【摘要】中獸藥是我國(guó)傳統(tǒng)獸醫(yī)藥的重要組成部分，是中醫(yī)防治疾病的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。為了確保中獸藥用藥安全，結(jié)合中獸藥的特性，采用顯微鑒別技術(shù)對(duì)中獸藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣進(jìn)行鑒別。該技術(shù)的使用不僅可以提高中獸藥質(zhì)控和監(jiān)管水平，還能為中獸藥的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)提供保障。本文針對(duì)中獸藥顯微鑒別操作過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行了深入分析，并提出相應(yīng)的改進(jìn)措施，旨在進(jìn)一步提高中獸藥顯微鑒別的準(zhǔn)確性和可靠性。

【關(guān)鍵詞】中獸藥；顯微鑒別；關(guān)鍵點(diǎn)

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.04.042

Analysis of Microscopic Identification Technology for Traditional Chinese Veterinary Medicine in Key Points

GAO Hongqian

（Liaoning Inspection ，ExaminationCertification

〔Liaoning Institute forAgro-product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Shenyang 110036， China）

Abstract： Traditional Chinese veterinary medicine is an important component of Chinese veterinary medicine and an important material basis for traditional Chinese medicine to prevent and treat diseases. In order to ensure the safety of traditional Chinese veterinary medicine， combined with the characteristics of traditional Chinese veterinary medicine， microscopic identification technology is used to identify the authenticity， quality， and advantages of traditional Chinese veterinary medicine. The use of this technology can not only improve the quality control and supervision level of traditional Chinese veterinary medicine， but also provide guarantees for the standardized production of traditional Chinese veterinary medicine. This article conducts in-depth analysis of the key aspects of the microscopic identification process of traditional Chinese veterinary medicine and proposes corresponding improvement measures to further improve the accuracy and reliability of microscopic identification of traditional Chinese veterinary medicine.

Keywords： traditional Chinese veterinary medicine； microscopic identification technology； key points

顯微鑒別技術(shù)是研究和控制中獸藥真?zhèn)蝺?yōu)劣的重要手段之一。藥材經(jīng)過(guò)搗碎或是磨成粉末后，原有的外部形態(tài)特征基本消失了，用肉眼很難鑒別藥材或是成方制劑的真?zhèn)吻闆r。因此，顯微鑒別技術(shù)有著重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。它不但可以檢測(cè)出成方制劑（特別是散劑）中所含的君臣佐使各味藥的組分，而且可以通過(guò)相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)出處方中未列出藥的組分或是缺少某味藥的組分，如摻偽、改變處方等。這就可以在一定程度上彌補(bǔ)理化鑒別和薄層色譜鑒別的不足。顯微鑒別技術(shù)以其快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和直觀的特點(diǎn)，在中獸藥的真?zhèn)魏蛢?yōu)劣鑒別中發(fā)揮著重要作用。通過(guò)顯微鏡和常規(guī)檢驗(yàn)試劑，結(jié)合檢驗(yàn)員的專業(yè)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，可以觀察到植物、動(dòng)物等在生物學(xué)上的穩(wěn)定特征，而這些特征又具有專屬性，可排除交叉影響，不容易發(fā)生混淆。因此，顯微鑒別技術(shù)為中獸藥的質(zhì)量分析和檢測(cè)提供了有力的支持，確保了中獸藥的安全性和有效性。但在顯微鑒別技術(shù)操作的過(guò)程中，有一些關(guān)鍵點(diǎn)需要注意，如顯微鏡的使用、裝片的制作、觀察過(guò)程、微粉劑的觀察、顯微鏡下看到的圖片與書上的圖片不同，以及檢驗(yàn)員的要求等。這些都會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生不利的影響，從而降低了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。接下來(lái)本文就顯微鑒別技術(shù)在操作過(guò)程中的關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行具體分析。

1顯微鑒別的概念和理論基礎(chǔ)

中藥顯微鑒別是指用顯微鏡對(duì)藥材（飲片）、粉末、解離組織或表面制片及含藥材粉末制劑中藥材的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的方法。中藥粉末顯微鑒別是其中的重要內(nèi)容之一，在粉末藥材及成方制劑的質(zhì)量微觀檢測(cè)工作中被廣泛應(yīng)用[1]。植物、動(dòng)物和微生物的內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞，及其內(nèi)含物的顯微形態(tài)特征，在特定條件下會(huì)展現(xiàn)出一定的穩(wěn)定性和專屬性，這就構(gòu)成了中藥顯微鑒定的理論基礎(chǔ)[2-3]。

2關(guān)鍵點(diǎn)及分析

2.1顯微鏡的使用

在使用顯微鏡做顯微鑒別時(shí)，把制作好的裝片夾到載物臺(tái)上后，旋轉(zhuǎn)粗準(zhǔn)焦螺旋并從側(cè)面觀察載物臺(tái)上升的過(guò)程，使載物臺(tái)逐漸上升，當(dāng)裝片與物鏡的距離在0.5 cm左右時(shí)，就可以從目鏡中開(kāi)始觀察。切勿在上升的過(guò)程中只用目鏡觀察，以免在上升的過(guò)程中物鏡的鏡頭和裝片的載玻片接觸，對(duì)鏡頭造成損壞。如果在調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋時(shí)，物鏡鏡頭和載物臺(tái)的距離小于工作的安全距離，就說(shuō)明此次調(diào)節(jié)失敗，需要重新操作，切勿因?yàn)樾募倍つ空{(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋。

2.2制作裝片

制作裝片是顯微鑒別技術(shù)非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。首先要考慮取樣量問(wèn)題。因?yàn)檩d玻片和蓋玻片的面積大小基本一樣，所以要在有限的面積內(nèi)盡可能多地取樣品，但又不能因?yàn)槿犹喽鴮?dǎo)致各個(gè)組分的顯微特征相互疊加，輪廓不清晰，給觀察增加難度，不利于做出準(zhǔn)確的判斷，而取樣太少不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，還會(huì)造成觀察到的組分殘缺。因此，要把握好取樣量。其次要考慮透化問(wèn)題。在載玻片上取完樣品后，滴加水合氯醛溶液并攪拌均勻，用鑷子夾住載玻片在酒精燈上加熱。隨著溫度的升高，載玻片上的液體先是產(chǎn)生小氣泡，處于微沸的狀態(tài)，這時(shí)要把蓋玻片從火焰上移開(kāi)，載玻片上的余熱可使水合氯醛溶液沸騰，等到氣泡停止產(chǎn)生時(shí)再放到酒精燈上，切勿持續(xù)加熱，以免造成載玻片的糊化。之后，再滴加幾滴水合氯醛溶液，重復(fù)上述操作，除去細(xì)胞中的淀粉和油脂等即完成透化過(guò)程。這時(shí)如果載玻片處于濕潤(rùn)狀態(tài)，就可以進(jìn)行下一步操作。最后需要考慮氣泡問(wèn)題。在加蓋蓋玻片時(shí)極易產(chǎn)生氣泡，為避免產(chǎn)生氣泡，可將蓋玻片一側(cè)輕輕與載玻片上的溶液接觸，然后慢慢將整個(gè)蓋玻片慢慢地置于載玻片上，使液體充盈整個(gè)蓋玻片，如還有氣泡，可重復(fù)上述操作。加蓋玻片的整個(gè)過(guò)程一定要抓住3個(gè)要點(diǎn)：輕、緩、不可操之過(guò)急。若有液體未充滿蓋玻片，可從一側(cè)縫隙中加入液體。如液體過(guò)多，溢出了蓋玻片之外，可用濾紙吸拭溢出的液體。還有一點(diǎn)需要注意的是：在冬季室溫較低的情況下，透化后應(yīng)立即觀察，以免水合氯醛結(jié)晶析出影響觀察，不能得出準(zhǔn)確的結(jié)論。

在裝片的制作過(guò)程中還有一種情況，就是所取樣品的顆粒過(guò)大，使載玻片和蓋玻片之間留有一定的空隙，這樣通過(guò)顯微鏡觀察時(shí)，不但看到裝片上的液體在不停流動(dòng)，無(wú)法對(duì)樣品的顯微特征進(jìn)行觀察，而且觀察到的圖像也不清晰。所以最好選取細(xì)小的顆粒來(lái)裝片觀看，或是制作完裝片后，用鑷子將較大的顆粒去除，直到達(dá)到觀察的要求即可。

2.3觀察過(guò)程

觀察時(shí)要采用從左到右或是從上到下的路徑，呈“Z”字形掃描，切勿觀察時(shí)雜亂無(wú)章，這樣會(huì)造成一個(gè)區(qū)域重復(fù)觀察或是有的區(qū)域沒(méi)有被觀察到，造成漏看的情況。

在做顯微觀察時(shí)，經(jīng)常會(huì)遇到在一個(gè)處方里有兩個(gè)組分的顯微特征相似度很高，這時(shí)不僅要看顯微特征屬于植物的哪一個(gè)部分，還要通過(guò)顏色和大小來(lái)進(jìn)行區(qū)分。例如：《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020版二部中荊防敗毒散的顯微鑒別，處方中防風(fēng)和柴胡的顯微特征很相像。防風(fēng)是油管含金黃色分泌物，直徑17～60μm（見(jiàn)圖1），柴胡是油管含淡黃色或黃棕色條狀分泌物，直徑8～25μm（見(jiàn)圖2）。

兩個(gè)組分首先可以在顏色上加以區(qū)分，防風(fēng)是淡黃色，柴胡是黃棕色，顏色要比防風(fēng)深一些。但如果柴胡油管的顏色也是淡黃色，與防風(fēng)很難分辨時(shí)，這時(shí)就可以用目鏡量尺來(lái)測(cè)量油管的直徑，直徑較大者則認(rèn)為是防風(fēng)，以此來(lái)作為區(qū)分防風(fēng)和柴胡顯微特征的另一個(gè)依據(jù)。

2.4微粉劑的觀察

微粉劑是指飲片粉碎成粒徑為微米級(jí)，并均勻混合制成的干燥粉末狀內(nèi)服制劑[4]。微粉劑收錄在《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020版二部，之前版本的藥典沒(méi)有關(guān)于微粉劑的相關(guān)內(nèi)容。近年來(lái)，市場(chǎng)上微粉劑的產(chǎn)品逐漸增多，但缺少相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，給中獸藥的質(zhì)量把控帶來(lái)難度，所以2020版藥典增加了微粉劑的收錄。中藥主要來(lái)源于植物，因而在進(jìn)行微粉劑的顯微鑒別觀察時(shí)，重點(diǎn)是觀察植物不同藥用部位的細(xì)胞和組織情況。與散劑不同，微粉劑的顆粒粒徑是微米級(jí)的，其植物細(xì)胞壁都已完全被破壞，導(dǎo)致在顯微鏡下很難觀察到相對(duì)完整的結(jié)構(gòu)狀態(tài)，大部分都是以碎片的形式存在的。這就對(duì)檢驗(yàn)員提出了更高的要求，他們不僅要在顯微鏡下找到完整的顯微特征，還需結(jié)合專業(yè)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)破碎的組織或碎片來(lái)推斷其所屬的藥材組分。

2.5顯微鏡下看到的圖片與書上的圖片不同

做過(guò)顯微鑒別的人都會(huì)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在顯微鏡下觀察某組分時(shí)，其顯微特征與書籍中附帶的直觀圖片并不總是完全一致。書籍通常在顯微特征的文字描述基礎(chǔ)上提供圖片，幫助讀者更快地理解所描述的特征。然而，這種方法存在一個(gè)缺陷：在實(shí)際使用顯微鏡尋找特定組分時(shí)，若僅依賴書籍中的圖片，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)很難找到與之完全一致的特征。因此，建議在理解了顯微特征的文字描述之后，參考徐國(guó)鈞老師編著的《中藥材粉末顯微檢定》一書。該書中，每一味藥材的顯微特征都以手繪線條形式展現(xiàn)，這有助于理解其基本形態(tài)。在掌握了某組分的特征并了解其大概輪廓之后，進(jìn)而比對(duì)彩色照片，便能夠精準(zhǔn)捕捉顯微特征。通過(guò)這種方法，在顯微觀察過(guò)程中，可以快速且準(zhǔn)確地定位到特定的組分。長(zhǎng)此以往，檢驗(yàn)員對(duì)每味藥材的特征都會(huì)有深刻的印象，形成一本自己的圖譜集。只有準(zhǔn)確把握每個(gè)組分的顯微特征，才能在復(fù)雜的藥方中輕松識(shí)別出具有顯微鑒別意義的特征。

2.6對(duì)檢驗(yàn)員的要求

中獸藥顯微鑒別是一項(xiàng)高度依賴操作者技術(shù)水平的鑒別工作。具備扎實(shí)的中藥理論知識(shí)，還應(yīng)擁有豐富的操作實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，否則就會(huì)在檢測(cè)的過(guò)程中出現(xiàn)漏看一些顯微特征、錯(cuò)看某一組分等情況，進(jìn)而降低檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。特別是在進(jìn)行中獸藥成方制劑的顯微鑒別時(shí)，如果處方中包含的藥材品種繁多，這無(wú)疑會(huì)增加顯微觀察的難度。若是對(duì)某一組分的顯微特征不太確定，建議選取這味藥材的對(duì)照藥材制作裝片，并進(jìn)行觀察，以準(zhǔn)確掌握這一組分的顯微特征，然后再重新對(duì)成方制劑的裝片進(jìn)行觀察。通過(guò)這樣的實(shí)踐過(guò)程，檢驗(yàn)員可以在日常工作中積累寶貴的顯微鑒別經(jīng)驗(yàn)，從而顯著提升檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

3結(jié)束語(yǔ)

中獸藥顯微鑒別技術(shù)雖然有很多優(yōu)勢(shì)，但在實(shí)際應(yīng)用中還是存在一定的局限性。例如，非原粉入藥是提取物及其制劑入藥的，很難通過(guò)顯微鑒別技術(shù)來(lái)判定其質(zhì)量。隨著科技的不斷進(jìn)步，目前可以將先進(jìn)的數(shù)碼顯微攝影采集設(shè)備與顯微鏡相連，使得在顯微鏡下看到的圖像能實(shí)時(shí)顯示在電腦的屏幕上。這一技術(shù)的應(yīng)用極大地提高了顯微鑒別工作的效率和準(zhǔn)確性。另外，中藥材DNA條形碼分子鑒別法的研究也初見(jiàn)成效[5]。相信隨著技術(shù)的不斷普及，顯微鑒別技術(shù)會(huì)在藥材物種檢定中發(fā)揮更重要的作用。總之，不斷提升和完善中獸藥顯微鑒別技術(shù)對(duì)于確保中獸藥的安全使用和質(zhì)量控制具有重要意義，并產(chǎn)生積極而深遠(yuǎn)的影響。

【參考文獻(xiàn)】

[1]高光，楊勁松.中藥顯微鑒別和薄層色譜彩色圖集[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2009：3.

[2]張南平，肖新月，劉寶玲.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中顯微鑒別項(xiàng)存在的問(wèn)題及討論[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2000（2）：10-13.

[3]黃海欣，王定.中藥材粉末顯微特征的專屬性和穩(wěn)定性研究[J].基層中藥雜志，2000（4）：3-5.

[4]張仲秋，馮忠武.中華人民共和國(guó)獸藥典：2020版二部[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2020：附錄16.

[5]張偉，李波，羅國(guó)安.中國(guó)藥典分析檢測(cè)技術(shù)指南[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2017：842.

【作者簡(jiǎn)介】

高紅倩，女，1984年出生，學(xué)士，研究方向?yàn)樾竽?、中獸藥。

（編輯：于淼）