郭靈生，蒙 琦

（1.平?jīng)雎殬I(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅平?jīng)?744000；2.甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅平?jīng)?744000）

雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起的一種高度接觸性呼吸道傳染病，臨床上以雞呼吸困難、咳嗽等癥狀為主［1］。該病毒主要以破壞免疫系統(tǒng)為主，不僅降低肉雞和蛋雞生產(chǎn)性能，群發(fā)時還會引起雞大面積死亡，嚴(yán)重影響?zhàn)B殖戶的生產(chǎn)效益，對養(yǎng)殖業(yè)造成了較大的經(jīng)濟損失［2］。雞傳染性支氣管炎在疫苗預(yù)防方面受保護范圍局限，在治療方面西藥又易產(chǎn)生耐藥性等缺點，亟需以新的途徑或藥物來替代。以中草藥為主的新型抗病藥物在疾病防治方面起到了重要作用，其廣譜性、低毒低殘留和經(jīng)濟實惠等優(yōu)點得到了越來越多學(xué)者的青睞［3］，尤其在抗菌抗病毒方面表現(xiàn)出來的優(yōu)勢有目共睹。

本研究以IBV 為研究對象，根據(jù)中草藥組方原則進行合理組方，通過體外抗病毒試驗和體內(nèi)細胞因子變化水平篩選出了抗IBV 的中草藥，可為后期開發(fā)中草藥制劑抗雞傳染性支氣管炎提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 中草藥組方、病毒和試驗動物

1）中草藥組方Ⅰ。板藍根10 g、連翹8 g、射干10 g、魚腥草10 g、炒白術(shù)8 g、桔梗10 g、黃芪10 g。

2）中草藥組方Ⅱ。板藍根10 g、連翹10 g、射干5 g、魚腥草10 g、桔梗6 g、杏仁10 g、茯苓8 g。

3）中草藥組方Ⅲ。板藍根10 g、連翹8 g、射干10 g、魚腥草10 g、馬兜鈴8 g、炒白術(shù)10 g、硼砂3 g。

以上方劑用2 倍蒸餾水浸泡0.5 h 左右，先用大火煮沸后再以小火煎煮約2 h，后用大火將藥液濃縮至1 g/mL 置于4 ℃?zhèn)溆?。所有中草藥均購自平?jīng)鍪兄嗅t(yī)院。

1.1.2 病毒 IBV 病毒液由平?jīng)雎殬I(yè)技術(shù)學(xué)院實驗室保存，TCID50為10-6.45/0.1 mL。

1.1.3 試驗動物 SPF 雞胚由平?jīng)雎殬I(yè)技術(shù)學(xué)院實驗室孵育，飼養(yǎng)至2 周齡。

1.2 方法

1.2.1 中草藥組方對雞感染IBV 的保護作用 將100 羽2 周齡的SPF 雞隨機分成5 組，每組20 羽。分別設(shè)定為空白對照組、IBV 病毒對照組、中草藥組方Ⅰ組、中草藥組方Ⅱ組和中草藥組方Ⅲ組。IBV 病毒對照組和中草藥組方組對雛雞滴鼻0.2 mL 病毒液，每日觀察發(fā)病情況，每組發(fā)病數(shù)達到10 羽以上開始飲水給藥，每羽每次按照1 mL，2 次/d 飲水給藥，試驗期內(nèi)飲水和飼料飼喂量相同，從試驗第1 天開始記錄每組雞的死亡數(shù)量和時間，按照百分率計算分析。

1.2.2 中草藥組方對感染IBV 雛雞IFN-γ、IgG 和IL-2 含量的影響 分別在接毒后第3 天、第6 天、第9 天，每組隨機抽取5 羽雛雞，翅下采血2 mL，2 500 r/min 離心15 min 分離血清，按照IFN-γ、IgG和IL-2 試劑盒操作說明書進行檢測，利用酶標(biāo)儀測血清中IFN-γ、IgG 和IL-2 的吸光度（OD值）。以此計算這3 種細胞因子的質(zhì)量濃度，用SPSS17.0 軟件進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 中草藥組方對感染IBV 雞的保護效果

如表1 所示，中草藥組存活率均高于IBV 病毒對照組，且中草藥組存活率都在60%及以上，3 組中草藥間相比，中草藥組方Ⅱ組較其他2 組存活率高，為85%，空白對照組雞存活率為100%。

表1 中草藥組方對雞感染IBV 的保護作用

2.2 中草藥組方對感染IBV 雞γ 干擾素（IFN-γ）含量的影響

由圖1 可知，感染IBV 后在試驗第3 天，各組間的IFN-γ 含量無顯著差異（P＞0.05），在第6 天和第9天，中草藥組和空白對照組IFN-γ 含量顯著高于IBV 病毒對照組（P＜0.05），且在第9 天IFN-γ 含量高于第6 天，但中草藥組間無顯著差異（P＞0.05）。

2.3 中草藥組方對感染IBV 雞免疫球蛋白G（IgG）含量的影響

由圖2 可知，感染IBV 后于試驗第3 天測得雞血液中IgG 含量，各組間的IgG 含量無顯著差異（P＞0.05），在試驗第6 天和第9 天，測得中草藥組方組和空白對照組IgG 含量顯著高于IBV 病毒對照組（P＜0.05），但各組間差異不顯著（P＞0.05），在試驗第9天，中草藥組方Ⅱ組IgG 含量極顯著高于IBV 病毒對照組（P＜0.01），且顯著高于空白對照組和其他中草藥組（P＜0.05）。

圖2 中草藥組方對感染IBV 雞免疫球蛋白G（IgG）含量的影響

2.4 中草藥組方對感染IBV 雞白細胞介素2（IL-2）含量的影響

由圖3 可知，雛雞感染IBV 后第3 天和第6 天各組間IL-2 含量無顯著差異（P＞0.05），但與IBV 病毒對照組相比，中草藥組方組IL-2 含量在逐漸升高。在試驗第9 天，中草藥組方Ⅱ組IL-2 含量顯著高于其他各組（P＜0.05）。

圖3 中草藥組方對感染IBV 雞白細胞介素2（IL-2）含量的影響

3 小結(jié)與討論

試驗結(jié)果表明，所用復(fù)方中草藥具有明顯優(yōu)勢，與IBV 病毒對照組相比，雛雞最高存活率高達85%，最低存活率也達60%，說明中草藥合理組方在一定程度上能殺滅病毒。

IFN-γ 具有廣泛的生物學(xué)活性，在體液中大量分泌，主要起到抗病毒、抗腫瘤和進行免疫調(diào)節(jié)等作用，當(dāng)病毒入侵時能保護正常細胞受到感染，調(diào)節(jié)體液免疫［4］。本研究發(fā)現(xiàn)，中草藥組方有持續(xù)誘生IFN-γ 的作用，開始試驗時，IFN-γ 含量無明顯變化，第6 天中草藥組IFN-γ 含量明顯高于IBV 病毒對照組，說明本研究的中草藥復(fù)方制劑具有抗病毒作用。

IgG 主要由免疫器官和一些漿細胞合成和分泌，以單體形式存在［5］。當(dāng)機體發(fā)生體液免疫時，免疫球蛋白中的IgG 會大量產(chǎn)生，是血清中含量最高的抗體成分，約占血清總Ig 的75%［6］。IgG 以小分子蛋白大量分布于動物體內(nèi)，相比于其他免疫球蛋白更容易穿透毛細血管而起到抗病毒感染作用［5］。該試驗表明，試驗后期中草藥組方Ⅱ中IgG 的含量與IBV 病毒對照組、空白對照組差異顯著，說明該復(fù)方中草藥對IgG 有較好的誘生作用。

白細胞介素家族成員較多，而由T 細胞分泌的IL-2 在免疫應(yīng)答中主要提高機體增強免疫水平，起到抗病毒作用［7］。IBV 在破壞機體免疫系統(tǒng)時，IL-2會在體液中增殖發(fā)揮作用。試驗發(fā)現(xiàn)，在各時期內(nèi)，與IBV 病毒對照組相比，中草藥組和空白對照組IL-2 的含量水平在逐漸上升，且中草藥組方Ⅱ組在第9天顯著高于IBV 病毒對照組，說明中草藥組方Ⅱ組在激發(fā)雞T 細胞發(fā)揮細胞免疫方面表現(xiàn)出了很好的作用。

板藍根、連翹、射干、魚腥草和桔梗等合理組方能降低雞傳染性支氣管炎的死亡率，同時能明顯提高雞血液中的免疫水平，起到抗雞傳染性支氣管炎的作用。