李曉麗，佟虎成，邱 晨

承德市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河北承德 067000

近年來(lái)，隨著生豬養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，生豬疫病呈現(xiàn)出新的特點(diǎn)，主要表現(xiàn)為動(dòng)物疫病種類繁多，老的疫病還未凈化消滅，新的疫病不斷出現(xiàn)，而且多種豬病混合感染的情況越來(lái)越普遍，發(fā)病率升高，豬病防控和凈化工作面臨巨大挑戰(zhàn)。

豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒（PCV），主要是豬圓環(huán)病毒2 型（PCV2）引起的多種臨床癥狀的總稱，PCV2 是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）和皮炎與腎病綜合征（PNDS）的主要病原[1]，豬圓環(huán)病毒病近年呈現(xiàn)逐年上升的發(fā)病趨勢(shì)，河北各地市PCV2 感染率在65%～83%之間[2]，該病可引起患病豬只體質(zhì)下降、腹瀉、呼吸困難、消瘦等臨床表現(xiàn)，導(dǎo)致患豬飼料轉(zhuǎn)化率降低、生殖能力受到影響，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3]，同時(shí)豬圓環(huán)病毒病是一種免疫抑制類疫病，可導(dǎo)致其他疫病的免疫失敗，繼發(fā)其他細(xì)菌和病毒感染，給生豬養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的間接經(jīng)濟(jì)損失[4～6]。圓環(huán)病毒病是嚴(yán)重影響豬群健康和危害豬場(chǎng)生產(chǎn)的主要病毒病[7]，其單獨(dú)感染癥狀一般不會(huì)比較嚴(yán)重，但混合感染或免疫刺激后，其致病性會(huì)提高。

豬細(xì)小病毒病是由豬細(xì)小病毒（PPV）引起的一種豬繁殖障礙性疫病，在全球許多國(guó)家廣泛流行，主要表現(xiàn)為胚胎和胎兒的感染和死亡，特別是初產(chǎn)母豬發(fā)生死胎、畸形胎和木乃伊胎，母豬本身無(wú)明顯的臨床癥狀。豬細(xì)小病毒嚴(yán)重影響仔豬生長(zhǎng)和母豬繁殖[8]，同時(shí)，豬細(xì)小病毒病也是一種免疫抑制類疫病，與圓環(huán)病毒病一樣，會(huì)對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的間接性經(jīng)濟(jì)損失。

1 材料與設(shè)備

1.1 材料

1.1.1 檢測(cè)病料

無(wú)菌采集河北省承德市各縣區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）病死豬組織樣品，包括病死豬的肝臟、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)、小腸等，按常規(guī)方法采集冷藏送檢，共41 頭病死豬樣品。

1.1.2 主要試劑

TGuide 病毒DNA/RNA（磁珠法）提取試劑盒，購(gòu)自天根生化科技有限公司；非洲豬瘟病毒熒光PCR 檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京森康生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；豬圓環(huán)病毒2 型、豬偽狂犬病病毒、豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒、豬藍(lán)耳病病毒（經(jīng)典型）、高致病性藍(lán)耳病病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒熒光PCR 檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自石家莊圣博生物科技有限公司。

1.2 主要儀器設(shè)備

多功能組織研磨儀（Tissuelyser-24），Tguide S32 自動(dòng)核酸提取儀，Roche Light Cycler 96熒光定量PCR儀，BHC-1300IIA2Ⅱ級(jí)生物安全柜。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 流行病學(xué)調(diào)查

調(diào)查病死豬免疫情況、發(fā)病日齡、主要臨床癥狀、病理變化及用藥情況等相關(guān)流行病學(xué)資料。

2.2 病毒核酸提取

將每頭病死豬的組織樣本合成1 份，加入鋯珠和1 mL 1×PBS 溶液，放入多功能組織研磨儀中研磨，離心取上清待測(cè)。

按照提取試劑說(shuō)明書，提取上述上清液中的病毒DNA 或RNA。提取的病毒DNA 或RNA 暫存于4 ℃冰箱中，盡快檢測(cè)完成。

2.3 病毒的熒光PCR 檢測(cè)

按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書，設(shè)定不同病種的反應(yīng)程序，于Roche Light Cycler 96 熒光定量PCR 儀中進(jìn)行檢測(cè)。

3 結(jié)果

3.1 主要流行病學(xué)特點(diǎn)

承德市2022年生豬免疫豬圓環(huán)病毒疫苗的免疫率僅為12.54%，本次檢測(cè)的41 頭病死豬中免疫豬圓環(huán)病毒疫苗的有6 頭，免疫率為14.63%，整體免疫率較低，本次檢測(cè)的病死豬未有免疫過(guò)豬細(xì)小病毒疫苗的。病死豬為集中在40 ～200日齡的生豬，臨床癥狀主要表現(xiàn)為食欲不振甚至采食廢絕、消瘦、腹瀉、發(fā)熱、咳嗽、關(guān)節(jié)腫大和呼吸困難，個(gè)別病死豬臀部和腹部有少量出血點(diǎn)。對(duì)部分病死豬進(jìn)行了剖檢，主要表現(xiàn)為肺淤血和水腫。曾用抗生素對(duì)個(gè)別病死豬進(jìn)行治療，但治療效果不明顯。

3.2 實(shí)驗(yàn)室病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

對(duì)采集的41 頭病死豬組織樣品，采用熒光定量PCR 方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)了非洲豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2 型、豬偽狂犬病病毒、豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒、豬藍(lán)耳病病毒（經(jīng)典型）、高致病性藍(lán)耳病病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒共10 個(gè)項(xiàng)目，檢測(cè)到豬細(xì)小病毒核酸陽(yáng)性豬2 頭，陽(yáng)性率為4.88%，豬圓環(huán)病毒2 型核酸陽(yáng)性豬27 頭，陽(yáng)性率為65.85%，豬圓環(huán)病毒2型和豬細(xì)小病毒混合感染2 頭，占總陽(yáng)性的7.41%（2/27），其他病種未檢出核酸陽(yáng)性樣本。詳見(jiàn)表1 和表2。

表1 豬病病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

表2 混合感染情況統(tǒng)計(jì)表

從表中可以看出，感染了豬細(xì)小病毒的病死豬均同時(shí)感染了豬圓環(huán)病毒2 型，導(dǎo)致其致病性增強(qiáng)。

4 討論

通過(guò)本次對(duì)河北省承德市部分病死豬10 種主要病毒病的病原學(xué)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)河北省承德地區(qū)生豬圓環(huán)病毒2 型的感染率較高，達(dá)到了65.85%，筆者認(rèn)為這主要與圓環(huán)病毒的疫苗免疫率較低有關(guān)，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，即使免疫過(guò)圓環(huán)病毒疫苗的生豬，也檢測(cè)到了圓環(huán)病毒2 型核酸陽(yáng)性，最終發(fā)病死亡的，這可能與圓環(huán)病毒基因突變較快，疫苗毒株與實(shí)際流行毒株不匹配有關(guān)，所以疫苗毒株的選擇應(yīng)在流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，以實(shí)際流行毒株為依據(jù)，選擇相適應(yīng)的疫苗毒株。

通過(guò)本次檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，承德地區(qū)豬細(xì)小病毒有一定的感染，與豬圓環(huán)病毒2 型混合感染占總陽(yáng)性的7.41%，但是未發(fā)現(xiàn)臨床典型的流產(chǎn)和死胎等癥狀，主要影響的是仔豬的生長(zhǎng)。未檢出其他疫病感染情況，說(shuō)明可能整體防控措施比較到位，也可能樣品數(shù)量有限或采樣等原因，未能檢測(cè)到相應(yīng)病毒核酸。

豬圓環(huán)病毒和豬細(xì)小病毒均為免疫抑制類疫病，可導(dǎo)致豬體的免疫抑制[8]，進(jìn)而導(dǎo)致其他疫病的免疫失敗，降低機(jī)體的抵抗力，繼發(fā)細(xì)菌或病毒感染，加重疫情，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

目前，對(duì)兩種病毒病的治療主要是采用注射抗生素的方法，但抗生素主要作用是防止或治療繼發(fā)感染，也就是說(shuō)，對(duì)于病毒病沒(méi)有很好的治療藥物，僅是對(duì)癥治療。因此，接種疫苗是現(xiàn)階段防控豬細(xì)小病毒病和豬圓環(huán)病毒病的主要且有效的手段。豬細(xì)小病毒的血清型比較單一，且具有較高的免疫原性[9]，因此接種疫苗是防控豬細(xì)小病毒的有效措施。市售豬圓環(huán)病毒疫苗種類繁多，因?yàn)槠浠蛲蛔兯俣容^快的原因，應(yīng)根據(jù)實(shí)際流行毒株選擇疫苗種類。

在生豬生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，做好生物安全措施，采用綜合防控措施，提高豬只抵抗力，有效減少疫病的發(fā)生，進(jìn)而提高養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。