趙志君,楊瑩瑩,張 璐*,李曉燕,張 嬌,趙靜宇,呂鼎豪,閆舒雅

(1山西省藥品審評中心,太原 030006;2山西省藥品檢查中心;*通訊作者,E-mail：735938703@qq.com)

六神曲是一味傳統(tǒng)的中藥曲劑,由辣蓼、青蒿、苦杏仁、赤小豆和蒼耳草等藥加工后與面粉或麩皮混和,經(jīng)發(fā)酵而成?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十九冊》[1]、《山西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1987年版)[2],具有健脾和胃、消食調(diào)中的功效,用于脾胃虛弱、飲食停滯、胸痞腹脹、嘔吐瀉痢、小兒積食[3,4],臨床應(yīng)用廣泛。

用麥麩炒六神曲和焦神曲多用于健脾和胃、消積化食,經(jīng)麩炒和炒焦后消化酶降低,助消化止瀉作用增強(qiáng)[5]。王秋紅等[6]進(jìn)行六神曲抗菌作用研究,表明麩炒六神曲有較強(qiáng)的抑菌和殺菌能力,可能和緩解細(xì)菌引起的腹瀉相關(guān)。麩炒品和炒焦品能增強(qiáng)胃動力功能,增強(qiáng)和胃之功效,且炒神曲和焦神曲中不含或少含草酸鈣,可減少體內(nèi)結(jié)石的產(chǎn)生,起到增效減副之功[7,8]。

神曲的炮制方法多為炒制[9-14]。傳統(tǒng)炮制方法常為麩炒六神曲[15],麩炒六神曲為山西省常用中藥品種,麩炒工藝[16,17]臨床應(yīng)用廣泛,用藥歷史悠久[18,19],大山楂丸[20]、人生再造丸、小兒百壽丸[21]等中成藥中均含有該飲片。分析各省中藥材標(biāo)準(zhǔn)和炮制規(guī)范,發(fā)現(xiàn)各地的神曲制備工藝均存在一定差異,各省地方炮制標(biāo)準(zhǔn)也不盡相同,直接使用他省標(biāo)準(zhǔn)也不現(xiàn)實(shí)。《山西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1987年版)收錄了六神曲、焦六神曲、炒六神曲,但沒有收錄麩炒六神曲。對山西省麩炒六神曲的標(biāo)準(zhǔn)研究未見有文章報(bào)道,為有效控制山西省麩炒六神曲的質(zhì)量,本研究根據(jù)《中國藥典》2020年版對炮制飲片的檢查要求,開展了麩炒六神曲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究,為制定山西省麩炒六神曲飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品 項(xiàng)目組共收集15批生六神曲,分別來自山西華康藥業(yè)、山西天生制藥和山西國泰中藥股份有限公司3家企業(yè),具體信息見表1。按照部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十九冊“六神曲”項(xiàng)下的要求進(jìn)行檢驗(yàn),均符合要求,麩炒后的六神曲經(jīng)過原省藥品檢驗(yàn)所專家李民生鑒定符合規(guī)定。

表1 飲片來源及批號

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 FA3204B電子天平(上海精科天美科學(xué)儀器有限公司),多功能暗箱式紫外分析儀(北京賽百奧科技有限公司),BH2-Olympus顯微鏡(上海通灝光電科技有限公司),CYQ-900自控溫燃?xì)獬此帣C(jī)、S-49型旋振篩。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 苦杏仁苷對照品(批號：110820-202109)、苦杏仁對照藥材(批號：121554-201204)、青蒿素對照品(批號：100202-202107)、青蒿對照藥材(批號：121016-202007)、赤小豆對照藥材(批號：121725-202103)均購自中國食品藥品檢定研究院;甘油(批號：199202,浙江省蘭溪縣化工總廠);甲酸、甲醇、無水乙醇、石油醚、水合氯醛(分析純,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);冰醋酸(分析純,無錫市晶科化工有限公司);甲酸(批號：20140611,天津市興復(fù)科技發(fā)展有限公司);二氯甲烷(批號：20090828,天津市化學(xué)試劑三廠)。硅膠G板50 mm×100 mm(批號：20150302,青島海洋化工廠分廠),硅膠G板100 mm×200 mm(批號：20141004,煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司),硅膠G板100 mm×200 mm(批號：20150302,青島海洋化工廠分廠)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 炮制工藝因素考察 分別稱取同一批大小均勻的生六神曲(華康產(chǎn),批號HZ20200507)3份,炒制溫度分別為文火110 ℃、中火130 ℃、大火150 ℃,炒制12 min,麩皮用量10%,以性狀、浸出物為評價(jià)指標(biāo),考察不同炒制溫度對麩炒六神曲的影響。

分別稱取同一批大小均勻的生六神曲(華康、批號HZ20200507)6份,炒制溫度130 ℃,麩皮用量10%,分別在炒制8,10,12,14,16,18 min時(shí)取樣,以性狀、浸出物為評價(jià)指標(biāo),考察不同炒制時(shí)間對麩炒六神曲的影響。

分別稱取同一批大小均勻的生六神曲(華康,批號HZ20200507)2份,炒制溫度130 ℃,炒制12 min,麩皮用量分別為10%和15%,以性狀、浸出物為評價(jià)指標(biāo),考察不同麩皮用量對麩炒六神曲的影響。

1.2.2 性狀觀察 通過考察15批麩炒六神曲的形狀、表面顏色、氣味和質(zhì)地確定“麩炒六神曲”的性狀。

1.2.3 顯微鑒別 取各批次藥材適量置于載玻片上,分別采用《中國藥典》2020年版四部通則2001-藥材顯微制片(粉末制片法)進(jìn)行制片,之后置于顯微鏡下觀察。對處方中的赤小豆、苦杏仁、麥麩進(jìn)行顯微鑒別。

1.2.4 水分限度制定 按照《中國藥典》2020版四部通則0832第二法,測定15批次“麩炒六神曲”的水分,擬定限度范圍。

1.2.5 總灰分限度制定 按照《中國藥典》2020版四部通則2302,測定15批次麩炒六神曲的總灰分,擬定限度范圍。

1.2.6 酸不溶性灰分限度制定 按照《中國藥典》2020版四部通則2302,測定15批次麩炒六神曲的酸不溶性灰分,擬定限度范圍。

1.2.7 浸出物試驗(yàn)條件考察 按照《中國藥典》2020版醇溶性浸出物測定法(通則2201)項(xiàng)下的冷浸法,測定15批次麩炒六神曲的浸出物,擬定限度范圍。

2 結(jié)果

2.1 炮制工藝

選擇炒制時(shí)間12 min,麩皮加入量10%,炒制溫度分別為110,130,150 ℃時(shí),得到的浸出物結(jié)果分別為22.02%,23.25%,21.93%,不同溫度炒制樣品的性狀結(jié)果見圖1,隨著溫度升高浸出物呈先升高后降低的趨勢。綜合性狀和浸出物的結(jié)果,選擇炮制溫度為130 ℃為最佳溫度。

圖1 不同溫度麩炒樣品Figure 1 Bran-fried samples under different stir frying temperature

選擇麩皮加入量10%,炒制溫度130 ℃,炒制時(shí)間分別為0,8,10,12,14,16,18 min時(shí),得到的浸出物結(jié)果分別為25.04%,22.54%,23.22%,23.26%,23.86%,22.59%,21.79%,不同炒制時(shí)間樣品的性狀結(jié)果見圖2,結(jié)果表明,隨著炒制時(shí)間的延長,浸出物含量呈先上升再下降的趨勢。綜合性狀和浸出物的結(jié)果,選擇炒制時(shí)間12 min為最佳。

圖2 不同時(shí)間麩炒樣品Figure 2 Bran-fried samples under different stir frying time

選擇炒制時(shí)間12 min,炒制溫度130 ℃,麩皮加入量10%和15%,浸出物結(jié)果為23.25%和23.29%,不同麩皮加入量樣品的性狀結(jié)果見圖3,由結(jié)果可見,不同麩皮加入量樣品的性狀和浸出物測定結(jié)果差異不明顯?？紤]成本問題,最后選擇麩皮加入量為10%。

圖3 不同麩皮加入量炒制樣品Figure 3 Bran-fried samples with different addition amounts of bran

2.2 性狀

用優(yōu)選出的最佳工藝對山西省企業(yè)生產(chǎn)的15批生六神曲進(jìn)行炮制,性狀如下：立方形小塊或圓柱條形段,表面棕黃色,質(zhì)堅(jiān)脆,有麥麩香氣;易斷,斷面不平整,類白色,可見未被粉碎的褐色殘?jiān)鞍l(fā)酵后的空隙(見圖4);具陳腐氣,味苦;以身干、陳久、無蟲蛀、雜質(zhì)少者為佳。

2.3 顯微鑒別結(jié)果

對15批麩炒六神曲進(jìn)行顯微鑒別,結(jié)果顯示樣品粉末黃白色或黃棕色;處方中麥麩的果皮表皮細(xì)胞緊密排列呈不規(guī)則片狀,單細(xì)胞非腺毛散生(見圖5);淀粉粒多單粒,呈球形,臍點(diǎn)點(diǎn)狀,層紋明顯;苦杏仁和赤小豆的石細(xì)胞黃色或白色,單個(gè)散在或數(shù)個(gè)相連,胞腔黑色;赤小豆的種皮柵狀細(xì)胞胞腔含淡紅棕色物,光輝帶明顯。

1-4.石細(xì)胞;5.淀粉粒;6.種皮柵狀細(xì)胞;7.非腺毛;8.果皮表皮細(xì)胞圖5 麩炒六神曲顯微鑒別圖Figure 5 Microscopic identification of bran-fried Massa Medicata Fermentata

2.4 水分測定

15個(gè)批次麩炒六神曲的水分含量波動范圍在2.3%～7.5%之間(見表2),均值為4.55%,根據(jù)測定結(jié)果,按照最高值上浮20%計(jì)算,水分為9.0%。但考慮到不同時(shí)間、不同地點(diǎn)空氣濕度的影響,并參考藥典及相關(guān)地方標(biāo)準(zhǔn)中水分的限度(不得過10.0%),暫定本品水分不得過10.0%。

表2 麩炒六神曲水分、總灰分、酸不溶灰分、浸出物測定結(jié)果

2.5 總灰分測定

15批次六神曲(麩炒)的總灰分波動范圍在3.2%～4.1%之間(見表2),均值為3.69%,根據(jù)測定結(jié)果的最高值上浮20%計(jì)算,總灰分為4.9%。參考相關(guān)地方標(biāo)準(zhǔn)的限度,因此暫定總灰分的限度為不得過5.0%。

2.6 酸不溶性灰分測定

15批次六神曲(麩炒)的酸不溶性灰分波動范圍在0.01%～0.06%(見表2),平均值為0.03%,遠(yuǎn)低于其他省市地方標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限度范圍(不超過2.0%),因此暫定酸不溶灰分不得過2.0%。

2.7 浸出物測定

本研究采用50%乙醇作為提取溶劑,對15批“麩炒六神曲”進(jìn)行浸出物(冷浸法)測定,結(jié)果在21.67%～24.6%之間(見表2),均值為22.97%,根據(jù)測定結(jié)果的最低值下浮20%計(jì)算,浸出物為17.33%。暫定浸出物限度不得少于17.0%。

3 討論

通過測定山西省3家企業(yè)15批炮制后的麩炒六神曲樣品,得到水分、灰分、酸不溶灰分、浸出物實(shí)際測定的范圍值,通過搜集、整理了國內(nèi)六神曲相關(guān)的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn),比較了部頒標(biāo)準(zhǔn)和部分地方標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容,通過查閱炮制及標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)文獻(xiàn)資料[22-24],擬定了我省的麩炒六神曲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。通過試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)六神曲處方中赤小豆、苦杏仁和青蒿素的含量很低,難以用薄層色譜法進(jìn)行鑒別,因此本研究標(biāo)準(zhǔn)中不加入薄層鑒別項(xiàng)。因?yàn)?5批次樣品的測定結(jié)果不能完全代表所有樣品的質(zhì)量,因此后續(xù)需要繼續(xù)積累數(shù)據(jù),制定更為合理的標(biāo)準(zhǔn)限度。