腐病的主要致病菌[25]。由此推測(cè)，落羽杉、水杉和紅哺雞竹林地白及生長(zhǎng)狀況和生物量均低于毛竹林地白及，可能是由于受到病原菌的侵染，導(dǎo)致白及根系產(chǎn)生病害，造成生長(zhǎng)受阻。

3.1.2 林地類型對(duì)白及內(nèi)生真菌的影響 林地類

型對(duì)白及內(nèi)生真菌的組成、群落結(jié)構(gòu)和豐度有一定影響。本研究中，毛竹、落羽杉和紅哺雞竹林地白及的內(nèi)生真菌中擔(dān)子菌門占主要地位，而水杉林地白及則為子囊菌門真菌占優(yōu)勢(shì)。4種林地類型下白及優(yōu)勢(shì)內(nèi)生真菌均為梨形孢屬，以毛竹林地白及相對(duì)豐度最高，水杉林地相對(duì)豐度最低。此結(jié)果可能是由不同林地條件下土壤養(yǎng)分、光照和植物種類的差異造成。

土壤養(yǎng)分會(huì)在一定程度上影響白及內(nèi)生真菌的種類。通過對(duì)內(nèi)生真菌和土壤養(yǎng)分進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析后發(fā)現(xiàn)，土壤養(yǎng)分可解釋門水平上79.12%的內(nèi)生真菌變異情況。其中TP、AN、TK、AP 等主要與子囊菌門真菌呈正相關(guān)關(guān)系，AK、N∶P 與擔(dān)子菌門呈正相關(guān)關(guān)系。屬水平上，外瓶霉屬和莖點(diǎn)霉屬真菌與磷含量相關(guān)性較強(qiáng)。水杉林地白及內(nèi)生真菌中莖點(diǎn)霉屬和外瓶霉屬的相對(duì)豐度最高，可能是由于水杉土壤中磷含量較高造成，因?yàn)檩^高的磷含量會(huì)促進(jìn)子囊菌的增殖。有研究表明，土壤養(yǎng)分如氮、磷等的含量與蘭花的內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)具有一定的相關(guān)性，且在低磷條件下，菌根真菌更容易與植物建立共生關(guān)系[6，26]，如紅哺雞竹林地白及的傘菌綱、梨形孢屬和膠膜菌屬等OMF 相對(duì)豐度高于水杉林地。

光照對(duì)白及內(nèi)生真菌的種類也會(huì)產(chǎn)生一定影響。FU 等[15]的研究結(jié)果表明，光照強(qiáng)度與OMF 梨形孢屬呈顯著正相關(guān)關(guān)系，與莖點(diǎn)霉屬呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。本研究中，毛竹林地中郁閉度最低，光照強(qiáng)度最大，梨形孢屬相對(duì)豐度最高，莖點(diǎn)霉屬相對(duì)豐度最低。由于不同林地的郁閉度有所區(qū)別，導(dǎo)致土壤的受光面積會(huì)產(chǎn)生一定差異，從而影響林地土壤的溫濕度[27]、含水量和土壤微生物的群落組成[28]，進(jìn)而影響白及內(nèi)生真菌的組成結(jié)構(gòu)。植物-土壤互作同樣影響白及內(nèi)生真菌組成。植物根系通過向土壤釋放有機(jī)物來提高土壤養(yǎng)分、改變土壤性質(zhì)，為土壤微生物提供食物和生存場(chǎng)所，微生物則將土壤中的有機(jī)廢物分解為植物可利用的形式促進(jìn)植物的生長(zhǎng)[29]。由于蘭科植物的特殊性，白及根系會(huì)不斷與土壤中的真菌進(jìn)行共生，促進(jìn)對(duì)土壤養(yǎng)分的獲取。但不同的植物根系分泌的有機(jī)質(zhì)不同，導(dǎo)致土壤微生物的群落結(jié)構(gòu)[30]以及白及內(nèi)生真菌的組成產(chǎn)生一定差異。

3.2 結(jié)論

林地類型對(duì)白及的生長(zhǎng)發(fā)育和內(nèi)生真菌的組成有顯著影響。本研究中，4 種林地白及生長(zhǎng)指標(biāo)差異較大，毛竹林地種植白及效果最好。不同林地類型白及內(nèi)生真菌種類也具有一定差異，4 種林地白及內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)種群均為擔(dān)子菌門的OMF 梨形孢屬，且毛竹林地相對(duì)豐度最高，水杉林地最低。水杉林地土壤磷含量較高，病原菌增殖快，導(dǎo)致整體上內(nèi)生真菌相對(duì)豐度較低、植株產(chǎn)生病害、生物量低。內(nèi)生真菌群落組成對(duì)白及生長(zhǎng)指標(biāo)有顯著影響，整體上內(nèi)生真菌相對(duì)豐度越高，白及生長(zhǎng)狀況越佳。因此，在對(duì)白及進(jìn)行農(nóng)林復(fù)合經(jīng)營(yíng)以及植物景觀配置時(shí)，應(yīng)注意選擇合適的林地類型如毛竹林地，并考慮光照、土壤養(yǎng)分以及微生物種類等因素對(duì)白及生長(zhǎng)發(fā)育的影響。在適當(dāng)條件下還可以施用有機(jī)肥或菌肥等調(diào)節(jié)土壤養(yǎng)分以及微生物種類，以達(dá)到最佳種植效果。