曾莉莎 陳康麗 杜彩嫻 李洪波 苗兵兵 莫偉欽 呂順

摘? ? 要：冬瓜在瓜類(lèi)蔬菜生產(chǎn)中占有重要地位，而枯萎病嚴(yán)重威脅冬瓜的安全生產(chǎn)。通過(guò)病原菌致病力測(cè)定、形態(tài)學(xué)特征觀(guān)察、培養(yǎng)特性比較，以及基于翻譯延伸因子（TEF-1α）的系統(tǒng)發(fā)育分析，對(duì)采自廣東、廣西等地的冬瓜枯萎病病原菌進(jìn)行鑒定，將引起冬瓜枯萎病的病原鑒定為尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型（Fusarium oxysporum f. sp. benincasae）。在此基礎(chǔ)上，選取致病力較強(qiáng)的冬瓜枯萎病菌株，以不同冬（節(jié)）瓜資源為材料，采用苗期灌根接種法對(duì)所收集的26份小冬瓜資源、47份節(jié)瓜資源和74份大冬瓜資源進(jìn)行抗病性鑒定。結(jié)果表明，147份冬（節(jié)）瓜資源的抗性鑒定結(jié)果差異相對(duì)較大，且不同冬（節(jié)）瓜資源間的枯萎病發(fā)病率存在顯著差異，其中26份小冬瓜資源中沒(méi)有1份高抗材料；47份節(jié)瓜資源中有2份高抗材料（JG-25和JG-33），占比4.26%；74份大冬瓜資源中有4份高抗材料（DDG-19、DDG-32、DDG-40和DDG-74），占比5.41%。研究結(jié)果為抗枯萎病冬瓜種質(zhì)資源的篩選及瓜類(lèi)枯萎病抗性遺傳育種提供參考。

關(guān)鍵詞：冬瓜；節(jié)瓜；枯萎病；病原菌; 抗性鑒定；

中圖分類(lèi)號(hào)：S642.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-2871（2024）01-064-12

Isolation and identification of Fusarium wilt pathogen from wax gourd and identification of resistance of wax gourd germplasm

ZENG Lisha， CHEN Kangli， DU Caixian， LI Hongbo， MIAO Bingbing， MO Weiqin，Lü Shun

（Dongguan Agricultural Research Centre， Dongguan 523000， Guangdong ，China）

Abstract： Wax gourd is one of the major vegetable crops in Cucurbitaceae family， and the Fusarium wilt disease seriously threatens the safety of wax gourd production. The pathogenicity， morphological characteristics， and cultural characteristics of phytopathogen based on translation elongation factor （TEF-1a）through phylogenetic analysis were compared in this study， the Fusarium wilt pathogens of wax gourd collected from Guangdong， Guangxi and other regions were identified， and the pathogen causing Fusarium wilt of wax gourd was identified as Fusarium oxysporum f.sp. benincasae. On this basis， the strong pathogenic ability strains were selected as the inoculum， and using different wax gourd resources as materials， we analyzed the disease resistance of 26 small wax gourd resources， 47 chieh-qua resources， and 74 large wax gourd resources by seedling root-irrigation inoculation method. There were relatively significant differences in the disease resistance results of 147 wax gourd and chieh-qua resources， and there were significant differences in the incidence of Fusarium wilt among different wax gourd and chieh-qua resources. None of 26 small wax gourd resources had high resistance to Fusarium wilt; two（JG-25 and JG-33） of the 47 Chieh-qua resources showed high resistance， accounting for 4.26%; four（DDG-19， DDG-32， DDG-40， and DDG-74）of the 74 large wax gourd resources showed high resistance， accounting for 5.41%. This study provides reference for the selection of resistant germplasm resources of wax gourd and the genetic breeding of Fusarium wilt resistance in Cucurbitaceae crops.

Key words： Wax gourd; Chieh-qua; Fusarium wilt ; Pathogen; Disease resistance identification

冬瓜（Benincasa hispida Cogn．）屬葫蘆科冬瓜屬一年生蔓性草本植物，起源于中國(guó)和東印度，在我國(guó)已有2000多年的栽培歷史，主要分布于廣東、廣西、海南等地區(qū)[1-2]。冬瓜營(yíng)養(yǎng)豐富，富含多種人體必需營(yíng)養(yǎng)元素和各種維生素[3]，加之冬瓜具有易栽培、產(chǎn)量高、耐貯運(yùn)等優(yōu)點(diǎn)，已成為近年來(lái)各地助力產(chǎn)業(yè)振興的優(yōu)選蔬菜種類(lèi)[2]。然而，隨著冬瓜復(fù)種指數(shù)的提高、資源單一化和種植地區(qū)集中化，病害的發(fā)生日益突出，尤其是枯萎病，部分冬瓜產(chǎn)區(qū)的枯萎病發(fā)病率高達(dá)70%，嚴(yán)重的甚至絕收，給農(nóng)戶(hù)帶來(lái)了巨大損失，枯萎病已成為冬瓜可持續(xù)健康發(fā)展的瓶頸[4]。

葫蘆科瓜類(lèi)枯萎病尖孢鐮刀菌共存在8個(gè)專(zhuān)化型[5]。尖孢鐮刀菌的鑒定主要包括形態(tài)學(xué)觀(guān)察、致病性檢測(cè)和分子生物學(xué)鑒定3種方法[6]。一般使用通用引物 ITS1 和 ITS4 擴(kuò)增分離物鑒定DNA，將菌株 rDNA-ITS 序列在GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)。目前，NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中有大量的鐮刀菌 ITS序列，盡管rDNA-ITS序列在鐮刀菌屬不同種間的鑒別能力較強(qiáng)，但不能把菌株與種內(nèi)的其他專(zhuān)化型菌株區(qū)分成不同類(lèi)群。TEF-1α是目前尖孢鐮刀菌系統(tǒng)發(fā)育研究中應(yīng)用最多的基因片段，O’Donnell等[7]采用TEF-1α和IGS兩個(gè)基因片段對(duì)來(lái)源于植物和人類(lèi)的病原尖孢鐮孢菌（F. oxysporum）進(jìn)行了系統(tǒng)分析，認(rèn)為T(mén)EF-1α是適用于Fusarium群體遺傳多樣性分析的基因片段，但是目前我國(guó)還未見(jiàn)利用TEF-1α等基因片段對(duì)引起瓜類(lèi)枯萎病的尖孢鐮刀菌進(jìn)行鑒定或系統(tǒng)發(fā)育研究的報(bào)道。

針對(duì)冬瓜枯萎病的防治，目前有化學(xué)防治、選育抗病資源、嫁接換根、輪作等防治措施[8-9]，其中以化學(xué)防治為主。常見(jiàn)防治冬瓜枯萎病的藥劑有惡霉靈、精甲咯菌腈、多菌靈可濕性粉劑等藥劑[10-11]。但化學(xué)防治有一定弊端，可以殺死病菌，也會(huì)殺死土壤中大量的有益微生物，使土壤的自我修復(fù)能力降低，甚至喪失土壤修復(fù)能力?；瘜W(xué)防治還具有使病菌產(chǎn)生抗藥性、蔬菜殘留農(nóng)藥和污染土壤環(huán)境等副作用。因此，選育抗枯萎病冬瓜（節(jié)瓜）品種尤為重要。目前市場(chǎng)上的冬瓜（節(jié)瓜）資源大部分以中抗和中低抗枯萎病品種為主，高抗品種較少?？档沦t等[4]采用自然病圃法對(duì)36份冬瓜種質(zhì)資源進(jìn)行抗枯萎病鑒定，結(jié)果表明，僅7份材料表現(xiàn)高抗，占總數(shù)的19.40%。梁少麗等[12]采用苗期接種鑒定法對(duì)東莞市16份冬瓜種質(zhì)資源進(jìn)行枯萎病抗性鑒定，結(jié)果表明，僅1份材料表現(xiàn)高抗，占總數(shù)的6.25%。彭家柱等[13]采用浸根法對(duì)20份節(jié)瓜資源（經(jīng)多代自交、分離并最終穩(wěn)定的自交系）進(jìn)行枯萎病抗性鑒定，結(jié)果表明，無(wú)材料表現(xiàn)高抗[13]。謝大森等[14]采用人工接種法對(duì)84份冬瓜種質(zhì)資源進(jìn)行枯萎病抗性鑒定，結(jié)果表明，僅5份黑皮冬瓜材料表現(xiàn)高抗，占總數(shù)的5.9 %。

筆者從廣東、廣西等冬瓜主栽區(qū)采集罹患枯萎病的冬瓜病株，采用組織分離法，從發(fā)病植株莖基部上分離病原菌，從病菌的形態(tài)學(xué)特征、培養(yǎng)特性、TEF-1α序列及致病性等方面進(jìn)行分析鑒定。然后采用苗期接種法對(duì)從華南地區(qū)收集的26份小冬瓜資源、47份節(jié)瓜資源和74份大冬瓜資源進(jìn)行枯萎病抗性鑒定，篩選出高抗資源，以期為不同抗病性冬瓜資源的合理布局和冬瓜枯萎病的生物生態(tài)防治提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

試驗(yàn)于2020年春秋兩季在東莞市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究中心萬(wàn)江基地實(shí)驗(yàn)室對(duì)具有典型感病癥狀的材料進(jìn)行病原物分離。供試病原菌包括采自廣東、廣西不同地區(qū)具有代表性的6個(gè)冬瓜枯萎病菌株，其來(lái)源及編號(hào)見(jiàn)表1。

用于致病力測(cè)定的冬瓜材料是XDG-7、 XDG-8，均為穩(wěn)定的多代自交系，據(jù)多年田間觀(guān)測(cè)，田間表現(xiàn)為中低抗枯萎病。

待鑒定冬（節(jié)）瓜資源 ：在2021年，結(jié)合全國(guó)冬瓜產(chǎn)業(yè)大會(huì)，從廣東、廣西、福建及湖南等冬瓜主產(chǎn)區(qū)引進(jìn)收集了26份小冬瓜、47份節(jié)瓜和74份大冬瓜資源，共計(jì)147份資源，大部分為雜交種F1代，少數(shù)為自交多代的穩(wěn)定自交系。其中XDG1～26是小冬瓜，JG1～47是節(jié)瓜，DDG1～74是大冬瓜。本文中的冬瓜資源為2021年全國(guó)冬瓜產(chǎn)業(yè)大會(huì)中面向冬（節(jié)）瓜育種研究單位、品種推廣部門(mén)以及種業(yè)銷(xiāo)售公司征集的新優(yōu)冬（節(jié)）瓜品種，由廣州種子商會(huì)征集并提供。

1.2 病原菌的分離、純化及形態(tài)鑒定

采用組織分離法，從發(fā)病植株莖基部上分離病原菌，用2%次氯酸鈉消毒60 s，75%乙醇消毒3 次，隨后用無(wú)菌水洗滌，再用滅菌過(guò)的吸水紙吸干水分，置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)。待長(zhǎng)出菌絲后，挑取部分菌絲接種在PDA平板上，經(jīng)3次純化后，采用稀釋法進(jìn)行單孢分離和培養(yǎng)，觀(guān)察其生長(zhǎng)性狀，在顯微鏡條件下觀(guān)察氣生菌絲上小型分生孢子的著生狀態(tài)、大小、形狀，分生孢子座上的大孢子以及厚垣孢子的形態(tài)。據(jù)柯赫氏法則將菌株回接冬瓜幼苗上，接種18株，3次重復(fù)，無(wú)菌水為對(duì)照。對(duì)發(fā)病冬瓜幼苗進(jìn)行病原物的再分離，與原接種菌株比較，進(jìn)行柯赫氏法則驗(yàn)證。

1.3 致病菌的TEF-1α序列分析

采用CATB法進(jìn)行菌體基因組DNA的提取。用鐮刀菌（Fusarium）種類(lèi)鑒定通用引物翻譯延伸因子（TEF-1α）擴(kuò)增病原菌基因組總DNA。引物序列為EF1H（ATGGGTAAGGAAGACAAGAC）和EF2T（GGAAGTACCAGTGATCATGTT）。使用 MEGA version 7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，進(jìn)化距離分析采用鄰位相連法（neighbor-joining，NJ），用 Bootstrap 1000次重復(fù)進(jìn)行系統(tǒng)樹(shù)的檢驗(yàn)。將菌株TEF-1α序列在 GenBank 核酸數(shù)據(jù)庫(kù)（ http： / / www. ncbi. nlm. nih. gov / BLAST）及Fusarium MLST database（https：//fusarium.mycobank.org/）中進(jìn)行 BLASTN 比對(duì)和同源性分析。

1.4 育苗

冬（節(jié)）瓜種子播種前用溫湯浸種6 h，然后置于28 ℃條件下催芽，2～3 d 后播于滅過(guò)菌的穴盤(pán)中。待幼苗長(zhǎng)出真葉后，用于苗期人工接種。

1.5 冬瓜枯萎病菌孢子懸浮液的制備

選取致病力強(qiáng)且生長(zhǎng)旺盛的冬瓜枯萎病菌絲接種于液體培養(yǎng)基中，于28 ℃條件下震蕩培養(yǎng)3～5 d。將培養(yǎng)液用雙層紗布過(guò)濾去掉菌絲，濾液離心后，去除上清液。用血球計(jì)數(shù)器計(jì)算病菌孢子的濃度，小孢子接種濃度為1×106 個(gè)·mL-1。

1.6 苗期人工接種枯萎病鑒定與病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

選取長(zhǎng)勢(shì)健壯、大小基本一致、株高為10～15 cm的冬（節(jié)）瓜實(shí)生苗用栽培基質(zhì)種植于盆缽中，7 d 后用1×106 個(gè)·mL-1的冬瓜枯萎病菌孢子懸浮液傷根澆灌接種（澆灌前在距根際1 cm 的4個(gè)方向各切一刀），每株澆灌10 mL，以清水處理為對(duì)照，每個(gè)處理組分別接種30株瓜苗[15-16]。接種溫度22～25 ℃，用無(wú)色塑料膜保濕24 h，保濕后的植株置于白天25 ℃左右、夜晚18 ℃左右的溫室內(nèi)正常管理。接種7 d后開(kāi)始調(diào)查發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)并記錄147份冬（節(jié)）瓜資源枯萎病發(fā)病率，采用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和差異顯著性分析。

參照康德賢等[4]的方法進(jìn)行抗性分級(jí)，將冬瓜資源對(duì)枯萎病的抗性分為4個(gè)等級(jí)：高抗（HR），枯萎病發(fā)病率低于20%；中抗（MR），枯萎病發(fā)病率21%～50%；輕抗（LR），枯萎病發(fā)病率51%～80%；感病（S），枯萎病發(fā)病率81%～100%。采用SPSS 23.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 冬瓜枯萎病菌的分離與純化

將分離純化后的菌株接種于PDA平板內(nèi)，28 ℃培養(yǎng)3 d 后，肉眼觀(guān)察菌落形態(tài)，發(fā)現(xiàn)其菌絲致密絮狀，白色至淡紫色。顯微鏡下觀(guān)測(cè)其小型分生孢子呈長(zhǎng)橢圓形、紡錘形、直或略彎曲成腎形等，假頭生，大型分生孢子呈鐮刀形，多為3～5分隔。厚垣孢子較易形成，數(shù)量多，球形或亞球形。以上形態(tài)學(xué)特征符合尖孢鐮孢菌（F. oxysporum）的形態(tài)描述（圖1）。

2.2 分離的枯萎病菌致病性鑒定

將分離得到的尖孢鐮刀菌孢子懸浮液接種于冬瓜幼苗上，結(jié)果表明，該菌株對(duì)冬瓜具有強(qiáng)致病性。冬瓜幼苗于接種7 d時(shí)，開(kāi)始出現(xiàn)輕微萎蔫癥狀；接種10 d 左右，植株大部分葉片出現(xiàn)萎蔫癥狀；接種20 d 后，植株表現(xiàn)為黃葉、萎蔫甚至死亡癥狀；病害后期常能看到藤蔓中下部至莖基部出現(xiàn)紅褐色縱裂條紋，在潮濕條件下表皮腐爛，剖開(kāi)病株可發(fā)現(xiàn)其維管束變成褐色；但清水處理（CK）的植株正常生長(zhǎng)，無(wú)萎蔫癥狀（圖 2）。重新分離接種的病原菌再回接到健康的冬瓜植株上，均獲得與接種時(shí)相同的病原物；清水對(duì)照（CK）未分離到病原物。

2.3 TEF-1α序列測(cè)定

從 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中下載27株鐮刀菌菌株的TEF-1α序列，與供試菌株的TEF-1α序列采用MEGA 7.0 軟件進(jìn)行一致性比對(duì)，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。從圖3可以看出，6個(gè)冬瓜枯萎病菌株NLDG-10-1、NLDG-10-4、NLDG-5-3、YLDG-1-2、YLDG-2-6和DGDG-1-4與尖孢鐮刀菌不同專(zhuān)化型聚在一起（支持率為 99%），且與引起葫蘆科瓜類(lèi)枯萎病的尖孢鐮刀菌西瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. niveum、尖孢鐮刀菌黃瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. cucumerinum、尖孢鐮刀菌甜瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. melonis和尖孢鐮刀菌瓜類(lèi)專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. cucurbitacearum親緣關(guān)系最近，進(jìn)一步支持了分離致病菌為尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型（Fusarium oxysporum f. sp. benincasae）。

從聚類(lèi)分析結(jié)果可以看出，TEF-1α序列在鐮刀菌屬不同種間的鑒別能力較強(qiáng)，且能把冬瓜枯萎病菌株與尖孢鐮孢菌（Fusarium oxysporum species complex，F(xiàn)OSC）種內(nèi)的其他專(zhuān)化型菌株區(qū)分成不同類(lèi)群，能較好地反映FOSC內(nèi)菌株間的親緣關(guān)系。

2.4 26份小冬瓜資源枯萎病發(fā)病率和抗性鑒定結(jié)果分析

如表2所示，26份小冬瓜資源有3種類(lèi)型，其中黑皮小冬瓜10份，占比38.46%；粉皮小冬瓜8份，占比30.77%；青皮小冬瓜8份，占比30.77%。經(jīng)分析，26份小冬瓜資源的抗性鑒定結(jié)果差異相對(duì)較大，且不同小冬瓜資源間的枯萎病發(fā)病率存在顯著差異。26份小冬瓜資源枯萎病平均發(fā)病率為70.48%，其中XDG-17粉皮小冬瓜枯萎病發(fā)病率最高，達(dá)100.00%，XDG-13粉皮小冬瓜枯萎病發(fā)病率最低，為30.00%。26份小冬瓜資源中沒(méi)有1份小冬瓜的抗性鑒定結(jié)果為高抗；4份小冬瓜資源（XDG-4、XDG-6、XDG-8和XDG-13）的抗性鑒定結(jié)果為中抗，占比15.39%；17份小冬瓜資源的抗性鑒定結(jié)果為輕抗，占比65.38%；剩余5份小冬瓜資源的抗性鑒定結(jié)果為感病，占比19.23%。

2.5 47份節(jié)瓜資源枯萎病發(fā)病率和抗性鑒定結(jié)果分析

47份節(jié)瓜資源的抗性鑒定結(jié)果如表3所示，差異相對(duì)較大，且不同節(jié)瓜資源間的枯萎病發(fā)病率存在顯著差異。47份節(jié)瓜資源枯萎病平均發(fā)病率為51.68%，其中JG-36節(jié)瓜枯萎病發(fā)病率最高，達(dá)90.00%，JG-33節(jié)瓜枯萎病發(fā)病率最低，達(dá)10.90%。47份節(jié)瓜資源中有2份節(jié)瓜（JG-25和JG-33）資源的抗性鑒定結(jié)果為高抗，占比4.26%；20份節(jié)瓜資源的抗性鑒定結(jié)果為中抗，占比42.55%；21份節(jié)瓜資源的抗性鑒定結(jié)果為輕抗，占比44.68%；剩余4份節(jié)瓜資源的抗性鑒定結(jié)果為感病，占比8.51%。

2.6 74份大冬瓜資源枯萎病發(fā)病率和抗性鑒定結(jié)果分析

如表4所示，74份大冬瓜資源有2種類(lèi)型，其中黑皮大冬瓜67份，占比90.54%；粉皮大冬瓜7份，占比9.46%。經(jīng)分析，74份大冬瓜資源的抗性鑒定結(jié)果差異相對(duì)較大，且不同大冬瓜資源間的枯萎病發(fā)病率存在顯著差異。74份大冬瓜資源枯萎病平均發(fā)病率為52.24%，其中DDG-23黑皮大冬瓜枯萎病發(fā)病率最高，高達(dá)96.97%，DDG-19黑皮大冬瓜枯萎病發(fā)病率最低，達(dá)5.90%。74份大冬瓜資源中有4份大冬瓜資源（DDG-19、DDG-32、DDG-40和DDG-74）的抗性鑒定結(jié)果為高抗，占比5.41%；31份大冬瓜資源的抗性鑒定結(jié)果為中抗，占比41.89%；32份大冬瓜資源的抗性鑒定結(jié)果為輕抗，占比43.24%；剩余7份大冬瓜資源的抗性鑒定結(jié)果為感病，占比9.46%。

3 討論與結(jié)論

冬瓜枯萎病是一種土傳真菌性、由土壤傳播、從植株根或根莖部侵入、在維管束內(nèi)寄生的系統(tǒng)性病害，致病菌為尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型（Fusarium oxysporum f. sp. benincasae）[17]。20世紀(jì)90年代，Gertagh 等[18]首次報(bào)道了尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型的存在。1994年，中國(guó)學(xué)者謝雙大等[19]報(bào)道了尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型的存在，表明該病原菌致病專(zhuān)化性較強(qiáng)，僅侵染瓜類(lèi)作物，引致冬瓜和節(jié)瓜嚴(yán)重枯萎，且致病性與黃瓜、西瓜、絲瓜、苦瓜等專(zhuān)化型有明顯差異，尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型是導(dǎo)致冬瓜枯萎病發(fā)生的真菌專(zhuān)化型。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，瓜類(lèi)枯萎病菌至少存在8個(gè)專(zhuān)化型，即尖孢鐮刀菌西瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. niveum、尖孢鐮刀菌黃瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. cucumerinum、尖孢鐮刀菌甜瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. melonis、尖孢鐮刀菌葫蘆專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. lagenariae、尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型 F. oxysporum f. sp. benincasae、尖孢鐮刀菌苦瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. momodicase、尖孢鐮刀菌絲瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. luffae 和尖孢鐮刀菌瓜類(lèi)專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. cucurbitacearum，各專(zhuān)化型對(duì)瓜類(lèi)作物的致病性存在明顯差異[5]。目前對(duì)我國(guó)瓜類(lèi)枯萎病的病原種群多樣性及致病力分化情況還沒(méi)系統(tǒng)研究，筆者從病原菌的形態(tài)學(xué)特征、培養(yǎng)特性、TEF-1α序列及致病性等方面對(duì)引起廣東、廣西、湖南冬瓜主栽區(qū)枯萎病的病原菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明，致病菌的形態(tài)學(xué)特征符合尖孢鐮孢菌（F. oxysporum）的形態(tài)描述，引起冬瓜和節(jié)瓜嚴(yán)重枯萎，且TEF-1α序列分析結(jié)果顯示致病菌與尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型的親緣關(guān)系最近。因此，將引起廣東、廣西、湖南冬瓜主栽區(qū)枯萎病的病原菌鑒定為尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型。

TEF-1α是適用于Fusarium群體遺傳多樣性分析的基因片段，本文中基于TEF-1α序列的系統(tǒng)發(fā)育分析，表明冬瓜枯萎病菌株與尖孢鐮刀菌不同專(zhuān)化型聚在一起，且與引起葫蘆科瓜類(lèi)枯萎病的尖孢鐮刀菌西瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. niveum、尖孢鐮刀菌黃瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. cucumerinum、尖孢鐮刀菌甜瓜專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. melonis和尖孢鐮刀菌瓜類(lèi)專(zhuān)化型 F. oxyspoorum f. sp. cucurbitacearum親緣關(guān)系最近。此結(jié)果表明，TEF-1α序列在鐮刀菌屬不同種間的鑒別能力較強(qiáng)，且能把冬瓜枯萎病菌株與尖孢鐮孢菌（Fusarium oxysporum species complex，F(xiàn)OSC）種內(nèi)的其他專(zhuān)化型菌株區(qū)分成不同類(lèi)群，能較好地反映FOSC內(nèi)菌株間的親緣關(guān)系。

冬瓜枯萎病病原菌隨病殘?bào)w在土壤或糞肥中越冬，借灌水、氣流、風(fēng)雨等進(jìn)行傳播蔓延，加上我國(guó)華南地區(qū)夏季高溫多雨等氣候條件，極易導(dǎo)致冬瓜枯萎病的暴發(fā)[20]。目前生產(chǎn)上針對(duì)冬瓜枯萎病以化學(xué)防治為主，但長(zhǎng)期以來(lái)化學(xué)防治效果不理想，加上市面上很多針對(duì)冬瓜（節(jié)瓜）枯萎病的化學(xué)藥劑是以預(yù)防為主，因此選用抗病性較強(qiáng)的冬瓜品種是解決枯萎病問(wèn)題最有效的途徑之一[21]。筆者采用苗期接種法對(duì)所收集的26份小冬瓜資源、47份節(jié)瓜資源和74份大冬瓜資源進(jìn)行抗病性鑒定，結(jié)果表明，從47份節(jié)瓜資源中篩選出2份節(jié)瓜（JG-25和JG-33）為高抗資源，占比4.26%；從74份大冬瓜資源篩選出4份大冬瓜（DDG-19、DDG-32、DDG-40和DDG-74）為高抗資源，占比5.41%。26份小冬瓜資源、47份節(jié)瓜資源和74份大冬瓜資源的抗性結(jié)果表現(xiàn)呈正態(tài)分布，即高抗和感病資源較少，中抗和輕抗資源較多，與康德賢等[4]、梁少麗等[12]、彭家柱等[13]和謝大森等[14]的研究結(jié)果一致。筆者篩選出4份大冬瓜和2份節(jié)瓜資源可為利用不同抗枯萎病的冬瓜資源進(jìn)行合理布局（搭配種植）提供參考。但是，筆者只是基于苗期接種法對(duì)部分冬瓜（節(jié)瓜）資源的抗病性進(jìn)行初步鑒定，接下來(lái)還需開(kāi)展更廣泛、更深入的田間抗病性評(píng)價(jià)試驗(yàn)，進(jìn)一步明確不同冬瓜（節(jié)瓜）資源的抗感病情況。

綜上所述，通過(guò)病原菌致病力測(cè)定、形態(tài)學(xué)特征分析、培養(yǎng)特性比較以及構(gòu)建的TEF-1α系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析，將引起冬瓜枯萎病的病原菌鑒定為尖孢鐮刀菌冬瓜專(zhuān)化型。筆者篩選出在苗期接種鑒定中表現(xiàn)為高抗的4份大冬瓜和2份節(jié)瓜資源，為利用不同抗枯萎病的冬瓜資源進(jìn)行合理布局和抗枯萎病冬瓜種質(zhì)資源的篩選及瓜類(lèi)枯萎病抗性遺傳育種提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1] 周勝軍，陳新娟，朱育強(qiáng)，等．我國(guó)冬瓜和節(jié)瓜種質(zhì)資源的研究現(xiàn)狀及建議[J]．植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2014，15（1）：211-214．

[2] 石博，關(guān)峰，張景云，等．冬瓜枯萎病研究進(jìn)展[J]．中國(guó)瓜菜，2022，35（11）：11-14．

[3] 芻宇曉，徐玉娟，廖森泰，等．冬瓜的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及其綜合利用研究進(jìn)展[J]．中國(guó)果菜， 2006（5）：46-47．

[4] 康德賢，陳振東，吳永官，等．冬瓜枯萎病病原鑒定及種質(zhì)資源田間抗性評(píng)價(jià)[J]．西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，25（5）：1698-1702．

[5] 沈文淵．瓜類(lèi)枯萎病菌四種專(zhuān)化型的生物學(xué)特性及瓜類(lèi)枯萎病生物防治研究[D]．四川雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012．

[6] 呂順，曾莉莎，劉文清，等．大蕉枯萎病病原菌鑒定及TEF-1α序列分析[J]．植物病理學(xué)報(bào)，2014，44（4）：337-348．

[7] O'DONNELL K，GUEIDAN C，SINK S，et al．A two-locus DNA sequence database for typing plant and human pathogens within the Fusarium oxysporum species complex[J]．Fungal Genetics and Biology，2009，46（12）：936-948．

[8] 王雨竹．保護(hù)地冬瓜枯萎病的診斷與防治[J]．農(nóng)村實(shí)用技術(shù)，2018（2）：37．

[9] 曾文青．砧用冬瓜枯萎病抗性鑒定，轉(zhuǎn)錄組分析及嫁接適應(yīng)性研究[D]．南寧：廣西大學(xué)，2023．

[10] 陳云呈．冬瓜枯萎病的發(fā)生與無(wú)公害防治技術(shù)[J]．中國(guó)農(nóng)技推廣，2008（3）：46．

[11] 姬小紅．冬瓜無(wú)公害栽培技術(shù)[J]．河南農(nóng)業(yè)，2021（34）：12．

[12] 梁少麗，劉麗琴，任曉雯，等．東莞市冬瓜品種對(duì)枯萎病的抗性鑒定[J]．現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2018（24）：110-111．

[13] 彭家柱，喬燕春，劉玉平，等．節(jié)瓜品種資源對(duì)枯萎病抗性評(píng)價(jià)[J]．蔬菜，2020（3）：43-45．

[14] 謝大森，何曉明，彭慶務(wù)，等．冬瓜枯萎病的抗性遺傳規(guī)律[J]．熱帶作物學(xué)報(bào)，2009，30（7）：1005-1008．

[15] 周紅梅，毛愛(ài)軍，張麗蓉，等．黃瓜枯萎病接種方法及抗性遺傳的研究[J]．華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2010，25（4）：186-190．

[16] 董京萍，齊曉花，徐強(qiáng)，等．黃瓜枯萎病菌分離鑒定及品種抗性差異分析[J]．分子植物育種，2017，15（9）：3648-3653．

[17] 李紅杰．外源噴施水楊酸對(duì)冬瓜枯萎病的防治效果及機(jī)制[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（19）：95-99．

[18] GERLAGH M， BLOK W J． Fusarium oxysporum f．sp． cucurbitacearum n．f． embracing all formae speciales of F．oxysporum attacking cucurbitaceous crops[J]．Netherlands Journal of Plant Pathology，1988，94（1）：17-31．

[19] 謝雙大，朱天圣，虞皓，等．冬瓜與節(jié)瓜枯萎病菌專(zhuān)化型鑒定[J]．植物病理學(xué)報(bào)，1994，24（3）：244．

[20] 袁飛，劉子凡，廖道龍，等．南瓜嫁接提高冬瓜枯萎病抗性的化感機(jī)制[J]．中國(guó)瓜菜，2021，34（5）：26-29．

[21] 劉慧迪，黃繼寧，成志軍，等．作物鐮刀菌枯萎病及其生物防治的研究進(jìn)展[J]．植物醫(yī)學(xué)，2022，1（5）：8-22．