孫強 曲潤波 蘭波 陰長發(fā) 陳洪凡 杜宜新 石妞妞 肖鴻勇 李湘民 楊迎青

關(guān)鍵詞：蘆筍莖枯病；天門冬擬莖點霉；分類地位；生長速率；致病性；遺傳多態(tài)性

蘆筍（AsparagusofficinalisLinn）別名石刁柏，屬百合科（Liliaceae）天門冬屬（Asparagus）。蘆筍因其營養(yǎng)價值高，并具有潤肺、鎮(zhèn)咳、祛痰、抑制腫瘤生長等藥理功能，被稱為“蔬菜之王”[1-3]。近年來，我國蘆筍產(chǎn)業(yè)發(fā)展很快，目前已是世界第一大蘆筍生產(chǎn)國和出口國。據(jù)不完全統(tǒng)計，全國蘆筍種植面積約8萬hm2，鮮蘆筍年產(chǎn)量約64萬t，居世界第1位[4-6]。莖枯病是蘆筍生產(chǎn)中的第一大病害，常常給田間蘆筍帶來毀滅性破壞，給廣大筍農(nóng)造成重大經(jīng)濟損失，進而還會對我國蘆筍的出口和創(chuàng)匯造成重大沖擊[7-9]。蘆筍莖枯病是由天門冬擬莖點霉（Phomopsisasparagi（Sacc.）Bubak）侵染引起的[10-12]。濕熱氣候是該病發(fā)生和流行的首要條件，在歐美蘆筍主產(chǎn)區(qū)均為冷涼氣候，因此，莖枯病在這些國家發(fā)生較輕[13-16]。該病害在中國、日本、泰國、印尼等亞洲蘆筍種植國家發(fā)生比較嚴(yán)重，尤其在我國發(fā)生最為嚴(yán)重，我國蘆筍生產(chǎn)省份均普遍發(fā)生，而且由于我國南方氣候較北方更為濕熱，在我國南方產(chǎn)區(qū)該病發(fā)生尤為嚴(yán)重，輕者導(dǎo)致蘆筍生長發(fā)育不良，降低產(chǎn)量與品質(zhì)，重者病株提前枯死，全田毀滅[17-19]。

長期以來，一些國內(nèi)外學(xué)者圍繞蘆筍莖枯病及其病原菌展開了多角度、多領(lǐng)域的研究，并取得了一些進展[17-21]。葉琪明[22]從癥狀、病原菌、發(fā)生規(guī)律、抗性生理和病害防治等5個方面闡述了我國蘆筍莖枯病的研究現(xiàn)狀。余智城等[23]就病害的癥狀、病原菌、發(fā)生規(guī)律、抗性生理和病害防治等進行了綜述。張岳平等[24]綜述了蘆筍重要真菌病害的研究進展。鄭金龍等[25]綜述了蘆筍莖枯病及抗病育種的研究進展。楊迎青等[26]綜述了蘆筍莖枯病菌致病機制的研究進展。葉艷英等[27]綜述了蘆筍主要病毒病的研究進展。但是由于抗病育種一直以來未有大的突破，越來越多學(xué)者開始將目光轉(zhuǎn)移到蘆筍莖枯病菌的致病性、遺傳多態(tài)性等生物學(xué)的研究上來，并取得了可喜的成果。

筆者著重從蘆筍莖枯病菌的分類地位、生物學(xué)特性和遺傳多態(tài)性等3個方面簡述蘆筍莖枯病菌生物學(xué)方面的最新研究進展，旨在為蘆筍莖枯病菌生物學(xué)領(lǐng)域的深入研究和有針對性地制定防控策略提供理論依據(jù)。

1 蘆筍莖枯病菌分類地位

1.1 蘆筍莖枯病菌分類地位的歷史演化

蘆筍莖枯病的病原菌最早由SACCARDO于1879年定名為PhomaasparagiSacc.。隨后，有不少學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)自己的鑒定結(jié)果與SACCARDO的命名存在出入。BUBAK于1906年提出，蘆筍莖枯病的病原菌應(yīng)該是擬莖點霉屬（Phomopsis）的天門冬擬莖點霉。此外，TRAVERSO和SPESSA于1910年、ALCALDE于1952年和SOHI等于1975年也相繼得出與BUBAK相同的結(jié)論[11]。但在1990年以前SACCARDO的定名一直被我國大陸和臺灣省沿用。目前，蘆筍莖枯病菌的分類地位在國內(nèi)學(xué)者間已無異議，普遍認(rèn)為蘆筍莖枯病菌的學(xué)名為天門冬擬莖點霉[1，10-11]。

1.2 蘆筍莖枯病菌的寄主范圍

一些學(xué)者通過接種試驗證明，天門冬擬莖點霉的侵染范圍較狹窄，既不能侵染同科不同屬的植物，也不能侵染同屬不同種的天門冬（Asparaguscochinchinensis（Lour.）Merr）、羊齒天冬（AsparagusfilicinusHam.exD.Don）和文竹（Asparagussetaceus（Kunth）Jessop）等植物[28-29]。也有學(xué)者通過人工針刺法接種證明，天門冬擬莖點霉對百合科、蕪科植物有侵染現(xiàn)象，其中以莧科的皺果莧（AmaranthusviridisL.）和百合科黃花（HemerocalliscitrinaBoroni.）發(fā)病明顯；對其他韭菜、蔥、莧菜、繁穗莧等有侵染現(xiàn)象，但無致病作用；而對豆科、蓼科、菊科、茄科、大戟科、馬齒莧科、藜科、石竹科、旋花科、傘形科、禾本科植物無任何侵染現(xiàn)象[30]。

1.3 蘆筍莖枯病菌的形態(tài)學(xué)鑒定

1.3.1 形態(tài)學(xué)鑒定 蘆筍莖枯病主要發(fā)生在蘆筍莖葉上，常常以莖部的典型癥狀作為田間診斷依據(jù)，尤其是侵染后期在莖部產(chǎn)生的小黑點（子座和分生孢子器）是該病最為重要的鑒別依據(jù)。因此，首先可以在通過田間癥狀識別，初步確定發(fā)生病害是否為蘆筍莖枯病。然后采集病莖標(biāo)本帶回實驗室，通過分離、培養(yǎng)獲得病原菌菌株。采用離體接種法將分離到的病原菌接種到蘆筍嫩莖上，根據(jù)離體接種是否發(fā)病以及發(fā)病后的癥狀與田間癥狀是否一致作為進一步確定的依據(jù)。劉克均等[8]通過形態(tài)學(xué)觀察和人工接種鑒定，將蘆筍莖枯病的病原菌鑒定為天門冬擬莖點霉，而非莖點霉。楊迎青等[11]將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）平板培養(yǎng)的蘆筍莖枯病菌菌絲塊接種到20～30cm長的蘆筍嫩莖上，25～28℃下用噴水壺噴霧保持濕度，使相對濕度保持在90%～100%，培養(yǎng)5～7d后觀測癥狀發(fā)現(xiàn)與田間癥狀一致，驗證了分離到的菌株為蘆筍莖枯病菌。同時，楊迎青等[11]將分離培養(yǎng)的病原菌在PDA培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)14～18d，待產(chǎn)孢后隨機挑取分生孢子器30～50個、分生孢子50～100個，生物顯微鏡400倍下觀察和測定了分生孢子的形態(tài)和大小，其形態(tài)與裘維蕃[31]對于天門冬擬莖點霉的描述一致，將其鑒定為天門冬擬莖點霉，驗證了劉克均等[8]的觀點。

1.3.2 蘆筍莖枯病的主要識別癥狀 莖葉梢部是蘆筍莖枯病的主要初始發(fā)病部位，之后隨著病原菌的蔓延逐漸擴展到莖稈上。發(fā)病初期，侵染處首先會形成乳白色小斑點，然后逐漸擴大，形成紡錘形或橢圓形的病斑，顏色大多為淺褐色至褐色，邊緣呈水漬狀。隨著侵染逐漸深入，病斑逐漸擴大，侵染14～18d后發(fā)病部位逐漸變?yōu)楹稚胶谏?，中心部位開始出現(xiàn)凹陷，散生出許多小黑點，即為病原菌的子座和分生孢子器。嚴(yán)重發(fā)生的情況下，病斑可以大到環(huán)繞莖基部7d，致使莖基部凹陷、干枯、折斷，直至死亡。苗華民等[10]通過田間觀察，發(fā)現(xiàn)蘆筍莖枯病發(fā)病部位在莖和枝，初為針刺水漬狀小斑點，漸擴展成菱形或不規(guī)則形褪綠斑，稍凹陷，后漸變褐色，中心灰白色，病斑邊緣整齊，有失綠水漬狀暈圈，10d后病斑中部密生黑色隆起的小黑點（分生孢子器），其排列多數(shù)為不規(guī)則，少數(shù)呈輪紋狀排列。病斑深入髓部，繞莖一周致使其上部植株失水枯死，病莖較脆易折斷。楊迎青等[11]利用人工接種方法將分離到的天門冬擬莖點霉接種到蘆筍株上，接種3～5d后觀察到典型病斑，并在15～18d后產(chǎn)生褐色至黑色的小斑點（子座和分生孢子器），與苗華民等[10]的田間觀察結(jié)果一致。

1.3.3 蘆筍莖枯病菌主要形態(tài)特征

1.3.3.1 菌落形態(tài) 菌落是指單個或少量微生物細(xì)胞在適宜的固體培養(yǎng)基的表面或內(nèi)部生長繁殖到一定規(guī)模，形成以母細(xì)胞為中心的一團肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的細(xì)胞集團。菌落的形狀、顏色、光澤、質(zhì)地、大小、邊緣和透明度等性狀構(gòu)成了菌落的形態(tài)特征。植物病原真菌的菌落大多較為疏松，菌絲一般較為粗長，在培養(yǎng)基上的排布多呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀等，相比植物病原細(xì)菌，其菌落直徑一般可以大幾倍到幾十倍。植物病原真菌的同屬不同種或同種不同菌株在相同培養(yǎng)條件下的菌落形態(tài)特征往往呈現(xiàn)出一定的多態(tài)性。明確這些形態(tài)特征的差異對植物病原真菌不同種類的區(qū)分及遺傳多態(tài)性研究具有重要意義[32]。蘆筍莖枯病菌天門冬擬莖點霉為擬莖點霉屬（Phomopsis）真菌。PDA培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)的蘆筍莖枯病菌菌絲體最初呈乳白色至白色，隨著培養(yǎng)時間的延長，菌絲體顏色逐漸加深為灰白色至淡綠色或深灰色。蘆筍莖枯病菌子座深褐色至黑色，分生孢子器形成于子座中，單生或聚生，形態(tài)為扁球形至近三角形。楊迎青等[11]比較了江西、山東、福建、海南、河北等5個省蘆筍莖枯病菌菌株的菌落形態(tài)。結(jié)果表明，江西省來源菌株的顏色最初為白色，隨著培養(yǎng)時間的增加逐漸加深變?yōu)榈G色，其他省份來源菌株的顏色最初為白色，然后隨著培養(yǎng)時間的增加逐漸加深變?yōu)榛野咨Ｄ鲜碓淳甑木鋭t呈現(xiàn)出同心輪紋狀。上述結(jié)果說明，蘆筍莖枯病菌不同地域來源菌株間的菌落形態(tài)表現(xiàn)出豐富的多態(tài)性。

1.3.3.2 有性態(tài) 蘆筍莖枯病菌分生孢子器初形成時為無色（透明狀）到乳白色，隨著培養(yǎng)時間的延長顏色逐漸加深為黃褐色、褐色至黑色，孔口突出，孔口處壁厚，具分生孢子梗。α型分生孢子大多為長橢圓形至梭形，單胞，無色，兩端各有一個油球，大小為2.0～3.2μm×6.8～11.6μm[8，11]。β型分生孢子呈線形，大部分彎曲，也有直的，大多數(shù)β型分生孢子的兩端也各有一個油球，大小為17.5～35.0μm×0.75～1.8μm[7，11]。采用400倍顯微鏡觀察到的蘆筍莖枯病菌α型和β型分生孢子如圖1所示。

1.3.3.3 有性態(tài)培養(yǎng) 蘆筍莖枯病菌分生孢子是利用人工接種方法對蘆筍種質(zhì)資源進行抗莖枯病鑒定的重要菌體材料[12]，也是從形態(tài)學(xué)上對其病原菌進行準(zhǔn)確鑒定的重要依據(jù)之一[11]。因此，探索提高蘆筍莖枯病菌分生孢子器和分生孢子產(chǎn)生的條件，利用最優(yōu)產(chǎn)孢條件進行離體培養(yǎng)并獲得產(chǎn)分生孢子器和分生孢子能力高的菌株，對開展該病菌形態(tài)學(xué)鑒定和蘆筍莖枯病的抗性鑒定都具有非常重要的意義。

楊迎青等[11]比較了江西、山東、福建、海南、河北等5個省來源蘆筍莖枯病菌菌株培養(yǎng)16d后產(chǎn)分生孢子器的數(shù)量及其所產(chǎn)分生孢子器的性狀。從產(chǎn)分生孢子器的數(shù)量來說，福建省來源菌株產(chǎn)生的數(shù)量較多（分生孢子器的平均產(chǎn)生量在60個/皿），分生孢子器最初呈白色，然后隨著時間的增加逐漸變?yōu)辄S褐色至黑色；海南省來源菌株產(chǎn)分生孢子器的數(shù)量次之，尺寸較福建省來源菌株略?。唤?、河北、山東等3個省來源菌株產(chǎn)分子孢子器的數(shù)量較少（16d后分子孢子器的平均產(chǎn)生量在15個/皿），其所產(chǎn)生的分生孢子器黑色、質(zhì)硬。

顧振芳等[33]人工培養(yǎng)結(jié)果表明，蘆筍莖枯病菌菌絲生長的適宜溫度為15～30℃，最適溫度20～25℃；最適pH值為6。張玉芬等[34]通過測定認(rèn)為，蘆筍莖枯病菌菌絲生長的適宜溫度為20～30℃，最適溫度25℃，在10℃和大于35℃時菌絲不能生長；20%蘆筍莖葉煎汁、20%蘆筍莖葉煎汁PD培養(yǎng)液及PD培養(yǎng)液均有促進孢子萌發(fā)的作用，且蘆筍莖枯病菌在20%蘆筍莖葉煎汁和20%蘆筍莖葉煎汁PDA培養(yǎng)基的產(chǎn)孢量明顯優(yōu)于前人推薦的培養(yǎng)基和常用培養(yǎng)基；不同光域內(nèi)分生孢子器形成有顯著差異，分生孢子經(jīng)2mg/L烯唑醇處理8h后，分生孢子和內(nèi)含物在超微結(jié)構(gòu)上發(fā)生顯著變化。楊迎青等[35]采用培養(yǎng)基平板培養(yǎng)法探討了不同因素（培養(yǎng)基、溫度、光照和碳氮源等）對蘆筍莖枯病菌產(chǎn)分生孢子器和分生孢子產(chǎn)生量的影響。結(jié)果表明，培養(yǎng)基、溫度和光照等因素對蘆筍莖枯病菌產(chǎn)分生孢子器和分生孢子能力的影響較大，一些氮源可顯著增加蘆筍莖枯病菌產(chǎn)分生孢子器和分生孢子的數(shù)量，而碳源對蘆筍莖枯病菌產(chǎn)分生孢子器和分生孢子能力沒有顯著促進作用。

1.4 蘆筍莖枯病菌的分子生物學(xué)鑒定

楊迎青等[11]利用ITS4/ITS5引物擴增了江西、山東、福建、海南、河北等5個省來源蘆筍莖枯病菌菌株的ITSrDNA序列，條帶大小在600bp左右。核苷酸BLAST（NucleotideBLAST）結(jié)果顯示，供試菌株與基因庫（GenBank）中天門冬擬莖點霉的ITSrDNA序列最高相似度為99%，供試菌株在分子生物學(xué)上被鑒定為天門冬擬莖點霉，從分子生物學(xué)角度驗證了形態(tài)學(xué)鑒定的結(jié)果。

2 蘆筍莖枯病菌的生長速率和致病性

2.1 生長速率

不同屬之間、同屬不同種之間的植物病原真菌生長速率各異，甚至同種不同菌株之間的生長速率也不盡相同。探討植物病原真菌同種不同菌株之間生長速率的差異對研究植物病原真菌的擴展以及有針對性地制定防控策略具有重要指導(dǎo)意義[36]。劉克均等[1]比較了江西、山東、江蘇、湖北、福建、浙江等6個省來源蘆筍莖枯病菌菌株的生長速率。結(jié)果表明，江西、山東、江蘇和湖北等4個省來源的蘆筍莖枯病菌菌株菌絲的生長速率較快，平均菌落直徑在培養(yǎng)5d后可達6.8～8.1cm，福建、浙江等2個省來源的菌株平均菌落直徑在培養(yǎng)5d后只有4.0～5.0cm。楊迎青等[11]比較了江西、山東、福建、海南、河北等5個省來源的蘆筍莖枯病菌菌株的菌落形態(tài)。結(jié)果表明，海南省來源菌株的生長最快，平均菌落直徑在培養(yǎng)5d后可以達到8.5cm；江西省和福建省菌株次之，平均菌落直徑在培養(yǎng)5d后為7.6cm；山東省和河北省來源的菌株生長較慢，平均菌落直徑在培養(yǎng)5d后只有5.5cm。此外，YANG等[36]通過試驗證明，江西、山東、福建、河北、海南、山西等6個省蘆筍莖枯病菌菌株的平均菌落直徑和菌絲干質(zhì)量在0.05水平上存在顯著差異。海南省來源菌株HN1～5的平均菌落直徑較大，分布在8.43～8.61cm；江西省來源菌株XT1～5、LT1～3和福建來源菌株FJ1～5次之，平均菌落直徑為7.40～7.60cm；山西省來源菌株SX6的平均菌落直徑最小，在4.34cm。海南省來源菌株HN2的平均菌絲干質(zhì)量最大（0.64g）；福建省來源菌株FJ1～5和海南省來源菌株HN1、HN3～5的平均菌絲干質(zhì)量次之，分布在0.53～0.63g。

2.2 致病性

植物病原真菌所具有的2個基本屬性是寄生性和致病性。致病性作為植物病原真菌的重要性狀之一，一直在持續(xù)不斷地進行遺傳進化，植物病原真菌致病性的進化就是對植物的適應(yīng)和二者共同進化的過程[36]。因此，植物病原真菌不同菌株致病性的明確對開展遺傳育種及有針對性地防控該病害具有極其重要的意義[12]。劉克均等[1]成功在蘆筍莖稈天然培養(yǎng)基上培養(yǎng)了蘆筍莖枯病菌，并從培養(yǎng)基上刮下子座和分生孢子器，置于研缽中加入新鮮蘆筍汁液后研磨，用無菌水稀釋將濃度調(diào)節(jié)到高倍視野中3～4個孢子，蘆筍莖枯病菌的致病力采用分生孢子噴霧接種法進行測定。楊迎青等[12]在PDA培養(yǎng)基平板上采用純培養(yǎng)的方式獲取了蘆筍莖枯病菌分生孢子器，用無菌載玻片將分生孢子器從PDA培養(yǎng)基平板上輕輕刮下，用少量無菌水洗下后轉(zhuǎn)至無菌研磨器中磨碎，經(jīng)無菌3層紗布過濾后通過血球計數(shù)板計數(shù)確定分生孢子懸浮液的濃度，加入定量無菌水調(diào)節(jié)分生孢子濃度到1×106個/mL。同時，YANG等[36]通過比較蘆筍莖枯病菌不同省域來源菌株的致病力，發(fā)現(xiàn)蘆筍莖枯病菌不同菌株間的致病力差異顯著，但與菌株的地域來源無明顯相關(guān)性。

3 蘆筍莖枯病菌的遺傳多態(tài)性

3.1 基于致病力的遺傳多態(tài)性

以感病蘆筍種質(zhì)資源作為受體材料，通過人工接種方法測定蘆筍莖枯病菌不同地域來源菌株的致病力。根據(jù)供試種質(zhì)資源對不同蘆筍莖枯病菌菌株的抗/感性，將其分別轉(zhuǎn)換成0/1表示，0表示抗?。≧），1表示感?。⊿），將相關(guān)數(shù)據(jù)匯總得到“0/1”表。選用軟件NTsys-PC1.8的SAHNclustering程序，利用非加權(quán)成組配對算術(shù)平均法（Unweightedpair-groupmethodwitharithmeticmeans，UPGMA），計算并獲得蘆筍莖枯病菌不同地域來源菌株的相似性系數(shù)矩陣和聚類圖。同時也可以通過獲得矩陣和聚類圖對不同地域來源蘆筍莖枯病菌菌株的致病力分化規(guī)律加以研究和分析，以明確蘆筍莖枯病菌不同地域來源菌株致病性遺傳規(guī)律[36-37]。

YANG等[36]研究了江西、山東、福建、山西、海南、河北等6個省來源蘆筍莖枯病菌菌株的致病力分化規(guī)律，結(jié)果顯示，不同菌株的致病力在0.05水平上差異顯著，菌株FJ2的致病力最強（平均病情指數(shù)為75.33），菌株HN2和SD4次之（平均病情指數(shù)分別為74.07和73.88），SD5的致病力最弱（平均病情指數(shù)為42.16）。未發(fā)現(xiàn)蘆筍莖枯病菌菌株的致病力分化與菌株來源呈現(xiàn)出顯著相關(guān)的規(guī)律，具體相關(guān)性尚待進一步深入研究。

陳建等[37]從江西、山東、福建、山西、海南、河北等6個省來源的蘆筍莖枯病菌菌株中，每省隨機選取2個菌株作為代表性菌株，共選取了12個代表性菌株，采用分生孢子噴霧接種法將12個菌株依次接種到31個供試蘆筍種質(zhì)資源的1月齡幼苗（株高10～25cm）上，暗室中利用噴霧法將相對濕度保持在90%～100%，培養(yǎng)1～2d后轉(zhuǎn)到25～28℃智能溫室內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，用加濕器保持相對濕度在90%～100%，10～15d后按照苗期病情7級分級標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查和統(tǒng)計病級，并計算病情指數(shù)。根據(jù)31個供試蘆筍種質(zhì)資源對莖枯病的抗/感性，將其轉(zhuǎn)換成0/1表。用UPGMA法分析了31個蘆筍種質(zhì)資源的抗病性并獲得了基于31個蘆筍種質(zhì)資源對莖枯病抗/感性的聚類圖，將所有供試蘆筍種質(zhì)資源劃分為4個組群。4個組群中每個組群選取1個種質(zhì)資源作為鑒別寄主。陳建等[37]的研究結(jié)果不僅為蘆筍莖枯病菌遺傳多態(tài)性的研究提供了理論依據(jù)，而且印證了其構(gòu)建鑒別寄主的穩(wěn)定性和可操作性，為進一步研究蘆筍莖枯病病菌和蘆筍品種之間的基因互作及蘆筍種質(zhì)資源抗莖枯病的遺傳育種奠定了基礎(chǔ)。

3.2 基于rDNAITS序列的遺傳多態(tài)性

楊迎青等[11]探討了蘆筍莖枯病菌不同省份來源菌株的系統(tǒng)進化規(guī)律。通過聚類，江西、山東、福建、河北和海南等5個省來源的菌株被劃分為2大組群：山東、江西、福建和海南等4個省來源的菌株聚為1個組群，河北省來源菌株單獨聚為1個組群。說明蘆筍莖枯病菌在省域間呈現(xiàn)出顯著的遺傳分化，在分子水平上證明了蘆筍莖枯病菌存在地域分化。擬莖點霉屬（Phomopsis）、鐮刀菌屬（Fusarium）、炭疽菌屬（Colletotrichum）、青霉屬（Penicillium）、木霉屬（Trichoderma）、曲霉屬（Aspergillus）和莖點霉屬（Phoma）等屬真菌分別按屬獨立聚為1個組群，說明同屬植物病原真菌間的rDNAITS較為相近，其親緣關(guān)系較近；與天門冬擬莖點霉親緣關(guān)系最近的是葉下珠生擬莖點霉（P.phyllanthicola），屬于擬莖點霉屬，從而證實了蘆筍莖枯病的病原菌應(yīng)歸屬于擬莖點霉屬，而非莖點霉屬。

3.3 基于ISSR分子標(biāo)記技術(shù)的遺傳多態(tài)性

簡單序列重復(fù)區(qū)間擴增多態(tài)性（Inter-simplesequencerepeat，ISSR）是在簡單重復(fù)序列（SSR）基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，由于其眾多優(yōu)點越來越受到科技工作者的歡迎，它是由加拿大蒙特利爾大學(xué)的ZIETKIEWICZ等在1994年提出的[38]?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于系統(tǒng)進化分析、遺傳多樣性與群體遺傳結(jié)構(gòu)分析、基因定位、遺傳作圖、分子標(biāo)記輔助育種、植物種質(zhì)資源鑒定等多方面研究中[39-40]。

YANG等[36]從哥倫比亞大學(xué)公布的100條ISSR引物中篩選出了4條引物，這4條引物在蘆筍莖枯病菌的ISSR-PCR擴增中表現(xiàn)出較強的特異性和較好的可重復(fù)性。利用篩選出的4條引物對蘆筍莖枯病菌6個省來源菌株進行了ISSR-PCR擴增，獲得了DNA指紋圖譜，其片段在300～3500bp。通過聚類分析數(shù)據(jù)顯示，蘆筍莖枯病菌鄰近省份來源菌株呈現(xiàn)出較近的親緣關(guān)系，證明了蘆筍莖枯病菌系統(tǒng)演化與不同地域環(huán)境條件存在相適應(yīng)的遺傳進化規(guī)律。

4 前景與展望

近年來，越來越多的學(xué)者認(rèn)識到植物病原真菌生物學(xué)特性和致病性等在遺傳育種中的重要地位。蘆筍莖枯病在全球范圍內(nèi)是一種區(qū)域性分布的毀滅性病害，俗稱“蘆筍癌癥”。國內(nèi)外一些學(xué)者著手從蘆筍莖枯病菌分類地位、生物學(xué)特性及遺傳多態(tài)性等方面展開了深入的研究。目前對蘆筍莖枯病菌的生物學(xué)領(lǐng)域的研究大多圍繞菌落形態(tài)、生長速率、分生孢子器和分生孢子產(chǎn)生量等方面展開，但蘆筍莖枯病菌生物學(xué)相關(guān)調(diào)控基因的克隆、功能及表達等方面的研究尚需深入。此外，蘆筍莖枯病菌遺傳多態(tài)性方面的研究還不夠深入，一些新型研究方法尚未在蘆筍莖枯病菌遺傳多態(tài)性的研究中得以應(yīng)用和驗證?？傊J筍莖枯病菌生物學(xué)特性、致病性和遺傳多態(tài)性等方面的探討，對于有針對性地防控蘆筍莖枯病及指導(dǎo)遺傳育種具有重要的理論與實踐意義，充分展現(xiàn)了其廣闊的應(yīng)用前景。