占 凱吳皓萌鄭 歡秦書敏楊元明黃紹剛

(1.廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院,廣州 510120;2.廣州中醫(yī)藥大學東莞醫(yī)院,廣東 東莞 523000;3.省部共建中醫(yī)濕證國家重點實驗室,廣州 510120)

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)是最常見的功能性腸病,以腹痛、腹脹或腹部不適并伴有排便習慣改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn),基于羅馬IV 標準下的全球患病率約為3.6%~4.0%[1],中國的患病率約為1.4%~11.5%[2]。IBS 有四種亞型,腹瀉型腸易激綜合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)是IBS 最主要的亞型,約占IBS 患者數(shù)的21.0%~74.1%[2]。腸道菌群作為眾多致病因素和機制的交匯點參與了IBS 的發(fā)病過程。既往研究顯示,與健康人群相比,IBS 患者存在明顯腸道菌群失調(diào),且在各亞型IBS 患者中,以IBS-D 腸道菌群失調(diào)最為嚴重[3-4]。短鏈脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)主要包括乙酸、丙酸、丁酸和戊酸等,是結(jié)腸細菌通過膳食碳水化合物和一些氨基酸發(fā)酵的主要代謝產(chǎn)物,與機體內(nèi)臟高敏[5]、宿主腸道免疫[6]及腸道屏障功能[7]等密切相關(guān)。本研究旨在通過16S rRNA 測序和靶向代謝組學分析IBS-D大鼠模型的腸道菌群-短鏈脂肪酸代謝軸變化特點,以及探討丁酸鈉對該軸的影響。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

17 只SPF 級Wistar 雄性大鼠,7 周齡,體重為(200±20)g,購買于南方醫(yī)科大學實驗動物中心[SCXK(粵)2021-0041]。本課題動物實驗經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學第二臨床醫(yī)學院(廣東省中醫(yī)院)倫理委員會批準(BF2020-028-01),實驗動物被飼養(yǎng)于廣東省中醫(yī)院科研樓動物中心[SYXK(粵)2018-0094],飼養(yǎng)環(huán)境溫度(22±1)℃,濕度(50±10)%,12 h/12 h 明暗交替周期,并提供足夠的食物和水,所有動物適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后開始實驗,實驗操作遵循3R 原則。

1.2 主要試劑與儀器

丁酸鈉(美國MedChemExpres 公司,批號:27305);醋酸(上海阿拉丁公司,貨號:A298827);DNA 抽提試劑盒(上海索寶生物科技有限公司,貨號:D5625-01);FastPfu 聚合酶(中國環(huán)凱微生物公司,貨號:HKE031-01A)。

超微量分光光度計(美國 Thermo Fisher Scientific 公司,型號:NanoDrop2000);MISEQ 測序儀(美國Illumina 公司,型號:Illumina Miseq);PCR儀(美國Applied Biosystems 公司,型號:Applied Biosystems GeneAmp?9700 型);小型離心機(德國,Eppendorf 公司,型號:Eppendorf 5430 R);粉碎研磨儀(上海萬柏生物科技有限公司,型號:TL-48R)。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗動物分組

將17 只SPF 級Wistar 雄性大鼠隨機分為正常組(5 只)、模型組(5 只)、丁酸鈉腹腔注射組(7只)。

1.3.2 束縛應(yīng)激+醋酸灌腸建立IBS-D 大鼠模型

大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)1 周后,予以4%醋酸灌腸1 次,具體方法參考文獻[8]:灌腸前大鼠禁食24 h,乙醚麻醉后,插入涂抹有潤滑劑的灌胃針8 cm,注入1 mL 4%(40 mL/L)醋酸溶液,緩慢拔出灌胃針,用手壓迫肛門并將大鼠尾巴抬高30 s, 30 s 后注入1 mL 0.9%NaCl 溶液沖洗,放回籠中自由活動進食水。與此同時,除正常組外的其余2 組大鼠,每日予自制束縛袋(專利號:ZL201820882292.X)束縛2 h(大鼠無法自由活動,可正常呼吸和排便),每天上午10:00~12:00,持續(xù)3 周。

1.3.3 給藥方法及劑量

造模開始后,丁酸鈉腹腔注射組即予以丁酸鈉腹腔注射干預(yù)14 d,500 mg/(kg·d)[9]。其余組予以相對應(yīng)劑量生理鹽水腹腔注射。

1.3.4 取材

糞便:給藥結(jié)束后,按照無菌原則收集大鼠糞便,即收集糞便時使用高溫高壓消毒的鑷子、Eppendorf(EP)管及無菌培養(yǎng)皿。帶好無菌手套后,提起大鼠尾巴,用準備好的75%酒精棉球消毒大鼠肛周,刺激大鼠排便至無菌培養(yǎng)皿中,用無菌鑷子將糞便轉(zhuǎn)移至1.5 mL EP 管中,避免不同組間交叉污染,標號,置于液氮罐中,隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中儲存待檢。

1.3.5 指標檢測及方法

(1)各組大鼠一般指標測定

觀察模型組與正常組大鼠形態(tài)變化,包括皮毛色澤、活動能力變化、神態(tài)、活動度、糞便、飲食等情況;每周測量大鼠體重變化、進食量、飲水量及排便情況。

(2)腹壁撤退反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)評分

在給藥結(jié)束后第1 天,用自制的結(jié)腸測壓計檢測各組大鼠腹壁撤退反射。檢測前輕輕觸碰大鼠肛門,排便后將涂抹有石蠟油的球囊塞入肛門內(nèi)8 cm,將連接球囊的管子固定在大鼠尾巴根部。待大鼠平靜后,緩慢向球囊充氣至氣壓為20、40、60 及80 mmHg,20 s 內(nèi)觀察大鼠腹壁對腸腔球囊擴張刺激的反應(yīng),根據(jù)AWR 評分標準進行評分。

(3)糞便含水率測定

給藥結(jié)束后當天收集所有大鼠的糞便,用離心管采集大鼠糞便,微量天平稱重并記錄后,放置于烘箱2 h,之后再次稱重并記錄。糞便含水率=(烘干前糞便重量-烘干后糞便重量)/烘干前糞重量×100%。

(4)大鼠腸道菌群16S rRNA 檢測

收集大鼠糞便,用DNA 提取試劑盒提取糞便中的總DNA 并檢測其提取質(zhì)量,然后用338F 和806R引物對V3~V4 可變區(qū)進行PCR 擴增。使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR 產(chǎn)物,利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit(Axygen Biosciences,UnionCity,加利福尼亞州,美國)進行純化,Tris-HCl 洗脫,2%瓊脂糖電泳檢測。利用QuantiFluorTM-ST(Promega, 美國)進行檢測定量。根據(jù)Illumina MiSeq 平臺(Illumina,圣地亞哥,美國)標準操作規(guī)程將純化后的擴增片段構(gòu)建PE 2×300 的文庫。利用Illumina 公司的Miseq PE300 平臺進行測序。

(5)短鏈脂肪酸氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)檢測

量取乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸、異戊酸純標準品適量,用乙醚配制成14 個混合標準濃度梯度。色譜條件:色譜柱Agilent HP-INNOWAX 毛細管柱(30 m×0.25 mm ID×0.25 μm);分流進樣,進樣量1 μL,分流比10 ∶1。進樣口溫度250℃;離子源溫度230℃;傳輸線溫度250℃,四極桿溫度150℃。程序升溫起始溫度90℃;然后以10℃/min升溫至120℃;再以5℃/min 升溫至150℃;最后以25℃/min 升溫至250℃維持2 min。載氣為氦氣,載氣流速1.0 mL/min。MS 條件:電子轟擊電離源,SIM 掃描方式,電子能量70 eV。取大鼠糞便上清液上機測試驗證方法可行性,待總離子流色譜圖明確8 個短鏈脂肪酸均能夠區(qū)分開后,對SCFA 標準液的濃度系列分別進行GC-MS 檢測。經(jīng)精密度、重復(fù)性、回收率檢測無誤后對所有樣品進行定量分析。SCFA 含量(μg/g)= 濃度(μg/mL)×0.5/取樣量(mg)×1000。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23 軟件進行數(shù)據(jù)處理,畫圖采用Prism 8 軟件,符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差(±s)表示,不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用M(P25,P75)表示。符合正態(tài)分布且方差齊性的數(shù)據(jù),兩間比較采用t檢驗;符合正態(tài)分布但方差不齊的數(shù)據(jù),兩間比較采用t’檢驗;不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù),兩組間比較采用Mann-WhitneyU秩和檢驗,以P＜0.05 為具有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 一般狀態(tài)觀察

與正常組相比較,給予4%醋酸灌腸及束縛應(yīng)激后,大鼠進食量、飲水量減少,自主活動減少,反應(yīng)遲鈍、蜷縮、扎堆,毛發(fā)凌亂,聞聲易驚,肛周污穢,持續(xù)排出淺棕色不成形大便,無血便,伴有少量黏液。與模型組對比,經(jīng)丁酸鈉干預(yù)后,進食量、飲水量稍增加,大鼠大便性狀稍成形,自主活動增加,毛色稍光澤。

2.2 體重增長情況

如圖1 所示,與正常組相比較,模型組大鼠體質(zhì)量呈負增長,在造模第1 周最為明顯,之后體重呈緩慢增長趨勢。丁酸鈉干預(yù)后,大鼠體重與模型組大鼠無明顯差異,但呈平穩(wěn)增長。提過提示腹瀉可使大鼠體重明顯降低,丁酸鈉可在一定程度上緩解束縛應(yīng)激聯(lián)合醋酸灌腸導(dǎo)致的腹瀉,改善IBS-D 大鼠體重。

圖1 各組大鼠體重變化情況Figure 1 Weight change of rats in each group

2.3 腹壁撤退反射(AWR)評分

AWR 實驗是評估大鼠內(nèi)臟高敏感應(yīng)用最廣泛的手段。如表1 所示,與正常組相比較,模型組大鼠在40 mmHg、60 mmHg 及80 mmHg 壓力的AWR 評分均升高,差異具有統(tǒng)計學意義,提示內(nèi)臟高敏誘導(dǎo)成功。與模型組相比較,丁酸鈉組大鼠在60 mmHg 壓力的AWR 評分較模型組顯著下降,在40 mmHg 和80 mmHg 壓力的AWR 評分雖均有下降的趨勢,但均無統(tǒng)計學意義。

表1 各組大鼠AWR 評分結(jié)果Table 1 AWR score of rats in each group

2.4 糞便含水率

在造模期間,醋酸灌腸聯(lián)合束縛應(yīng)激所誘導(dǎo)的大鼠均出現(xiàn)不成形大便,腹瀉率為100%。與正常組相比,模型組糞便含水率明顯升高;經(jīng)丁酸鈉干預(yù)后,丁酸鈉組大鼠糞便含水率較模型組降低,差異顯著。具體如圖2 所示。

注:與模型組比較,***P＜0.001。圖2 各組大鼠糞便含水率Note.Compared with model group,***P＜0.001.Figure 2 Water content in feces of rats in each group

2.5 各組大鼠腸道菌群測序

2.5.1 α 多樣性

α 多樣性是評估菌群豐富度和均勻度的指標,如圖3 所示,與正常組相比,模型組大鼠Chao1 指數(shù)、Faith-pd 指數(shù)及Observed-otus 指數(shù)有下降的趨勢,但均無統(tǒng)計學差異。與模型組比較,丁酸鈉組以上指數(shù)雖有增加的趨勢,但也均無統(tǒng)計學意義。Shannon 指數(shù)在各組之間均無明顯變化。

圖3 各組大鼠腸道菌群α 多樣性Figure 3 α diversity of gut microbiota in each group of rats

2.5.2 β 多樣性

基于unweighted-unifrace 距離來進行PCoA 分析(圖4A)和NMDS 分析(圖4B),結(jié)果均顯示正常組、模型組及丁酸鈉組糞便樣本距離接近,提示三組大鼠糞便群落組成結(jié)構(gòu)相似,β 多樣性無明顯差異。

圖4 各組大鼠腸道菌群β 多樣性Figure 4 β diversity of gut microbiota in each group of rats

2.5.3 各組大鼠腸道菌群門、屬水平變化情況

在門水平(圖5A),三組大鼠均以厚壁菌門(Firmicutes)、糖細菌門(Saccharobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、軟壁菌門(Tenericutes)、放線菌門(Actinobacteria)及變形菌門(Proteobacteria)為主要組成,其中厚壁菌門(Firmicutes)均占比70%以上。與正常組比較,模型組厚壁菌門、擬桿菌門及變形菌門均有下降的趨勢,但無統(tǒng)計學差異。與模型組比較,丁酸鈉有逆轉(zhuǎn)上述菌群下降的趨勢。在屬水平(圖5B),與正常組比較,我們發(fā)現(xiàn)模型組乳酸桿菌屬(Lactobacillus)、瘤胃球菌屬(Ruminococcus)及雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)等相對豐度明顯下降,而布勞特氏菌屬(Blautia)相對豐度明顯升高;經(jīng)丁酸鈉干預(yù)后,乳酸桿菌屬、瘤胃球菌屬及雙歧桿菌屬相對豐度升高但無統(tǒng)計學差異,布勞特氏菌屬相對豐度明顯下降(圖5C、5D)。

注:與模型組比較,*P＜0.05,**P＜0.01。圖5 各組大鼠腸道菌群門、屬水平變化情況Note.Compared with model group,*P＜0.05,**P＜0.01.Figure 5 Relative abundances of gut microbiota at phylum and species level in each group of rats

2.6 各組大鼠糞便短鏈脂肪酸含量測定

研究結(jié)果顯示,與正常組比較,模型組大鼠糞便乙酸含量明顯升高,丁酸及戊酸含量顯著降低,丙酸、異丁酸及異戊酸含量無明顯差異;與模型組比較,我們發(fā)現(xiàn)腹腔注射丁酸鈉可顯著提高大鼠腸道丁酸及戊酸的含量,而對乙酸的表達無明顯作用(圖6)。

注:與模型組比較,*P＜0.05,**P＜0.01。圖6 各組大鼠糞便SCFA 含量Note.Compared with model group,*P＜0.05,**P＜0.01.Figure 6 Fecal SCFA content in each group of rats

2.7 腸道菌群與SCFAs 相關(guān)性

如圖7 所示,Spearman 相關(guān)性分析顯示,芽孢桿 菌 屬 (Elusimicrobium)、 考 拉 桿 菌 屬(Phascolarctobacterium) 及 聚 集 桿 菌 屬(Aggregatibacter)與丁酸呈顯著正相關(guān)。薩特氏菌屬(Sutterella)、Reyranella與戊酸呈顯著負相關(guān),而芽孢桿菌屬(Elusimicrobium)與戊酸呈顯著正相關(guān),具有統(tǒng)計學意義。

注:橫軸為SCFAs,縱軸為腸道細菌。通過計算獲得R 值(秩相關(guān))和P 值。R 值在圖中以不同顏色展示正相關(guān)(紅色)或負相關(guān)(藍色),*P＜0.05,**P＜0.01。圖7 腸道細菌與SCFAs 相關(guān)性分析Note.Horizontal axis is SCFAs, and the vertical axis is gut microbiota.R value (rank correlation) and P value are obtained by calculation.R value shows positive correlation (red) or negative correlation (blue) in different colors,*P＜0.05,**P＜0.01.Figure 7 Correlation between gut microbiota and SCFAs

3 討論

本研究結(jié)果顯示,4%醋酸灌腸聯(lián)合束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的IBS-D 大鼠模型可以成功模擬IBS-D 患者的腹瀉及內(nèi)臟高敏表型,且該類大鼠模型表現(xiàn)為以乳酸桿菌屬及雙歧桿菌屬等相對豐度明顯降低、布勞特氏菌屬相對豐度升高為特征的糞便菌群失調(diào);和以糞便乙酸含量升高,丁酸、戊酸含量降低為特征的SCFAs 代謝失調(diào)。與此同時,我們發(fā)現(xiàn)丁酸鈉可能通過改善腸道菌群-SCFAs 代謝軸失調(diào)而緩解IBSD 大鼠腹瀉及內(nèi)臟高敏表型。

IBS-D 是目前公認的與腸道微生態(tài)聯(lián)系最為密切的疾病之一。人體分布的共生微生物有80%生活在消化道內(nèi),細胞總數(shù)超過1014個,約為人體自身細胞數(shù)量的1.3~2.3 倍[3]。羅馬IV 指出腸道菌群失調(diào)是IBS-D 的重要機制之一,腸道菌群結(jié)構(gòu)及數(shù)量的改變是腸道內(nèi)臟高敏感、免疫過度激活、腸動力增強、低度炎性反應(yīng)狀態(tài)及黏膜屏障功能受損等腸道穩(wěn)態(tài)失調(diào)的重要誘因,參與IBS 重要病理基礎(chǔ)的構(gòu)成[10-11]。本研究結(jié)果顯示三組大鼠腸道菌群的α 多樣性差異無統(tǒng)計學意義,這與目前在IBSD 患者發(fā)現(xiàn)的腸道菌群多樣性變化是一致的[12-14]。但是在屬水平,我們發(fā)現(xiàn)模型組乳酸桿菌屬(Lactobacillus)及雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)相對豐度明顯下降。研究表明,乳酸桿菌(Lactobacillus)是人體腸道中一種豐富的益生菌,不僅具有營養(yǎng)功能,還具有調(diào)節(jié)腸道功能紊亂、調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤等作用[15-16]。一些研究還證實乳酸桿菌可提高黏膜屏障功能,主要通過以下三個途徑[17]:(1)增加緊密連接蛋白的表達;(2)促進黏液分泌基因的表達,從而減少病原體與上皮細胞的結(jié)合;(3)抑制炎癥的發(fā)展。目前關(guān)于乳酸桿菌(Lactobacillus)在抑制腸道炎癥方面的研究眾多,如在葡聚糖硫酸酯鈉和2,4,6-三硝基苯磺酸誘導(dǎo)的結(jié)腸炎動物模型、潰瘍性結(jié)腸炎患者及克羅恩病患者的治療中均顯示出了良好的抗炎效果;這種抗炎作用可通過上調(diào)Toll 樣受體的負調(diào)節(jié)因子抑制絲裂原活化蛋白激酶和NF-κB 信號通路的激活實現(xiàn)。而雙歧桿菌屬不僅可以刺激γ-氨基丁酸的產(chǎn)生調(diào)節(jié)腦-腸軸,從而改善焦慮和抑郁[18];還可以通過調(diào)節(jié)Treg/Th2 反應(yīng)和腸道菌群重塑改善葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎。予以丁酸鈉干預(yù)后,IBS-D 大鼠腸道乳酸桿菌屬及乳酸桿菌屬相對豐度均有增加的趨勢,表明丁酸鈉有增加IBS-D 益生菌的潛力。近期研究表明,IBS 患者布勞特氏菌屬(Blautia)相對豐度顯著增加[19],患者腹瀉癥狀與該菌豐度呈正相關(guān),被認為是腸道“失衡”的標志[20],其誘發(fā)IBS-D 的機制可能與誘導(dǎo)腸道的炎癥激活,繼而引起腸黏膜屏障損傷和內(nèi)臟高敏[21]。另外,布勞特氏菌屬是腸道產(chǎn)乙酸的主要菌屬[22],而乙酸是誘導(dǎo)IBS-D 模型的常用物質(zhì)之一。我們發(fā)現(xiàn)布勞特氏菌屬(Blautia)在IBS-D 大鼠模型中明顯升高,而丁酸鈉可降低其相對豐度,提示丁酸鈉改善IBS-D 腹瀉及內(nèi)臟高敏可能與降低布勞特氏菌屬相對豐度有關(guān)。

菌群的失調(diào)必然會導(dǎo)致其代謝產(chǎn)物的改變。SCFAs 是腸道菌群的重要代謝產(chǎn)物之一,在IBS-D的發(fā)病機制中占據(jù)著重要地位。本研究檢測了三組大鼠糞便中乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸六種SCFAs 的含量。本研究中丁酸鈉干預(yù)后IBS-D 大鼠腸道乙酸含量并未下降,或者其實丁酸鈉有下調(diào)乙酸作用,但前期造模時采用了乙酸灌腸,外源性補充的乙酸掩蓋了丁酸鈉的效應(yīng)作用,因此無法明確丁酸鈉對乙酸的作用,這也是本實驗的不足之處。因此,后續(xù)實驗需要評判乙酸在IBSD 的作用時,可考慮束縛應(yīng)激聯(lián)合番瀉葉或大黃灌胃等方法。

丁酸在胃腸道中起到多種益處,丁酸陰離子很容易作為主要的能量來源被腸上皮細胞吸收,其本身還參與了腸道免疫調(diào)節(jié)和抗炎過程,是結(jié)腸細胞增殖和凋亡、胃腸運動的重要調(diào)節(jié)劑[23]。既往研究表明,丁酸可能通過多種途徑維持腸上皮屏障完整的功能而改善IBS-D 腹瀉:(1)抑制組蛋白去乙酰化酶和外周促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子受體的表達[24];(2)參與合成前列腺素E1 促進MUC2 基因的表達, 使MUC2 分泌增加[25];(3)抑制結(jié)腸上皮細胞促炎通路的激活,下調(diào)炎性因子如 NF-κB、TNF-α、IFN-γ、TLR2 等的表達[26]。給予IBS 患者移植健康人群的糞菌液可顯著提高其糞便丁酸、戊酸表達水平,且應(yīng)答者丁酸水平與IBS-SSS 評分、疲勞評定量表評分呈負相關(guān)[23]。動物實驗顯示丁酸鈉可下調(diào)IRAK1 改善腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感[28]。本研究中IBS-D 大鼠糞便丁酸、戊酸含量明顯下降,予以腹腔注射丁酸鈉后,丁酸、戊酸含量明顯升高,結(jié)果與上述研究保持一致。針對戊酸而言,僅在IBD 患者中發(fā)現(xiàn)戊酸含量降低[29],還需要大量研究來證實其在IBS-D 中的作用,本實驗也為今后進一步深入研究提供依據(jù)。

丁酸在腸道中主要由梭菌屬、柔嫩梭菌屬、羅斯式菌屬、真菌屬及丁酸弧菌屬產(chǎn)生,而這些產(chǎn)丁酸細菌的代謝能力還與其他腸道微生物的存在有關(guān),尤其是乳酸菌和雙歧桿菌[30]。研究表明,口服乳酸桿菌能夠增加腸道內(nèi)產(chǎn)丁酸細菌羅斯式菌屬的豐度,并顯著增加丁酸含量[31]。另外,霍式真桿菌不能利用復(fù)雜的低聚糖和多糖,但低聚果糖的存在可以增加雙歧桿菌的豐度,雙歧桿菌產(chǎn)生的乳酸可以被霍式真桿菌利用轉(zhuǎn)化為丁酸鹽[32]。本實驗中發(fā)現(xiàn)丁酸鈉有增加IBS-D 腸道乳酸菌和雙歧桿菌的趨勢,給我們今后的研究有一定提示作用,即丁酸鈉可能通過乳酸菌和雙歧桿菌間接發(fā)揮增加調(diào)控產(chǎn)丁酸菌的作用,從而改善IBS-D 癥狀,但可能由于樣本量相對較少,結(jié)果無顯著性,后續(xù)實驗需進一步驗證。與此同時,相關(guān)性分析顯示丁酸及戊酸的表達水平與芽孢桿菌屬(Elusimicrobium)、考拉桿菌 屬 (Phascolarctobacterium)、 聚 集 桿 菌 屬(Aggregatibacter)及薩特氏菌屬(Sutterella)密切相關(guān),這為今后進一步研究腸道菌群與SCFAs 的關(guān)系奠定了重要基礎(chǔ)。

綜上所述,IBS-D 大鼠存在腸道菌群-短鏈脂肪酸代謝軸失調(diào),丁酸鈉可通過改善該軸失調(diào)達到緩解IBS-D 腹瀉和內(nèi)臟高敏的作用,但由于本實驗主要通過菌群及代謝角度闡釋丁酸鈉與IBS-D 的關(guān)系,未進行相關(guān)分子生物學檢測及機制研究,后續(xù)實驗據(jù)此進一步完善。