雷 璇，汪蕓蘭，魏 玄，張 穎，屈 瓊，趙小梅，趙佩媛，張新博，邱金清，段 璽，宋 逍, 3

基于特征圖譜的小兒消積止咳口服液量質(zhì)傳遞相關(guān)性研究

雷 璇1，汪蕓蘭1，魏 玄1，張 穎1，屈 瓊1，趙小梅1，趙佩媛1，張新博1，邱金清1，段 璽2，宋 逍1, 3*

1. 陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046 2. 陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 咸陽 712000 3. 中藥制藥與新藥開發(fā)教育部工程研究中心，北京 100029

建立HPLC特征圖譜檢測方法，將物性參數(shù)及化學(xué)成分結(jié)合進(jìn)行相關(guān)性分析研究小兒消積止咳口服液（Xiaoer Xiaoji Zhike Oral Liquid，XXZOL）的提取、醇沉、濃縮過程中的量質(zhì)傳遞規(guī)律，為XXZOL在生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制提供幫助。分別建立15批XXZOL制備過程中的提取液、醇沉液、濃縮液的特征圖譜，并測定15批提取液、醇沉液、濃縮液的物性參數(shù)（pH值、電導(dǎo)率、相對密度），結(jié)合化學(xué)成分含量進(jìn)行相關(guān)性分析，得到在XXZOL制備過程中提取液、醇沉液、濃縮液之間的量質(zhì)傳遞規(guī)律。建立了15批XXZOL中提取液、醇沉液、濃縮液的特征圖譜，標(biāo)定出13個(gè)共有峰，根據(jù)對照品指認(rèn)出6個(gè)色譜峰，確定為5-羥甲基糠醛（峰2）、綠原酸（峰4）、連翹酯苷A（峰8）、蕓香柚皮苷（峰9）、橙皮苷（峰10）、新橙皮苷（峰11）；經(jīng)主成分分析（principal component analysis，PCA），提取出5個(gè)主成分，累積方差貢獻(xiàn)率為91.3%；量質(zhì)傳遞規(guī)律研究發(fā)現(xiàn)6個(gè)成分在提取液-醇沉液中的轉(zhuǎn)移率較低，在醇沉液-濃縮液中的轉(zhuǎn)移率較高。根據(jù)正交偏最小二乘-判別分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）篩選得到5個(gè)差異指標(biāo)；根據(jù)測定的物性參數(shù)與化學(xué)成分相關(guān)性分析，醇沉液與濃縮液中相對密度與蕓香柚皮苷的含量都呈顯著正相關(guān)，并且連翹酯苷A的含量與pH值呈顯著負(fù)相關(guān)，提取液與濃縮液中新橙皮苷含量與連翹酯苷A含量都呈顯著負(fù)相關(guān)。5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、新橙皮苷在提取液、醇沉液、濃縮液之間都呈顯著正相關(guān)，橙皮苷含量在醇沉液和濃縮液之間呈顯著正相關(guān)。得到的XXZOL的提取、醇沉、濃縮過程的量質(zhì)傳遞規(guī)律，可為XXZOL在生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制提供幫助。

小兒消積止咳口服液；特征圖譜；量質(zhì)傳遞；質(zhì)量控制；質(zhì)量標(biāo)志物；主成分分析；正交偏最小二乘-判別分析；電導(dǎo)率；相對密度；5-羥甲基糠醛；綠原酸；連翹酯苷A；蕓香柚皮苷；橙皮苷；新橙皮苷

小兒消積止咳口服液（Xiaoer Xiaoji Zhike Oral Liquid，XXZOL）是依據(jù)“食積咳嗽”治療理論研發(fā)的兒科用的中藥制劑，不僅是魯南制藥集團(tuán)股份有限公司重點(diǎn)產(chǎn)品之一，也是國家中藥保護(hù)品種之一。XXZOL由炒山楂、檳榔、枳實(shí)、蜜枇杷葉、瓜蔞、炒萊菔子、炒葶藶子、桔梗、連翹、蟬蛻10種中藥組成，具有清熱肅肺、消積止咳的功能[1]，臨床用于小兒飲食積滯及痰熱蘊(yùn)肺導(dǎo)致的咳嗽、咳痰、腹脹、口臭等癥[2-4]。炒山楂及檳榔為處方中的君藥，具有消食導(dǎo)滯之功效，消食化積，則郁熱痰濁無依，生熱生痰無源[5]；蜜枇杷葉、瓜蔞、桔梗、連翹為處方中的臣藥，具有清肺化痰同時(shí)還具有宣散肺氣的作用[6]；葶藶子、萊菔子、蟬蛻、枳實(shí)為處方中的佐藥，葶藶子泄肺平喘的作用較強(qiáng)，萊菔子主降氣化痰，蟬蛻可宣散肺熱、消食化積、枳實(shí)行氣消痰；桔梗是處方中的使藥，除了具有宣肺利氣和祛痰止咳的作用之外，還能載藥上行直達(dá)病所[7]。10味藥共同發(fā)揮消積化痰、宣肺止咳的功效。消去胃內(nèi)食積，脾的運(yùn)化功能恢復(fù)，絕生痰之源、肺氣宣通、咳嗽停止，從而恢復(fù)正常[8-9]。XXZOL是目前臨床常用于治療小兒咳嗽的有效藥物，該方針對小兒體質(zhì)和咳嗽常見病機(jī)特點(diǎn)選藥配伍[10]，其處方配伍嚴(yán)密，藥性平和，君臣佐使分明，不僅用于治療小兒食積咳嗽，還可用于治療小兒支原體肺炎[11]、支氣管哮喘[12]、慢性咳嗽[13]、變異性哮喘等[14]，具有較好療效?！吨袊幍洹?020年版中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)是與檳榔、連翹、桔梗對照藥材及辛弗林對照品進(jìn)行薄層鑒別，用HPLC測定辛弗林的含量，并沒有對XXZOL整體的質(zhì)量控制進(jìn)行研究，難以有效反映該制劑的整體質(zhì)量[15]。

從中醫(yī)的整體觀出發(fā)，中成藥從提取、醇沉、濃縮過程中，各參數(shù)間會具有一定的傳遞性，在化學(xué)成分含量測定的基礎(chǔ)之上可以考慮增加物性參數(shù)的測定，單個(gè)指標(biāo)成分與多個(gè)物性參數(shù)之間相互對應(yīng)，為中藥生產(chǎn)工藝規(guī)范化研究提供更加綜合的數(shù)據(jù)參數(shù)[16]。劉昌孝院士[17]首次提出質(zhì)量標(biāo)志物（Q-Marker）的概念，指出中藥Q-Marker是指中藥材以及中藥產(chǎn)品（如中藥飲片、中藥湯劑、中藥提取物、中成藥制劑）中本來存在的或者在中藥生產(chǎn)過程中形成的和中藥功效密切相關(guān)的化學(xué)成分[18]，可以反映出中藥安全性及有效性的標(biāo)示性物質(zhì)。根據(jù)中藥Q-Marker的定義，基于質(zhì)量傳遞與溯源、成分特有性、成分有效性、復(fù)方配伍環(huán)境、成分可測性5個(gè)方面對XXZOL進(jìn)行預(yù)測分析[19-20]?，F(xiàn)有文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、綠原酸、連翹苷、連翹酯苷A與XXZOL的有效性密切相關(guān)，且可測性較高，可以作為XXZOL的質(zhì)量標(biāo)志物[21-25]。

基于此，本研究通過HPLC指紋圖譜結(jié)合多指標(biāo)成分含量測定，建立XXZOL的特征圖譜及質(zhì)量控制方法。運(yùn)用SPSS 25.0進(jìn)行主要成分與物性參數(shù)（pH值、電導(dǎo)率、相對密度）間的相關(guān)性分析，表示XXZOL從提取、醇沉、濃縮的物性參數(shù)與主要成分間的動態(tài)變化過程，可為中藥生產(chǎn)智能化、產(chǎn)業(yè)化奠定一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

KQ-250DE型數(shù)控超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；D101型電熱鼓風(fēng)干燥箱，北京科偉永鑫實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備廠；安捷倫1200系列高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；高速多功能粉碎機(jī)，永康市鉑歐五金制品有限公司；New CLassic MS-S型十萬分之一分析天平，上海梅特勒-托利多儀器有限公司；PHS-3E型雷磁pH計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；DDS-307A型電導(dǎo)率儀，杭州齊威儀器有限公司。

1.2 試藥

實(shí)驗(yàn)所用中藥材均經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室顏永剛教授鑒定，炒山楂為薔薇科山楂屬植物山里紅Bge. var.N. E. Br.的干燥成熟果實(shí)的炮制品；檳榔為棕櫚科檳榔屬植物檳榔L的干燥成熟種子；枳實(shí)為蕓香科柑橘屬植物酸橙L的干燥幼果；蜜枇杷葉為薔薇科枇杷屬植物枇杷(Thunb.) Lindl.的干燥葉的炮制品；瓜蔞為葫蘆科栝樓屬植物栝樓Maxim.的干燥成熟果實(shí)；炒萊菔子為十字花科蘿卜屬植物蘿卜L的干燥成熟種子的炮制品；炒葶藶子為十字花科播娘蒿屬植物播娘蒿(L.) Webb. ex Prantl.的干燥成熟種子的炮制品；桔梗為桔?？平酃僦参锝酃?Jacq.) A. DC.的干燥根；連翹為木犀科連翹屬植物連翹(Thunb.) Vahl的干燥果實(shí)；蟬蛻為蟬科昆蟲黑蚱蟬Fabricius的若蟲羽化時(shí)脫落的皮殼。

乙腈、甲醇，色譜純，美國Fisher公司；水為純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司；磷酸，色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；其余試劑均為分析純；對照品5-羥甲基糠醛，批號B21832，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，上海源葉生物技術(shù)有限公司；對照品綠原酸（批號B20780）、連翹酯苷A（批號PS011810）、蕓香柚皮苷（批號PS011543）、柚皮苷（批號PS001113）、橙皮苷（批號PS011588）、新橙皮苷（批號PS010413），質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，均購自成都普思生物科技股份有限公司。

15批XXZOL提取液、醇沉液、濃縮液均為實(shí)驗(yàn)室自制，各批提取液、醇沉液、濃縮液所對應(yīng)的飲片信息見表1。

表1 15批中藥飲片來源信息

Table 1 Information of 15 batches of Chinese herbal decoction pieces

XXZOL編號炒山楂檳榔枳實(shí)蜜枇杷葉瓜蔞炒萊菔子炒葶藶子桔梗連翹蟬蛻 S1山東廣東湖南四川浙江廣東河北安徽山西河南 S2山東海南江西廣東山東河南河南安徽陜西河南 S3山東四川陜西廣東河北四川陜西陜西陜西陜西 S4山東廣西重慶廣東河北甘肅河北河南晉城陜西 S5山東廣西四川四川江蘇河北河北陜西陜西陜西 S6山東廣東陜西四川山西河北江蘇陜西安徽安徽 S7山東云南四川湖北山西河北山東陜西陜西安徽 S8山東廣西江西浙江河北陜西陜西陜西山西陜西 S9山東廣東江西廣東河北河北江蘇陜西山西河北 S10山東河南福建江蘇陜西陜西河北吉林山西陜西 S11陜西河南陜西河南河北陜西河北陜西陜西陜西 S12山東廣東福建福建河南甘肅山東安徽陜西山東 S13河北廣東湖北廣東安徽河南河北安徽安徽安徽 S14山東海南江西廣東河北河北河北山西安徽湖北 S15河北海南江西廣西河北河北陜西陜西陜西山東

2 方法與結(jié)果

2.1 XXZOL濃縮液的制備過程

分別稱取炒山楂20.0 g、檳榔20.0 g、枳實(shí)20.0 g、蜜枇杷葉20.0 g、瓜蔞26.8 g、炒萊菔子20.0 g、炒葶藶子20.0 g、桔梗20.0 g、連翹20.0 g、蟬蛻13.2 g。采用10倍量水提取2次，每次1.5 h，合并濾過，即得提取液；藥液濃縮至167 mL，加入乙醇至含醇量為60%，4 ℃靜置20 h濾過，即得醇沉液；繼續(xù)回收乙醇并濃縮至100 mL，即得濃縮液。

2.2 對照品溶液的制備

分別精密稱取對照品5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷適量，加甲醇配制成分別含5-羥甲基糠醛191.68 μg/mL、綠原酸314.00 μg/mL、連翹酯苷A 828.00 μg/mL、蕓香柚皮苷1 198.00 μg/mL、橙皮苷198.72 μg/mL、新橙皮苷1 532.00 μg/mL的混合對照品儲備液。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 各單味藥供試品溶液 按照“2.1”項(xiàng)下XXZOL制備方法，分別稱取炒山楂20.0 g、檳榔20.0 g、枳實(shí)20.0 g、蜜枇杷葉20.0 g、瓜蔞26.8 g、炒萊菔子20.0 g、炒葶藶子20.0 g、桔梗20.0 g、連翹20.0 g、蟬蛻13.2 g，制備得到各單味藥樣品溶液，精密量取2 mL各單味藥樣品溶液至10 mL量瓶中，甲醇定容，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 陰性對照溶液的制備 分別稱取除去炒山楂、檳榔、枳實(shí)、蜜枇杷葉、瓜蔞、炒萊菔子、炒葶藶子、桔梗、連翹、蟬蛻的其余飲片，按照“2.1”項(xiàng)下的制備方法操作，精密量取2 mL放置10 mL量瓶內(nèi)，甲醇定容，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得陰性對照溶液。

2.3.3 提取液供試品溶液 按照“2.1”項(xiàng)下所制備的XXZOL提取液，精密量取2 mL放置10 mL量瓶內(nèi)，甲醇定容，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得提取液樣品供試品溶液（AS1～AS15）。

2.3.4 醇沉液供試品溶液 按照“2.1”項(xiàng)下XXZOL口服液制備方法，精密量取1 mL放置10 mL量瓶內(nèi)，甲醇定容，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得醇沉液樣品供試品溶液（BS1～BS15）。

2.3.5 濃縮液供試品溶液 按照“2.1”項(xiàng)下所得到的XXZOL濃縮液，精密量取0.5 mL放置10 mL量瓶內(nèi)，甲醇定容，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得濃縮液樣品供試品溶液（CS1～CS15）。

2.4 特征圖譜分析

2.4.1 色譜條件 色譜柱為Acclaim TM 120A C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為0.2%磷酸水溶液-乙腈，洗脫梯度：0～10 min，5%乙腈；10～15 min，5%～10%乙腈；15～20 min，10%乙腈；20～25 min，10%～15%乙腈；25～65 min，15%～17%乙腈；65～90 min，17%～30%乙腈；90～100 min，30%～40%乙腈；100～101 min，40%～5%乙腈；101～110 min，5%乙腈；體積流量為1.0 mL/min；檢測波長275 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 取S1提取液1份，過0.22μm濾膜，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以蕓香柚皮苷為參照峰，計(jì)算各共有峰相對保留時(shí)間和相對峰面積RSD。結(jié)果各共有峰相對保留時(shí)間RSD＜1.00%，相對峰面積RSD＜3%，以《中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)軟件》2012版評價(jià)，6次進(jìn)樣的相似度均為1.00，表明儀器精密度良好，符合指紋圖譜要求。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 按照“2.3.3”項(xiàng)下的方法平行制備6份S1提取液供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。以蕓香柚皮苷為參照峰，計(jì)算其他各共有峰相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD值。結(jié)果計(jì)算得到各共有峰相對保留時(shí)間RSD均＜1.00%，相對峰面積的RSD均＜3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取S1提取液1份，過0.22 μm濾膜，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)行測定，記錄色譜圖。以蕓香柚皮苷為參照峰，計(jì)算各共有峰相對保留時(shí)間和相對峰面積RSD。結(jié)果計(jì)算得到各共有峰相對保留時(shí)間RSD均＜1.00%，相對峰面積的RSD均＜3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 XXZOL化學(xué)特征圖譜建立及相似度分析 精密吸取對照品溶液、各單味藥供試品溶液、陰性對照溶液、提取液、醇沉液、濃縮液10 μL，過0.22μm濾膜，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，對記錄的色譜圖進(jìn)行分析。以S1號樣品圖譜為參照圖譜，時(shí)間窗為0.1 min，用平均數(shù)法生成對照圖譜（R），進(jìn)行全譜峰匹配，計(jì)算相似度。通過與對照品色譜峰位置比較，指認(rèn)共有峰。結(jié)果得到15批提取液（AS1～AS15）、醇沉液（BS1～BS15）、濃縮液（CS1～CS15）的HPLC特征圖譜及其對照指紋圖譜（AR、BR、CR），結(jié)果見圖1。相似度評價(jià)結(jié)果見表2。共標(biāo)定了13個(gè)共有峰，通過與對照品圖譜進(jìn)行比對指認(rèn)出了其中的6個(gè)色譜峰，結(jié)果見圖2，即峰2為5-羥甲基糠醛，峰4為綠原酸，峰8為連翹酯苷A，峰9為蕓香柚皮苷，峰10為橙皮苷，峰11為新橙皮苷。

圖1 15批提取液(AS1～AS15)、醇沉液(BS1～BS15)、濃縮液(CS1～CS15)的HPLC特征圖譜及其對照指紋圖譜(AR、BR、CR)

將各單味藥材、缺單味藥陰性樣品的HPLC圖（圖3）與樣品色譜圖比對分析得：峰2～5來源于炒山楂，峰4來源于檳榔，峰1、5、9～11、13來源于枳實(shí)，峰3、4來源于蜜枇杷葉，峰1、2來源于瓜蔞，峰13來源于炒萊菔子，峰5、8、13來源于炒葶藶子，峰1來源于桔梗，峰6～8、12來源于連翹，峰1來源于蟬蛻。其中9號峰（蕓香柚皮苷）分離度良好，峰面積較大，且相對保留時(shí)間在0.98～1.02，因此，選蕓香柚皮苷作為參考色譜峰，計(jì)算出其他共有峰的相對保留時(shí)間以及相對峰面積，各共有峰的相對保留時(shí)間RSD值均小于1%，表明這15批提取液、醇沉液、濃縮液樣品中13個(gè)共有峰之間的保留時(shí)間比較接近，但共有峰相對峰面積的RSD值相差比較大，表明不同產(chǎn)地批次制備的15批提取液、醇沉液、濃縮液13個(gè)共有峰所代表化合物的含量存在較大差異。除了S2、S6的提取液及S9的醇沉液和濃縮液外，其他各批次樣品與對照圖譜的相似度均大于0.700。

表2 15批提取液、醇沉液、濃縮液與各自對照特征圖譜的相似度評價(jià)結(jié)果

Table 2 Similarity evaluation results of 15 batches of extract, alcohol precipitation solution, concentrated solution and their respective control fingerprints

編號相似度編號相似度編號相似度編號相似度 提取液醇沉液濃縮液提取液醇沉液濃縮液提取液醇沉液濃縮液提取液醇沉液濃縮液 S10.8280.7230.714S50.7920.7270.711S90.7120.6470.607S130.8880.8760.875 S20.6050.7270.729S60.6910.8280.800S100.8310.7510.755S140.8020.8140.778 S30.8200.7170.704S70.8330.7340.708S110.8250.7470.727S150.9260.8780.889 S40.8400.8320.842S80.7960.7020.701S120.8710.8000.790

2-5-羥甲基糠醛 4-綠原酸 8-連翹酯苷A 9-蕓香柚皮苷 10-橙皮苷 11-新橙皮苷

圖3 各單味藥供試品、缺單味藥陰性樣品的HPLC圖

2.5 XXZOL制備過程中有效成分的含量測定

2.5.1 色譜條件 同“2.4.1”項(xiàng)下的色譜條件。

2.5.2 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取混合對照品溶液、各單味藥、提取液、醇沉液、濃縮液供試品溶液以及甲醇空白溶劑各10 μL，注入高效液相色譜儀，按照色譜條件測定。結(jié)果供試品色譜中，在與5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷混合對照品色譜對應(yīng)位置上有色譜峰，而甲醇溶劑的空白樣品不存在對應(yīng)的色譜峰，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，樣品溶液中各組分之間分離度程度和理論塔板數(shù)都很高，而且陰性樣品沒有干擾，見圖2。

2.5.3 線性關(guān)系考察 將“2.2”項(xiàng)下的對照品溶液用甲醇稀釋共制得6個(gè)樣品，注入液相色譜儀，按照色譜條件測定，以各成分對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，回歸方程分別為5-羥甲基糠醛＝54.991＋19.588 0，＝0.999 9，線性范圍0.32～191.68 μg/mL；綠原酸＝8.370 4－76.349 0，＝0.999 2，線性范圍3.22～314.00 μg/mL；連翹酯苷A＝7.922 3－2.802 0，＝0.999 9，線性范圍3.39～828.00 μg/mL；蕓香柚皮苷＝13.741－12.372 0，＝1.000 0，線性范圍4.91～1 198.00 μg/mL；橙皮苷＝14.547＋10.485 0，＝0.999 8，線性范圍2.04～198.72 μg/mL；新橙皮苷＝16.435＋1.042 7，＝1.000 0，線性范圍0.25～1 532.00 μg/mL；結(jié)果表明，這6個(gè)成分在相應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較良好。

2.5.4 精密度試驗(yàn) 取S1提取液供試品溶液1份，按照色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算各成分色譜峰面積的RSD。結(jié)果顯示5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰面積的RSD分別為0.74%、1.64%、0.49%、1.48%、0.62%、0.46%，表明該儀器精密度良好。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取6份S1提取液供試品溶液，按照“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測定，依次進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD。結(jié)果5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷質(zhì)量濃度的RSD分別為1.94%、0.37%、0.60%、1.42%、2.73%、2.50%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取S1提取液供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)行測定，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件，記錄峰面積，計(jì)算各成分色譜峰面積的RSD。結(jié)果5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰面積的RSD分別為2.35%、1.27%、0.62%、1.83%、0.67%、2.82%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取S1提取液1 mL分別精密加入對照品溶液適量，加入甲醇定容至10 mL，平行配制9份，搖勻，過0.22 μm濾膜，進(jìn)樣量10 μL注入液相色譜儀，按色譜條件測定，記錄峰面積，分別計(jì)算6個(gè)指標(biāo)成分的平均加樣回收率。結(jié)果5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的平均加樣回收率分別為99.80%、101.54%、99.63%、100.49%、99.67%、100.82%，RSD分別為1.53%、0.94%、1.72%、1.46%、1.87%、1.95%，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.5.8 含量測定 將15批的中藥飲片，按照供試品溶液制備方法，根據(jù)色譜條件對供試品溶液進(jìn)行指標(biāo)成分含量測定。以XXZOL制備過程穩(wěn)定性成分為評價(jià)指標(biāo)，分別計(jì)算5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的得率。15批提取液、醇沉液、濃縮液中5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量見表3～5。

2.6 物性參數(shù)測定

2.6.1 相對密度測定 參照《中國藥典》2020年版四部通則0601項(xiàng)下比重瓶法測定法，分別測定15批提取液、醇沉液、濃縮液的相對密度，結(jié)果見表6。

2.6.2 電導(dǎo)率測定 對電導(dǎo)儀先進(jìn)行校正，然后進(jìn)行溫度補(bǔ)償，將鉑黑電極浸入待測溶液中，等待示數(shù)穩(wěn)定后讀取數(shù)值，乘以相應(yīng)的電極常數(shù)，即得到浸膏的電導(dǎo)率[26]，分別測定15批提取液、醇沉液、濃縮液的電導(dǎo)率值，結(jié)果見表6。

2.6.3 pH值測定 實(shí)驗(yàn)使用pH計(jì)進(jìn)行測定，測定前采用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器，測定15批提取液、醇沉液、濃縮液的pH值，結(jié)果見表6。

2.6.4 各指標(biāo)成分含量在提取液-醇沉液-濃縮液之間的傳遞規(guī)律 6個(gè)指標(biāo)成分在提取液-醇沉液-濃縮液之間的轉(zhuǎn)移率結(jié)果見表7。結(jié)果顯示，5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷6個(gè)成分在提取液-醇沉液的轉(zhuǎn)移率分別在16.14%～67.66%、6.74%～12.64%、12.60%～24.79%、15.98%～24.87%、5.66%～27.14%、10.97%～62.95%，平均轉(zhuǎn)移率分別為37.84%、9.77%、17.03%、19.48%、10.26%、28.56%。醇沉液-濃縮液的轉(zhuǎn)移率分別在33.34%～80.27%、39.49%～79.71%、49.85%～86.10%、47.73%～96.40%、39.58%～79.07%、22.88%～94.79%，平均轉(zhuǎn)移率分別為53.99%、55.74%、63.33%、63.74%、61.73%、61.05%。

表3 15批提取液中有效成分含量

Table 3 Content of effective components in 15 batches of extract solution

樣品質(zhì)量濃度/(μg?mL?1)樣品質(zhì)量濃度/(μg?mL?1) 5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 AS1564295581722AS98278206441682 AS2269444933463AS10793211542185 AS337444891842AS11877359482021 AS418322125160343AS1218723394320213 AS5491489751866AS1376924451208349 AS6918148105116825AS14668131582105 AS7687281541573AS1536802996819646 AS87988317462462

表4 15批醇沉液中有效成分含量

Table 4 Content of effective components in 15 batches of alcohol precipitation solution

樣品質(zhì)量濃度/(μg?mL?1)樣品質(zhì)量濃度/(μg?mL?1) 5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 BS178231160735142015BS95442209092275424 BS2701492914112834029BS109536087830156123 BS36821514745614257BS11125282166524639816 BS44423915631977693191BS121722051952260407120 BS5134282256653044744BS1310923714514039603008 BS64671981924315113594BS149816366432245081 BS783321160437739225BS153082441537389355348 BS856635514792598247

表5 15批濃縮液中有效成分含量

Table 5 Content of effective components in 15 batches of concentrated solution

樣品質(zhì)量濃度/(μg?mL?1)樣品質(zhì)量濃度/(μg?mL?1) 5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 CS119858053761146139124CS921638782954805214214 CS21172937269806774760CS1038110052545913166434 CS312364042211607116547CS114088516784955138729 CS4108625437053121274402CS1245451059497691238165 CS533383685911659132081CS132315863955106823743999 CS61359646826207523778516CS142723781926961125458 CS722299362121390121646CS15881698482813041314581 CS812938753980657163112

表6 15批提取液、醇沉液、濃縮液物性參數(shù)測定結(jié)果

Table 6 Determination results of physical parameters of 15 batches of extract, alcohol precipitate and concentrated solutions

樣品相對密度/(g?mL?1)電導(dǎo)率/(mS?cm?1)pH值 提取液醇沉液濃縮液提取液醇沉液濃縮液提取液醇沉液濃縮液 S11.010 30.940 11.146 11.791.005.654.615.194.12 S21.007 30.948 61.103 11.381.166.094.455.194.19 S31.008 40.940 51.140 41.651.096.454.575.174.15 S41.007 30.941 21.114 31.481.207.654.695.204.24 S51.009 60.952 31.165 11.631.155.554.685.054.00 S61.009 80.946 41.178 81.851.164.484.485.114.15 S71.003 80.938 01.120 31.691.225.964.505.214.20 S81.008 00.939 11.133 71.641.085.514.555.224.12 S91.008 20.936 81.105 21.651.223.714.425.034.28 S101.007 10.937 51.131 01.651.145.934.735.324.26 S111.008 40.938 41.134 51.621.106.184.515.154.04 S121.007 80.942 11.136 01.591.225.724.615.054.00 S131.009 60.950 51.149 41.321.103.134.745.124.30 S141.007 90.940 51.109 31.491.285.304.895.234.49 S151.003 40.941 91.156 41.461.276.094.895.224.18

2.6.5 各物性參數(shù)在提取液-醇沉液-濃縮液之間的傳遞規(guī)律 由表6可知，15批提取液、醇沉液、濃縮液的相對密度、電導(dǎo)率、pH值均較穩(wěn)定。其傳遞規(guī)律在提取液-醇沉液-濃縮液均呈現(xiàn)先遞減后遞增的趨勢。

2.6.6 相關(guān)性分析 運(yùn)用SPSS 25. 0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用相關(guān)性雙變量考察15批提取液、醇沉液、濃縮液物性參數(shù)與主要成分含量間的相關(guān)性。物性參數(shù)與成分間相關(guān)性分析結(jié)果見表8～13，結(jié)果顯示提取液中橙皮苷含量與連翹酯苷A含量存在顯著正相關(guān)關(guān)系，橙皮苷含量與新橙皮苷含量存在顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，新橙皮苷含量與連翹酯苷A含量存在顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。醇沉液中相對密度與蕓香柚皮苷以及新橙皮苷的含量存在顯著正相關(guān)的關(guān)系。濃縮液中連翹酯苷A含量與pH值、新橙皮苷含量均存在顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，相對密度與蕓香柚皮苷的含量存在顯著正相關(guān)關(guān)系。5-羥甲基糠醛、綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、新橙皮苷含量在提取液、醇沉液、濃縮液之間都存在顯著正相關(guān)關(guān)系，橙皮苷含量在醇沉液和濃縮液之間存在顯著正相關(guān)關(guān)系。

2.7 主成分分析（principal component analysis，PCA）

將15批提取液、醇沉液、濃縮液的共有峰峰面積及測定的物性參數(shù)值導(dǎo)入SIMCA 14.1軟件中，進(jìn)行PCA。結(jié)果在16個(gè)變量中選取出5個(gè)變量，累積方差貢獻(xiàn)率為91.3%，結(jié)果見表14，說明模型具有良好的預(yù)測能力。進(jìn)行Hotelling2檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CS6、CS9樣品超出99%控制限，剔除這2個(gè)樣品后，提取前2個(gè)主成分作PCA得分圖，詳見圖4、5。結(jié)果表明15批提取液、醇沉液、濃縮液可各聚為一類。

表7 提取液-醇沉液6個(gè)成分的傳遞轉(zhuǎn)移率

Table7 Transfer rate of six components in extract-alcohol precipitation solution

樣品提取液-醇沉液傳遞轉(zhuǎn)移率/%樣品醇沉液-濃縮液傳遞轉(zhuǎn)移率/% 5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 S147.3811.2717.0418.827.6122.14S150.9350.3266.9165.3866.2662.72 S254.736.7420.4726.3727.1427.19S233.3439.4949.8547.7347.7847.26 S367.669.0024.7919.807.2231.78S336.0459.6552.2757.3154.7978.35 S432.488.9722.1224.8715.0129.11S448.9752.3855.9353.7955.3455.18 S518.209.6416.3822.027.5223.11S549.7159.2966.9762.5759.0772.96 S616.147.6312.6012.8313.7513.61S658.1365.1786.1096.4093.0694.79 S741.6011.5817.8621.707.7928.35S753.7861.8377.4673.6662.0973.08 S822.4212.6414.5817.7210.4610.97S845.6949.3853.8250.7739.5871.91 S920.648.8513.7916.2010.1037.03S979.6079.7165.0171.0279.0722.88 S1042.9912.1012.9917.448.0515.55S1080.2755.8657.9760.6659.3359.33 S1150.1811.4014.4715.986.1662.95S1165.3360.3381.5077.7269.6873.39 S1229.468.9117.9918.756.2928.25S1252.6849.8360.9459.2060.7854.97 S1347.0410.7618.5524.5914.4026.96S1342.5049.4254.5153.0549.4553.17 S1450.027.5615.8117.236.7047.66S1455.6846.2057.9859.7455.7128.94 S1526.679.4816.0817.885.6623.77S1557.2057.1962.8067.0674.0066.82

表8 15批提取液間物性參數(shù)與成分間相關(guān)性

Table8 Correlation between physical parameters and components of 15 batches of extract solution

變量相關(guān)性系數(shù) pH值電導(dǎo)率相對密度5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 pH值1.000?0.438?0.217?0.362?0.0340.188?0.0270.489?0.231 電導(dǎo)率?0.4381.0000.2460.4050.2790.0490.4650.059?0.051 相對密度?0.2170.2461.0000.094?0.313?0.0410.2070.0130.249 5-羥甲基糠醛?0.3620.4050.0941.0000.225?0.1370.2530.0320.287 綠原酸?0.0340.279?0.3130.2251.0000.3460.0490.248?0.115 連翹酯苷A0.1880.049?0.041?0.1370.3461.000?0.3140.529*?0.544* 蕓香柚皮苷?0.0270.4650.2070.2530.049?0.3141.000?0.1490.316 橙皮苷0.4890.0590.0130.0320.2480.529*?0.1491.000?0.637* 新橙皮苷?0.231?0.0510.2490.287?0.115?0.544*0.316?0.637*1.000

提取環(huán)節(jié)物性參數(shù)與成分相關(guān)性比較：*＜0.05

comparison of correlation between physical parameters and components in extraction process:*< 0.05

2.8 正交偏最小二乘-判別分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）

采用SIMAC 14.1軟件對15批提取液、醇沉液、濃縮液的共有峰峰面積及測定的物性參數(shù)值進(jìn)行OPLS-DA，建立OPLS-DA模型。分析結(jié)果顯示，OPLS-DA自變量擬合指數(shù)（R2）為0.689，因變量擬合指數(shù)（R2）為0.906，模型預(yù)測指數(shù)（2）為0.885，說明該模型穩(wěn)定性及預(yù)測能力較好。為進(jìn)一步驗(yàn)證該模型的有效性，利用SIMCA 14.1軟件對其進(jìn)行置換檢驗(yàn)，所有2均在2之下，說明該模型有效。由OPLS-DA得分圖可以看出，15批提取液、醇沉液、濃縮液可以很好地區(qū)分，詳見圖6。以VIP＞1為標(biāo)準(zhǔn)，篩選得到pH值、相對密度、電導(dǎo)率和色譜峰5、6可作為區(qū)分15批提取液、醇沉液、濃縮液質(zhì)量差異指標(biāo)，詳見圖7和表15。

表9 15批醇沉液與提取液間物性參數(shù)與成分間相關(guān)性

Table9 Correlation between physical parameters and components of 15 batches of alcohol precipitation and extract solution

變量相關(guān)性系數(shù) pH值電導(dǎo)率相對密度5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 pH值0.385?0.101?0.429?0.2870.178?0.242?0.1180.126?0.124 電導(dǎo)率0.329?0.312?0.619*0.0830.134?0.084?0.116?0.0800.000 相對密度0.112?0.3650.363?0.155?0.1240.0390.310?0.3630.524* 5-羥甲基糠醛?0.3070.3240.0460.977**0.2590.0000.1630.1380.134 綠原酸0.0010.281?0.2300.0630.772**0.541*?0.1670.563*?0.421 連翹酯苷A0.1970.008?0.020?0.3570.2260.845**?0.1900.509?0.581* 蕓香柚皮苷0.0530.0610.128?0.204?0.035?0.1930.782**?0.2530.163 橙皮苷0.149?0.2510.2920.2110.1640.083?0.3060.4250.182 新橙皮苷?0.158?0.3660.1760.046?0.205?0.5070.026?0.677**0.921**

各變量（物性參數(shù)、成分）在醇沉與提取環(huán)節(jié)的相關(guān)性比較：*＜0.05**＜0.01

correlation comparison of variables (physical parameters, components) in alcohol precipitation and extraction process:*< 0.05**< 0.01

表10 15批濃縮液與提取液間物性參數(shù)與成分間相關(guān)性

Table 10 Correlation between physical parameters and components of 15 batches of concentrated solution and extract solution

變量相關(guān)性系數(shù) pH值電導(dǎo)率相對密度5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 pH值0.398?0.374?0.153?0.030?0.217?0.517*?0.1510.0180.087 電導(dǎo)率0.1050.013?0.386?0.4680.2180.049?0.197?0.096?0.197 相對密度0.1590.3690.2910.2180.1760.2490.704**0.1830.267 5-羥甲基糠醛?0.3420.3350.0370.937**0.225?0.0320.1120.0830.085 綠原酸?0.1870.452?0.2370.2470.793**0.462?0.0140.446?0.389 連翹酯苷A0.0860.124?0.059?0.3550.2410.865**?0.1360.427?0.577* 蕓香柚皮苷?0.0940.4420.1240.1300.100?0.1860.939**?0.2690.350 橙皮苷?0.0150.1170.3420.5020.171?0.0550.0120.2080.434 新橙皮苷?0.200?0.0890.2400.256?0.110?0.526*0.267?0.617*0.996**

各變量（物性參數(shù)、成分）在濃縮與提取環(huán)節(jié)的相關(guān)性比較：*＜0.05**＜0.01

correlation comparison of variables (physical parameters, components) in concentration and extraction process:*< 0.05**< 0.01

表11 15批醇沉液間物性參數(shù)與成分間相關(guān)性

Table 11 Correlation between physical parameters and components of 15 batches of alcohol precipitation solution

變量相關(guān)性系數(shù) pH值電導(dǎo)率相對密度5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 pH值1.000?0.048?0.389?0.2940.356?0.280?0.1070.021?0.055 電導(dǎo)率?0.0481.000?0.0820.089?0.270?0.171?0.187?0.2460.005 相對密度?0.389?0.0821.000?0.167?0.3450.0820.584*0.1090.574* 5-羥甲基糠醛?0.2940.089?0.1671.0000.139?0.236?0.2320.227?0.070 綠原酸0.356?0.270?0.3450.1391.0000.409?0.1840.320?0.455 連翹酯苷A?0.280?0.1710.082?0.2360.4091.0000.0760.071?0.500 蕓香柚皮苷?0.107?0.1870.584*?0.232?0.1840.0761.000?0.2820.085 橙皮苷0.021?0.2460.1090.2270.3200.071?0.2821.0000.263 新橙皮苷?0.0550.0050.574*?0.070?0.455?0.5000.0850.2631.000

醇沉環(huán)節(jié)物性參數(shù)與成分相關(guān)性比較：*＜0.05

comparison of correlation between physical parameters and components in alcohol precipitation process:*< 0.05

表12 15批濃縮液與醇沉液間物性參數(shù)與成分間相關(guān)性

Table 12 Correlation between physical parameters and components of 15 batches of concentrated solution and alcohol precipitation solution

變量相關(guān)性系數(shù) pH值電導(dǎo)率相對密度5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 pH值0.4050.394?0.180?0.064?0.248?0.573*?0.1660.2610.165 電導(dǎo)率0.4640.052?0.273?0.4630.1330.239?0.087?0.345?0.090 相對密度?0.230?0.3040.4470.1780.1470.2740.517*0.0580.029 5-羥甲基糠醛?0.3710.181?0.2510.951**0.069?0.280?0.2930.143?0.109 綠原酸0.088?0.111?0.4250.2960.877**0.332?0.1460.166?0.503 連翹酯苷A?0.294?0.1550.024?0.2500.4220.960**0.073?0.090?0.538* 蕓香柚皮苷?0.200?0.0790.4090.035?0.131?0.0650.819**?0.3440.092 橙皮苷?0.236?0.0660.0430.4290.121?0.152?0.2750.739**0.329 新橙皮苷?0.1160.0090.521*0.105?0.414?0.548*0.1320.2290.938**

各變量（物性參數(shù)、成分）在濃縮與醇沉環(huán)節(jié)的相關(guān)性比較：*＜0.05**＜0.01

correlation comparison of variables (physical parameters, components) in concentration and alcohol precipitation process:*< 0.05**< 0.01

表13 15批濃縮液間物性參數(shù)與成分間相關(guān)性

Table 13 Correlation between physical parameters and components of 15 batches of concentrated solution

變量相關(guān)性系數(shù) pH值電導(dǎo)率相對密度5-羥甲基糠醛綠原酸連翹酯苷A蕓香柚皮苷橙皮苷新橙皮苷 pH值1.000?0.256?0.4830.205?0.227?0.615*?0.2200.2350.103 電導(dǎo)率?0.2561.000?0.208?0.514?0.0200.240?0.180?0.510?0.168 相對密度?0.483?0.2081.0000.0630.1500.2750.705**0.2750.249 5-羥甲基糠醛0.025?0.5140.0631.0000.338?0.2630.0090.4740.058 綠原酸?0.227?0.0200.1500.3381.0000.4110.0550.253?0.391 連翹酯苷A?0.615*0.2400.275?0.2630.4111.0000.031?0.205?0.555* 蕓香柚皮苷?0.220?0.1800.705**0.0090.0550.0311.0000.0060.308 橙皮苷0.235?0.5100.2750.4740.253?0.2050.0061.0000.463 新橙皮苷0.103?0.1680.2490.058?0.391?0.555*0.3080.4631.000

濃縮環(huán)節(jié)物性參數(shù)與成分相關(guān)性比較：*＜0.05

comparison of correlation between physical parameters and components in concentration process:*< 0.05**< 0.01

表14 5個(gè)主成分因子的特征值和方差貢獻(xiàn)率

Table 14 Eigenvalue and variance contribution rate of five principal component factors

主成分特征值方差貢獻(xiàn)率/%累積方差貢獻(xiàn)率/% 19.11057.0057.0 21.98012.4069.3 31.65010.3079.6 41.1106.9686.6 50.7614.7591.3

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采集的15批中藥飲片樣品，基本上能代表市場上流通的飲片，保證了其來源的可溯性。XXZOL處方藥味較多，成分復(fù)雜。pH值、相對密度、電導(dǎo)率等物性參數(shù)能夠反映出中藥飲片本身的性質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)建立了15批XXZOL中提取液、醇沉液、濃縮液的指紋圖譜，根據(jù)對照品指認(rèn)出6個(gè)色譜峰，經(jīng)PCA，提取出5個(gè)主成分，根據(jù)OPLS-DA篩選得到了5個(gè)差異指標(biāo)。在供試品制備過程中，“2.3.4”“2.3.5”項(xiàng)反映了醇沉過程、濃縮過程樣品的制備，得到的醇沉、濃縮供試品溶液，是為了在實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)小兒消積止咳口服液醇沉、濃縮過程的量質(zhì)傳遞關(guān)系。指紋圖譜結(jié)果表明，不同產(chǎn)地批次制備的15批提取液、醇沉液、濃縮液13個(gè)共有峰所代表化合物的含量存在較大差異，分析造成此含量差異的原因可能是15批中藥飲片的藥材產(chǎn)地、采收時(shí)間、貯存時(shí)間、炮制方法及炮制時(shí)間等有所差異。根據(jù)各指標(biāo)成分含量在提取液-醇沉液-濃縮液之間的傳遞規(guī)律，發(fā)現(xiàn)6個(gè)成分在水提液-醇沉液中的轉(zhuǎn)移率較低，在醇沉液-濃縮液中的轉(zhuǎn)移率較高，分析原因可能為這幾種指標(biāo)成分的相對分子質(zhì)量相對較小，容易被醇沉的沉淀物（多糖類、蛋白類等）吸附，后期課題組將嘗試采用膜分離方法以解決提取-醇沉環(huán)節(jié)轉(zhuǎn)移率底的缺點(diǎn)。

圖4 Hotelling T2檢驗(yàn)圖

圖5 15批提取液、醇沉液、濃縮液的PCA得分圖

圖6 15批提取液、醇沉液、濃縮液的OPLS-DA得分圖

圖7 15批提取液、醇沉液、濃縮液的OPLS-DAVIP值

表15 VIP＞1的5個(gè)差異指標(biāo)的VIP值

Table 15 VIP values of five differential indexes with VIP > 1

變量VIP值變量VIP值 pH值1.541 45色譜峰51.005 38 相對密度1.414 09色譜峰61.004 47 電導(dǎo)率1.240 70

物性參數(shù)與化學(xué)成分相關(guān)性分析表明，醇沉液與濃縮液中相對密度與蕓香柚皮苷的含量都呈顯著正相關(guān)，且連翹酯苷A的含量與pH值呈顯著負(fù)相關(guān)，提取液與濃縮液中新橙皮苷含量與連翹酯苷A含量都呈顯著負(fù)相關(guān)。pH值、電導(dǎo)率、相對密度反映了溶液的物理性質(zhì)，從pH值、電導(dǎo)率、相對密度相關(guān)性分析來看，pH值減小，電導(dǎo)率和相對密度增大，由pH值可知溶液呈酸性，同時(shí)分析綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷化學(xué)結(jié)構(gòu)及測定其溶液pH值，結(jié)果顯示均為酸性，可以認(rèn)為電導(dǎo)率和pH值在一定層面上反映綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷成分的溶解性，同時(shí)相對密度值也側(cè)面印證綠原酸、連翹酯苷A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷成分的溶解性增加，即電導(dǎo)率、相對密度與化學(xué)成分呈正相關(guān)，pH值與化學(xué)成分呈負(fù)相關(guān)。因此，可以用pH值、電導(dǎo)率、相對密度預(yù)測XXZOL整體質(zhì)量。造成提取液、醇沉液、濃縮液中物性參數(shù)與化學(xué)成分之間存在不同相關(guān)性的原因可能是在醇沉過程中，加乙醇速度、攪拌速度、醇沉溫度等對成分轉(zhuǎn)移率有較大影響。PCA分析結(jié)果表明，15批樣品被分成了3類，A為提取液，B為醇沉液，C為濃縮液，累積方差貢獻(xiàn)率為91.3%，說明模型具有良好的預(yù)測能力。此外，通過OPLS-DA分析，pH值、相對密度、電導(dǎo)率、色譜峰5、色譜峰6的VIP＞1，可將其作為XXZOL的質(zhì)控指標(biāo)，本課題組后續(xù)將對色譜峰5、色譜峰6進(jìn)行指認(rèn)。

綜上所述，本研究創(chuàng)新性的將物性參數(shù)和化學(xué)成分結(jié)合進(jìn)行相關(guān)性分析，研究XXZOL制備過程中提取、醇沉、濃縮過程中量質(zhì)傳遞變化規(guī)律。結(jié)合特征圖譜分析并對關(guān)鍵成分進(jìn)行含量測定與量質(zhì)傳遞評價(jià)，相較于藥典規(guī)定的質(zhì)量評價(jià)方法，本實(shí)驗(yàn)從物理屬性、化學(xué)屬性方面對XXZOL進(jìn)行了較為全面的質(zhì)量控制方法研究，為實(shí)際生產(chǎn)過程中質(zhì)量控制提升提供依據(jù)，對控制XXZOL的質(zhì)量、提升XXZOL質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有重要意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 袁斌. 小兒消積止咳口服液治療小兒急性支氣管炎118例療效觀察 [J]. 江蘇中醫(yī), 2001, 33(12): 16.

[2] 高輝, 林永強(qiáng), 徐麗華. 小兒消積止咳口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 [J]. 齊魯藥事, 2011, 30(11): 650-652.

[3] 王樹亮. 小兒消積止咳口服液治療小兒咳嗽的療效研究 [J]. 中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志, 2016, 4(8): 134-135.

[4] 劉冬巖, 孫方舟, 姚國華. 小兒消積止咳口服液聯(lián)合丙卡特羅治療小兒咳嗽變異性哮喘的臨床研究 [J]. 現(xiàn)代藥物與臨床, 2019, 34(7): 2064-2068.

[5] 楊永朝. 小兒消積止咳顆粒聯(lián)合保和丸治療小兒痰熱咳嗽兼食積證的療效及對血清TNF-α、IL-6、IL-10水平影響 [J]. 醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐, 2021, 34(20): 3598-3600.

[6] 肖偉, 李俊. 小兒消積止咳口服液治療小兒咳嗽的療效及對患兒癥狀的影響分析 [J]. 實(shí)用心腦肺血管病雜志, 2021, 29(S1): 103-105.

[7] 王凱, 張伯禮, 崔遠(yuǎn)武, 等. 桔?！拜d藥上行”探尋與評議 [J]. 中醫(yī)雜志, 2018, 59(4): 271-275.

[8] 張雪榮, 向希雄. 小兒消積止咳口服液/顆粒治療痰熱咳嗽兼食積證療效觀察 [J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合兒科學(xué), 2010, 2(6): 521-523.

[9] 龔向英, 劉小妹, 斯建中. 小兒消積止咳口服液佐治下呼吸道感染93例分析 [J]. 兒科藥學(xué)雜志, 2005, 11(5): 52-53.

[10] 管華全, 譚峰, 樊巧玲. 小兒消積止咳口服液治療咳嗽組方機(jī)制探析 [J]. 世界中醫(yī)藥, 2021, 16(22): 3383-3386.

[11] 王艷茹, 章櫻, 周琴, 等. 小兒消積止咳口服液聯(lián)合阿奇霉素治療支原體肺炎及對患兒體液免疫功能的影響 [J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2019, 37(5): 1168-1171.

[12] 周璇, 葛燦俠, 陳羽, 等. 小兒消積止咳口服液聯(lián)合西藥治療兒童支氣管哮喘臨床效果的遠(yuǎn)期觀察 [J]. 世界中醫(yī)藥, 2020, 15(11): 1611-1614.

[13] 梁剛, 陳立, 周彥池, 等. 小兒消積止咳口服液對慢性咳嗽患兒癥狀改善及體液免疫功能的影響 [J]. 世界中醫(yī)藥, 2018, 13(12): 3043-3045.

[14] 孟戰(zhàn)備. 小兒消積止咳口服液在小兒咳嗽變異性哮喘中的療效觀察及對T淋巴細(xì)胞百分比的影響 [J]. 中國合理用藥探索, 2021, 18(4): 39-43.

[15] 范建偉, 劉武占, 李艷芳, 等. 小兒消積止咳口服液的HPLC指紋圖譜研究 [J]. 中國現(xiàn)代中藥, 2017, 19(6): 858-862.

[16] 陳天朝, 李沁, 姚超, 等. 赤芍不同炮制品及標(biāo)準(zhǔn)湯劑的物性參數(shù)及主要成分、指標(biāo)成分含量的研究 [J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2021, 39(2): 113-117.

[17] 劉昌孝. 中藥質(zhì)量標(biāo)志物（Q-Marker）研究發(fā)展的5年回顧 [J]. 中草藥, 2021, 52(9): 2511-2518.

[18] 陳士林, 劉昌孝, 張鐵軍, 等. 基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物和傳統(tǒng)用法的中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑傳承發(fā)展研究思路與建議 [J]. 中草藥, 2019, 50(19): 4519-4528.

[19] Zhang Y T, Xiao M F, Deng K W,. Novel mathematic models for quantitative transitivity of quality-markers in extraction process of the Buyanghuanwu Decoction [J]., 2018, 45: 68-75.

[20] Liang G, Yang J Y, Liu T T,. A multi-strategy platform for quality control and Q-markers screen of Chaiqin Chengqi Decoction [J]., 2021, 85: 153525.

[21] 王喜軍, 陳曦, 楊舸, 等. 枳術(shù)丸口服給藥后血中移行成分分析及其定量研究 [J]. 世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2007, 9(2): 54-57.

[22] 李文兵, 許玲, 盧君蓉, 等. 基于HPLC指紋圖譜的枇杷葉蜜炙前后標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量控制研究 [J]. 中草藥, 2020, 51(13): 3444-3450.

[23] 孔維潔, 翟瑩, 袁發(fā)滸, 等. 連翹、黃芩、大青葉三味中藥藥理作用及主要活性成分含量檢測方法研究 [J]. 廣東化工, 2021, 48(10): 199-201.

[24] 葛俊德, 李曉驕陽, 劉閏平, 等. 基于“肺與大腸相表里”的小兒消積止咳口服液功效網(wǎng)絡(luò)分析與作用機(jī)制探討 [J]. 中草藥, 2020, 51(15): 3978-3986.

[25] 梁琰, 張貴民, 蘇瑞強(qiáng), 等. 小兒消積止咳口服液多指標(biāo)成分分析及其HPLC指紋圖譜研究 [J]. 中草藥, 2017, 48(21): 4440-4447.

[26] 梁悅, 劉濤, 蔣天宇, 等. 生脈注射液物理指紋圖譜的建立及其質(zhì)量評價(jià) [J]. 中草藥, 2018, 49(11): 2571-2576.

Correlation between quantity and quality transfer of Xiaoer Xiaoji Zhike Oral Liquid for children based on characteristic chromatogram

LEI Xuan1, WANG Yun-lan1, WEI Xuan1, ZHANG Ying1, QU Qiong1, ZHAO Xiao-mei1, ZHAO Pei-yuan1, ZHANG Xin-bo1, QIU Jin-qing1, DUAN Xi2, SONG Xiao1, 3

1. Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, China 2. Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712000, China 3. Engineering Research Center for Pharmaceutics of Chinese Materia Medica and New Drug Development, Ministry of Education, Beijing 100029, China

To establish a HPLC characteristic chromatogram detection method, the physical parameters and chemical composition were combined for correlation analysis to study the mass transfer law of the extraction, alcohol precipitation and concentration process of Xiaoer Xiaoji Zhike Oral Liquid (小兒消積止咳口服液, XXZOL), so as to provide help for the quality control of XXZOL in the production process.The characteristic chromatograms of extract, alcohol precipitate solution and concentrated liquid in the preparation process of 15 batches of XXZOL were established, and the physical parameters (pH value, conductivity, relative density) of 15 batches of extract, alcohol precipitate solution and concentrated liquid were determined. The correlation analysis was carried out by combining the content of chemical components, and the mass transfer law between extract, alcohol precipitate solution and concentrated liquid in the preparation process of XXZOL was obtained.The characteristic chromatograms of the extract, alcohol precipitation solution and concentrated solution of 15 batches of XXZOL were established, and 13 common peaks were identified. According to the reference substance, six chromatographic peaks were identified as 5-hydroxymethylfurfural, chlorogenic acid, forsythoside A, narirutin, hesperidin and neohesperidin. Five principal components were extracted by principal component analysis (PCA), and the cumulative variance contribution rate was 91.3%. The study of mass transfer law found that the transfer rate of six components in water extract-alcohol precipitate was low, and the transfer rate in alcohol precipitate-concentrated solution was high. Five differential indexes were screened according to orthogonal partial least squares-discriminant analysis (OPLS-DA). According to the correlation analysis between the measured physical parameters and the chemical composition, the relative density in the alcohol precipitation solution and the concentrated solution was significantly positively correlated with the content of narirutin, and the content of forsythoside A was significantly negatively correlated with pH value. The content of neohesperidin in the extract and concentrated solution was significantly negatively correlated with the content of forsythoside A. There was a significant positive correlation between 5-hydroxymethylfurfural, chlorogenic acid, forsythoside A, narirutin and neohesperidin in the extract, alcohol precipitation and concentrated liquid. The content of hesperidin was significantly positively correlated between alcohol precipitation and concentrated liquid.The quality transfer law of the extraction, alcohol precipitation and concentration process of XXZOL obtained in this study can provide help for the quality control of XXZOL in the production process.

Xiaoer Xiaoji Zhike Oral Liquid; characteristic chromatogram; quantitative transfer; quality control; quality markers; principal component analysis;orthogonal partial least squares-discriminant analysis; electric conductivity; relative density; 5-hydroxymethylfurfural; chlorogenic acid; forsythoside A; narirutin; hesperidin; neohesperidin

R283.6

A

0253 - 2670(2023)16 - 5182 - 14

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.16.007

2023-03-17

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2019YFC1711204）；陜西省教育廳項(xiàng)目（21JC011）；陜西省中醫(yī)藥管理局（2021-04-ZZ-007）

雷 璇（1999—），女，漢，陜西省西安市，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幹苿┕に嚺c新產(chǎn)品開發(fā)。Tel: 18209187521 E-mail: 2216539744@qq.com

宋 逍（1979—），男，漢，陜西省乾縣人，教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┕に嚺c新產(chǎn)品開發(fā)。Tel: 15319015083 E-mail: song-xiaoyao@163.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]