張翠娥，趙書光，張亞楠

（灌南縣農(nóng)業(yè)技術推廣中心，江蘇灌南 222500）

0 引言

杏鮑菇，又稱刺芹側耳，是典型的亞熱帶草原—干旱沙漠地區(qū)的野生食用菌，同時也是近年來開發(fā)栽培成功的集食用、藥用、食療于一體的珍稀食用菌新品種。近幾年，得益于政府鼓勵扶持杏鮑菇種植產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，我國杏鮑菇產(chǎn)量呈不斷增長的態(tài)勢。灌南縣是我國食用菌行業(yè)主產(chǎn)基地縣之一，是江蘇省食用菌生產(chǎn)基地縣，食用菌工廠化生產(chǎn)集聚度居全國前列。

1 灌南縣工廠化杏鮑菇生產(chǎn)現(xiàn)狀

目前，灌南縣食用菌產(chǎn)業(yè)園已入駐食用菌工廠化生產(chǎn)企業(yè)近40家，其中近半數(shù)是生產(chǎn)杏鮑菇的工廠化企業(yè)。杏鮑菇工廠化生產(chǎn)關鍵技術基本成熟，液體菌種的生產(chǎn)技術也基本穩(wěn)定，灌南食用菌產(chǎn)業(yè)園內(nèi)的菌菇生產(chǎn)企業(yè)已全部采用液體菌種，取代了以前的固體菌種，在帶動農(nóng)民就業(yè)方面和經(jīng)濟效益方面，效果均十分顯著。液體菌種具有生產(chǎn)周期短、菌絲生長快的優(yōu)勢，一般經(jīng)振動或通氣培養(yǎng)3～7天即可培養(yǎng)好菌種，且液體菌種菌齡均一。

然而，液體種因培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，加之是液態(tài)，對運輸條件要求嚴格，稍有不慎即會造成菌種污染，不如固體菌種運輸方便。液體種在制作中，由于液體培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，故極易污染雜菌，污染發(fā)生率要高于固體種制作。液體菌種的質(zhì)量檢查也要難于固體菌種，不僅需要一定的技術技能，還需要一定的檢測設備，一般生產(chǎn)者不易掌握。生產(chǎn)者在使用液體菌種栽培時應注意，須采用與之相配套的栽培方法和栽培技術，才能最大限度地發(fā)揮液體菌種的優(yōu)勢。

2 主推培養(yǎng)基配方

2.1 母種配方

采用常規(guī)PDA培養(yǎng)基配方。

2.2 一級液體菌種（三角瓶原種）配方

馬鈴薯200 g、瓊脂18 g、葡萄糖20 g，純凈水 1 000 ml，pH值自然。

2.3 二級液體菌種（發(fā)酵罐栽培種）配方

在參考近年來國內(nèi)食用菌科研院所和部分杏鮑菇工廠化生產(chǎn)企業(yè)液體菌種研究工作的基礎上，食用菌生產(chǎn)企業(yè)試驗篩選的主推液體菌種配方是豆粕粉5 kg、酵母膏4 kg、白糖2 kg、磷酸二氫鉀0.5 kg、硫酸鎂 0.5 kg、消泡劑100 ml，水1 000 L，pH值自然。

2.4 出菇栽培包配方

生產(chǎn)企業(yè)試驗篩選的主推配方是雜木屑35%、玉米芯25%、麥麩27%、玉米粉5%、豆粕粉5%、石灰2%以及輕質(zhì)碳酸鈣1%。滅菌前，培養(yǎng)料含水量為64%～66%，pH值自然。

3 液體菌種制備工藝

3.1 一級液體菌種制作與菌絲培養(yǎng)

按照PDA培養(yǎng)基配方制作步驟，除去瓊脂，配制成PDA液體培養(yǎng)基，以1 000 ml規(guī)格的三角瓶為容器，1袋加入培養(yǎng)基250 ml，在1.05 kg/cm2壓力下滅菌30 min，冷卻后接入2塊約0.5～1.0 cm2大小的斜面菌種塊，靜置24 h，然后在25℃、轉速120轉/min、避光條件下，搖床振蕩培養(yǎng)7～8天，觀察菌絲生長情況。培養(yǎng)結束的標準：培養(yǎng)液清澈透明，液中懸浮著大量小菌絲球，并伴隨杏鮑菇特有的香味。

生產(chǎn)上，在轉接二級液體菌種前，要對一級液體菌種進行取樣檢測。首先，以“三看一聞”即看菌液顏色、黏稠度、菌球形態(tài)及數(shù)量，聞氣味的方法進行初篩，排除感染雜菌的三角袋菌種。其次，同批次的隨機抽樣2～3袋，利用顯微鏡（存放于空氣百級凈化室內(nèi)）檢測是否存在雜菌菌絲體。

3.2 二級液體菌種制作與菌絲培養(yǎng)

3.2.1 洗罐與煮罐

一是清洗與檢查：新購的或使用過的發(fā)酵罐，每次制種前都必須清洗干凈，確保罐體內(nèi)壁無懸掛物、菌球，排放出來的水清澈、無污染物。二是煮罐：正常生產(chǎn)上不需要煮罐，只有在更換品種、上批污染、啟用新罐時才煮罐。首先，關閉接種閥和進氣閥，從進料口加水至視鏡中線處。然后，關閉排氣閥，打開電源升溫至100℃排冷空氣，并微微打開排氣閥升溫至121℃滅菌30～40 min。最后，待鍋內(nèi)溫度降至100℃以下時，排除罐內(nèi)水。在煮罐的同時，按配方煮料、滅濾芯及接種槍。

3.2.2 菌種制作

一是加料：關閉排氣閥和接種閥（出料口），通過進料口加入培養(yǎng)基（添加量為罐容積的70%～80%）和消泡劑（食品級、添加量為培養(yǎng)基重量的0.5%～1%）。加料高度以稍高于視鏡為宜，并關緊進料口閥門。二是滅菌及冷卻：關閉所有閥門，打開電源加熱，升溫至100℃時排冷空氣，為防止料液糊化，直接通入空氣攪拌。升溫至121℃滅菌30 min。滅菌結束后，利用循環(huán)冷卻水降溫至25℃～28℃?zhèn)溆谩Ｈ墙臃N：準備好棉花火圈、打火機、95%酒精、手套等用品，待鍋內(nèi)壓力降為0時，將火圈放在進料口上，在火焰保護下打開進料蓋，加入1瓶（三角瓶）一級液體菌種，并迅速關閉進料口。

3.2.3 菌絲培養(yǎng)及取樣觀察

啟動設備，微開排氣閥使罐壓升至0.02～0.04 Mpa，保持20℃～22℃和1.0～1.2 m3/h通氣量條件培養(yǎng)24 h后，隔24 h從接種口取樣1次。每次取樣操作，要在百級空氣凈化室內(nèi)的超凈工作臺內(nèi)進行，先排掉1 000 ml菌液，然后取樣100 ml，置于無菌三角袋（250 ml規(guī)格）中，并用鋁箔紙封口。通常情況下，培養(yǎng)5～7天即可制成菌種。

3.3 液體菌種質(zhì)量檢測

發(fā)酵罐內(nèi)液體菌種的檢測方法，主要包括周期較長PDA平板（直徑10 mm規(guī)格）劃線培養(yǎng)法和周期較短的顯微鏡檢測法兩種。前者，在超凈工作臺內(nèi)，用接種鉤蘸取樣品后在平板上畫曲線，然后置于28℃～30℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24～72 h，以無雜菌菌落為宜。后者，操作方法同一級液體菌種檢測方法相同，均在顯微鏡下完成。通常情況下，培養(yǎng)5～7天即可制成菌種。

4 配套技術

4.1 培養(yǎng)料攪拌與裝袋

按配方要求，將木屑、玉米芯、甘蔗渣、麩皮等主料加入攪拌機，攪拌20 min，接著加入豆粕粉、玉米粉，繼續(xù)攪拌10 min。然后，一邊加入石灰、輕質(zhì)碳酸鈣等調(diào)節(jié)酸堿度的輔料，一邊加水再攪拌30 min，即可裝袋。生產(chǎn)上，常用對折口徑（規(guī)格17～19 cm×38 cm×0.005 cm）的高壓聚丙烯塑料袋，裝入濕料1.2～1.4 kg/袋，培養(yǎng)料高19～21 cm，料中間預埋塑料打孔棒。

4.2 滅菌與冷卻接種

在工廠化生產(chǎn)時，栽培包在121℃～123℃高壓條件下滅菌2 h即可。待料溫冷卻至25℃以下時，在凈化室超凈單元下、在罐內(nèi)壓力0.03～0.05 Mpa時用液體接種機接種，接入菌種20 ml/袋。

5 結語

菌種制作是食用菌栽培的第一步。一個優(yōu)良的菌種和一套與其相對應的高效率的制種工藝，既取決于科學的制種技術，也有賴于合理的制種設備。隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，食用菌液體菌種在固體菌種制作的基礎上不斷改進和提高，目前技術穩(wěn)定，利用廣泛，效益顯著。灌南食用菌生產(chǎn)企業(yè)在液體菌種制作過程中，已經(jīng)克服了液體菌種污染率高、不耐儲存等缺點，充分顯示出生產(chǎn)規(guī)?；?、控制自動化、生產(chǎn)無菌化、發(fā)菌高速化的優(yōu)勢。其具有生產(chǎn)周期短、菌齡整齊、接種方便等諸多優(yōu)點，適宜工廠化生產(chǎn)，是食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展方向。