葛塬　馬佐鵬　王延華

摘要：目的 探討金絲桃苷對鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲等生物學(xué)行為的影響和機(jī)制。方法 采用10、20及40 mg/L金絲桃苷的培養(yǎng)液孵育SUNE1細(xì)胞，依次記為低、中、高劑量組；將長鏈非編碼RNA（lncRNA）配對盒基因8反義RNA 1（PAX8-AS1）過表達(dá)或敲低質(zhì)粒、miR-494-3p模擬物及其陰性對照分別轉(zhuǎn)染至40 mg/L金絲桃苷處理的SUNE1細(xì)胞，采用CCK-8實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測SUNE1細(xì)胞活力、克隆形成以及遷移和侵襲。蛋白質(zhì)印記法分析基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p表達(dá)。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)分析lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p靶向關(guān)系。結(jié)果 低、中、高劑量金絲桃苷降低SUNE1細(xì)胞活力、遷移數(shù)和侵襲數(shù)，下調(diào)MMP-2蛋白、MMP-9蛋白以及miR-494-3p表達(dá)水平，上調(diào)lncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平（P＜0.05）。lncRNA PAX8-AS1靶向負(fù)調(diào)控miR-494-3p表達(dá)。過表達(dá)lncRNA PAX8-AS1增強(qiáng)40 mg/L金絲桃苷對SUNE1細(xì)胞活力、遷移、侵襲以及MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的抑制作用（P＜0.05）。敲低lncRNA PAX8-AS1和過表達(dá)miR-494-3p均減弱40 mg/L金絲桃苷對SUNE1細(xì)胞活力、遷移、侵襲以及MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的抑制作用（P＜0.05）。結(jié)論 金絲桃苷可能通過上調(diào)lncRNA PAX8-AS1/miR-494-3p軸來抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。

關(guān)鍵詞：鼻咽腫瘤；藥理作用分子作用機(jī)制；基因，腫瘤抑制；細(xì)胞增殖；腫瘤侵潤；金絲桃苷；lncRNA PAX8-AS1；miR-494-3p

中圖分類號：R739.6 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20220805

Molecular mechanism of hyperoside inhibiting the biological behavior of

nasopharyngeal carcinoma cells

GE Yuan， MA Zuopeng， WANG Yanhua

Department of Otolaryngology， Qinghai Red Cross Hospital， Xining 810001， China

Abstract： Objective To investigate the effect and mechanism of hyperoside on the biological behavior such as cell proliferation， migration and invasion of nasopharyngeal carcinoma cells. Methods SUNE1 cells were incubated with hyperin medium of 10 mg/L， 20 mg/L and 40 mg/L， and cells were divided into the low， the medium and the high dose groups. The lncRNA PAX8-AS1 overexpression or knockdown plasmid and miR-494-3p mimic were transfected into 40 mg/L hypericin-treated SUNE1 cells respectively. The activity， clonal formation， migration and invasion of SUNE1 cells were detected by CCK-8 assays， plate cloning experiment and Transwell assays. Western blot assay was used to analyze the expression of matrix metalloproteinase （MMP） -2 and MMP-9 proteins. Real-time quantitative polymerase chain reaction （RT-qPCR） was used to detect the expression of long non-coding RNA （lncRNA） paired-box gene 8 antisense RNA 1 （PAX8-AS1） and miR-494-3p. Dual luciferase report experiment and RT-qPCR were used to determine the targeting relationship between lncRNA PAX8-AS1 and miR-494-3p. Results Low， medium and high dose-hyperoside significantly reduced the cell viability， migration number and invasion number of SUNE1 cells， and down-regulated expression levels of MMP-2 protein， MMP-9 protein and miR-494-3p， and up-regulated the expression level of lncRNA PAX8-AS1 （P＜0.05）. lncRNA PAX8-AS1 negatively regulated miR-494-3p expression. lncRNA PAX8-AS1 overexpression significantly enhanced inhibitory effects of 40 mg/L hyperoside on SUNE1 cell viability， migration and invasion， and MMP-2 and MMP-9 protein expression （P＜0.05）. Knockdown of lncRNA PAX8-AS1 and overexpression of miR-494-3p significantly reduced inhibitory effects of 40 mg/L hyperoside on SUNE1 cell viability， migration， invasion and MMP-2 and MMP-9 protein expression （P＜0.05）. Conclusion Hyperoside may inhibit the proliferation and migration， and invasion of nasopharyngeal carcinoma cells by up-regulating the lncRNA PAX8-AS1 /miR-494-3p axis.

Key words： nasopharyngeal neoplasms; molecular mechanisms of pharmacological action; genes， tumor suppressor; cell proliferation; neoplasm invasiveness; hyperoside; lncRNA PAX8-AS1；miR-494-3p

鼻咽癌是我國華南地區(qū)最常見的頭頸部惡性腫瘤。目前，放射療法是提高鼻咽癌局部控制率的首選方法，但由于遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移率高，多數(shù)患者的治療效果較差。近年來，天然產(chǎn)物在癌癥治療中的獨(dú)特作用受到重視。金絲桃苷是一種植物源性槲皮素3d-半乳糖苷，具有抗炎、抗氧化和血管保護(hù)作用［1］。有研究證實(shí)，金絲桃苷通過調(diào)控細(xì)胞自噬、凋亡、增殖、分化，在肝癌、乳腺癌等多種腫瘤中發(fā)揮抗癌作用［2-3］。然而，金絲桃苷在鼻咽癌中的作用及分子機(jī)制尚不清楚。長鏈非編碼RNA（lncRNA）和微小RNA（miRNA）是非編碼RNA的重要組成部分，lncRNA可通過靶向miRNA參與腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移等過程，這可能是腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)［4］。研究顯示，槲皮素聯(lián)合金絲桃苷可通過下調(diào)致癌因子miR-27a的表達(dá)水平，從而對腎癌細(xì)胞發(fā)揮抗癌活性［5］。lncRNA配對盒基因8反義RNA 1（PAX8-AS1）是一種抑癌因子，上調(diào)其表達(dá)可有效抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖和侵襲［6］。miR-494-3p在鼻咽癌中表達(dá)水平上調(diào)，并促進(jìn)鼻咽癌進(jìn)展［7］。筆者前期預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，lncRNA PAX8-AS1與miR-494-3p存在結(jié)合位點(diǎn)，且金絲桃苷處理可改變鼻咽癌細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p的表達(dá)水平。本研究旨在為金絲桃苷在鼻咽癌治療中的進(jìn)一步應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 人鼻咽癌SUNE1細(xì)胞購自美國菌種保藏中心；空載體質(zhì)粒（pcDNA）、lncRNA PAX8-AS1過表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA-lncRNA PAX8-AS1）、小干擾RNA陰性對照（si-NC）、lncRNA PAX8-AS1的小干擾RNA（si-lncRNA PAX8-AS1）、miR-494-3p模擬物（mimics）、miRNA模擬物陰性對照（miR-NC）、熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒購自上海生工生物工程有限公司；金絲桃苷（純度94.9%）購自中國食品藥品檢定研究院；Lipofectamine 2000購自美國Thermo Fisher公司；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK-8）購自福州飛凈生物公司；Transwell小室購自美國Corning公司；TRIzol試劑、雙熒光素酶活性檢測試劑盒購自北京百奧萊博生物公司；放射免疫沉淀測定（RIPA）裂解液、山羊抗兔IgG二抗、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2兔源多克隆抗體、MMP-9兔源多克隆抗體、β-肌動蛋白（β-actin）兔源單克隆抗體購自上海碧云天生物公司；miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、miRNA分析試劑盒購自美國GeneCopoeia公司；SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒、PrimeScript逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 研究方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和分組 SUNE1細(xì)胞在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于5% CO2的37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%～90%時(shí)按照1∶3比例傳代。將對數(shù)生長期的SUNE1細(xì)胞接種至6孔板（2×105個(gè)/孔），用Lipofectamine 2000將pcDNA、pcDNA-lncRNA PAX8-AS1、si-NC、si-lncRNA PAX8-AS1、miR-NC、miR-494-3p mimics分別轉(zhuǎn)染SUNE1細(xì)胞，收集轉(zhuǎn)染48 h細(xì)胞。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測lncRNA PAX8-AS1或miR-494-3p表達(dá)，驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果合格后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。依據(jù)參考文獻(xiàn)［8］和前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別用10 mg/L（低劑量組）、20 mg/L（中劑量組）、40 mg/L（高劑量組）金絲桃苷的培養(yǎng)液孵育SUNE1細(xì)胞48 h；正常培養(yǎng)的SUNE1細(xì)胞記為正常對照（NC）組；轉(zhuǎn)染pcDNA、pcDNA-lncRNA PAX8-AS1、si-NC、si-lncRNA PAX8-AS1的SUNE1細(xì)胞依次記為pcDNA組、pcDNA-lncRNA PAX8-AS1組、si-NC組、si-lncRNA PAX8-AS1組；SUNE1細(xì)胞用含40 mg/L金絲桃苷的培養(yǎng)液干預(yù)后分別轉(zhuǎn)染pcDNA（pcDNA+高劑量組）、pcDNA-lncRNA PAX8-AS1（pcDNA-lncRNA PAX8-AS1+高劑量組）、si-NC（si-NC+高劑量組）、si-lncRNA PAX8-AS1（si-lncRNA PAX8-AS1+高劑量組）、miR-NC（miR-NC+高劑量組）、miR-494-3p mimics（miR-494-3p+高劑量組）。

1.2.2 CCK-8法檢測各組SUNE1細(xì)胞活力 細(xì)胞按照3×103個(gè)/孔的密度接種于96孔板，待SUNE1細(xì)胞貼壁生長后，按照實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行處理，將96孔板置于37 ℃、5% CO2中培養(yǎng)48 h，更換為正常培養(yǎng)液，每孔加入10 ?L CCK-8試劑，再孵育2 h，酶標(biāo)儀檢測450 nm波長處光密度（OD）值。每組設(shè)置3個(gè)平行孔，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

1.2.3 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測SUNE1細(xì)胞克隆能力 胰酶消化各組SUNE1細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞計(jì)數(shù)后將200個(gè)細(xì)胞接種于直徑為60 mm培養(yǎng)皿中，使細(xì)胞分散均勻，培養(yǎng)2～3周，出現(xiàn)肉眼可見克隆時(shí)，棄去培養(yǎng)液，磷酸鹽緩沖液（PBS）浸洗2次。甲醇固定15 min，棄甲醇后空氣干燥5 min。用0.1%結(jié)晶紫染液染色20 min，流水緩慢洗去染液，空氣干燥10 min。顯微鏡下記錄細(xì)胞克隆數(shù)（＞50個(gè)細(xì)胞為1個(gè)克?。Ｃ拷M設(shè)置3個(gè)平行孔，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

1.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞遷移和侵襲 遷移實(shí)驗(yàn)用未包被基質(zhì)膠的Transwell小室，侵襲實(shí)驗(yàn)用包被基質(zhì)膠涂層的Transwell小室。收集各組SUNE1細(xì)胞，用無血清培養(yǎng)基制備單細(xì)胞懸液。上室加200 μL細(xì)胞懸液，下室加500 μL含10%胎牛血清的培養(yǎng)液，培養(yǎng)24 h，去除Transwell小室膜表面的未穿膜細(xì)胞，4%多聚甲醛固定30 min，0.1%結(jié)晶紫染色20 min。倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞穿膜情況，以隨機(jī)讀取的5個(gè)視野細(xì)胞數(shù)的平均值表示SUNE1細(xì)胞遷移或侵襲數(shù)量。每組設(shè)置3個(gè)平行，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

1.2.5 Western blot法檢測各組SUNE1細(xì)胞中MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá) 用RIPA緩沖液裂解各組SUNE1細(xì)胞，4 ℃、12 000 r/min離心5 min收集上清液。蛋白定量后，每組取等量（40 ?g）蛋白樣品進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，參數(shù)設(shè)定為電壓100 V、時(shí)間90 min；濕法轉(zhuǎn)移蛋白到硝酸纖維素（NC）膜上，參數(shù)設(shè)定為電流300 mA、時(shí)間20 min。室溫下用5%脫脂奶粉封閉NC膜2 h，4 ℃下用MMP-2（1∶1 000）、MMP-9（1∶1 000）、β-actin（1∶2 000）一抗孵育NC膜過夜；室溫加IgG二抗（1∶1 000）孵育NC膜1 h。加入化學(xué)發(fā)光試劑顯影。以Quantity One v4.6.6軟件測定目的蛋白條帶和內(nèi)參β-actin條帶的灰度值表示其相對表達(dá)量。每組設(shè)置3個(gè)平行，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

1.2.6 RT-qPCR檢測lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p表達(dá) TRIzol試劑抽提上述各組SUNE1細(xì)胞的總RNA。按照miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、miRNA分析試劑盒說明書檢測miR-494-3p表達(dá)。反應(yīng)體系（20 ?L）：cDNA 5 ?L，上下游引物各0.1 ?L，SYBR GREEN 10 ?L，ddH2O 4.8 ?L。反應(yīng)條件：95 ℃ 30 s（預(yù)變性）；95 ℃ 5 s（變性），60 ℃ 34 s（退火），40個(gè)循環(huán)。β-actin為lncRNA PAX8-AS1的內(nèi)參，U6為miR-494-3p的內(nèi)參。miR-494-3p：上游5'-GGGTGAAACACACACGGGAA-3'，下游5'-GGCAGGTCCGAGGT-3'；PAX8-AS1：上游5'-CTTCTGATTGCCCAAGCCCT-3'，下游5'-TGCTTGACTACAGAGCACCC-3'。按照PrimeScript逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒說明書檢測lncRNA PAX8-AS1表達(dá)。2-ΔΔCt法分析lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p相對表達(dá)量。每組設(shè)置3個(gè)平行，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

1.2.7 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn) 采用starbase網(wǎng)站（http：//starbase.sysu.edu.cn/index.php）在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測lncRNA PAX8-AS1與miR-494-3p的結(jié)合位點(diǎn)。將SUNE1細(xì)胞接種于24孔板，用Lipofectamine 2000將miR-494-3p mimics、miR-NC分別與含有l(wèi)ncRNA PAX8-AS1野生序列（結(jié)合位點(diǎn)：AUGUUUC）或突變序列（結(jié)合位點(diǎn)：CCAGGAA）的pRL-TK熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染50%融合SUNE1細(xì)胞。孵育48 h后，用雙熒光素酶活性檢測試劑盒測定SUNE1細(xì)胞的螢火蟲和海腎熒光素酶活性，以兩者的比值表示相對熒光素酶活性。每組設(shè)置3個(gè)平行，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism 8進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以x±s表示。2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 低、中、高劑量金絲桃苷對SUNE1細(xì)胞的影響

2.1.1 SUNE1細(xì)胞增殖能力 與NC組比較，金絲桃苷低、中、高劑量組SUNE1細(xì)胞OD450、細(xì)胞克隆數(shù)依次降低（P＜0.05），見表1、圖1。

2.1.2 SUNE1細(xì)胞遷移和侵襲能力及MMP-2和MMP-9表達(dá)水平比較 與NC組比較，金絲桃苷低、中、高劑量組SUNE1細(xì)胞遷移、侵襲數(shù)量，MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)依次降低（P＜0.05），見圖2、3，表2。

2.1.3 SUNE1細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p表達(dá) 與NC組比較，金絲桃苷低、中、高劑量組SUNE1細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平依次升高，miR-494-3p表達(dá)水平依次降低（P＜0.05），見表3。

2.2 lncRNA PAX8-AS1可調(diào)控miR-494-3p的表達(dá) starbase在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測顯示，miR-494-3p與lncRNA PAX8-AS1序列間存在特異性結(jié)合位點(diǎn)，見圖4。與miR-NC組比較，miR-494-3p mimics組WT-lncRNA PAX8-AS1相對熒光素酶活性降低（P＜0.05），而MUT-lncRNA PAX8-AS1相對熒光素酶活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表4。與pcDNA組比較，pcDNA-lncRNA PAX8-AS1組SUNE1細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平升高，miR-494-3p表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與si-NC組比較，si-lncRNA PAX8-AS1組SUNE1細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平降低，miR-494-3p表達(dá)水平升高（P＜0.05），見表5。

2.3 lncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平對金絲桃苷處理的SUNE1細(xì)胞的影響 與NC組比較，pcDNA+高劑量組、si-NC+高劑量組lncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平升高，MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)水平降低，OD₄₅₀、細(xì)胞克隆數(shù)、細(xì)胞遷移數(shù)量、細(xì)胞侵襲數(shù)量下降（P＜0.05）；與pcDNA+高劑量組比較，pcDNA-lncRNA PAX8-AS1+高劑量組lncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平升高，MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)水平降低，細(xì)胞克隆數(shù)、OD₄₅₀、細(xì)胞遷移數(shù)量、細(xì)胞侵襲數(shù)量下降（P＜0.05）；與si-NC+高劑量組比較，si-lncRNA PAX8-AS1+高劑量組lncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平降低，MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)水平升高，細(xì)胞克隆數(shù)、OD₄₅₀、細(xì)胞遷移數(shù)量、細(xì)胞侵襲數(shù)量升高（P＜0.05）。見表6，圖5、6。

2.4 上調(diào)miR-494-3p對金絲桃苷處理的SUNE1細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響 與miR-NC+高劑量組比較，miR-494-3p+高劑量組SUNE1細(xì)胞miR-494-3p、MMP-2、MMP-9表達(dá)水平以及細(xì)胞克隆數(shù)、OD450、細(xì)胞遷移數(shù)量、細(xì)胞侵襲數(shù)量升高（P＜0.05）。見表7，圖7、8。

3 討論

隨著放療技術(shù)的進(jìn)步，鼻咽癌局部復(fù)發(fā)率明顯降低，但其高度侵襲性和轉(zhuǎn)移性仍是其治療失敗的主要原因。因此，尋找有效抑制鼻咽癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥物有助于提高鼻咽癌患者生存率。金絲桃苷已被證實(shí)在多種人類腫瘤或異種移植模型中具有抗癌活性，是潛在抗腫瘤候選藥物。研究發(fā)現(xiàn)，金絲桃苷可明顯抑制皮膚癌細(xì)胞的增殖［9］。金絲桃苷通過激活Bax/caspase-3軸和抑制核因子κB（NF-κB）信號通路誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡［10］。金絲桃苷還可通過抑制Wnt/β-catenin信號通路，從而抑制胃癌腫瘤生長［11］。本研究結(jié)果顯示，不同劑量金絲桃苷處理后SUNE1細(xì)胞活力、克隆形成數(shù)、遷移數(shù)量、侵襲數(shù)量均降低，高劑量組效果更明顯。MMP-2和MMP-9是降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的關(guān)鍵酶，可降解或破壞腫瘤細(xì)胞表面細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅳ、Ⅴ型膠原或明膠，從而使腫瘤細(xì)胞沿著受損的基膜向周圍組織浸潤，引起腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移［12］。本研究結(jié)果顯示，不同劑量金絲桃苷處理后SUNE1細(xì)胞中MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平依次下降，這與金絲桃苷的抗遷移和抗侵襲作用一致，表明金絲桃苷可通過降低相關(guān)蛋白表達(dá)來抑制SUNE1細(xì)胞的遷移和侵襲作用。以上研究提示，金絲桃苷可能通過抑制SUNE1細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，從而抑制鼻咽癌進(jìn)展。

近年來，多項(xiàng)研究證實(shí)，非編碼RNA可作為金絲桃苷的下游因子介導(dǎo)癌細(xì)胞的生物學(xué)功能［13-14］。研究顯示，金絲桃苷可下調(diào)lncRNA結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1表達(dá)，從而抑制表皮生長因子受體（EGFR）T790M突變的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，抑制體內(nèi)移植瘤的生長［15］。金絲桃苷和槲皮素通過下調(diào)miR-21表達(dá)，抑制前列腺癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移［16］。黃芩素可通過激活lncRNA PAX8-AS1亞型（PAX8-AS1-N），抑制乳腺癌細(xì)胞活力和周期進(jìn)程［17］。miR-494-3p是鼻咽癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌進(jìn)展的促進(jìn)因子，下調(diào)miR-494-3p表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖和轉(zhuǎn)移能力，減緩腫瘤進(jìn)展［18-19］。本研究結(jié)果顯示，不同劑量金絲桃苷均可明顯上調(diào)SUNE1細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平，下調(diào)miR-494-3p表達(dá)水平，表明金絲桃苷在SUNE1細(xì)胞中可促進(jìn)lncRNA PAX8-AS1表達(dá)并抑制miR-494-3p表達(dá)，提示lncRNA PAX8-AS1、miR-494-3p可能在SUNE1細(xì)胞中分別起抑癌和促癌作用；另外miR-494-3p的表達(dá)受到lncRNA PAX8-AS1負(fù)調(diào)控，證實(shí)了兩者的靶向調(diào)控作用，提示lncRNA PAX8-AS1/miR-494-3p軸可能介導(dǎo)金絲桃苷在鼻咽癌中的抗癌作用。深入研究表明，過表達(dá)lncRNA PAX8-AS1可提高金絲桃苷對鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，抑制MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)；而敲低lncRNA PAX8-AS1和過表達(dá)miR-494-3p則逆轉(zhuǎn)金絲桃苷對鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的影響，進(jìn)一步證實(shí)金絲桃苷至少部分通過激活lncRNA PAX8-AS1/miR-494-3p軸，從而在鼻咽癌進(jìn)展中發(fā)揮了抗癌活性。由于敲低lncRNA PAX8-AS1和過表達(dá)miR-494-3p并未完全逆轉(zhuǎn)金絲桃苷的抗鼻咽癌作用，故筆者推測可能有其他lncRNA或miRNA參與金絲桃苷的抗鼻咽癌過程。

綜上所述，金絲桃苷可能通過上調(diào)lncRNA PAX8-AS1/ miR-494-3p軸活性，從而抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，其有望成為一種潛在預(yù)防和抑制鼻咽癌轉(zhuǎn)移的藥物。

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（2022-05-23收稿 2022-08-26修回）

（本文編輯 陸榮展）