黃惠娟，俞烜華，張富，梁玲，李淼鋆，陳孔敏，黃文金

1 福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院治未病科，福州350004；2 福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院風(fēng)濕病科

隨著生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國居民血脂水平逐年升高。調(diào)查顯示，中國成人血脂異?；疾÷始s40%［1］。血脂水平主要受環(huán)境因素和遺傳因素共同影響，環(huán)境因素包括飲食結(jié)構(gòu)、運(yùn)動(dòng)、吸煙、飲酒、熬夜等，而遺傳因素的影響仍在不斷探索中，目前關(guān)于基因多態(tài)性與血脂水平關(guān)系的研究越來越多［2-6］。線粒體融合蛋白2（Mfn2）基因可促進(jìn)線粒體融合，以維持線粒體功能和形態(tài)，在心、腦、腎組織及肌肉組織等中表達(dá)升高。在細(xì)胞內(nèi)，Mfn2主要定位于線粒體外膜，Mfn2過表達(dá)可影響線粒體功能狀態(tài)，導(dǎo)致人體能量代謝以及細(xì)胞功能變化，從而引發(fā)血脂代謝異常、血糖升高、肥胖等病理改變［7-9］。顧偉等［10］研究表明，中國北方漢族人群的Mfn2基因多態(tài)性與血脂水平相關(guān)。本研究以福州地區(qū)漢族人群為研究對(duì)象，觀察Mfn2基因位點(diǎn)不同基因型與血脂水平的相關(guān)性，為心腦血管疾病的預(yù)防和治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2021—2022年在我院體檢中心體檢的福州地區(qū)漢族人群198例。男99例、女99例，年齡（43.3 ± 12.7）歲，身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）為（24.0 ± 2.9）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡18 ～ 75歲；籍貫為福州，漢族，相互間無血緣關(guān)系。排除標(biāo)準(zhǔn)：無法正常溝通，無法提供清晰病史；合并高血壓、糖尿病或糖耐量異常、腦血管疾??；腓腸肌萎縮??；合并肝腎疾病；合并惡性腫瘤等慢性消耗性疾病或多臟器功能衰竭；妊娠或哺乳期婦女；近1個(gè)月內(nèi)接受過影響血脂的治療。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（批號(hào)2021-031-02），受試者均簽署知情同意書。

1.2 Mfn2基因多態(tài)性檢測(cè) 采集受試者空腹靜脈血5 mL，使用Ezup柱式血液基因組DNA抽提試劑盒提取基因組DNA，-20 ℃保存。采用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增引物由Primer Premier5軟件設(shè)計(jì)，由上海生工生物工程股份有限公司合成并提純。rs2295281位點(diǎn)上游引物序列為5′-CCTCTCCCATCCACTTTGCTG-3′，下游引物序列為5′-CCAAAAATA CAAAAATTAGCCAGC-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度280 bp。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系（總體積25 μL）：基因組DNA 1.0 μL，上、下游引物各1.0 μL，dNTP 1.0 μL，Taq DNA聚合酶0.2 U，10×Buffer（含MgCl2）2.5 μL，ddH2O 23.3 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性30 s，63 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循環(huán)10次；95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循環(huán)30次；最后72 ℃修復(fù)延伸10 min，4 ℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，使用凝膠成像分析儀觀察擴(kuò)增結(jié)果；最后擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物用SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒進(jìn)行切膠回收，使用美國ABI公司生產(chǎn)的3730XL測(cè)序儀對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果顯示出單、雙峰兩種測(cè)序峰圖，單峰表示純合基因型，雙峰表示雜合基因型。

1.3 血脂檢測(cè) 采集受試者空腹靜脈血3 mL，使用雅培a3600全自動(dòng)生化儀檢測(cè)總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL），其中TC和TG采用酶法，HDL采用均相測(cè)定法，LDL采用直接法—表面活性劑清除法。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用直方圖進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。群體基因型采用Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，等位基因和基因型構(gòu)成比的組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)。以非條件Logistic回歸模型及分層分析計(jì)算比值比（OR）及其95%可信區(qū)間（CI）評(píng)估Mfn2基因多態(tài)性與血脂水平的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)基因型測(cè)序結(jié)果Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)存在CC、TT、CT三種基因型，見圖1。其中CC基因型攜帶者78例（39.39%），TT基因型攜帶者32例（16.16%），CT基因型攜帶者88例（44.44%）；C等位基因頻率為61.62%，T等位基因頻率為38.38%。Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布符合Hardy-Weiberg遺傳平衡（P均＞0.5），具有群體代表性。

圖1 Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)基因型

2.2 Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)不同基因型攜帶者血脂水平比較 見表1。TT基因型攜帶者血清TG水平高于CC、CT基因型（P均＜0.05）。不同基因型攜帶者血清TC、HDL、LDL水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。

表1 Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)不同基因型攜帶者血脂水平比較（mmol/L，）

表1 Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)不同基因型攜帶者血脂水平比較（mmol/L，）

注：與TT基因型比較，*P＜0.05。

基因型CC TT CT LDL 3.441 ± 0.782 3.572 ± 0.847 3.271 ± 0.912 n 78 32 88 TC 5.412 ± 0.888 5.572 ± 0.903 5.253 ± 1.018 TG 1.232 ± 0.718*1.682 ± 0.940 1.378 ± 0.748*HDL 1.410 ± 0.365 1.241 ± 0.281 1.356 ± 0.321

2.3 總體人群Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)不同基因型與血脂水平的關(guān)系 以基因型作為因變量，校正性別、年齡、BMI分級(jí)等混雜因素后，Logistic回歸分析結(jié)果顯示，相對(duì)于TT基因型，CC基因型是血清TG水平降低的影響因素（P＜0.05）；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于TT基因型，CC+CT基因型是血清TG水平降低的影響因素（P＜0.05）。相對(duì)于TT基因型，CC基因型是血清HDL水平升高的影響因素（P＜0.05）；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于TT基因型，CC+CT基因型是血清HDL水平升高的影響因素（P＜0.05）。血清TC和LDL水平各組間比較，（P均＞0.05）。見表2。

表2 Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)不同基因型與血脂水平的關(guān)系

2.4 分層分析Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)基因型與血脂水平的關(guān)系 總體人群的分析中未發(fā)現(xiàn)血清TC水平與Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)基因型的相關(guān)性，但以性別分層分析發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)與血清TC水平相關(guān)，見表3。在男性人群中，相對(duì)于TT基因型，CT基因型和CC+CT基因型是血清TC水平降低的影響因素（P均＜0.05）。在女性人群中，相對(duì)于TT基因型，CC基因型是TG水平降低的影響因素（P＜0.05）；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于CC基因型，CT+TT基因型是TG水平升高的影響因素（P＜0.05）。在女性人群中，相對(duì)于TT基因型，CC基因型和CC+CT基因型是血清HDL水平升高的影響因素（P均＜0.05）。

表3 性別分層分析Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)不同基因型與血脂水平的關(guān)系

3 討論

研究表明，血脂水平與心腦血管疾病的發(fā)病密切相關(guān)，TC、TG、LDL升高均可引起動(dòng)脈粥樣硬化性心腦血管疾病，導(dǎo)致心腦血管事件的發(fā)生；而HDL是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，與心血管疾病的發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)。影響血脂代謝的機(jī)制復(fù)雜，不僅有環(huán)境因素，遺傳因素也參與其中，其中Mfn2基因是影響血脂代謝的遺傳因素之一。Mfn2基因異常表達(dá)使線粒體的融合功能失調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致血脂代謝異常［7-9］。Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)位于該基因的轉(zhuǎn)錄區(qū)，該位點(diǎn)的基因突變可以改變Mfn2蛋白表達(dá)［11］。CHEN等［12］報(bào)道，在Mfn2缺失小鼠的肝臟中，脂肪合成效率明顯降低，最終小鼠血清TG明顯升高。陳小琳等［13］報(bào)道，在健康小鼠模型中，抑制Mfn2表達(dá)可引起肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和代謝功能損害，導(dǎo)致葡萄糖和脂肪酸代謝通路受損，使小鼠血清TG升高。另有研究表明，TG水平升高與Mfn2低表達(dá)導(dǎo)致的線粒體融合效率降低有關(guān)［14］。KONG等［15］在高脂飲食的大鼠中發(fā)現(xiàn)Mfn2高表達(dá)，通過AMP激活蛋白激酶信號(hào)通路提高大鼠骨骼肌中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的轉(zhuǎn)運(yùn)能力，有助于降低血脂。

Mfn2基因影響血脂代謝的分子機(jī)制研究已取得很大進(jìn)展，但基因組學(xué)的研究相對(duì)較少?？紤]到基因多態(tài)性存在種族、地域差異，本研究以福州地區(qū)漢族人群作為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)與血脂水平具有明顯相關(guān)性，這一發(fā)現(xiàn)與顧偉等［10］報(bào)道的中國北方漢族人群該位點(diǎn)的研究結(jié)果一致，表明中國漢族人群的Mfn2基因多態(tài)性與血脂水平存在關(guān)聯(lián)，Mfn2基因多態(tài)性影響血脂代謝。但在總體人群中發(fā)現(xiàn)CC基因型攜帶者的TG水平明顯低于TT基因型攜帶者，這與顧偉等［10］報(bào)道的中國北方漢族人群C等位基因TG水平更高不一致，不排除南北方的差異或樣本量較少所致，有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究證實(shí)。

本研究結(jié)果顯示，Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)TT基因型攜帶者血清TG水平高于CC、CT基因型，提示攜帶CC、CT基因型可能是血脂代謝異常的保護(hù)因素，而攜帶TT基因型可能是影響血脂代謝、升高血脂水平的潛在風(fēng)險(xiǎn)。在與TC、LDL的關(guān)聯(lián)性分析中未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性，但性別分層分析結(jié)果顯示，在男性人群中，相對(duì)于TT基因型，CT和CC+CT基因型是TC水平降低的影響因素，提示男性人群TT基因型攜帶者TC水平可能更高；而女性人群中TT、CT+TT基因型是TG水平升高、HDL水平降低的影響因素，CC基因型攜帶者TG水平可能相對(duì)較低。

綜上所述，Mfn2基因rs2295281位點(diǎn)的TT基因型可能是福州地區(qū)漢族人群血脂水平升高的遺傳影響因素之一，男性人群風(fēng)險(xiǎn)可能更高，而CC基因型攜帶人群可能降低血脂異常風(fēng)險(xiǎn)，且女性人群中可能有更多獲益。本研究不足之處在于：樣本量偏小，研究位點(diǎn)較少，結(jié)果可能受到環(huán)境因素的影響而產(chǎn)生偏倚。以上結(jié)論有待擴(kuò)大樣本量、增加基因多態(tài)性位點(diǎn)并從機(jī)制方面進(jìn)一步論證。