白雅林 方占海 丁晨哲 蘭彥平 劉帶林 齊高洋 陳 磊 王軍成

（寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院，銀川 740001）

腦出血是腦實(shí)質(zhì)血管破裂引起的出血，占腦卒中的20%～30%，病死率較高，腦出血后會(huì)繼發(fā)嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)及毒性損傷［1］。血腦屏障受損是腦繼發(fā)損傷的重要原因，血腦屏障可阻礙血液中的一些有害物質(zhì)進(jìn)入大腦進(jìn)而損傷大腦，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)維持具有重要生物學(xué)意義［2］。因此，保護(hù)血腦屏障并降低神經(jīng)炎癥是治療腦出血的方向之一。目前腦出血治療仍缺乏有效藥物，尋找保護(hù)血腦屏障、降低神經(jīng)炎癥的治療方法是有待研究課題。人參對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)具有廣泛作用，可增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，人參皂苷Rg1作為人參干燥根的提取物，具有抗炎、抗氧化應(yīng)激等功效［3-4］。杜姝等［5］研究顯示，人參皂苷Rg1 可減輕癲癇大鼠海馬神經(jīng)元損傷，但對(duì)腦出血患者作用的研究較少。甲?；氖荏w2（formyl peptide receptor 2，F(xiàn)PR2）是與神經(jīng)炎癥關(guān)系密切的因子之一，在外界刺激下可介導(dǎo)炎癥作用，通過(guò)調(diào)控NF-κB、MAPK 等通路參與腦出血神經(jīng)炎癥進(jìn)展［6-7］。生信網(wǎng)站分析顯示miR-144-3p 與FPR2 存在靶向作用關(guān)系，且miR-144-3p 在腦出血中表達(dá)上調(diào)［8］。基于此，本研究探討人參皂苷Rg1 對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠血腦屏障、神經(jīng)炎癥的治療作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 90 只SD 大鼠購(gòu)自常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（蘇）2021-0013；人參皂苷Rg1（B21057）、膠原酶Ⅱ（S10054）、伊文思藍(lán)（EB）（R20616）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；ago-miR-144-3p 由上海生工生物工程技術(shù)有限公司構(gòu)建；TNF-α ELISA 試劑盒（ml002953）、IL-6 ELISA試劑盒（ml102828）、IL-1β ELISA 試劑盒（ml003057）購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；總RNA 抽提試劑盒（12183016）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（4366597）、總蛋白提取試劑盒（89842）購(gòu)自賽默飛世爾科技公司；兔源FPR2（ab203129）、p-p38（ab178867）、p38（ab170099）、GAPDH（ab9485）一抗、山羊抗兔二抗（ab6721）購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 腦出血模型大鼠構(gòu)建及分組 90 只SD 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、腦出血組、人參皂苷Rg1低劑量組、人參皂苷Rg1 高劑量組、人參皂苷Rg1 高劑量+ago-miR-144-3p 組，每組18 只，除對(duì)照組外，其余各組均構(gòu)建腦出血大鼠模型，即術(shù)前禁食12 h，禁水4 h，戊巴比妥鈉麻醉，于右側(cè)尾狀核（前囟0.2 mm、中線右側(cè)3 mm、深6 mm處）注射0.5 U膠原酶Ⅱ，注射完畢后留針5 min，對(duì)照組以等量生理鹽水代替［9］。術(shù)后保溫，大鼠麻醉蘇醒后采用Longa 法評(píng)分，1～3 分代表造模成功。造模成功后，人參皂苷Rg1 低劑量組、人參皂苷Rg1 高劑量組、人參皂苷Rg1 高劑量+ago-miR-144-3p 組大鼠分別腹腔注射10 mg/kg、40 mg/kg、40 mg/kg 人參皂苷Rg1［10］，人參皂苷Rg1高劑量+ago-miR-144-3p組腦內(nèi)1次注射5 μl ago-miR-144-3p，注射完畢退針，對(duì)照組、腦出血組連續(xù)7 d注射等量生理鹽水，1次/d，連續(xù)給藥14 d。

1.2.2 大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分 給藥前、末次給藥后各組大鼠均進(jìn)行Longa 評(píng)分，0 分：無(wú)神經(jīng)功能損傷；1 分：大鼠不能完全伸直前肢；2 分：大鼠一側(cè)癱瘓，存在追尾現(xiàn)象；3 分：大鼠不能打滾及站立；4分：大鼠無(wú)法進(jìn)行自發(fā)性活動(dòng)，存在意識(shí)障礙。

1.2.3 腦含水量測(cè)定 每組隨機(jī)選取6只大鼠，戊巴比妥鈉麻醉后斷頭取腦，電子天平測(cè)濕重，烘干后測(cè)干重，腦含水量（%）=（濕重-干重）/濕重×100%。

1.2.4 ELISA檢測(cè)大鼠腦組織勻漿炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平 每組隨機(jī)選取6只大鼠，戊巴比妥鈉麻醉后斷頭取腦，取大鼠部分血腫周?chē)M織，勻漿后按照TNF-α、IL-6、IL-1β試劑盒測(cè)定TNF-α、IL-6、IL-1β 水平。部分血腫周?chē)M織修剪約1 mm3后戊二醛溶液中浸泡；部分血腫周?chē)M織冷凍保存。

1.2.5 大鼠血腦屏障結(jié)構(gòu)觀察 選取1.2.4中戊二醛浸泡的腦組織，固定、脫水、包埋，切片（5 μm），醋酸鈾和枸櫞酸鉛染色，透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.2.6 大鼠血腦屏障通透性觀察 每組隨機(jī)選取6 只大鼠，處死前尾靜脈注射4 ml/kg EB，1 h 后戊巴比妥鈉麻醉并斷頭處死大鼠，取右腦，稱(chēng)重后添加三氯乙酸勻漿過(guò)夜，添加至含5 ml 50%甲酰胺溶液試管，孵育24 h，離心（15 000 r/min、30 min）取上清，測(cè)定632 nm 處吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以EB 含量代表血腦屏障通透性，每組設(shè)3 個(gè)重復(fù)。EB 滲出率（μg/g 腦濕重）=EB 濃度（μg/ml）×甲酰胺容積（ml）/濕重（g）。

1.2.7 qRT-PCR 檢 測(cè)miR-144-3p、FPR2 mRNA、p38 mRNA 水平 TRIzol 法提取各組大鼠腦組織RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 后qRT-PCR 擴(kuò) 增，2-??Ct分析miR-144-3p、FPR2 mRNA、p38 mRNA 相對(duì)表達(dá)，分別以U6和GAPDH為內(nèi)參，引物序列見(jiàn)表1。

表1 qRT-PCR引物Tab.1 qRT-PCR primers

1.2.8 Western blot 檢測(cè)FPR2、p38 蛋白表達(dá) 裂解各組大鼠腦組織，15 000 r/min 離心5 min，收集上清，蛋白提取試劑盒提取總蛋白，BCA 試劑盒定量蛋白，行SDS-PAGE 電泳，轉(zhuǎn)膜（PVDF）后封閉（5%脫脂奶粉），添加FPR2、p-p38、p38、GAPDH 一抗（稀釋比均為1∶1 000），孵育過(guò)夜，添加HRP 標(biāo)記的IgG山羊抗兔二抗孵育1 h，ECL試劑顯色后凝膠成像儀曝光、觀察，Image J 軟件分析FPR2、p38 蛋白灰度值，并計(jì)算其含量，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0 軟件分析數(shù)據(jù)，所有數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分的影響 給藥前，與對(duì)照組相比，各組大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分均升高（P<0.05），各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；末次給藥后，與對(duì)照組相比，腦出血組大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分升高（P<0.05）；與腦出血組相比，人參皂苷Rg1低劑量組、人參皂苷Rg1高劑量組大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分降低（P<0.05），組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與人參皂苷Rg1 高劑量組相比，人參皂苷Rg1 高劑量+ago-miR-144-3p 組大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分升高（P<0.05，表2）。

表2 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分的影響（±s，n=18）Tab.2 Effect of ginsenoside Rg1 on neurological injury score of rats （±s， n=18）

表2 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分的影響（±s，n=18）Tab.2 Effect of ginsenoside Rg1 on neurological injury score of rats （±s， n=18）

Note：Compared with control group， 1）P<0.05； compared with intracerebral hemorrhage group， 2）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 low dose group， 3）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 high dose group， 4）P<0.05.

Groups Control Intracerebral hemorrhage Ginsenoside Rg1 low dose Ginsenoside Rg1 high dose Ginsenoside Rg1 high dose+ago-miR-144-3p Before administration 0 2.55±0.311）2.52±0.341）2.56±0.351）After last administration 0 2.44±0.251）1.79±0.182）1.18±0.132）3）2.58±0.341）1.59±0.174）

2.2 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦含水量的影響 與對(duì)照組相比，腦出血組大鼠腦含水量增加（P<0.05）；與腦出血組相比，人參皂苷Rg1低劑量組、人參皂苷Rg1 高劑量組大鼠腦含水量降低（P<0.05），組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與人參皂苷Rg1 高劑量組相比，人參皂苷Rg1 高劑量+ago-miR-144-3p 組大鼠腦含水量升高（P<0.05，表3）。

表3 人參皂苷Rg1對(duì)大鼠腦含水量的影響（±s， n=6）Tab.3 Effect of ginsenoside Rg1 on brain water content of rats （±s， n=6）

表3 人參皂苷Rg1對(duì)大鼠腦含水量的影響（±s， n=6）Tab.3 Effect of ginsenoside Rg1 on brain water content of rats （±s， n=6）

Note：Compared with control group， 1）P<0.05； compared with intracerebral hemorrhage group， 2）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 low dose group， 3）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 high dose group， 4）P<0.05.

Brain water content/%74.13±8.21 84.66±9.411）72.91±8.142）67.54±7.622）3）73.82±8.164）Groups Control Intracerebral hemorrhage Ginsenoside Rg1 low dose Ginsenoside Rg1 high dose Ginsenoside Rg1 high dose+ago-miR-144-3p

2.3 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織勻漿炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β 水平的影響 與對(duì)照組相比，腦出血組大鼠腦組織勻漿TNF-α、IL-6、IL-1β 水平升高（P<0.05）；與腦出血組相比，人參皂苷Rg1 低劑量組、人參皂苷Rg1高劑量組大鼠腦組織勻漿TNF-α、IL-6、IL-1β 水平降低，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與人參皂苷Rg1 高劑量組相比，人參皂苷Rg1 高劑量+ago-miR-144-3p 組大鼠腦組織勻漿TNF-α、IL-1β水平升高（P<0.05，表4）。

表4 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織勻漿TNF-α、IL-6、IL-1β水平的影響（±s，n=6，pg/ml）Tab.4 Effect of ginsenoside Rg1 on TNF-α，IL-6，IL-1β levels in rat brain homogenate （±s，n=6，pg/ml）

表4 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織勻漿TNF-α、IL-6、IL-1β水平的影響（±s，n=6，pg/ml）Tab.4 Effect of ginsenoside Rg1 on TNF-α，IL-6，IL-1β levels in rat brain homogenate （±s，n=6，pg/ml）

Note：Compared with control group， 1）P<0.05； compared with intracerebral hemorrhage group， 2）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 low dose group， 3）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 high dose group， 4）P<0.05.

Groups Control Intracerebral hemorrhage Ginsenoside Rg1 low dose Ginsenoside Rg1 high dose Ginsenoside Rg1 high dose+ago-miR-144-3p TNF-α 31.75±3.48 IL-6 59.11±6.54 IL-1β 83.02±9.20 99.20±11.031）184.32±20.461）182.73±20.311）81.64±9.022）144.79±16.062）134.26±14.882）66.17±7.342）3）113.46±12.582）3）115.60±12.832）3）72.26±7.994）113.19±12.54 138.92±15.424）

2.4 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響對(duì)照組大鼠血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)完整、薄厚均勻、無(wú)明顯水腫，內(nèi)皮細(xì)胞連接緊密，吞飲小泡數(shù)量較少。腦出血組大鼠血管內(nèi)皮薄厚不均多處呈水腫狀態(tài)，內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)性消失，吞飲小泡數(shù)量增多；與腦出血組相比，人參皂苷Rg1低劑量組、人參皂苷Rg1高劑量組血管內(nèi)皮細(xì)胞逐漸連接緊密、薄厚較為均勻，水腫減少；與人參皂苷Rg1高劑量組相比，人參皂苷Rg1高劑量+ago-miR-144-3p組血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷加重（圖1）。

圖1 人參皂苷Rg1對(duì)大鼠血腦屏障結(jié)構(gòu)的影響（×15 000）Fig.1 Effect of ginsenoside Rg1 on structure of bloodbrain barrier in rats （×15 000）

2.5 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠血腦屏障通透性的影響 與對(duì)照組相比，腦出血組大鼠腦組織EB 滲出率升高（P<0.05）；與腦出血組相比，人參皂苷Rg1低劑量組、人參皂苷Rg1高劑量組大鼠腦組織EB滲出率降低，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與人參皂苷Rg1 高劑量組相比，人參皂苷Rg1 高劑量+ago-miR-144-3p 組大鼠腦組織EB 滲出率升高（P<0.05，表5）。

表5 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織EB 滲出率的影響（±s，n=6）Tab.5 Effect of ginsenoside Rg1 on EB exudation rate of rat brain tissue （±s， n=6）

表5 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織EB 滲出率的影響（±s，n=6）Tab.5 Effect of ginsenoside Rg1 on EB exudation rate of rat brain tissue （±s， n=6）

Note：Compared with control group， 1）P<0.05； compared with intracerebral hemorrhage group， 2）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 low dose group， 3）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 high dose group， 4）P<0.05.

EB exudation rate/（μg·g-1）9.10±1.01 35.82±3.971）22.60±2.482）14.37±1.562）3）18.92±2.094）Groups Control Intracerebral hemorrhage Ginsenoside Rg1 low dose Ginsenoside Rg1 high dose Ginsenoside Rg1 high dose+ago-miR-144-3p

2.6 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織miR-144-3p、FPR2 mRNA、p38 mRNA 的影響 與對(duì)照組相比，腦出血組大鼠腦組織miR-144-3p、p38 mRNA 水平升高（P<0.05），F(xiàn)PR2 mRNA 水平降低（P<0.05）；與腦出血組相比，人參皂苷Rg1 低劑量組、人參皂苷Rg1高劑量組大鼠腦組織miR-144-3p、p38 mRNA 水平降低（P<0.05），F(xiàn)PR2 mRNA 水平升高（P<0.05），組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與人參皂苷Rg1 高劑量組相比，人參皂苷Rg1 高劑量+ago-miR-144-3p組大鼠腦組織miR-144-3p、p38 mRNA 水平升高（P<0.05），F(xiàn)PR2 mRNA水平降低（P<0.05，表6）。

表6 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織miR-144-3p、FPR2 mRNA、p38 mRNA的影響（±s， n=6）Tab.6 Effects of ginsenoside Rg1 on miR-144-3p， FPR2 mRNA and p38 mRNA in rat brain （±s， n=6）

表6 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織miR-144-3p、FPR2 mRNA、p38 mRNA的影響（±s， n=6）Tab.6 Effects of ginsenoside Rg1 on miR-144-3p， FPR2 mRNA and p38 mRNA in rat brain （±s， n=6）

Note：Compared with control group， 1）P<0.05； compared with intracerebral hemorrhage group， 2）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 low dose group， 3）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 high dose group， 4）P<0.05.

Groups Control Intracerebral hemorrhage Ginsenoside Rg1 low dose Ginsenoside Rg1 high dose Ginsenoside Rg1 high dose+ago-miR-144-3p miR-144-3p 1.02±0.12 2.46±0.271）1.94±0.222）FPR2 mRNA 1.01±0.09 0.17±0.021）0.42±0.052）p38 mRNA 1.01±0.11 3.16±0.351）2.46±0.262）1.17±0.132）3）0.79±0.082）3）1.52±0.172）3）1.82±0.194）0.61±0.064）1.94±0.224）

2.7 人參皂苷Rg1對(duì)大鼠腦組織FPR2、p38蛋白的影響 與對(duì)照組相比，腦出血組大鼠腦組織p-p38/p38 水平升高（P<0.05），F(xiàn)PR2 水平降低（P<0.05）；與腦出血組相比，人參皂苷Rg1低劑量組、人參皂苷Rg1 高劑量組大鼠腦組織p-p38/p38 水平降低（P<0.05），F(xiàn)PR2 水平升高（P<0.05），組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與人參皂苷Rg1 高劑量組相比，人參皂苷Rg1 高劑量+ago-miR-144-3p 組大鼠腦組織p-p38/p38 水平升高（P<0.05），F(xiàn)PR2 水平降低（P<0.05，圖2、表7）。

圖2 人參皂苷Rg1對(duì)大鼠腦組織FPR2、p38蛋白的影響Fig.2 Effect of ginsenoside Rg1 on FPR2 and p38 proteins in rat brain

表7 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織FPR2、p38 蛋白的影響（±s， n=6）Tab.7 Effects of ginsenoside Rg1 on FPR2 and p38 proteins in rat brain （±s， n=6）

表7 人參皂苷Rg1 對(duì)大鼠腦組織FPR2、p38 蛋白的影響（±s， n=6）Tab.7 Effects of ginsenoside Rg1 on FPR2 and p38 proteins in rat brain （±s， n=6）

Note：Compared with control group， 1）P<0.05； compared with intracerebral hemorrhage group， 2）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 low dose group， 3）P<0.05； compared with ginsenoside Rg1 high dose group， 4）P<0.05.

Groups Control Intracerebral hemorrhage Ginsenoside Rg1 low dose Ginsenoside Rg1 high dose Ginsenoside Rg1 high dose+ago-miR-144-3p FPR2/GAPDH 1.72±0.18 0.46±0.051）0.62±0.062）1.21±0.132）3）p-p38/p38 0.12±0.01 0.84±0.091）0.71±0.082）0.57±0.062）3）0.94±0.114）0.62±0.064）

3 討論

腦出血是腦卒中的一種，屬于急性腦血管疾病，患者病死率高、預(yù)后差。血腦屏障是遍布于腦組織周?chē)哪X毛細(xì)血管壁構(gòu)成的脈絡(luò)叢屏障，有效隔開(kāi)血漿與腦脊液，可阻礙血液中的一些有害物質(zhì)進(jìn)入，在維護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)生理功能方面發(fā)揮重要作用，腦出血后血液在腦實(shí)質(zhì)中迅猛聚集，破壞血腦屏障穩(wěn)定性，進(jìn)而導(dǎo)致腦水腫、神經(jīng)炎癥等繼發(fā)性損傷?；谘X屏障在腦出血中的重要地位，探究有效保護(hù)血腦屏障及其損傷造成的神經(jīng)炎癥的藥物對(duì)腦出血治療十分重要。

人參皂苷Rg1是人參的關(guān)鍵成分，具有抗衰老、心肌保護(hù)、抗炎等作用［11-13］。王利等［14］研究顯示，人參皂苷Rg1在新生兒缺血缺氧損傷后腦修復(fù)中起神經(jīng)保護(hù)作用，HIF-1α 是干預(yù)靶點(diǎn)。向玥等［15］研究顯示，人參皂苷Rg1 可降低D-半乳糖所致小鼠海馬組織氧化應(yīng)激及炎癥水平，并調(diào)控p53-p21 通路，對(duì)海馬神經(jīng)元具有保護(hù)作用。TNF-α、IL-6、IL-1β與神經(jīng)炎癥相關(guān)的血管改變有關(guān)［16］。本研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1能夠顯著降低實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分、腦含水量、血腦屏障損傷程度、EB 滲出率、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平，提示人參皂苷Rg1 可有效降低腦出血大鼠血腦屏障損傷程度及神經(jīng)炎癥。

FPR2 是趨化因子受體，定位于人染色體19q13.3～13.4，在血管內(nèi)皮組織中廣泛表達(dá)，在血管炎癥損傷中發(fā)揮重要作用。薛盛丁等［17］研究顯示，F(xiàn)PR2 基因敲除C57BL/6J 小鼠在氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜病變后，視網(wǎng)膜中新生血管、IL-6、TNF-α 表達(dá)顯著低于野生型C57BL/6J 小鼠，涉及ERK、p38 通路。張俊等［18］研究顯示，阿司匹林可能通過(guò)激活FPR2抑制心肌缺血再灌注損傷小鼠心肌組織炎癥反應(yīng)。XIE 等［19］通過(guò)檢索PubMed 數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1 的抗腦缺血再灌注機(jī)制涉及包括p38 通路在內(nèi)的多種途徑，可調(diào)節(jié)血腦屏障。DING 等［20］研究顯示，F(xiàn)PR2/p38/COX2途徑是膜聯(lián)蛋白A1發(fā)揮抗雄性小鼠腦出血后神經(jīng)炎癥的關(guān)鍵途徑，給予FPR2 拮抗劑后此作用消除。p38 是常見(jiàn)炎癥通路，在血腦屏障中也發(fā)揮作用［21］。提示FPR2/p38 途徑可能在腦出血造成的神經(jīng)炎癥及血腦屏障中發(fā)揮作用。本研究顯示，人參皂苷Rg1 可增加FPR2 表達(dá)，抑制p38 活化，提示人參皂苷Rg1 可能通過(guò)促進(jìn)FPR2 表達(dá)抑制p38降低腦出血大鼠血腦屏障損傷及神經(jīng)炎癥。生信網(wǎng)站分析顯示miR-144-3p 與FPR2 有靶向作用關(guān)系，SUN 等［22］證實(shí)氧化血紅素可通過(guò)miR-144-3p 依賴(lài)性下調(diào)FPR2，加重腹膜炎小鼠炎癥損傷。miR-144-3p 在腦出血疾病中發(fā)揮重要作用，F(xiàn)AN 等［8］通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-144-3p促進(jìn)腦出血誘導(dǎo)的繼發(fā)性腦損傷；血腦屏障損傷體外模型中miR-144呈高表達(dá)［23］；人參皂苷Rg1可通過(guò)miR-144/Nrf2/ARE 途徑保護(hù)缺血再灌注誘導(dǎo)的大鼠神經(jīng)元損傷［24］。本研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1 處理后，大鼠miR-144-3p 水平顯著下調(diào)，猜測(cè)人參皂苷Rg1 可能通過(guò)下調(diào)miR-144-3p參與FPR2/p38調(diào)控，進(jìn)而降低腦出血大鼠血腦屏障損傷及神經(jīng)炎癥。因此，本研究在高劑量人參皂苷Rg1處理大鼠基礎(chǔ)上設(shè)置了恢復(fù)試驗(yàn)，過(guò)表達(dá)miR-144-3p，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1對(duì)腦出血大鼠血腦屏障損傷、神經(jīng)炎癥的抑制作用減弱，大鼠血腦屏障損傷、神經(jīng)炎癥再次加重，提示人參皂苷Rg1 可能通過(guò)下調(diào)miR-144-3p 表達(dá)激活FPR2，并抑制p38 通路活化，進(jìn)而降低腦出血大鼠血腦屏障損傷及神經(jīng)炎癥。

綜上，人參皂苷Rg1 可能通過(guò)調(diào)控miR-144-3p/FPR2/p38 軸參與對(duì)大鼠血腦屏障損傷及神經(jīng)炎癥的抑制作用。但本研究仍存在一定不足，僅研究了人參皂苷Rg1 對(duì)FPR2/p38 的影響，人參皂苷Rg1 調(diào)控miR-144-3p 是否通過(guò)影響FPR2/p38 通路發(fā)揮作用有待進(jìn)一步探索。