張效澤，朱方圓，劉延慶，朱耀東（.安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 30000；.揚(yáng)州大學(xué)，江蘇 揚(yáng)州 5000）

胃癌前病變（Precancerous lesions of gastric cancer，PLGC）是一個(gè)病理性概念，是指較易轉(zhuǎn)變?yōu)槲赴┙M織的病理學(xué)變化，包括腸上皮化生和異型增生，主要伴存于慢性萎縮性胃炎，是從正常胃黏膜向胃癌轉(zhuǎn)化過程中的一個(gè)重要階段[1]。胃癌前病變具有雙向轉(zhuǎn)化的特點(diǎn)，早期干預(yù)和治療能有效逆轉(zhuǎn)胃黏膜上皮細(xì)胞向惡性發(fā)展并預(yù)防胃癌的發(fā)生，現(xiàn)已成為胃癌二級(jí)預(yù)防的重點(diǎn)研究方向[2]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)胃癌前病變尚缺乏療效肯定的治療藥物和方法，而中醫(yī)藥在逆轉(zhuǎn)胃癌前病變等方面則顯示出自己獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。目前對(duì)中醫(yī)藥逆轉(zhuǎn)胃癌前病變的研究，已形成了基于循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的作用機(jī)制探索。一些學(xué)者[3-4]運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)中醫(yī)經(jīng)典名方如四君子湯、半夏瀉心湯治療胃癌前病變的活性成分、藥物作用靶點(diǎn)及作用通路進(jìn)行分析，為闡釋中醫(yī)藥逆轉(zhuǎn)胃癌前病變的作用機(jī)制提供了研究參考。然而由于中藥復(fù)方成分的多樣性，以及其與機(jī)體相互作用的復(fù)雜性，導(dǎo)致其分子機(jī)制的揭示一直十分困難。

南蛇藤（CelastrusorbiculatusThunb），辛溫、有小毒，歸肝、膀胱經(jīng)，具有解毒消腫、祛風(fēng)除濕、活血通經(jīng)等功效，主要用于治療筋骨疼痛、腰腿痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、閉經(jīng)、痢疾、跌打損傷、瘡瘍癰腫等病癥[5]。前期研究[6]發(fā)現(xiàn)南蛇藤提取物（Celastrusorbiculatusextract，COE）可以逆轉(zhuǎn)胃癌前病變過程，但其具體機(jī)制尚不清楚。研究[7]表明，上調(diào)的有氧糖酵解代謝通路是胃癌前病變?yōu)檫m應(yīng)缺氧微環(huán)境而進(jìn)行細(xì)胞選擇的結(jié)果，在此過程中FOXO4發(fā)揮了關(guān)鍵作用。因此，本研究擬從有氧糖酵解及FOXO4 的角度，探討南蛇藤提取物逆轉(zhuǎn)大鼠胃癌前病變的分子藥理機(jī)制，對(duì)胃癌早期預(yù)防具有積極的意義。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物SD大鼠70只，雄性，SPF級(jí)，8周齡，體質(zhì)量（115±15）g，安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（皖）2017-001，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：340729220100026214，飼養(yǎng)于安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)條件：（23±2）℃、相對(duì)濕度（55±5）%、12 h/12 h 光照黑暗循環(huán)，自由飲水進(jìn)食。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)：LLSC20220294。

1.2 藥物及試劑南蛇藤飲片購自廣州致信藥業(yè)有限公司，批號(hào)：070510。Trizol試劑盒，美國(guó)Solarbio公司，批號(hào)：R1100；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，北京寶日生物有限公司，批號(hào)：RR036A；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time PCR）試劑盒，美國(guó)Promega公司，批號(hào)：A6001；甲基硝基亞硝基胍N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍（MNNG），日本東京Kabushiki 株式會(huì)社，批號(hào)：ZG4T1-FP；蘇木素染色液，武漢塞維爾生物科技有限公司，批號(hào)：G1004；伊紅染液，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：71014544；乳酸試劑盒，上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：mLsh0715；HK2、 PKM2、 FOXO4 一抗，美國(guó)Thermo Fisher 公司，批號(hào)分別為：PA5-29326、PA5-28700、MA5-32385；LDHA 一抗，美國(guó)Cell Signaling Technology 公司，批號(hào)：3582S；GLUT1 一抗，美國(guó)Santa 公司，批號(hào)：sc-377228；HIF-1α 一抗，美國(guó)CST 公司，批號(hào)：36169；二抗山羊抗兔，美國(guó)ImmunoWay 公司，批號(hào)：RS0002。引物通過Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)，由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.3 主要儀器TS100 倒置顯微鏡，日本Nikon 公司；CFX96 型Touch PCR 儀，美國(guó)BioRad 公司；KZ-Ⅱ型號(hào)勻漿儀，武漢Servicebio公司。

1.4 藥物制備南蛇藤提取物的提取制備流程已獲批國(guó)家專利[8]。主要流程為：將南蛇藤飲片打碎成粉，用濃度為95%的乙醇加熱回流提取3 次，回收溶劑，濃縮至干。將干燥的粉末加水分散，用石油醚和醋酸乙酯分別萃取3 次，回收溶劑，減壓濃縮，真空凍干。

1.5 分組、模型復(fù)制及給藥方法所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d。采用復(fù)合模型復(fù)制法[9]構(gòu)建大鼠胃癌前病變模型：將70 只大鼠隨機(jī)分為正常組（15 只）與胃癌前病變組（55只）；胃癌前病變組大鼠自由飲用170 μg·mL-1的MNNG 溶液，同時(shí)用含有0.03%鹽酸雷尼替丁的SPF大鼠飼料喂養(yǎng)，喂食2 d，禁食1 d，空腹當(dāng)天下午使用2%水楊酸鈉溶液10 mL·kg-1進(jìn)行灌胃。第12 周末，分別從兩組大鼠中隨機(jī)選取5只處死，取胃黏膜組織，HE染色鑒定模型是否制備成功。以胃黏膜腺體結(jié)構(gòu)紊亂，腺體萎縮且數(shù)目減少，上皮細(xì)胞核深染增大，極性減弱，有絲分裂增加，胞漿比增加為模型復(fù)制成功標(biāo)準(zhǔn)。將胃癌前病變模型制備成功后的大鼠，隨機(jī)分為模型組（170 μg·mL-1）與南蛇藤提取物低、中、高劑量組（12.5、25、50 mg·kg-1），每組10 只，南蛇藤提取物灌胃給藥4 周，每日1 次；另設(shè)正常組予以等量的生理鹽水灌胃。

1.6 標(biāo)本采集給藥結(jié)束后，禁食12 h，不禁水，使用3%戊巴比妥鈉，以150 mg·kg-1劑量腹腔注射麻醉處死大鼠，迅速解剖獲取胃體-胃竇交界處胃黏膜，置于4%多聚甲醛固定液中固定24 h。

1.7 HE 染色法觀察病理形態(tài)學(xué)變化胃黏膜組織進(jìn)行梯度乙醇脫水、二甲苯透明和石蠟包埋處理。切取厚度為5～6 μm 石蠟切片，HE 染色，光鏡（×200）下觀察胃黏膜組織病理學(xué)改變。

1.8 化學(xué)比色法檢測(cè)乳酸含量使用化學(xué)比色法檢測(cè)胃黏膜組織乳酸含量。胃黏膜組織按照質(zhì)量（g）∶提取液體積（mL）為1∶5 的比例加入提取液，冰浴機(jī)械勻漿后，置入離心機(jī)4 ℃、3 000 r·min-1（離心半徑8.5 cm）離心10 min。取上清液與檢測(cè)試劑充分混勻，于37 ℃反應(yīng)30 min。置于1 mL 玻璃比色皿內(nèi)，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定530 nm 處吸光度值。具體的操作流程按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.9 免疫組化檢測(cè)胃黏膜組織中蛋白表達(dá)情況取大鼠胃黏膜組織用石蠟包埋并切片，脫蠟后進(jìn)行抗原修復(fù)，使用3%H2O2室溫孵育切片10 min，PBS 沖洗3 次，每次5 min。室溫下使用山羊血清封閉切片孵育20 min，滴加提前配置好的一抗（1∶100），4 ℃孵育過夜，PBS 沖洗3 次，每次5 min。滴加二抗并在室溫條件下孵育1 h，滴加DAB溶液進(jìn)行染色，蘇木素復(fù)染40 min，脫水，封片。使用顯微鏡200倍視野下觀察拍照，以棕黃色顆粒表示陽性表達(dá)。隨機(jī)選取最具代表性的1個(gè)視野進(jìn)行觀察。

1.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)胃黏膜組織中mRNA表達(dá)情況取100 mg 組織加入勻漿管中，滴加1 mL的Trizol Reagent，用勻漿儀將組織充分研磨。依據(jù)RNA提取試劑盒流程提取總RNA，檢測(cè)總RNA 純度與濃度。隨后依據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒流程將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，簡(jiǎn)述為25 ℃條件下退火5 min，42 ℃條件下延伸1 h，70 ℃條件下15 min，使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。依據(jù)試劑盒流程進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，簡(jiǎn)述為95 ℃條件下預(yù)變性10 min，95 ℃條件下變性15 s，60 ℃退火1 min，60 ℃條件下延伸15 s，循環(huán)40 次，在60～95 ℃生成溶解曲線。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算，使用GraphPad Prism 8.4.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)繪圖。Real-time PCR引物序列見表1。

表1 Real-time PCR 引物序列Table 1 Primer sequence of Real-time PCR

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。多組間比較采用單因素方差分析（ANOVO）。兩組間的比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 南蛇藤提取物對(duì)胃癌前病變大鼠胃黏膜形態(tài)的影響結(jié)果見圖1。正常組胃黏膜皺襞光滑，表面黏液附著，無糜爛與出血點(diǎn)，胃壁厚度一致。模型組的胃黏膜皺襞粗糙且欠光滑，光澤度差，可見散在出血點(diǎn)，表面黏液附著量減少，胃壁厚度不一。與模型組比較，南蛇藤提取物低、中、高劑量組中，胃黏膜可見胃黏膜皺襞變光滑、出血點(diǎn)減少、光澤度變清晰等不同程度的好轉(zhuǎn)。

圖1 南蛇藤提取物（COE）對(duì)胃癌前病變（PLGC）大鼠胃黏膜形態(tài)的影響Figure 1 Effect of Celastrus orbiculatus extract（COE）on gastric mucosa morphology in rats with precancerous lesions of grastic cancer（PLGC）

2.2 南蛇藤提取物對(duì)胃癌前病變大鼠胃黏膜病理變化的影響結(jié)果見圖2。正常組胃黏膜上皮細(xì)胞排列整齊，腺體結(jié)構(gòu)完整，形狀規(guī)則，邊界清晰，細(xì)胞核大小均一且呈橢圓形，核仁明顯，核漿比正常；模型組胃黏膜腺體結(jié)構(gòu)、排列紊亂，邊界欠清晰，腺體萎縮且數(shù)目減少，上皮細(xì)胞大小不一，可見核深染、增大，核漿比增加，細(xì)胞核極性明顯減弱且核分裂增加；南蛇藤提取物低、中、高劑量組中，胃黏膜病變分別可見不同程度的好轉(zhuǎn)。

圖2 南蛇藤提取物（COE）對(duì)胃癌前病變（PLGC）大鼠胃黏膜病理變化的影響（HE 染色，×200）Figure 2 Effect of Celastrus orbiculatus extract（COE）on pathological changes of gastric mucosa in precancerous lesions of grastic cancer（PLGC）rats（HE staining，×200）

2.3 南蛇藤提取物對(duì)胃癌前病變大鼠胃黏膜乳酸含量的影響結(jié)果見表2。與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜的乳酸含量明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，南蛇藤提取物低、中、高劑量組大鼠胃黏膜的乳酸含量均明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。以上結(jié)果表明南蛇藤提取物能夠降低模型組胃黏膜乳酸含量。

表2 南蛇藤提取物（COE）對(duì)胃癌前病變（PLGC）大鼠胃黏膜乳酸含量的影響（±s，n=10）Table 2 Effect of Celastrus orbiculatus extract（COE）on lactic acid content of gastric mucosa in precancerous lesions of grastic cancer（PLGC）rats（±s，n=10）

表2 南蛇藤提取物（COE）對(duì)胃癌前病變（PLGC）大鼠胃黏膜乳酸含量的影響（±s，n=10）Table 2 Effect of Celastrus orbiculatus extract（COE）on lactic acid content of gastric mucosa in precancerous lesions of grastic cancer（PLGC）rats（±s，n=10）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01

乳酸含量/（mmol·g-1）0.274±0.005 0.520±0.006**0.390±0.006##0.326±0.006##0.282±0.003##組別正常組模型組南蛇藤提取物低劑量組南蛇藤提取物中劑量組南蛇藤提取物高劑量組劑量/（mg·kg-1）--12.5 25 50

2.4 南蛇藤提取物對(duì)胃癌前病變大鼠胃黏膜中HK2、PKM2、GLUT1、LDHA、HIF-1α 和FOXO4 蛋白表達(dá)的影響結(jié)果見圖3。免疫組化染色結(jié)果表明，HK2主要表達(dá)于線粒體與細(xì)胞質(zhì)中，PKM2主要表達(dá)于細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中，GLUT1 主要表達(dá)于細(xì)胞膜中，LDHA 主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，HIF-1α 主要表達(dá)于胃黏膜細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中。與正常組比較，模型組大鼠可見HK2、PKM2、LDHA、GLUT1、HIF-1α 陽性染色顆粒明顯增多且染色較深，分布密集；南蛇藤提取物低、中、高劑量組與模型組比較，可見陽性染色顆粒明顯減少，染色變淺。FOXO4 主要表達(dá)于胃黏膜細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中，與正常組比較，模型組可見FOXO4 陽性染色顆粒明顯減少，染色較淺；南蛇藤提取物低、中、高劑量組與模型組比較，可見FOXO4 陽性染色顆粒增加，染色較深。

2.5 南蛇藤提取物對(duì)胃癌前病變大鼠胃黏膜中HK2、PKM2、GLUT1、LDHA、HIF-1α 和FOXO4mRNA水平的影響結(jié)果見圖4。與正常組比較，模型組有氧糖酵解標(biāo)志物HK2、PKM2、LDHA、GLUT1、HIF-1α 的mRNA 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），F(xiàn)OXO4 的mRNA 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，南蛇藤提取物低、中、高劑量組中有氧糖酵解標(biāo)志物HK2、PKM2、LDHA、GLUT1、HIF-1α的mRNA 水平明均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），F(xiàn)OXO4的mRNA表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05，P＜0.01）。

圖4 南蛇藤提取物（COE）對(duì)胃癌前病變（PLGC）大鼠胃黏膜HK2、PKM2、GLUT1、LDHA、HIF-1α 和FOXO4 mRNA 表達(dá)的影響Figure 4 Effect of Celastrus orbiculatus extract（COE）on mRNA expressions of HK2，PKM2，GLUT1，LDHA，HIF-1α and FOXO4 in of gastric mucosa in precancerous lesions of grastic cancer（PLGC）rats

3 討論

腫瘤酸性微環(huán)境作為所有實(shí)體瘤共同的理化性質(zhì)，在腫瘤進(jìn)展中扮演著重要角色[10]。研究[11]表明，正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞在葡萄糖代謝方面存在明顯差異，即腫瘤細(xì)胞在氧氣充足的條件下，也會(huì)消耗較多葡萄糖并產(chǎn)生大量乳酸的情況，這一過程也被稱為“Warburg 效應(yīng)”，而乳酸的過量和持續(xù)生成導(dǎo)致酸性腫瘤微環(huán)境的生成。腫瘤微環(huán)境中的乳酸濃度可高達(dá)10～30 mmol·L-1，而其在正常生理?xiàng)l件下的濃度約為1.5～3.0 mmol·L-1[12]。腫瘤酸性微環(huán)境可通過增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞惡性、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)降解和血管新生，明顯促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[13]。因此，糾正腫瘤的酸性微環(huán)境的狀態(tài)，破壞腫瘤細(xì)胞的生存環(huán)境是預(yù)防腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵所在。

酸性微環(huán)境廣泛存在于腫瘤發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中，其形成與腫瘤細(xì)胞特有的代謝方式有氧糖酵解密切相關(guān)。有氧糖酵解過程中的糖酵解中間體可用于合成核苷酸、氨基酸和脂類，同時(shí)產(chǎn)生三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP），滿足腫瘤和增殖細(xì)胞對(duì)大分子合成及能量的需求[14]。其中PKM2是有氧糖酵解過程中的關(guān)鍵限速酶；LDHA 是關(guān)鍵的底物調(diào)節(jié)酶，其過度活躍可明顯驅(qū)動(dòng)有氧糖酵解過程；HIF-1α 通過激活糖酵解基因的轉(zhuǎn)錄促進(jìn)有氧糖酵解過程，在Warburg 效應(yīng)中處于中心位置[15]。據(jù)報(bào)道[16]，在癌細(xì)胞HIF-1α/ALYREF/PKM2 通路中，HIF-1α 能夠激活A(yù)LYREF 間接上調(diào)PKM2 的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)癌細(xì)胞有氧糖酵解，表明二者在有氧糖酵解中具有調(diào)控作用。研究[17]證實(shí)，抑制HIF-1α 及其下游靶點(diǎn)LDHA的表達(dá)會(huì)導(dǎo)致有氧糖酵解的減少和氧化磷酸化的增加，HIF-1α -LDHA表達(dá)的上調(diào)能夠促進(jìn)有氧糖酵解。這說明三者在有氧糖酵解中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。同時(shí)有研究[18]發(fā)現(xiàn)，抑制有氧糖酵解過程能夠明顯提高胃癌細(xì)胞中上皮標(biāo)志物如E-鈣黏蛋白（E-Cadherin）表達(dá)，降低間充質(zhì)標(biāo)志物如N-鈣黏蛋白（N-Cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表達(dá)，從而抑制癌癥的轉(zhuǎn)移與發(fā)展。課題組前期研究[19]已經(jīng)證實(shí)，南蛇藤提取物能夠通過促進(jìn)E-Cadherin、抑制NCadherin 和Vimentin 的蛋白及mRNA 表達(dá)，抑制甚至逆轉(zhuǎn)胃癌前病變，發(fā)揮抗癌作用。在本研究中，我們也發(fā)現(xiàn)南蛇藤提取物能夠緩解胃癌前病變大鼠胃黏膜的病變；降低大鼠胃黏膜的乳酸含量；降低有氧糖酵解標(biāo)志物HK2、PKM2、GLUT1、LDHA、HIF-1α 蛋白及mRNA的表達(dá)，這與課題組前期研究結(jié)論相符合。由此我們認(rèn)為南蛇藤提取物能夠逆轉(zhuǎn)胃癌前病變，預(yù)防胃癌的發(fā)生，其機(jī)制可能與抑制有氧糖酵解有關(guān)。

FOXO 蛋白是在DNA 結(jié)合域具有高度保守的翼狀、螺旋結(jié)構(gòu)的一類轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，家族成員包括FOXO1、FOXO3、FOXO4 和FOXO6，參與調(diào)節(jié)各種細(xì)胞進(jìn)程，包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、DNA 損傷修復(fù)、應(yīng)激反應(yīng)以及代謝等過程[20]。最新研究[21]表明，在胃癌中FOXO4 通常處于被下調(diào)的狀態(tài)?；謴?fù)胃癌細(xì)胞中FOXO4 的表達(dá)可以明顯降低胃癌細(xì)胞的有氧糖酵解率，而沉默F(xiàn)OXO4 的表達(dá)可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的有氧糖酵解率[22]。同時(shí)，F(xiàn)OXO4與LDHA的通路具有一定關(guān)聯(lián)性，F(xiàn)OXO4 可以與LDHA 的啟動(dòng)子結(jié)合，并以劑量依賴性的模式抑制LDHA 的活性，而LDHA的表達(dá)下調(diào)能夠緩解胃癌前病變中的異常糖酵解[6]?；诖?，我們認(rèn)為促進(jìn)FOXO4 表達(dá)在抑制胃癌，調(diào)節(jié)有氧糖酵解中發(fā)揮關(guān)鍵作用，可以作為防治胃癌的新策略。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)南蛇藤提取物能夠提高胃黏膜細(xì)胞中FOXO4 的蛋白及mRNA 表達(dá)，由此我們推測(cè)，F(xiàn)OXO4 可能是南蛇藤提取物逆轉(zhuǎn)胃癌前病變，抑制有氧糖酵解逆轉(zhuǎn)胃癌前病變的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

課題組前期研究[23]發(fā)現(xiàn)，南蛇藤提取物在調(diào)控E-Cadherin、N-Cadherin 和Vimentin 的蛋白及mRNA表達(dá)的同時(shí)，也能降低富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體5（leucine-rich repeat containing G proteincoupled receptor，Lgr5）的表達(dá)。提高FOXO4 表達(dá)能夠降低E-Cadherin 表達(dá)，促進(jìn)Vimentin 表達(dá)；沉默F(xiàn)OXO4 則會(huì)抑制N-Cadherin 表達(dá)，這為闡明FOXO4調(diào)控有氧糖酵解，抑制胃癌發(fā)生發(fā)展的理論機(jī)制提供了有力支撐[24-25]。實(shí)驗(yàn)[26-27]證實(shí)，Lgr5+細(xì)胞通常分布在胃竇部，并且能夠自我更新并分化為胃竇上皮的所有細(xì)胞類型，且Lgr5 在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯增加。因此，胃Lgr5+干細(xì)胞通常被認(rèn)為是研究胃癌前病變及胃癌發(fā)生的干細(xì)胞群。值得注意的是，上皮細(xì)胞極性喪失，E-Cadherin表達(dá)減少，N-Cadherin和Vimentin 表達(dá)增加是上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial mesenchymal transition，EMT）的典型特點(diǎn)[28]。而EMT也被認(rèn)為是癌癥患者的主要死亡原因——癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵影響因素之一[29]。這進(jìn)一步佐證了本研究與前期工作的一致性與科學(xué)性。

本研究作為課題組前期工作的深入研究，重點(diǎn)著眼于胃癌前病變與有氧糖酵解，在課題組前期工作的基礎(chǔ)上，我們通過檢測(cè)有氧糖酵解相關(guān)標(biāo)志物與信號(hào)通路的表達(dá)情況，探討南蛇藤提取物對(duì)胃癌前病變大鼠有氧糖酵解的影響。本研究結(jié)果驗(yàn)證了南蛇藤提取物逆轉(zhuǎn)胃癌前病變的作用，這與我們前期已發(fā)表結(jié)果相符合。

綜上所述，我們認(rèn)為南蛇藤提取物能夠有效逆轉(zhuǎn)大鼠胃癌前病變的發(fā)生，糾正大鼠胃黏膜的酸性微環(huán)境，其機(jī)制可能與抑制有氧糖酵解、上調(diào)FOXO4的表達(dá)有關(guān)。下一步，本課題組將對(duì)南蛇藤提取物抑制有氧糖酵解的具體機(jī)制進(jìn)行深入探討。本研究為臨床治療胃癌前病變提供了思路，也為將來的研究工作提供了良好的基礎(chǔ)。