魏菁菁 傅冬梅 汪 薇 劉 靚 劉 莉

1.中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院漢口院區(qū)檢驗科，湖北武漢 430014；2.中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院漢口院區(qū)疾病預(yù)防控制科，湖北武漢 430014

獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）也成為艾滋病，對人類健康構(gòu)成嚴(yán)重的威脅，防治AIDS 是全球重點關(guān)注的重大問題。人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體檢測是防治AIDS 感染的重要手段，初篩的方法主要包括：酶聯(lián)免疫吸附實驗（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）、化學(xué)發(fā)光免疫試驗（chemiluminescence immunoassay，CLIA）和膠體金法快速檢測等[1]。CLIA 法具有靈敏度高、特異性較強，且操作簡單、反應(yīng)迅速、重復(fù)性較好等特點，在臨床上得到了廣泛的使用。但是，高靈敏度在減少漏檢的同時，也增加了初步篩查中假陽性的數(shù)量[2]，這可能會給患者帶來心理和生活壓力，對血源供應(yīng)和臨床治療等造成負(fù)面影響[3]。本研究以免疫印跡法（Western blot，WB）作為確證試驗，對CLIA 法初篩的HIV 結(jié)果進(jìn)行比對和評價，探討CLIA 應(yīng)用于HIV 篩查的臨床價值及假陽性檢測結(jié)果出現(xiàn)的主要原因。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文選取2013 年1 月至2022 年3 月到某部隊醫(yī)院就診并用CLIA 法初篩HIV 抗體的103 326 患者為研究對象，其中CLIA 法初篩HIV 陽性病例238 例，男198 例，女40 例，年齡7 ～87 歲，平均（42.43±17.34）歲。送檢人數(shù)172 例，送檢率72.27%。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 主要儀器 全自動化學(xué)發(fā)光儀（i2000SR，美國雅培公司），酶標(biāo)儀（SUNRISE，奧地利Tecan公司），全自動酶標(biāo)洗板機（PW-960 型，蘇州瑞諾德生物科技有限公司），高速離心機（Eppendorf，武漢諾瑞德科技有限公司）。

1.2.2 主要試劑 HIV 抗原及抗體聯(lián)合測定試劑盒（CLIA 法，美國Abbott 有限公司）；HIV 抗原抗體診斷試劑盒（ELISA 法，北京萬泰生物有限公司）。

1.3 方法

本實驗室按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序（standard operation procedure，SOP）進(jìn)行HIV 抗體檢測實驗。CLIA 法初篩HIV 陽性（標(biāo)本吸光度值與臨界值之比S/CO ≥1）標(biāo)本，先確認(rèn)該標(biāo)本是否有凝塊或者其他干擾因素，10 000 rpm×10 min 高速離心后復(fù)查確認(rèn)是否為陽性。陽性標(biāo)本用ELISA 法進(jìn)行復(fù)查，復(fù)查結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)本均送往武漢市疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行確證試驗。

1.4 結(jié)果判讀

初篩試驗：CLIA 法S/CO ≥1 判讀為陽性，S/CO＜1 結(jié)果判讀為陰性。ELISA 法S/CO ≥1 者，判定為有反應(yīng)性；S/CO＜0.8 者，判定為無反應(yīng)性；0.8 ≤S/CO＜1 為灰區(qū)。

確證試驗：武漢市疾病控制中心通過WB 進(jìn)行確認(rèn)，參照中國疾病預(yù)防控制中心《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》的標(biāo)準(zhǔn)判定WB 結(jié)果[4]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。不同組間確證陰性率用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HIV初篩試驗和確證試驗結(jié)果

2013 年1 月至2022 年3 月，總?cè)巳篐IV 初篩陽性率（CLIA 法）為2.30‰（238/103 326），送檢率為72.27%（172/238）?？?cè)巳捍_證試驗陽性率為1.11‰（115/103 326），確證試驗陰性率為0.50‰（52/103 326），不確定率為0.05‰（5/103 326）。送檢的172 例標(biāo)本中，確證試驗結(jié)果陽性率為66.86%（115/172），陰性率30.23%（52/172），不確定率2.91%（5/172）。

2.2 不同年齡段患者HIV確證試驗結(jié)果分析

在不同年齡段中，21 ～50 歲年齡段的初篩陽性人數(shù)最多，而≤20 歲和≥51 歲年齡段的初篩陽性人數(shù)較少。HIV 確證試驗陰性率（初篩結(jié)果假陽性）隨著年齡的增加而升高，≥51 歲組的確證試驗陰性率均高于其他兩組的確證試驗陰性率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表1。

表1 不同年齡段人群初篩陽性樣本的確證試驗結(jié)果分析[n（%）]

2.3 不同性別患者HIV確證試驗結(jié)果分析

HIV 初篩陽性病例中多為男性。女性患者的確證試驗陰性率高于男性患者的確證試驗陰性率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表2。

表2 不同性別人群初篩陽性樣本的確證試驗結(jié)果分析[n（%）]

2.4 不同就診類型患者HIV確證試驗結(jié)果分析

住院患者HIV 的確證試驗陰性率高于門診患者的確證試驗陰性率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表3。

表3 不同就診類型人群初篩陽性樣本的確證試驗結(jié)果分析[n（%）]

2.5 不同S/CO值患者HIV確證結(jié)果分析

根據(jù)S/CO 值的大小將初篩結(jié)果分為四個組。其中確證試驗陰性率最高的是S/CO＜5 組（87.23%），確證結(jié)果陰性率隨著S/CO 值的升高而逐步降低，S/CO＞50 組確證試驗陰性率最低，僅為2.08%。S/CO＜5 組的確證陰性率分別高于其他三組的確證陰性率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表4。

表4 不同S/CO值初篩陽性樣本的確證試驗結(jié)果分析[n（%）]

2.6 HIV假陽性患者特征分析

本研究對52 例確證試驗陰性的患者進(jìn)行特征分析，結(jié)果表明：大部分確證試驗為陰性的患者為年紀(jì)≥51 歲（53.85%）的男性患者（73.08%），HIV 假陽性患者分布于多個科室，主要包括骨科/康復(fù)科（21.15%）、泌外/腎內(nèi)科（15.38%）、婦產(chǎn)科（11.54%）、手足外科（9.62%），見表5。HIV 真陽性患者主要分布在皮膚/性病科（43.33%）、呼吸科（13.33%）。

表5 HIV假陽性患者特征分析

3 討論

近年來，AIDS的發(fā)病率呈逐年上升。如何準(zhǔn)確、快速地檢測出HIV 抗體，為防治AIDS 提供可靠的依據(jù)，是檢驗工作者亟須解決的問題。另外本研究HIV 初篩陽性樣本的送檢率僅為72.27%，一些患者拒絕送檢或留下虛假信息，增加了AIDS 預(yù)防和治療的難度。

本研究中總?cè)巳篐IV 確證試驗陰性率為0.503‰，這與冷冬等[5]研究中北京地區(qū)HIV 初篩試驗陰性率相近。確證試驗的陰性率可能和HIV初篩的方法學(xué)和使用試劑有關(guān)。董文斌等[3]采用ELISA 法作為初篩方法，研究HIV 確證試驗陰性率為12.08%；劉建禮等[1，5]采用化學(xué)發(fā)光作為初篩方法，研究HIV 確證試驗陰性率分別為46.5%和20.51%。隨著科技的進(jìn)步，HIV 第四代化學(xué)發(fā)光試劑逐漸廣泛應(yīng)用于臨床檢驗工作，相較于第三代試劑，它能同時檢測出HIV1/2 抗體和P24 抗原，具有更高的靈敏度和特異度，但是隨之而來的是HIV 檢測假陽性率的增加[3，6]。而確證試驗（WB）只能檢測出特異性抗體而檢測不出P24 抗原，因此確證試驗也可能會遺漏一些早期感染HIV 的患者[7]。

本研究顯示，送檢的172 例HIV 初篩陽性標(biāo)本中，確證結(jié)果陽性比例僅為66.86%，除了方法學(xué)的因素外，從下面幾個方面分析CLIA 法初篩HIV抗體產(chǎn)生假陽性的原因。研究表明HIV 的初篩假陽性率和被檢人群的性別、年齡、就診類型和患病情況有一定的相關(guān)性?！?1 歲患者的確證陰性率高于其他組，可能是因為老年病人易患一些基礎(chǔ)疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[8]，血清中容易產(chǎn)生交叉抗體或高滴度的自身抗體[1，5，8]，干擾HIV 抗體的檢測，產(chǎn)生一定的假陽性。另外，女性的確證陰性率高于男性的確證陰性率，一是因為女性患者中有部分孕產(chǎn)婦，孕產(chǎn)婦血清中的某些抗體可與試劑發(fā)生非特異性反應(yīng)[9]；二是男性相較于婦女更容易發(fā)生感染HIV 的高危行為，如不潔性生活和毒品注射等。此外，HIV 假陽性率可能與患病情況有一定的關(guān)系[10-11]。52 例確證試驗陰性的患者集中分布在骨科/康復(fù)科、腎內(nèi)/泌外科、婦產(chǎn)科和手足外科，這可能是由于骨科疾病和急性外傷（如車禍傷、骨折）患者常常伴有急性溶血以及C反應(yīng)蛋白增高、D-二聚體水平升高，干擾HIV 抗體的檢測[12]，導(dǎo)致假陽性率升高。而懷孕和腎病/尿毒癥的患者體內(nèi)可能產(chǎn)生治療性抗體、嗜異性抗體，這些抗體與試劑中的抗原成分發(fā)生非特異性結(jié)合，產(chǎn)生假陽性[9-11]。另外有文獻(xiàn)報道，HIV 假陽性的患者一般罹患其他相關(guān)疾病[10-11，13]，如腫瘤、消化道疾病，泌尿系統(tǒng)疾病、懷孕分娩、骨骼及肌肉組織相關(guān)疾病等。由于本院是部隊醫(yī)院，所以骨科、康復(fù)科發(fā)現(xiàn)的HIV 假陽性例數(shù)較多。皮膚科為HIV 陽性發(fā)現(xiàn)的主要科室，提示性傳播在AIDS 蔓延過程中仍然處于重要位置。當(dāng)然本研究也存在一些局限性，由于患者的流動性和醫(yī)院?？圃O(shè)置特點可能使分析結(jié)果存在一定偏倚，但分析結(jié)果總體符合武漢市AIDS 流行的一般特征。

另一方面，HIV 的初篩假陽性率與S/CO 值相關(guān)，S/CO 值越小，確證試驗陰性率越高，S/CO 值＜5 時，確證試驗陰性率達(dá)到了87.23%，不確定率為8.51%；而當(dāng)S/CO 值＞50 時，確證試驗陰性率僅為2.08%。這與董文斌等[3，14-15]的研究結(jié)果相符合。

綜上所述，臨床醫(yī)生應(yīng)謹(jǐn)慎對待S/CO 值＜5 的初篩結(jié)果，首先排除標(biāo)本本身的干擾因素，如溶血、纖維蛋白等，必要時重新抽血，進(jìn)行多試劑、多方法學(xué)審查，并及時與臨床進(jìn)行溝通，掌握所屬人群特征（如性別、年齡、疾?。┖土餍胁W(xué)數(shù)據(jù)，以作出慎重判斷。