田蕊， 張華， 黃玫紅， 邵振啟， 李喜煥， 張彩英

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，教育部華北作物種質(zhì)資源研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 保定 071001）

大豆是重要的糧食和油料作物，是植物蛋白和食用油的主要來(lái)源[1]。干旱嚴(yán)重影響大豆生長(zhǎng)發(fā)育，干旱條件下大豆植株生長(zhǎng)緩慢，葉片萎蔫，生物量降低，以至減產(chǎn)甚至絕收。葉片是大豆植株重要光合器官，其葉綠素含量與光合速率及產(chǎn)量密切相關(guān)，易受干旱影響，是反映品種抗旱性的重要指標(biāo)[2]。已有研究對(duì)作物干旱條件下的葉綠素含量進(jìn)行定位分析，沈波等[3]利用水稻重組自交系（recombinant inbred lines， RIL）群體，在水分脅迫和正常條件下對(duì)葉綠素含量進(jìn)行連鎖分析，定位到13 個(gè)控制葉綠素含量的數(shù)量性狀基因座（quantitative trait locus，QTL），其中水分脅迫條件下6 個(gè)，解釋表型變異4.74%～19.86%；胡頌平等[4]以水稻F9重組自交系（珍汕97B×IRAT109）為材料，在正常與水分脅迫下對(duì)葉綠素含量進(jìn)行定位，檢測(cè)到13 個(gè)葉綠素含量QTLs，其中正常條件下檢測(cè)到7個(gè)，聯(lián)合貢獻(xiàn)率為56.19%；干旱處理下檢測(cè)到6 個(gè)，聯(lián)合貢獻(xiàn)率為47.39%。Kumar 等[5]利用C306×HUW206 構(gòu)建的小麥RIL 群體在干旱條件下定位到1 個(gè)控制葉綠素含量QTL（QChl.ksu-3B），該QTL 解釋表型變異的14.2%。Peleg 等[6]以硬粒小麥和野生二粒小麥構(gòu)建的RIL 群體為材料，在干旱及正常水分條件下，對(duì)葉綠素含量進(jìn)行QTL定位，獲得8個(gè)葉綠素含量QTLs，解釋表型變異的2%～10%。

崔世友等[7]以‘波高’ב南農(nóng)94-156’構(gòu)建RIL群體為材料，在4 個(gè)不同生育期對(duì)大豆葉綠素含量進(jìn)行連鎖分析，定位到與葉綠素含量相關(guān)的10 個(gè)位點(diǎn)，分別位于1、7、12、13、18 和19 號(hào)染色體，解釋表型變異的6.9%～23.4%。Fang 等[8]利用809 份大豆自然群體重測(cè)序，對(duì)葉綠素含量進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，獲得9 個(gè)大豆葉綠素含量相關(guān)位點(diǎn)，分別位于11、13、18、20 號(hào)染色體。Kato 等[9]利用‘Minsoy’בT225H’構(gòu)建的F2:3家系在14 及17 號(hào)染色體定位到2 個(gè)葉綠素相關(guān)位點(diǎn)。由此可見(jiàn)，相較其他農(nóng)作物，目前大豆多就正常水分條件下葉綠素含量進(jìn)行研究。因此，本研究以199 份大豆品種資源構(gòu)建的自然群體為材料，在干旱和正常澆水條件下，測(cè)定其葉綠素含量，并計(jì)算抗旱指數(shù)，結(jié)合20×重測(cè)序基因型數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，發(fā)掘基于葉綠素含量的抗旱遺傳位點(diǎn)和相關(guān)基因，為大豆品種抗旱分子遺傳改良提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

以本課題組前期構(gòu)建的大豆自然群體為材料，包括152個(gè)育成品種和47個(gè)地方品種[10]。

1.2 大豆種植方法

將蛭石和土以體積比1∶1 進(jìn)行混合，裝入花盆（直徑35 cm，高40 cm，花盆下鋪塑料布），每盆裝土20 kg，施復(fù)合肥5 g，澆水6 L；當(dāng)基質(zhì)含水量為20%時(shí)播種，每盆播種20 粒；待2 片真葉完全展開(kāi)時(shí)定苗，每盆保留10株。試驗(yàn)分別于2021年6月（E1）、7月（E2）和8月（E3）在河北農(nóng)業(yè)大學(xué)作物育種中心試驗(yàn)基地旱棚內(nèi)進(jìn)行，設(shè)置對(duì)照組和干旱脅迫處理組，2 次重復(fù)，其中干旱脅迫處理組于大豆V3 期開(kāi)始進(jìn)行干旱處理，對(duì)照組正常澆水，期間利用托普云農(nóng)土壤水分含量測(cè)定儀對(duì)土壤水分含量進(jìn)行測(cè)定，待干旱處理組的土壤含水量低于10%（植株受到干旱脅迫）時(shí)測(cè)定葉綠素含量[11-12]。

1.3 葉綠素含量測(cè)定

利用葉綠素儀SPAD-502Plus 分別測(cè)定干旱處理組和對(duì)照組的葉綠素含量。每盆隨機(jī)選擇3 個(gè)單株，分別測(cè)定其最上部完全展開(kāi)三出復(fù)葉的葉綠素含量，其中每個(gè)葉片選擇非葉脈處測(cè)定3次。

1.4 葉綠素含量抗旱指數(shù)計(jì)算

利用干旱處理及正常澆水條件下的葉綠素含量計(jì)算抗旱指數(shù)（drought resistance index，DRI），公式如下。

式中，CCD為干旱條件下葉綠素含量；CCW為正常條件下葉綠素含量；CCDM為干旱條件下供試大豆自然群體葉綠素含量平均值。

1.5 葉綠素抗旱指數(shù)遺傳變異分析方法

利用SPSS 25.0 對(duì)基于葉綠素含量計(jì)算的抗旱指數(shù)進(jìn)行描述統(tǒng)計(jì)及方差分析，利用公式計(jì)算其廣義遺傳力（broad-sense heritability，h2）[10]。

1.6 葉綠素抗旱指數(shù)關(guān)聯(lián)分析方法

利用GEMMA（genome-wide efficient mixed model association algorithm）軟件，采用混合線性模型（mixed linear model, MLM）對(duì)葉綠素抗旱指數(shù)進(jìn)行全基因組關(guān)聯(lián)分析（genome-wide association study, GWAS），其中供試大豆自然群體的基因型數(shù)據(jù)包含566萬(wàn)個(gè)單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）標(biāo)記[10]；此外，參照已有報(bào)道根據(jù)LD（linkage disequilibrium）衰減距離，同一LD區(qū)域顯著關(guān)聯(lián)SNP視為1個(gè)位點(diǎn)[10,13]。

1.7 候選基因的篩選

在顯著關(guān)聯(lián)SNP 上、下游100 kb 篩選候選基因，結(jié)合大豆公共數(shù)據(jù)庫(kù)Soybase（https://www.soybase.org/）注釋基因功能，初步篩選候選基因；然后利用已有大豆干旱脅迫條件下的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)[14]，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化處理分析各基因表達(dá)量，根據(jù)基因差異表達(dá)結(jié)果確定候選基因。

2 結(jié)果與分析

2.1 大豆自然群體葉綠素含量抗旱指數(shù)遺傳變異分析

對(duì)199 份供試大豆品種資源進(jìn)行葉綠素含量抗旱指數(shù)方差分析（表1）發(fā)現(xiàn)，每個(gè)環(huán)境條件下的供試品種資源抗旱指數(shù)均具有極顯著差異，說(shuō)明干旱脅迫處理有效，品種資源抗旱能力存在較大差異。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同環(huán)境下的葉綠素含量抗旱指數(shù)也存在差別，其平均值由大到小依次為E3、E2、E1，變化范圍為1.35～1.48。進(jìn)一步分析不同品種資源葉綠素抗旱指數(shù)遺傳變異（表1）發(fā)現(xiàn)，變異系數(shù)為8.71%～11.64%，以E2 環(huán)境條件下的變異系數(shù)最大。分析葉綠素含量抗旱指數(shù)廣義遺傳力發(fā)現(xiàn)，其值為81.44%，表明主要由遺傳因素決定。另外，分析葉綠素含量抗旱指數(shù)的偏度和峰度系數(shù)發(fā)現(xiàn)，絕對(duì)值均趨近于0，說(shuō)明葉綠素抗旱指數(shù)屬多基因控制數(shù)量性狀（圖1）。

表1 大豆自然群體抗旱指數(shù)遺傳變異分析Table 1 Genetic variation analysis of drought resistance index in soybean natural population

2.2 大豆葉綠素含量抗旱指數(shù)GWAS分析

對(duì)3 種環(huán)境條件下的葉綠素抗旱指數(shù)及其平均值、最佳線性無(wú)偏預(yù)測(cè)（best linear unbiased prediction，BLUP）值進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析（圖1）發(fā)現(xiàn)，關(guān)聯(lián)到237 個(gè)SNPs，分別位于1、2、3、7、10、16、17 及18 號(hào)染色體，其中，11 個(gè)SNPs 位于基因外顯子并引起非同義突變，28 個(gè)位于基因上游或下游，2 個(gè)位于基因3’UTR，這些SNPs位點(diǎn)可能影響基因功能或調(diào)控基因表達(dá)。此外，依據(jù)LD 衰減距離（100 kb）可將237 個(gè)SNPs 劃分為18 個(gè)位點(diǎn)，其中位點(diǎn)1、5、6、11、12、13、14、15、17、18 在E1、E2、E3、平均值及BLUP 值中均被關(guān)聯(lián)到，屬多環(huán)境關(guān)聯(lián)穩(wěn)定位點(diǎn)（表2）。

進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在16號(hào)染色體關(guān)聯(lián)到181個(gè)SNPs（分布于Locus 10～Locus 14），占總SNPs 的76.37%，其中4 個(gè)位點(diǎn)在上述3 種環(huán)境以及平均值和BLUP 值同時(shí)關(guān)聯(lián)到，說(shuō)明這4 個(gè)位點(diǎn)不僅是多環(huán)境穩(wěn)定位點(diǎn)，而且是控制葉綠素抗旱指數(shù)熱點(diǎn)區(qū)域；并且，上述181 個(gè)SNPs 中，49 個(gè)位于基因內(nèi)，其中9 個(gè)在內(nèi)含子，17 個(gè)在外顯子（6 個(gè)屬于非同義突變，9 個(gè)屬于同義突變，2 個(gè)屬于提前終止），11 個(gè)在基因上游，10 個(gè)在下游，2 個(gè)在3’UTR。此外，在10 號(hào)染色體關(guān)聯(lián)到27 個(gè)SNPs（位于Locus 5～Locus 9），其中Locus 5 和Locus 6屬多環(huán)境穩(wěn)定關(guān)聯(lián)位點(diǎn)，且在上述27 個(gè)SNPs 中，2 個(gè)位于基因上游或下游，2 個(gè)在內(nèi)含子區(qū)域。

2.3 葉綠素抗旱指數(shù)顯著關(guān)聯(lián)SNP驗(yàn)證

為驗(yàn)證顯著關(guān)聯(lián)SNPs及其位點(diǎn)準(zhǔn)確性，選取18 個(gè)位點(diǎn)的最顯著P值關(guān)聯(lián)SNPs，對(duì)參試品種含有的葉綠素抗旱指數(shù)優(yōu)異等位SNPs 數(shù)目及其抗旱指數(shù)進(jìn)行回歸分析，結(jié)果（圖2）表明，隨優(yōu)異等位變異數(shù)目增加，葉綠素抗旱指數(shù)逐漸增加（R2=0.76）。依據(jù)參試品種葉綠素抗旱指數(shù)，分別選取高、低極端品種各5個(gè)，對(duì)每個(gè)品種含有的18個(gè)位點(diǎn)中的11 個(gè)純合SNPs 數(shù)目進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表3），5個(gè)抗旱品種中，3個(gè)具有所有的11個(gè)優(yōu)異等位變異，另2 個(gè)分別含有9 和10 個(gè)優(yōu)異等位變異，而5個(gè)敏感品種則不含任何優(yōu)異等位變異。

圖2 大豆葉綠素抗旱指數(shù)與優(yōu)異等位變異數(shù)量回歸分析Fig. 2 Regression analysis of drought resistance index and elite allele numbers of soybean accessions

表3 大豆抗旱特異種質(zhì)顯著關(guān)聯(lián)SNP分析Table 3 Analysis of associated SNPs in different soybean accessions with different drought resistance index

2.4 大豆抗旱相關(guān)基因發(fā)掘

在顯著關(guān)聯(lián)SNPs上、下游100 kb范圍內(nèi)尋找到57 個(gè)候選基因（表4），其中10 個(gè)基因外顯子存在等位變異，10 個(gè)基因內(nèi)含子存在等位變異，15 個(gè)基因上游或下游存在等位變異，2 個(gè)基因3’UTR存在等位變異?；诖耍鶕?jù)Soybase網(wǎng)站（https://www.soybase.org）Wm82 基因組注釋信息，從57 個(gè)候選基因中初步篩選出16 個(gè)相關(guān)基因，分別參與植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白磷酸化、抗旱反應(yīng)等；利用已有大豆轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)[14]分析候選基因表達(dá)量（圖3），最終篩選出3 個(gè)抗旱相關(guān)基因，即Glyma.16G063600、Glyma.10G007000和Glyma.17G143900。

圖3 大豆抗旱候選基因表達(dá)分析Fig. 3 Expressions of candidate genes for soybean drought tolerance

表4 大豆抗旱指數(shù)候選基因Table 4 Candidate genes of drought resistance index in soybean

Glyma.16G063600存在1 個(gè)非同義突變（C/A，天冬氨酸/谷氨酸）、3 個(gè)同義突變、2 個(gè)下游SNPs、17 個(gè)基因間SNPs（圖4）。該基因編碼F-box 蛋白，可與小熱激蛋白結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控植物耐旱性[15]。依據(jù)已發(fā)表轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)[14]發(fā)現(xiàn)，該基因受干旱脅迫誘導(dǎo)顯著上調(diào)表達(dá)。利用該基因的非同義突變分析供試群體發(fā)現(xiàn)，含有優(yōu)異等位變異A與含有非優(yōu)異等位變異C的品種間的葉綠素抗旱指數(shù)差異極顯著。

圖4 候選基因Glyma.16G063600分析Fig. 4 Identification of candidate gene Glyma.16G063600

Glyma.10G007000編碼AP2-EREBP 轉(zhuǎn)錄因子。AP2/EREBP 轉(zhuǎn)錄因子含有1 個(gè)或多個(gè)AP2/ERF 結(jié)構(gòu)域，該類轉(zhuǎn)錄因子可響應(yīng)植物鹽、旱、冷等多種非生物脅迫[16]。轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，干旱脅迫條件下，Glyma.10G007000表達(dá)顯著上調(diào)；利用其上游SNP 分析群體發(fā)現(xiàn)，含有優(yōu)異等位變異的品種其葉綠素抗旱指數(shù)顯著高于含有非優(yōu)異等位變異的品種（圖5）。

圖5 候選基因Glyma.10G007000分析Fig. 5 Identification of candidate gene Glyma.10G007000

Glyma.17G143900編碼AP2/ERF 結(jié)構(gòu)域蛋白。利用基因間最顯著SNP 分析群體發(fā)現(xiàn)，含有優(yōu)異等位變異T的品種其葉綠素抗旱指數(shù)顯著高于含有非優(yōu)異等位變異C的品種（圖6）。

圖6 候選基因Glyma.17G143900分析Fig. 6 Identification of candidate gene Glyma.17G143900

2.5 大豆抗旱優(yōu)異基因型篩選

利用Glyma.10G007000、Glyma.16G063600及Glyma.17G143900等位變異，對(duì)供試品種資源進(jìn)行分析，結(jié)果（表5）發(fā)現(xiàn)，可將其分為8種類型，其中基因型Ⅶ（AAT）含3 個(gè)優(yōu)異等位變異，其葉綠素抗旱指數(shù)最高；基因型Ⅳ（CAT）、基因型Ⅵ（ACT）及基因型Ⅷ（AAC）含有2 個(gè)優(yōu)異等位變異，葉綠素抗旱指數(shù)次之；而不含任何優(yōu)異等位變異的基因型Ⅰ（CCC）葉綠素抗旱指數(shù)最低，說(shuō)明3 個(gè)候選基因與干旱脅迫下的抗旱指數(shù)相關(guān)，為大豆抗旱育種提供了基礎(chǔ)材料。

表5 供試大豆自然群體基于入選抗旱基因等位變異分析Table 5 Analysis of soybean natural population based on the allele variations of three selected causal genes

3 討論

葉綠素是光能轉(zhuǎn)化為化學(xué)能的關(guān)鍵色素[17]。對(duì)干旱條件下的葉綠素含量進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，隨干旱脅迫增加，葉綠素含量呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，說(shuō)明葉綠素含量受干旱脅迫的影響[18-19]?？购抵笖?shù)是指性狀抗旱系數(shù)與干旱條件下該性狀指數(shù)的乘積[20]。劉桂茹等[21]對(duì)小麥抗旱系數(shù)、干旱敏感系數(shù)、單株產(chǎn)量降低指數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，抗旱指數(shù)能反應(yīng)品種的抗旱性，可作為小麥抗旱篩選的重要指標(biāo)。楊玉敏等[22]以100 份小麥資源為材料，對(duì)抗旱系數(shù)、抗旱指數(shù)、耐旱指數(shù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，抗旱指數(shù)綜合考慮了各品種在干旱條件下的敏感度和干旱脅迫下目標(biāo)性狀在整個(gè)群體中的地位，比較適合作為作物抗旱性評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)?；诖?，本研究利用干旱處理和正常澆水處理下的葉綠素含量計(jì)算抗旱指數(shù)，用于大豆品種資源抗旱種質(zhì)篩選以及遺傳位點(diǎn)與候選基因挖掘；并依據(jù)群體供試品種資源的葉綠素抗旱指數(shù)，篩選出優(yōu)異種質(zhì)5 份，分別是‘冀10B5’‘滄0627’‘邯15-685’‘冀11B9’和‘HN1030’，其抗旱指數(shù)為1.70～1.83；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，其含有9～11 個(gè)優(yōu)異等位變異，且均含有3 個(gè)入選相關(guān)基因的優(yōu)異等位變異，為大豆抗旱育種奠定了重要物質(zhì)基礎(chǔ)。

目前，有關(guān)水稻、小麥等作物的干旱脅迫葉綠素含量遺傳位點(diǎn)發(fā)掘研究已有報(bào)道，但大豆中開(kāi)展相關(guān)研究較少[23-26]。本研究利用SPAD-502Plus測(cè)定干旱及正常條件下供試大豆自然群體葉綠素含量，計(jì)算抗旱指數(shù)，并依據(jù)本團(tuán)隊(duì)前期重測(cè)序數(shù)據(jù)對(duì)群體的葉綠素含量抗旱指數(shù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果獲得18 個(gè)位點(diǎn)，通過(guò)與已有研究進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，Locus3 與李廣軍等[27]定位到的葉綠素含量QTLLeaflet chlorophyll 1-4重合，其加性效應(yīng)值為0.97，解釋表型變異5%。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，本研究定位到的Locus15與Du等[28]定位到的干旱敏感指數(shù)相關(guān)QTLDrought index 1-9距離700 kb，該QTL 加性效應(yīng)值為0.128 1，可解釋表型變異6.42%；且QTLDrought index 1-5與本研究中的Locus10 相距4.2 Mb，該QTL 解釋表型變異9.36%。另外，本研究獲得的Locus3 與Carpentieri 等[29]定位到的耐旱相關(guān)QTLDrought tolerance 6-1及Shi 等[30]定位到的葉綠素相關(guān)QTLLeaflet chlorophyll 3-1相距2.2 Mb。上述結(jié)果證實(shí)了本研究結(jié)果的可靠性，為大豆抗旱遺傳改良提供了選擇標(biāo)記。

為篩選大豆抗旱相關(guān)基因，依據(jù)關(guān)聯(lián)區(qū)域內(nèi)的基因SNP突變、基因注釋及其表達(dá)量篩選出3個(gè)抗旱相關(guān)基因，其中候選基因Glyma.16G063600編碼F-box 蛋白，該類蛋白既可調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育，也可對(duì)植物多種生物及非生物脅迫作出響應(yīng)[31-32]。Qu 等[33]發(fā)現(xiàn)，與擬南芥F-box 基因突變體fof2相比，過(guò)表達(dá)FOF2株系表現(xiàn)為ABA 含量增加及耐旱性提高；Lim 等[34]發(fā)現(xiàn)，辣椒F-box 類基因CaDIF1沉默植株表現(xiàn)出對(duì)干旱脅迫的敏感性，而過(guò)表達(dá)CaDIF1植株則表現(xiàn)為耐旱；Xu 等[15]發(fā)現(xiàn)，在干旱條件下，過(guò)表達(dá)大豆F-box 類基因GmFBL144可提高擬南芥過(guò)氧化氫及丙二醛含量。本研究篩選的F-box蛋白基因Glyma.16G063600與上述已報(bào)道的GmFBL144屬同一亞族，說(shuō)明其可能在大豆抵御干旱脅迫逆境中具有重要作用。

本研究還篩選出AP2/EREBP（APETALA2/ethylene-responsive element binding proteins）轉(zhuǎn)錄因子家族基因Glyma.10G007000，該類轉(zhuǎn)錄因子通常包含1 或2 個(gè)AP2/ERF 結(jié)構(gòu)域，依據(jù)結(jié)構(gòu)域數(shù)目，可將其分為2 個(gè)亞族，即EREBP 亞族（包含1 個(gè)AP2/ERF 結(jié)構(gòu)域）和AP2 亞族（包含2 個(gè)AP2/ERF 結(jié)構(gòu)域）；AP2 亞族可調(diào)控花、胚珠及種子發(fā)育過(guò)程，EREBP 亞族（包括DREB 和ERF 類）參與植物激素調(diào)節(jié)，并響應(yīng)非生物脅迫[16]。研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)蘋果AP2/EREBP 基因MdSHINE2可增加擬南芥植株莖和葉表面蠟質(zhì)，并提高其抗旱性[35]。大豆DREB 同源基因GmDREB2在干旱、高鹽及低溫等非生物脅迫條件下被誘導(dǎo)表達(dá)，且過(guò)表達(dá)該基因會(huì)激活下游轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)而提高抗旱性[36]。因此，推斷AP2/EREBP 轉(zhuǎn)錄因子基因Glyma.10G007000可能參與大豆抗旱反應(yīng)。

另外，本研究還獲得了諸如MYB 轉(zhuǎn)錄因子、Dof （DNA binding with one finger）結(jié)構(gòu)域蛋白、CCR-4（carbon catabolite repressor 4）、LRR（Leucinerich repeat）候選基因，已有研究發(fā)現(xiàn)這些蛋白均可響應(yīng)植物干旱脅迫，Cominelli 等[37]發(fā)現(xiàn)，AtMYB60通過(guò)調(diào)控葉片保衛(wèi)細(xì)胞的開(kāi)關(guān)影響植物抗旱；Ma 等[38]在干旱脅迫下對(duì)白菜9 個(gè)Dof 亞族基因表達(dá)模式進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，不同亞族Dof基因均可響應(yīng)干旱脅迫；Li 等[39]發(fā)現(xiàn)，大豆LRR-RLK基因GmSARK可通過(guò)調(diào)控葉綠素降解基因Gmlls1及葉綠素合成基因Gmgtr1調(diào)控葉片衰老，說(shuō)明該類基因位于Gmlls1和Gmgtr1上游，可間接調(diào)控葉綠素合成或降解。因此，本研究篩選出的這些候選基因可作為今后開(kāi)展大豆抗旱分子育種研究的重要目標(biāo)基因。